Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ДНК-полиморфизм генов главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "ДНК-полиморфизм генов главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота"

РОССИЙСКАЯ ЛКЛД1:МИЯ НЛУК Институт общей генетики им. Н. И. Вавилова

СОКОЛОВА Светлана Сергесппа

ДНК-ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ГЛАВНОГО КОМПЛЕКСА ГИСТОСОВМЕСТИМОСТИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

(0.100.15 — Генетика)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

На мраках рукописи

УДК 575.174.015.3 : 636.2

М О С к в А

19 9 3

!

Работа выполнена 1! лаборатории сравнительной генетики животных Института общей генетики им. Н. И. Вавилова, РАН и в отделе генетических методов в селекции сельскохозяйственных животных Всероссгпккого научно-исследовательского института племенного дела Министерства сельского хозяйства Российской Федерации.

Научные руководители:

до к то р сел ьс к о хоз я и с тв е; и 1 ы х наук профессор Бороздин Э. К. кандидат биологичеких наук Сулимова Г. Е.

Официальные оппоненты:

доктор биологических паук Смирнов А. Ф.

кандидат биологических наук Малшшиа Т. В.

Ведущее учреждение:

Мос к о вс к а я Ветеринарная Академия им. В. А. Скрябина

Защита состоится « »_ 1993 г. в

на заседании специализированного Ученого совета (Д 002.49.01) при Институте Общей Генетики им. Н. И. Вавилова РАН по адресу: Москва, ул. Губкина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОГеи РАМ.

Автореферат разослан « »__1993 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Г. Н. ПОЛУХИНА

Актуальность проблемы. За последние несколько лет значительно возрос интерес к полиморфизму генов главного комплекса гистосовместимости (ГКГ) сельскохозяйственных животных. Это вызвано тем, что продукты генов ГКГ играют важную роль в иммунном ответе организма и его резистентности к болезням.

ГКГ представляет собой кластер тесно сцепленных генов, состояшлх из трех областей (гены I ,Г! и Ш классов). Антигены- II класса преимущественно экспреасируотоя на поверхности иммунных клеток В-лимфоцитов, субпопуляций Т-клеток и макрофагов. Гены II класса образуют пять локусов : DQ. DR, DZ, DP, DO.

Исследование полиморфизма генов ГКГ позволяет выявить связи между полиморфизмом генов ГКГ и резистентностью к заболеваниям. У крупного рогатого скота была показана ассоциация между гаплотипом DQ 1А и предрасположенностью к клиническому маститу: другие гаплотипы DQ и DYA не проявляли: такого эффекта (Lunden et al. 1987).

Для исследования полиморфизма генов ГКГ активно разрабатывается молекулярно-генетические подходы, основанные на анализе полиморфизма ДНК, методы, позволяющие упростить такой анализ и сделать его доступным для массового тестирования животных. В настоящее время предложен метод анализа специфических последовательностей ДНК после их амплификации in vitro с помощью по-лимеразной цепной реакции (ПЦР). Рестрикционный полиморфизм таких амплифицированных последовательностей можно определять без применения изотопных методов анализа, а путем простого сравнения подеижностэй полученных фрагментов после электрофо-ретического разделения в полиакриламидном и агарозных гелях.

Целью исследований было изучение генетического разнообразия генов главного комплекса гистосовместимости класса II DRB и DQB у разных пород крупного рогатого скота и зубров и поиск ассоциации полиморфных вариантов с устойчивостью к маститам.

Для этого были поставлены следующие задачи:

1. Разработка условий анализа полиморфизма ДНК генов DQB и DRB ГКГ у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР-аналцэ),

2. Исследование полиморфизма генов ГКГ класса II DRB и DQB у холмогорской, черно-пестрой и герефордской пород крупного рога" гатого скота и зубров методом ПЦР.

I 3. Поиск внутрипородных и межпородных и межвидовых разли-£ чий генов DRB и DQB.

uj 4. Выявление ассоциации между аллельными вариантами генов

j? DRB и DQB с устойчивостью к маститам.

5. Анализ генетического равновесия локусов DRB и DQB.

Научная новизна полученных результатов. В работе предложен метод полимеразной цепной реакции для изучения полиморфизма генов ГКГ у крупного рогатого скота, проведена оптимизация условий полимеразной цепной реакции. Впервые изучен полимор-.физм генов класса 11 ГКГ у холмогорской, герефордской. черно-пестрой пород крупного рогатого скота и зубров. Впервые изучены меж- и внутрипородные различия у этих пород крупного рогатого скота и зубров. Впервые показан рестрикционный полиморфизм по эндонуклеазам Hinf I и Мзр I генов DQB и DRB.

Практическая ценность. Практическое использование результатов работы позволяет глубоко и целенаправленно изучать структуру генов ГКГ у крупного рогатого скота. Полученные данные следует использовать для маркирования животных по генам ГКГ в связи с резистентностью к болезням. Перспективно также использование полученных дачных в качестве учебного материала в подготовке специалистов биологического профиля.

Апробация работы прошла во Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства (Москва,1991) на 44-й научно-методической конференции аспирантов и молодых ученых по теме: "Проблемы интенсификации животноводства", а также на IV совещании СНГ по проблеме селекции сельскохозяйственных животных на устойчивость к болезням (Сумы, 1992). Материалы диссертации докладывались на межлабораторном семинаре "Генетика животных" ИОГен им. н. И. Вавилова, РАК Представлены тезисы на UI съезд общества генетиков и селекционеров им. Вавилова (Минск, 1992) и на конференцию по частной генетике сельскохозяйственных животных (Аскания-Нов&, 1992г).

По теме диссертации опубликовано 4 статьи.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на ... страницах машинописного текста. Она состоит из введения, обзора литературы, методической части, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование проведено на трех породах крупного рогатого скота: черно-пестрой (Думмерсторф-Росток, Германия), холмогорской, герефордской и зубрах.

Выделение ДНК и электрофоретический анализ проводили по стандартным методикам (Маниатис и др., 1984).

Рестрикцию ДНК зндонуклеазами осуществляли при оптимальных для каждого фермента условиях: температуре и буфере( Маниатис и др., 1984). Электрофорез проводили в 0,8£-ом агарозном геле (агароза "BioRad", "Calbiochem" или "Pharmacia") или в 67лом

полиакриламидном геле в трис-боратном буфере (Маниатис к др. ,1984).

Полимеразную цепную реакцию проводили по Saiki et al.(1988) с модификациями.

Для подбора праймеров были использованы компьютерные программы "01 ¡его" и "Tcpt", любезно предоставленные Э. М. Берберовым (ИОГен РАН), а также программы "Micro Genie" и "BioSys". Работа проводилась на IBM-совместииш персональных компьютерах.

РЕЗУЛЬТАТУ И ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика материала и исследуемых областей генов Во1Л-01?В и ВоЬА-ОДВ.

Для исследования были выбраны функционально различные области генов: регуляторный участок (5'-нетранслируемая область) гена К}В и фрагмент гена ОЙВ, кодирующий антиген-свя-зываюций участок пептида - Ы-область, являющаяся одной из наиболее полиморфных областей гена 01?В (схема 1).

BoLa-DQB

5'-нетранслируемая область ,

-259 • -110 5' _ _;__з'

__149 К. П. _

Qm QB2

б'CAGATGAAGTTTTTCCGCTCC 3' 3'CGACACAACTGATGGTAATCA 5'

Bola-DRb

bl-домен

701 841

5'___3'

__141 я. п. _

RB3 RB4 *

5'T6CCCACAGCACAT7TSATGG 3' 3'CGTTGCTACACCCACTCAAGT 5'

Схема 1. Локализация и состав праймеров QB1 и QB2, RB3 и RB4 и амплифицйрованных фрагментов ДНК.

Первым шагом в изучении генов DRB и DQB было проведение с помощью компьютерной программы "Micro Genie" анализа пукле-

отидных последовательностей исследуемых фрагментов с целью поиска сайтов рестрикции для 150 ферментов. Полученные рест-риктные карты использовались затем для поиска рестрикционного полиморфизма амллифицированных фрагментов.

Поскольку исследования полиморфизма генов БРВ и ВДВ являются оригинальными, как в отношении выбора исследуемых фрагментов генов, так и в отношении подбора праймеров, и не имеют аналогов в литературе, необходимыми этапами работы были характеристика праймеров и оптимизация условий полимеразной цепной реакции.

Характеристика праймеров и оптимизация условий полимеразной цепной реакции.

Основные характеристики праймеров приведены в таблице 1.

Таблица 1.

Характеристики праймеров, использованных в работе.

|Праймер Тш ( С) Наличие шпилек Наличие димеров Наличие свой. 5'-конца Та при (К+)| 50мМ ЗЗмМ |

1 QB1 66,1 + +++ - 53.2 48.4 |

1 QB2 56.4 +++ -

| RB3 71.8 + ++ + 62.5 57,5 |

| RB4 68.5 ■ + ++ -

В результате проведенных экспериментов были подобраны оптимальные условия для амплификации участков ДНК DQB и DFB генов класса II ГКГ в количествах достаточных для проведения последующего рестрикционного анализа (таблица 2).

Таблица 2.

Оптимальные условия амплификации генов DQB и DRB с помощью ПЦР для Tth-полимеразы.

| |Кол-во| Отжиг ¡Праймеры1 1 | Синтез 1 | Плавление(Концентра| 1 1шя МСГ++1

| | циклов | мин | t С 1 III |мин | t С 1 1 |мин |t С 1 1 | шМ | 1 1

|DQ1, DQ2 45 1,3 55 1,6 72 1,3 92 7тМ |

|DR3, DR4 45 1,46 62 1,6 72 1,3 92 7шМ |

ЩР-анализ 5'-нетрансдируемой области гена DQB.

Полученные продукты амплификации у исследованных животных были определены как варианты или генотипы и обозначены латинскими буквами. При амплификации ДНК животных черно-пестрой и герефордской пород был получен один фрагмент, размер которого у всех исследованных животных был одинаков и еоот-- ветствовал ожидаемому (149 п. н.), что указывает на отсутствие у них протяженных делеций и вставок во всех копиях гена. Это позволило объеденить их в один вариант гена, который был обозначен как вариант L, частота его у обеих пород равна 1,0.

У животных холмогорской породы были получены три типа ам-плификатов: 1 - продукт амплификации длиной 149 п. н. (вариант L, частота 0,65) , 2 - амллификат представлен одним фрагментом, но его длина состовляла 156 п. н. (этот вариант гена DQB был обозначен как вариант М, частота 0, 28) и 3 - продукты амплификации представлены двумя фрагментами указанной длины. Животные, имеющие обе копии гена DQB (генотип LM) встречались с частотой 0,033. Имелись животные ДНК которых не амплифици-ровалась с праймерами QB1-QP2 ( п-4, частота - 0,066). При амплификации ДНК зубров с праймерами QB1-QB2 все образцы давали один фрагмент размером 149 п. н. - L-вариант (п-31)

Во всех трех породах крупного рогатого скота для L-вари-анта гена DQB был отмечен рестрикционный полиморфизм по рест-риктазам Alu Г и Hinf I. У зубров сайтов рестрикции для Hinfl обнаружено нэ было.

У черно-пестрой породы были выявлены 4 особи, дававшие после обработки эндонуклеааой Hinf I более сложную ранее не описанную рестрикционную картину, которая может быть объяснена наличием у животных копий гена DQ8, различающихся по сайтам рестрикции для Hinf I (схемой). Одна из копий не имеет сайтов рестрикции, вторая копия имеет сайт рестршсции после 47-го нуклеотида от 5'-конца фрагмента, в третьей копии, кроме известного сайта, появляется новый сайт в районе 76-го нуклеотида за счет микродедеции двух нуклеотидоз в этой об. ласти гена, которая одновременно должна приводить к исчезновению сайта рестрикции для Alu I, что и наблюдалось в эксперименте. После рестрикций' амшшфицированного фрагмента этой g копии retía (или псевдопена) должны образовываться фрагменты ® размером 2Á, - 47 и 76- п. н., из которых в использованных усло-™ виях электрофореза были зарегистрированы два - 47 и 76 п. н.. 2 При рестрикционном анализе суммарного продукта амплификации л были зарегистрированы четыре фрагмента. Наследование нового ^ признака (наличие дополнительного сайта рестрикции Hinf I)

соответствует правилу простого менделевского наследования, что хорошо прослеживалась на линии быка Rollet.

Hinfl AluI Hinf I

I II

TCTAGGS ACTCTCCAATCTGCCATACATGGAA GC TCTCATAGGCT

Схема 2. Возможная локализация нового сайта рестрикции Hinfl (HinfI*, 6 ACT) в 5'-области гена DQB. Подчеркнуты нук-леотиды, делеция которых может привести к образованию сайта рестрикции для Hinfl и исчезновению сайта узнавания для эндо-нуклеазы Alu I (AGCT)

Таким образом, на основе проведенного рестрикционного анализа исследуемой области гена DQB внутри L-варианта можно выделить пять подвариантов. различающихся по наличию или отсутствию сайтов рестрикции для Alu I и Hinf I. частоты которых приведены в таблице 3.

Таблица 3.

Частоты подвариантов L-варианта гена DQB у животных холмогорской и черно-пестрой пород.

|Подвариант|Холмогорская порода |Черно-пестрая порода I I п (Частота I n | Частота I II I I I_I_I_I_I__

IUA1-H-) • 11 0,234

1UAHH-) 12 0,315 12 0,255

ILU1-H+) 16 0,420 И 0,234

1ЦА1+Н+) 10 0.2Q3 • 9 0,191

|L(A1-H+H*t) 4 0,085

I_I

Примечания: А1+, Ж--,Н*+ сайты рестрикции для Alu I и Hinf I, в 73-м, 47-м, 71-м положении от 5'-конца амплифицкрованного фрагмента соответственно, (-) - отсутствие сайта рестрикции, (±) - одновременное присутствие в генотипе животного копий гена, различающихся по наличию или отсутствию сайтов рестрикции. Расчет частот, подвариантов проводился только для животных, имеющих L-вариант гена DQB, суммарная частота которого в данном случае принималась за 1,0.

- 9 -

ПЦР-анализ Ы-области гена DRB.

Поскольку для этой области гена характерен высокий уровень полиморфизма различные аллельные варианты гена могут быть зарегистрированы уже на уровне электрофоретического анализа продуктов амплификации. В табл. 4 приведены длины про- . дуктов амплифик дни и частоты их встречаемости у трех исследованных пород крупного рогатого скота и зубров.

Таблица 4.

Основные продукты амплификации Ы-области гена ОЯВ.

I Размер! ХЬлмогорская|Черно-пестрiГерефордская| Зубры |

| фраг- 1 порода 1 порода | порода |

| мента п |_ |Частота*! I 1 п|Частота! 1 1 п |Частота| 1 1 п |Частота! i 1

I 360 29 0,618 - -

I 316-320 9 0.166 38 0,809 - - - j

| 278-280 16 0,296 38 0,809 - - - !

I 263 16 0,296 - - - - - |

| 251 16 0,296 - - - - - |

I 240 16 0,296 38. 0,809 - - - |

I 216-220 9 0,166 21 0,446 - - 11 0,785 |

| 207 16 0,296 - - - ■ - |

I 199 - - - 4 0,22 - |

I 180 - - - 6 0,33 - |

| 160 16 0,295 - - - - - |

| 151 5 0,0920 - - - - - !

| 147 16 0,296 - - ■ - - |

| 141 54 1,000 1,000 18 1,00 14 1,000 |

| 100 26 0,487 - - - - - 1

| 90 - - 47 1,000 - -- - 1

( 76 26 0,487 - - - - - 1

| 70 - - 47 1,000 / — " 1

Примечания: *) Поскольку на один гаплоидный набор приходится не менее трех копий гена 01?В и один псевдоген, частоты отдельных вариантов (копий гена) в сумме не.составляют 1.00. Картина осложняется тага© тем, что число копий гена в геноме не фиксировано и может варьировать как у разных пород, так и внутри одной породы у разных особей. Частоты рассчитывали с. учетом только амплифйцировавшихся образцов, процент которых от суммарной выборки составил 902, 1002, 90% и 457. для холмогорской, черно-пестрой, герефордской пород и зубров.

В работе исследуется полиморфизм не одного, а всех генов локуса DRB, включая псевдоген. Это предоставляет возможность оценить уровень полиморфизма данного локуса в целом, но не позволяет идентифицировать аллельнье варианты отдельных генов. При этом следует указать, что во всем научном мире исследования по идентификации аллельных вариантов генов DRB, выявляющихся при анализе полиморфизма ДНК, с аллелями типиро-ванными серологически или на основе белкового полиморфизма только начинаются.

Всего можно было тестировать 18 фрагментов различной длины. По-видимому, для каждого из них матрицей служит своя копия гена DRB, которая может рассматриваться как самостоятельный аллельный вариант. Кроме того, часть образцов ДНК не давала амплификации (О вариант).

Наибольшее количество полиморфных вариантов для генов DRB показано у холмогорской породы (13 вариантов), частоты которых варьируют от О,09 до 1,00. У популяции черно-пестрой породы выявлено 8 различных вариантов генов, все они представлены в популяции с высокой частотой (не менее 0,45). Крайне ограниченное число аллелей гена DRB обнаружено у исследованной популяции герефордской породы и зубров.

Полученные фрагменты (копии гена) распределяются на несколько типов: 1 - присущие только одной породе; 2 - общие для всех изученных пород; 3 - общие для двух пород и зубров.

Отдельные копии гена DRB, представленные амшшфицирован-ными фрагментами разной длины присутствуют у исследовзкных животных одновременно, составляя устойчивые сочетания, определяющие генотип животного по данному локусу (таблица 5). Максимальное количество продуктов амплификации разной длины, полученное на одном образце ДНК, было равно 12- ти, что указывает на то, что число копий гена у отдельной особи может достигать 6-ти копий на гаплоидный геном.

Для черно-пестрой породы можно выделить 4 основных гено- . типа обозначенных как: F. G, H, I. Они различаются по числу амплифицированных фрагментов и по размерам самих фрагментов. Наиболее полиморфной по Ы-области гена DRB оказалась холмогорская порода: общее количество генотипов у холмогорской породы составило 6 вариантов, обозначенных как: 0. А, В, С, D, Е. Наибольшая частота встречаемости - 0.466 показана для варианта А, при амплификации которого наблюдается всего один фрагмент размером 141 п. н.. Популяция герефордской породы менее полиморфна по этому гену, чем холмогорская и черно-пестрая. Было выявлено 3 варианта обозначенные как: A, J, к, раз-

■лншаиеся m спектрам >тлифшрс>г.атых фрагментов и их

Заха &*Э4 8/ 93ф

Генотипы локуса СКВ у исследованных животных

Таблица 5.

Размер Фр.1Г- Холмогорская порода варианты Черно-пестрая порода варианты Герефордская порода Зубры варианты ! варианты

0 А В С 0 Е Р 5 Н I 0 А J { К | 0 ( А | Р

оби

£20-316 260-278 263 £51 243 220-216 207 199 180

150

151 147 141

г оо

90 76 70

+ + + + + + +

+ + + +

+ + +

+ +

+ + + + + + + +

+ + + + + + + +

+ +■ + + + . + +

+ +

Нет ампли-фикациии + ->• +

6 28 9 7 5 5 18 11 9 9 2 12 4 о 17 г п

, Частота,X 10 46,7 15 11,6 8,3 8,3 38,3 23,4 19,1.19,1 10 60 20 10 54,9 9,6 25 1

; Стайка 4,0 6,4 4,6 4,1 3,6 3,6 7,5 6,4 5,7 5,7 4,0 11,7 6,1 4,0 9,2 3,7 7

+

+

+

+

+

частотам (таблица 5). Часть образцов ДНК не амплифицировалась - О варианте частота - 0,1).

При амплификации ДНК зубров были получены три варианта генотипов, обозначенных как О, А и Р. Вариант А является общим для зубров, холмогорской и герефордской пород. Хотя в изученной популяции зубров он встречается очень редко (частота - 0,096). Значительная часть образцов не амплифицировалась "О"вариант, частота - 0,549. Вариант Р представлен двумя продуктами амплификации длиной 220 и 141 п. н. и встречался только у зубров.

При проведении рестрикционного анализа впервые было показано наличие полиморфизма в Ы-области гена йРВ по рестрикта-з&ч ШпГ I и Мзр I, причем для рестрикгазы Мзр Г бив выявлен новый сайт рестрикции, локализованный в 37-м нуклеотиде от 5'-конца исследуемого фрагмента. Полученные данные позволяли выделить отдельные подварианты внутри группы животных с генотипом А по локусу ЮНВ (табл. б).

Таблица 6.

Рестрикционный полиморфизм варианта А гена 0!?В у холмогорской и герефордской пород.

Подварианг! Холмогорская порода ! Герэфордская порода !

! п ! Частота !' п 1 Частота !

-5-

-! -

-!

А(М- Н-) А(М- Н-0 А(№ Н-) А(М- Н+) А(М*±М-Н-)

5

3

6 С.

4 4

0.178 0,108 0,214 0,224 0,143 С, 143

3 9

0,25 0.75

Примечания: М - сайт рестрикции для Мзр I в 53-ем положении, М* - новый сайт рестрикции для 1£зр I в 37-ом положат, Н - сайт рестрикции для ШпГ I в 70 положении от 5'-конца исследуемого фрагмента, (-) - отсутствие и (+) - наличие сайтов рестрикции, (+) - одновременное присутствие в генотипе копий гена, содержащих ('+) и не содержащих (-) указанные сайты рестрикции.

- 13 -

Анализ генотипов исследованных животных по двум докуеам (DRB и DQB)

Частоты генотипических сочетаний вариантов генов DQB и DRB у животных холмогорской породы представлены ка рис. 12. ■

вгз m

ЕЯ КЗ ЕЯ О Е?а ES3 ш

_кшаз-в ива,, вия.

Е-М А-О В-О С-0 C-L А-М D-L

20

ЕЯ

га

БвгллЗ

ЕЯ BÜO

ет га в га ЕЯ Е0 о 5 ттця 4

iL'1"!! РИ ps?35 jp»g

ЦЦ'1"*' 2

гапкаиа ш i

jSSLEELKI

A-L B-M 0-L E-L A-LM 0-М C-M

Гистограма 3. Частоты генотипических сочетаний по локусам DRB и DQB у животных холмогорской породы.

В исследованной выборке генотип A/L является преобладающем (частота 0,3), что позволило рассчитать для него таете частоты подвариантов (таблица 7). Частота генотипа В/М такие достаточно высока (0,12), остальные 12 вариантов представлены частотами ниле 0,07.

Из-за большого количества вариантов гена DRB размер выборки (п-60) оказывается недостаточным для достоверной оценки неравнокесности по сцеплении аллельных вариантов генов DRB и DQB. Тем не менее, можно отметить некоторые тенденции: например, в исследованной выборке полностью отсутствуют животные с генотипом D/M, хотя ожидаемая частота для него составляет 0,121. Аналогичная картина прослеживается и на частотах сочетаний различных подвариантов генов: полностью отсутствуют генотипы A(M-H+-)/L( А1-Н+), A(M-H+)/L(А1+Н-), А(K-i-Ht-)/1С AI +Н-) и другие (таблица 7). На основе таких данных можно проследить неравновесность по сцеплении аялельных вариантов генов DQB и DRB, но при значительном увеличении выборки.

. Таблица 7.

Частоты подвариантов генов ОКБ и ВДВ у группы животных холмогорской породы с генотипом А/1- по данным локусам.

| *\ К}В 1 \ Ь вариант 1И !Т Час- | то- |

1 \ 1 юяв \ подварианты А1-Н+1А1+Н- Ю А1+ННГ та |

1 |П 1 а |о АСМ-Н-) 4 1 0 15 1 0,25 |

1 в |д 1 а |в А(М-Н+) 0 0 3' 13 1 0,15 |

1 Р |а 1 и |р АСМ+Н+) 4 0 0 14 I 0,20 |

1 а (и 1 т |а 3 0 1 И 1 0,20 |

1 1и 1 |г А(М*+М-Н-) 0 0 0 10 1 0 |

1 |ы А(М*±М-Н£> 0 4 0 14 1 0,20 1

| ИТОГ 11 5 4 |20 1 1,00 |

| Частота 0,55 0,25 0,25 1 1,0 |

Анализ частот сочетаний вариантов и подвариантов генов ОДВ и Б(?В для черно-пестрой и герефордской пород и зубров представлены в табл.8, 9 и 10.

Таблица 8.

Генотипы животных черно-пестрой породы по локусам Б1?В и К}Е

N I Ь вариант I ! N эдв !-----------------------------------------1ИТО-! Час-

\ ! подварианты !ГО !тоте

ОКБ \ КА1-Н-) (льне (А1+Н+) (АНН-)!(А1-Ш-Н**! !

Р вариант! 3 2 4 I 3 18 0,3{

в вариант! 2 4 3 2 ! 0 И о,2;

Н вариант! 3 2 1 2 Г 1 9 0,1!

I варцант! 3 3 1 2 ! 0 " 9 0,1!

ИТОГО 11 11 9 12 4 47

Частота 0,255 0,255 0,235 0,255 0,02 ' 1,0