Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биолого-морфологические основы клонального микроразмножения некоторых представителей рода Rhododendron L.

ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Биолого-морфологические основы клонального микроразмножения некоторых представителей рода Rhododendron L."



На правах рукописи té

Васильева Ольга Григорьевна

БИОЛОГО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА RHODODENDRON L.

Специальность 03.00.05 - ботаника

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п

f 1 f Г-» r^/^rN

uAr ¿w.J

Москва-2009

003465572

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Главный ботанический сад им. Н. В. Цицина РАН

Научный руководитель - кандидат с.-х. наук О. И. Молканова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук - Е. А. Калашникова

доктор биологических наук - О. Б. Ткаченко

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Ботанический институт им. В. Л. Комарова РАН

Защита диссертации состоится 16 апреля 2009 г. в 14 часов на заседании Диссертационного совета Д.002.028.01 в Главном ботаническом саду им. Н. В. Цицина РАН в конференц-зале лабораторного корпуса.

Адрес: 127276, г. Москва, ул. Ботаническая, д. 4, ГБС РАН Факс: 8 (495) 977-91-72

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Главного ботанического сада им. Н. В. Цицина РАН

Автореферат разослан « 16 » марта 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета /О . 0

доктор биологических наук <9 Ю. К. Виноградова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Род Rhododendron L. - самый крупный в семействе Ericaceae - насчитывает более 1300 видов. Рододендроны характеризуются большим видовым разнообразием, множеством экотипов и широким естественным ареалом. Они представлены вечнозелеными, полувечнозелеными и листопадными видами, значительно отличающимися по морфофизиологическим и биохимическим характеристикам (Кондратович, 1986). Рододендроны - одна из интереснейших групп растений, пользующихся заслуженной популярностью во всем мире благодаря высоким декоративным качествам. Их также можно отнести к ресурсным растениям, так как они являются источниками биологически активных веществ, что обусловлено их высокой биосинтетической активностью. Благодаря этому рододендроны широко используются в качестве технических и эфироносных растений, а также в гомеопатии и традиционной народной медицине многих стран.

В настоящее время, наряду с традиционными способами вегетативного размножения растений, все более успешно используется метод клонального микроразмножения, который базируется не только на процессах морфогенеза и регенерации в условиях in vitro, но и на структурно-физиологической адаптации регенерантов. При этом большую роль играют фенольные соединения -низкомолекулярные продукты вторичного метаболизма, образующиеся практически во всех клетках растений и защищающие их от стрессовых воздействий (Запрометов, 1993).

Таким образом, оптимизация методики клонального микроразмножения и изучение особенностей накопления фенольных соединений в растениях рода Rhododendron весьма актуальны.

Цель и задачи исследования. Цель исследований - комплексное изучение биологических особенностей размножения и сохранение некоторых видов рода Rhododendron ex situ.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. выявить зависимость между морфологическими особенностями вегетативных почек разных видов рододендрона и их регенерационным потенциалом;

2. изучить влияние типа эксплаита и времени его изоляции на регенерационную способность;

3. усовершенствовать методику клонального микроразмножения модельных видов рододендрона;

4. исследовать динамику накопления фенольных соединений в листьях однолетних побегов разных видов рододендрона на протяжении вегетации;

5. сравнить биосинтетическую способность к образованию фенольных соединений интактных растений рододендрона и микропобегов, культивируемых в условиях in vitro.

Научная новизна. Впервые предложен метод предварительной оценки регенерационного потенциала in vitro на основе морфологического анализа вегетативных почек представителей рода Rhododendron.

Выявлены общие закономерности и специфические особенности культивирования in vitro вечнозеленых, полувечнозеленых и листопадных видов рододендрона.

Впервые установлены особенности образования фенольных соединений в листьях интродуцированных видов рододендрона в разные периоды вегетации, а также микропобегах в процессе культивирования in vitro.

Впервые на основе исследования содержания фенольных соединений установлены оптимальные сроки изоляции эксплантов разных видов рода Rhododendron.

Практическая пенность работы и реализация результатов исследований. Предложенный метод предварительной оценки регенерационного потенциала, основанный на особенностях морфологии вегетативных почек рододендрона позволяет прогнозировать потенциальную способность к размножению в культуре in vitro.

Оптимизирована методика клонального микроразмножения представителей рода Rhododendron на основе прямой регенерации растений, которая позволит получать выровненный посадочный материал высоко декоративных и зимостойких видов, форм и сортов этой культуры для заложения маточников.

Создан генетический банк представителей рода Rhododendron in vitro, включающий 20 образцов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 печатных работ, в том числе 3 статьи в реферируемых журналах.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на 9 Российских и Международных конференциях: Международной конференции по дендрологии, посвященной 90-летию П.И. Лапина (Москва, 1999); на конференции, посвященной 40-летию ботанического сада им. И. С. Косенко (Краснодар, 1999); на Конференции молодых ученых МСХА им. К.А. Тимирязева (Москва, 2000); на IV Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Москва - Пущино, 2000); на Всероссийской конференции по нетрадиционным плодовым, ягодным и декоративным культурам (Мичуринск, 2003); на Международной научно-практической конференции «Биотехнология овощных, цветочных и малораспространенных культур» (Москва, 2004); на IX и X конференциях «Проблемы озеленения крупных городов» (Москва; декабрь 2005, март 2007), на I и II Всероссийских конференциях «Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира» (Волгоград; 2006, 2008); на Международной конференции, посвященной 20-летию экспозиции «Японский сад» в ГБС РАН (Москва, 2007). Научные разработки экспонировались на различных выставках, в том числе: на Международной флористической выставке «Flowerex» (Москва; 2006, 2007), на Международной выставке «Мир биотехнологии - 2007», на XI Международной выставке «Цветы - 2007», (2007); на II Фестивале науки в г. Москве, (МГУ, 2007).

Автор выражает искреннюю благодарность д.б.н. Загоскиной Н.В. и к.б.н. Александровой М.С за научные консультации, а также Костиной В.М. за помощь в проведении исследований.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа включает следующие разделы: введение, обзор литературы, описание объекта, материалов и методов исследований, экспериментальную часть, состоящую из трех глав, заключение и выводы. Работа изложена на {^2, страницах, содержит таблицы и рисунков. Список использованной литературы включаехЛ л) источников из них^ на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории биотехнологии растений ГБС им. Н.В. Цицина РАН в 1999-2008 гг.

Исследования проведены на основе коллекции рододендронов отдела дендрологии ГБС РАН, в состав которой входят 40 видов, отобранных в результате многолетних шпродукционных исследований. Модельными объектами исследований служили 12 видов: вечнозеленые виды представлены Rh. maximum L., Rh. brachycarpum D.Don ex G.Don, Rh. catawbiense Michx. и Rh. smirnowii Trautv.; листопадные - Rh. japonicum (A.Gray) Suring., Rh. luteum Sweet, Rh. canadense (L.) Torr., Rh. dauricum L., Rh. schlippenbachii Maxim., Rh. roseum (Loisel.) Rehd, Rh. vaseyi A. Grey и полувечнозеленый Rh. ledebourii Pojark.

Методика биотехнологических исследований основывалась на общепринятых классических приемах работы с культурами изолированных тканей и органов растений (Бутенко, 1999).

Для индукции культуры использовали терминальные и латеральные почки одревесневших побегов и побегов текущего года, а также верхушки стерильных проростков. Изучали способность эксплантов к регенерации в зависимости от типа экспланта и физиологического состояния интактных растений.

На стадии пролиферации использовали питательную среду Андерсона (Anderson, 1976). В качестве регуляторов роста в питательную среду добавляли: 2iP, Kinetin, Zeatin, 6-БАП, в различных концентрациях (1,0-1,5мг/л) и комбинации этих препаратов с ИУК (1,0 мг/л). Стандартом являлась питательная среда Андерсона с содержанием ИУК и 2iP в концентрациях 4 и 15 мг/л соответственно. На стадии размножения учитывали следующие показатели: коэффициент размножения, число междоузлий и высоту микропобегов. Продолжительность каждого субкультивирования составляла 60-70 дней.

На этапе укоренения было изучено два способа аппликации ауксина, влияющих на формирование корневой системы (Высоцкий, 1998).

Адаптацию регенерантов проводили по стандартной методике (Бутенко, 1999).

Определение содержания суммы растворимых фенольных соединений и флаванов, осуществляли спектрофотометрическими методами. Растительный материал экстрагировали горячим 70% или 96%-ым этанолом. Содержание суммы растворимых фенольных соединений в этанольных экстрактах определяли с реактивом Фолина-Дениса, содержание флаванов - с 1%-ным раствором ванилина в 70% H2SO4 (поглощение при 725 и 500 нм, соответственно) (Запрометов, 1971). Калибровочные кривые строили

по (-)-эпикатехину. Определение содержания фенольных соединений и флаванов проводилось в двух биологических и двух аналитических параллелях.

Математическую обработку данных проводили стандартными методами (Доспехов, 1985) с использованием пакета программ Microsoft Office.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение морфологических особенностей вегетативных почек модельных видов рододендрона.

У древесных растений и кустарников в качестве эксплантов обычно используют апикальную меристему вегетативных органов.

В процессе выполнения работы исследована зависимость между морфологическими особенностями вегетативных почек разных видов рода Rhododendron. и их регенерационным потенциалом.

Основным показателем при морфологическом исследовании была емкость почек, которую мы определяли как число листовых зачатков всех возрастов, заключенных в почке от первого видимого примордия до вполне сформированного растущего листа, согласно терминологии, предложенной Т. И. Серебряковой (1971). Из каждого зачатка пазушной почки при благоприятных условиях внешней среды может сформироваться побег (Михалевская, 1983).

У рододендронов в условиях г. Москвы рост побегов заканчивается примерно к середине июля. К этому времени аксиллярные почки содержат 2 - 6 (в зависимости от вида) ясно различимых зачатков листьев, в пазухах которых заметны почки второго порядка. В течение лета число зачатков листьев увеличивается, и к осени на побегах возобновления терминальная вегетативная почка при моноподиальном нарастании содержит от 3 до 10 (в зависимости от вида) ясно различимых зачатков листьев

Для определения зависимости между емкостью почек и коэффициентом размножения in vitro проведен морфологический анализ вегетативных почек на модельных видах рода Rhododendron (табл. 1). Учитывали число внешних и внутренних почечных чешуй, а также число зачаточных листьев, по которому определяли емкость почек (рис.1).

Наибольшие показатели емкости почек были отмечены у полувечнозеленого Rh. ledebourii (10,0) и листопадного Rh. roseum (9,6) - видов, в свою очередь, характеризующихся и наибольшим коэффициентом размножения в культуре in vitro -12,0 и 11,8 соответственно (табл. 2). Вечнозеленые Rh. brachycarpum и Rh. catawbiense характеризуются средними показателями емкости почек по сравнению с листопадными и полувечнозелеными рододендронами. Наименьшее значение емкости почек отмечено у листопадного Rh. schlippenbachii (4,0) отличающегося и невысоким коэффициентом размножения in vitro (6,7).

Рис.1. Строение вегетативных почек Ш. ]аротсит (1) и КИ. ЪгасЬусагрит (2).

|

Таблица 1

Морфометрические показатели вегетативных почек модельных видов.

Вид Число

внешних чешуй, внутренних чешуй, зачатков листьев,

шт. шт. шт.

Rh. brachycarpum 9,3 12,0 6,7

Rh. catawbiense 2,7 8,6 7,3

Rh. ledebourn 5,6 7,8 10,0

Rh. luteum 5,8 5,8 9,0

Rh. japonicum 6,0 8,0 9,0

Rh. schlippenbachii 4,0 3,0 4,0

Rh. roseum 4,0 8,0 9,6

Для установления зависимости между морфологическими характеристиками почек и регенерационным потенциалом рододендронов in vitro проведен корреляционный анализ (табл.2).

Y

Внешние чешуи

Внутренние чешуи

Зачатки листьев

Таблица 2

Коэффициент размножения рододендронов in vitro в зависимости от емкости почек.

Вид Емкость почки Коэффициент размножения (Кр) Коэффициент корреляции (Кг)

Rh. brachycarpum 6,7 1,9 0,81**

Rh catawbiense 7,3 4,0 0,90**

Rh. ledebourii 10,0 12,0 0,87**

Rh japonicum 9,0 9,5 0,95**

Rh. roseum 9,6 11,8 0,82**

Примечание. Критическое значение Кг при различных уровнях значимости:

0,63 - 95% уровень значимости (*); 0,77 - 99% уровень значимости (**)

Для всех изученных видов на 99%-ном уровне значимости выявлена положительная корреляция между емкостью почек и коэффициентом размножения в культуре in vitro. Наибольший коэффициент корреляции отмечен у Rh japonicum (г=0,95**) и у Rh. catawbiense (г=0,90**). Таким образом, количество зачатков метамеров в почках интактных растений в значительной мере определяет коэффициент размножения в искусственных условиях.

Все это свидетельствует о возможности использования предварительного морфологического анализа вегетативных почек перспективных для размножения видов, форм и сортов рододендрона для оценки их регенерационного потенциала в условиях in vitro.

Оптимизация методики клонального микроразмножения представителей рода Rhododendron.

Выявлены факторы, влияющие на эффективность регенерации рододендронов при микроклональном размножении. Реализация морфогенетического потенциала культивируемых тканей обусловлена видовыми особенностями, происхождением и сроками изоляции экспланта, составом питательной среды и условиями культивирования.

Влияние типа экспланта на регенерационный потенциал в культуре in vitro.

Использование для индукции культуры апикальных и латеральных почек с небольшим участком стебля способствовало лучшему росту и развитию микропобегов. В этом случае органогенез наблюдали у 58-72 % эксплантов, в то время как при использовании выделенных меристем (размером 0,2-0,5 мм) - только у 9-16 %. Это, вероятно, связано с наличием запаса энергопластических веществ в тканях побега.

Исследования по определению регенерационного потенциала различных типов эксплантов (апикальные и латеральные почки одревесневших и неодревесневших побегов,

а также верхушки стерильных проростков), проведенные на четырех модельных видах (Rh. ledebourii, Rh. roseum, Rh. japonicum, Rh. catawbiense), позволили установить зависимость коэффициента размножения рододендронов in vitro от типа первичного экспланта (табл. 3).

Таблица 3

Коэффициент размножения некоторых представителей рода Rhododendron

в зависимости от типа экспланта.

Тип экспланта Вид

Rh. catawbiense Rh. ledebourii Rh. japonicum Rh. roseum

Верхушка стерильного проростка 5,7 8,1 13,4 14,2

Апикальные почки с неодревесневших побегов 3,5 5,4 8,1 10,3

Латеральные почки с неодревесневших побегов (в!) 2,4 4,3 5,1 6,2

НСРо,5 1,6 1,9 2,1 3,2

Самым высоким регснерационным потенциалом характеризовались экспланты, изолированные из стерильных проростков. Наибольшее число микропобегов этих эксплантов, получено у ЯИ. гозеит (14,2) и Rh. ]аротсит (13,4). Наименьшей регенерационной способностью характеризовались экспланты Як сШам>Ыеп5е (5,7). У всех исследуемых видов рододендрона экспланты, выделенные из неодревесневших побегов текущего года, характеризовались меньшими показателями коэффициента размножения. Это может быть объяснено тем, что у эксплантов, выделенных из стерильных проростков синтезируется больше эндогенных фитогормонов, что в дальнейшем способствует дедифференциации клеточных структур, их активному делению и росту, а затем, и образованию большего числа микропобегов.

В дисперсионный анализ не были включены показатели коэффициентов размножения у эксплантов, выделенных из одревесневших побегов, так как процесса регенерации у них не наблюдали.

Таким образом, в качестве первичных эксплантов у рододендрона наиболее эффективно использовать верхушки стерильных проростков, а также апикальные почки побегов текущего года.

Влияние видовых особенностей на коэффициент размножения рододендронов in vitro.

В процессе наших исследований определены коэффициенты размножения (Кр) у разных видов рода Rhododendron (рис.2).

Рис.2. Коэффициент размножения видов рода Rhododendron на среде Андерсона. Условные обозначения: 1 - Rh. smirnowii; 2 - Rh. brachycarpum; 3 - Rh. maximum; 4 - Rh. catawbiense; 5 - Rh. ledebourii; 6 - Rh. japonicum; 7 - Rh. roseum; 8 - Rh. vaseyi; 9 - Rh. schlippenbachii.

На начальных этапах культивирования на стандартной среде Андерсона (1976) коэффициенты размножения изученных видов отличались более чем в 5 раз (от 1,9 до 12,0). Наибольшей способностью к регенерации характеризовались Rh. ledebourii, Rh. roseum и Rh. japonicum: коэффициенты размножения - 12,0; 11,8 и 9,7 соответственно. Самая низкая регенерационная способность - у Rh. brachycarpum и Rh. maximum: коэффициенты размножения соответственно - 1,9 и 2,5.

По интенсивности пролиферации изученные виды были условно разделены нами на 2 группы: первая группа включает листопадные рододендроны - Rh. japonicum, Rh. roseum, Rh. schlippenbachii и Rh. vaseyi и полувечнозеленый Rh. ledebourii (Kp>6), a вторая - вечнозеленые - Rh. smirnovii, Rh. catawbiense, Rh. maximum и Rh. brachycarpum (Kp<6).

При последующих субкультивированиях коэффициент размножения у вечнозеленых видов рододендрона увеличивался незначительно - до 3-6, тогда как у листопадных видов - до 30-35. В то же время образующиеся в процессе пролиферации микропобеги листопадных видов сильно вытягивались, что негативно сказывалось на процессах ризогенеза.

Влияние регуляторов роста на коэффициент размножения рододендронов.

Многими исследователями показано определяющее влияние физиологически активных веществ на морфогенез in vitro (Высоцкий, 1998; Игнатова, 2004; Долгих, 2005).

Для увеличения коэффициента размножения и получения выровненных микропобегов, способных к ризогенезу, было проведено исследование по подбору оптимальных концентраций регуляторов роста (рис. 3).

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

MRh. ledebourii О Rh. japonicum Ш Rh. roseum

Рис. 3. Влияние гормонального состава питательной среды на коэффициент размножения некоторых видов рода Rhododendron. Условные обозначения:

1 - Зеатин - 1,0 мг/л; 7 - Кинетин -1,0 мг/л + ИУК -1,0 мг/л;

2 - Зеатин -1,5 мг/л; 8 - Кинетин -1,5 мг/л + ИУК -1,0 мг/л;

3 - Зеатин -1,0 мг/л + ИУК -1,0 мг/л; 9 - 6-БАП -1,0 мг/л;

4 - Зеатин -1,5 мг/л + ИУК -1,0 мг/л; 10 - 6-БАП -1,5 мг/л;

5 - Кинетин -1,0 мг/л; 11 - 6-БАП -1,0 мг/л + ИУК - 1,0 мг/л;

6 - Кинетин -1,5 мг/л; 12 - 6-БАП -1,5 мг/л + ИУК -1,0 мг/л.

Сравнительный анализ влияния различных регуляторов роста на коэффициент размножения показал, что максимальный коэффициент размножения у ЛЬ. ШеЬоиги (19,8) получен на питательной среде с добавлением зеатина в сочетании с ИУК (1,0 мг/л); а у Як ]аротсит (16,1) и Rh. гоэеит (11,1) - с зеатином (1,0 мг/л). При этом происходило образование хорошо сформированных микропобегов. На остальных вариантах питательных сред показатели коэффициента размножения не превышали 10,0 и были в 2 -9 раз ниже.

При клональном микроразмножении рододендронов подобраны условия культивирования, при которых растения-регенеранты развиваются посредством прямого органогенеза, минуя стадию каллусообразования.

Особенности укоренения модельных видов Rhododendron в условиях in vitro.

Важным этапом при получении растений-регенерантов является укоренение микропобегов. Многие виды рододендрона (особенно вечнозеленые) относятся к трудноукореняемым растениям. При укоренении микропобегов рододендрона часто наблюдается образование каллусной ткани на базальной части микропобегов или образование воздушных корней (преимущественно у листопадных видов), затрудняющих высадку растений-регенерантов в условия in vivo. В связи с этим было изучено два способа аппликации ауксина дам увеличения процента укореняемости микропобегов и сокращения сроков укоренения:

1) непосредственное культивирование микропобегов на питательной среде, ' содержащей ИМК в концентрации 1 мг/л;

2) обработка базальной части микропобегов ИМК в концентрациях 25-30 мг/л в течение 3-6 часов с последующим культивированием на питательных средах, не содержащих регуляторов роста.

Наибольший процент укоренения растений наблюдали при выдерживании микропобегов в растворе ИМК в концентрации 30 мг/л в течение 4-х часов (табл. 4).

Таблица 4

Влияние способа аппликации ауксина на укоренение микропобегов рододендрона.

Способ аппликации ауксина Вид Укоренение, % Число корней на один микропобег, шт Длина корней, см

Среда Андерсона + ИМК 1 мг/л (а) Rh. ledebourii 72,0 ±4,1 3,85 ± 0,12 1,95 ±0,12

Rh. smirnowii 49,8 ± 2,8 2,15 ±0,10 1,00 ±0,09

Rh. luteum 60,0 ±3,5 3,42 ± 0,17 1,50 ±0,08

25 мг/л ИМК, экспозиция - 4 часа Rh. ledebourii 79,3 ±4,0 4,18 ±0,26 2,25 ±0,21

Rh. smirnowii 59,3 ± 1,2 2,42 ±0,13 1,07 ±0,07

Rh. luteum 70,0 ±2,3 3,65 ±0,14 1,60 ±0,08

30 мг/л ИМК, экспозиция - 4 часа Rh. ledebourii 100,0 4,37 ±0,22 1,63 ±0,09

Rh. smirnowii 66,7 ±1,1 4,10 ±0,31 1,03 ±0,11

Rh. luteum 85,7 ±2,5 4,26 ±0,32 1,61 ±0,13

Выдерживание микрочеренков в растворе ауксина в течение 4-х часов для всех видов было наиболее предпочтительно. При концентрации ИМК 30 мг/л выход укоренившихся регенерантов Rh. ledebourii составил 100%, Rh. luteum - 85,7%,

Rh. smirnowii - 66,7%, а при концентрации 25 мг/л- 79,3%; 70,0% и 59,3% соответственно. В контроле (при обычном способе укоренения на питательной среде Андерсона с добавлением 1 мг/л ИМК) укореняемость составляла у Rh. ledebourii - 72%, у Rh. luteum - 60%, ay Rh. smirnowii - не превышала 50%. Причем положительное влияние таких обработок проявлялось не только в увеличении процента укоренившихся микропобегов, но и в увеличении числа образовавшихся корней у всех исследуемых видов. Необходимо отметить, что кратковременные обработки ауксинами приводили к сокращению времени укоренения с 2,5-3,0 до 1,0-1,5 месяцев.

Адаптация растений-регенерантов рододендрона.

Для успешной адаптации растений-регенерантов рододендронов к условиям in vivo мы использовали субстрат, состоящий из смеси верхового торфа и песка в соотношении 1:1, с добавлением хвойной земли. Приживаемость регенератов рододендронов составила 90-98%.

При замедлении роста регенерантов в первый год после высадки в открытый грунт отмечали хорошее жизненное состояние растений. Через год наблюдали активный рост побегов, а в последующие годы и более раннее заложение цветочных почек по сравнению с растениями, размноженными с использованием традиционных методов. Необходимо отметить, что растения-регенеранты характеризовались более высокой способностью к ризогенезу по сравнению исходными растениями, что может быть использовано в дальнейшем при их размножении методом «зеленого черенкования».

Изучение содержания фенольных соединений у представителей рода Rhododendron.

Фенольные соединения, участвующие в различных физиологических процессах и зачищающих клетки от стрессовых воздействий, могут препятствовать процессам дедифференциации при введении тканей в культуру in vitro и редифференциации - при регенерации растений, что обусловлено их высокой реакционной способностью.

Одной из наиболее актуальных проблем на начальных этапах культивирования рододендронов in vitro, а также при последующей работе с микропобегами, является поликонденсация веществ фенольной природы, которая приводит к потере жизнеспособности, ингибированию клеточных делений, гибели экспланта (Костина, Загоскина, 2004).

Была изучена динамика накопления фенольных соединений в тканях интактных растений в течение вегетации с целью определения оптимальных сроков изоляции эксплантов (рис. 4).

Rh. maximum '.catawbiense Ht"Rh. brachycarpum

• Rh.dauricum

• Rh. canadense й Rh.luteum

Л/г. schlippenbachii

май

июль октябрь

Рис. 4. Суммарное содержание растворимых фенольных соединений в листьях однолетних побегов видов рода рододендрон в разные периоды вегетации.

Изученные виды существенно отличались по способности к синтезу фенольных соединений. В тканях вечнозеленых видов Rh. maximum и Rh. catawbiense их накопление в 2-2,5 раза больше, чем у листопадных видов. Листопадные виды (Rh. luteum, Rh. canadense, Rh. dauricum) практически не различались между собой по биосинтетической способности, за исключением Rh. schlippenbahii, который содержит наименьшее количество растворимых фенольных соединений.

Кроме этого, исследуемые виды отличались по биосинтетической активности в разные периоды вегетации. Самые высокий уровень накопления фенольных соединений для всех исследуемых видов отмечен в период активного роста побегов (конец июня -начало июля).

В состав фенольного комплекса рододендронов входят флаваны, синтез которых характерен для многих видов растений. Эти вещества являются одними из наиболее восстановленных соединений фенольной природы, что обуславливает их высокую биологическую активность (Запрометов; 1964, 1971).

Одновременно с изучением способности интродуцированных видов рода Rhododendron образованию фенольных соединений, проводили определение флаванов в тканях интактных растений (рис. 5).

.-ш- ВИшатЫепге

—Ъг"РИЪтсЬусагр1т

—Ь—ЯкЛаигкит

^—ВНАаеит ——¡УмсНИррепЬасНи

Рис. 5. Содержание флаванов в листьях однолетних побегов видов рода рододендрон.

Более высокой способностью к образованию флаванов характеризовались вечнозеленые виды рододендрона. У листопадных видов содержание флаванов было значительно ниже (в 2 раза и более), за исключением Як ¿аипсит, по содержанию флаванов приближающегося к вечнозеленым видам, особенно в период активного роста побегов.

Накопление флаванов в течение вегетации изменяется соответственно суммарному содержанию растворимых фенольных соединений: самый высокий уровень отмечен в период активного роста побегов.

В целом, на долю флаванов приходится от 18,9 до 37,8 % от суммарного содержания растворимых фенольных соединений, при этом: у вечнозеленых видов доля флаванов составляла 21,6-26, 7 %, у листопадных - 18,9-25 %. У ЛИ. с1аипсит, который относится к листопадным видам и характеризуется более низкой биосинтетической способностью по сравнению с вечнозелеными видами, доля флаванов была наиболее высокой из исследуемых видов - 34,3—37,8 %. Следует отметить, что такое соотношение флаванов к общей сумме фенольных соединений сохраняется в разные периоды вегетации. Таким образом, выявлена взаимосвязь между накоплением фенольных соединений и флаванов в течение вегетации у всех исследуемых видов (рис. 6).

мг/r сыр.массы 160 т-

140

1 2 3 4 5 6 7

0 май-фенолы 69 май-флаваны 0 июль-фенолы ■ июль-флаваны В октябрь-фенолы ■ октябрь-флаваны

Рис. 6. Содержание фенольных соединений и флаванов у разных видов рода Rhododendron в течение вегетации.

Условные обозначения: 1 - Rh.maximum; 2 - Rh.catawbiense; 3 - Rh.brachycarpum; 4 - Rh.dauricum; 5- Rh.luteum; 6- Rh.canadense; 7- Rh.schlippenbachii

В литературе имеются данные, свидетельствующие о снижении способности регенерантов к синтезу вторичных метаболитов при культивировании in vitro (Зайцева, 2007). В связи с этим на следующем этапе работы было проведено сравнение биосинтетической активности интактных растений рододендрона с микропобегами при культивировании in vitro (Рис.7).

При культивировании рододендронов в культуре in vitro суммарное содержание фенольных соединений в микропобегах снижается у всех исследуемых видов. У вечнозеленого Rh. catawbiense уровень накопления фенольных соединений в микропобегах (по сравнению с интактньми растениями) уменьшается почти в 4 раза, у листопадного Rh. luteum - в 2,4 раза, а у Rh. dauricum - в 1,7 раза. Отмечено, что на стадии пролиферации уменьшается выделение фенолов в питательную среду, что снижает их ингибирующее действие на ткани микропобегов. Это коррелирует с содержанием фенолов в тканях регенерантов. Очевидно, благодаря этому снижается и негативное действие фенолов при последующих субкультивированиях.

Ш интактные растения ■ микропобеги

Рис. 7. Суммарное содержание растворимых фенольных соединений (в тканях однолетних побегов) в интактных растениях и в микропобегах при культивировании от vitro (первый год культивирования).

Динамика накопления фенольных соединений в тканях интактных растений в течение вегетации в значительной мере определяет оптимальные сроки изоляции исходных эксплантов. Именно этим, на наш взгляд, объясняется тот факт, что наиболее жизнеспособные экспланты видов рода Rhododendron получены при изоляции с растений, прошедших период физиологического и вынужденного покоя, т.е. в момент наименьшего накопление фенольных соединений.

выводы

1) Обоснована возможность прогнозирования регенерационного потенциала у представителей рода Rhododendron по емкости вегетативных почек интактных растений.

2) Оптимальным сроком изоляции эхсплаитов видов рододендрона является период до начала активного роста побегов (май), в который наблюдается наименьшее накопление фенольных соединений в почках интактных растений.

3) В качестве первичных эксплантов наиболее эффективно использовать верхушки стерильных проростков и апикальные почки побегов текущего года, характеризующиеся наибольшим регенерационным потенциалом.

4) Виды рода Rhododendron отличаются по способности к размножению в культуре in vitro. Наблюдается снижение регенерационного потенциала в следующей последовательности - Rh. ledebourii (12,0) и Rh. roseum (11,8); Rh. dauricum (11,0); Rh. japonicum (9,7); Rh. luteum (9,0); Rh. canadense (7,8); Rh. schlippenbachii (6,7); Rh. vaseyi (6,2); Rh smirnowii (5,3); Rh. catawbiense (4,0); Rh. maximum (2,5); Rh. brachycarpum (1,9).

5) Для размножения in vitro представителей рода Rhododendron оптимальной является питательная среда Андерсона с добавлением зеатина (1,0-1,5 мг/л) и зеатина (1,0-1,5 мг/л) в сочетании с ИУК (1,0 мг/л).

6) Оптимальным способом аппликации ауксинов на этапе укоренения является выдерживание микропобегов в растворе ИМК (30 мг/л в экспозиции 4 ч.), сокращающим период укоренения с 3,0 до 1,5 месяцев.

7) Выявлено, что интродуцированные виды рода Rhododendron отличаются по способности к синтезу фенольных соединений: у вечнозеленых видов она значительно выше по сравнению с полувечнозелеными и листопадными.

8) Растения-регенеранты характеризуются значительным снижением синтеза фенольных соединений по сравнению с интактными растениями.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

1. Васильева О.Г., Стахеева Т.С. Размножение интроАудированных рододендронов методом in vitro II Тезисы докладов международной конференции, посвященной 90-летию со дня рождения члена-корреспондента РАН П.И.Лапина, "Проблемы дендрологии на рубеже XXI века". Москва, 1999. С. 339-341.

2. Васильева О.Г., Стахеева Т.С. Возможности размножения интродуцированных видов рододендронов методом in vitro II Бюл. Ботан. сада им. И.С.Косенко. Краснодар, 1999. №.14. С. 19.

3. Васильева О.Г., Стахеева Т.С., Молканова О.И. Размножение рододендронов в культуре in vitro // Тезисы докладов конференции "Интродукция растений. Охрана и обогащение биологического многообразия видов". Воронеж, 2002. С. 25.

4. Васильева О.Г., Стахеева Т.С Некоторые особенности размножения рододендронов в культуре in vitro // Тезисы докладов Международной научной конференции, посвященной 70-летию со дня основания ЦБС, "Ботанические сады: состояние и перспективы сохранения, изучения, использования биоразнообразия растительного мира". Минск, 2002. С. 31.

5. Стахеева Т.С., Васильева О.Г., Митрошенкова В.М. Проблема вегетативного размножения некоторых представителей рода Vaccinium // Мат. 3-й Международной научной конференции. Санкт-Петербург, 2003. С. 355-357.

6. Molkanova O.I., Belyaeva J.E., Stakheeva T.S., Vasilieva O.G. Application of biotechnological methods for management of biological resources // VIII International conference «The biology of plant cells in vitro and biotechnology». Russua, Saratov, 2003. P. 208.

7. Молканова О.И., Коновалова Л.Н., Стахеева T.C., Васильева О.Г. Разработка и совершенствование биотехнологических методов размножения и сохранения полезных и редких растений // Биотехнология овощных, цветочных и малораспространенных культур. Сборник научных трудов международной научно-практической конференции. Москва, 2004. С. 227-231.

8. Молканова О.И., Васильева О.Г., Ветчинкина Е.М. Использование антиоксидантов при культивировании растений in vitro II VI симпозиум по фенольным соединениям. - Москва, 2004. С 57.

9. Молканова О.И., Васильева О.Г. Использование биотехнологических методов в ускоренном размножении посадочного материала для озеленения г. Москвы // VIII конференция «Проблемы озеленения крупных городов». Москва, 2004. С. 53-56.

10. Васильева О.Г., Александрова М.С. Биологические особенности клонального размножения и регенерация in vitro интродуцированных видов рода Rhododendron L. // Бюл. Гл. ботан. сада. 2005. Вып.189. С.252-259.

11. Молканова О.И., Стахеева Т.С., Васильева О.Г., Коновалова Л.Н., Сучхова Н.К. Использование биотехнологических методов для размножения и сохранения редких и ценных видов растений // Материалы Международной научной конференции, посвященной 60-летию Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН

«Ботанические сады как центры сохранения биоразнообразия и рационального использования растительных ресурсов». Москва, 2005. С. 354-356.

12. Молканова О.И., Беляева Ю.Е., Васильева О.Г. Возможности использования биотехнологических методов для размножения и сохранения древесных растений // Материалы международной научной конференции, посвященная 165-летию Сухумского ботанического сада и 110-летию Сухумского субтропического дендропарка института ботаники AHA. Сухум, 2006 г. С. 393-395.

13. Васильева О.Г., Костина В.М., Александрова М.С., Загоскина Н.В. Микроклональное размножение рододендронов и исследование их метаболизма на уровне накопления фенольных соединений // Российская научно-практическая конференция «Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира». Волгоград. 2006. С. 82-84.

14. Демидов А. С., Коротков О. И., Васильева О. Г., Молканова О. И. Применение биотехнологических методов размножения в системе производства посадочного материала для озеленения городов // Состояние зеленых насаждений в Москве. Аналитический доклад. Москва, 2007. Вьш.Ю. С. 159-161.

15. Костина В.М., Васильева О.Г., Загоскина Н.В. Образование фенольных соединений в растениях рода Rhododendron L., полученных методом клонального микроразмножения // Материалы Международной конференции «Современная физиология: от молекул до экосистем». Сыктывкар, 2007. С. 19-21.

16. Костина В. М., Васильева О. Г., Александрова М. С., Загоскина Н. В. Накопление фенольных соединений в растениях рода Rhododendron L. // Бюл. Гл. ботан. сада. 2006. Вып. 191. С. 168-170.

П.Васильева О. Г., Голосова Е. В. Рододендроны Японского сада и перспективы их размножения // Сб. докладов Международной конференции, посвященной 20-летию экспозиции «Японский сад» в ГБС РАН. Москва, 2007. С. 65-71.

18. Васильева О.Г. Возможности и перспективы клонального микроразмножения интродуцированных видов рододендрона // Вестн. КрасГАУ. 2008. №3 С. 74-78.

19. Васильева О.Г., Захарова А. А., Александрова М. С. Оценка регенерационного потенциала интродуцированных видов рода Rhododendron L. // Материалы II Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира». Волгоград, 19-21 августа 2008. Под ред. A.C. Демидова; отд. Биол. наук РАН, совет ботан. Садов России.-Белгород: Изд-во БелГУ, 2008. С. 92-96.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 16.03.09. Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,25 Печать авторефератов: 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Васильева, Ольга Григорьевна

Список использованных сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Ботаническая классификация представителей рода Rhododendron.

1.2. Особенности распространения и экологии представителей рода Rhododendron.

1.3. История интродукции видов рода Rhododendron.

1.4. Использование рододендронов в различных областях народного хозяйства.

1.5. Микроклональное размножение растений: модели, основные факторы, влияющие на микроклональное размножение.

1.6. Классификация фенольных соединений и их функции в растениях.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕКТЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

3.1. Изучение морфологических особенностей вегетативных почек модельных видов рододендрона.

3.2. Оптимизация методики клонального микроразмножения представителей рода Rhododendron.

3.3. Изучение содержания фенольных соединений у представителей рода Rhododendron.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биолого-морфологические основы клонального микроразмножения некоторых представителей рода Rhododendron L."

Род Rhododendron L. - самый крупный в семействе Ericaceae -насчитывает более 1300 видов. Рододендроны характеризуются большим видовым разнообразием, множеством экотипов и широким естественным ареалом. Они представлены вечнозелеными, полувечнозелеными и листопадными видами, значительно отличающимися по морфофизиологическим и биохимическим характеристикам (Кондратович, 1981). Рододендроны - одна из интереснейших групп растений, пользующихся заслуженной популярностью во всем мире благодаря высоким декоративным качествам. Их также можно отнести к ресурсным растениям, так как они являются источниками биологически активных веществ, что обусловлено их высокой биосинтетической активностью.

Метод клонального микроразмножения растений, имеющий значительные преимущества перед традиционными способами вегетативного размножения, приобретает все большее значение в современных биотехнологических исследованиях. Поэтому для ценных видов все более актуальна разработка и оптимизация методик клонального микроразмножения. При этом важное значение имеет предварительная оценка регенерационного потенциала in vitro на основе морфологического анализа вегетативных почек.

Метод клонального микроразмножения базируется не только на процессах морфогенеза и регенерации в условиях in vitro, но и на структурно-физиологической адаптации регенерантов. При этом большую роль играют фенольные соединения - низкомолекулярные продукты вторичного метаболизма, образующиеся практически во всех клетках растений и защищающие их от стрессовых воздействий (Запрометов, 1993). Поэтому установление особенностей образования фенольных соединений в листьях интродуцированных видов рода Rhododendron в разные периоды вегетации необходимо для выявления оптимальных сроков изоляции эксплантов.

Таким образом, оптимизация методики клонального микроразмножения и изучение особенностей накопления фенольных соединений в растениях рода Rhododendron весьма актуальны.

Цель исследований - комплексное изучение биологических особенностей размножения и сохранение некоторых видов рода Rhododendron ex situ.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. выявить зависимость между морфологическими особенностями вегетативных почек разных видов рододендрона и их регенерационным потенциалом;

2. изучить влияние типа экспланта и времени его изоляции на регенерационную способность;

3. усовершенствовать методику клонального микроразмножения модельных видов рододендрона;

4. исследовать динамику накопления фенольных соединений в листьях однолетних побегов разных видов рододендрона на протяжении вегетации;

5. сравнить биосинтетическую способность к образованию фенольных соединений интактных растений рододендрона и микропобегов, культивируемых в условиях in vitro. ■

Научная новизна. Впервые предложен метод предварительной оценки регенерационного потенциала in vitro на основе морфологического анализа вегетативных почек представителей рода Rhododendron.

Выявлены общие закономерности и специфические особенности культивирования in vitro вечнозеленых, полувечнозеленых и листопадных видов рододендрона.

Впервые установлены особенности образования фенольных соединений в листьях интродуцированных видов рододендрона в разные периоды вегетации, а также микропобегах в процессе культивирования in vitro.

Впервые на основе исследования содержания фенольных соединений установлены оптимальные сроки изоляции эксплантов разных видов рода Rhododendron.

Практическая ценность работы и реализация результатов исследований. Предложенный метод предварительной оценки регенерационного потенциала, основанный на особенностях морфологии вегетативных почек рододендрона позволяет прогнозировать потенциальную способность к размножению в культуре in vitro.

Оптимизирована методика клонального микроразмножения представителей рода Rhododendron на основе прямой регенерации растений, которая позволит получать выровненный посадочный материал высоко декоративных и зимостойких видов, форм и сортов этой культуры для заложения маточников.

Создан генетический банк представителей рода Rhododendron in vitro, включающий 20 образцов.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены на 9 Российских и Международных конференциях: Международной конференции по дендрологии, посвященной 90-летию П.И. Лапина (Москва, 1999); на конференции, посвященной 40-летию ботанического сада им. И. С. Косенко (Краснодар, 1999); на Конференции молодых ученых МСХА им. К.А. Тимирязева (Москва, 2000); на IV Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и- перспективы их использования» (Москва -Пущино, 2000); на Всероссийской конференции по нетрадиционным плодовым, ягодным и декоративным культурам (Мичуринск, - 2003); на Международной научно-практической конференции «Биотехнология овощных, цветочных и малораспространенных культур» (Москва, 2004); на IX и X конференциях «Проблемы озеленения крупных городов» (Москва; декабрь 2005, март 2007), на I и II Всероссийских конференциях «Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира» (Волгоград; 2006, 2008); на Международной конференции, посвященной 20-летию экспозиции «Японский сад» в ГБС РАН (Москва, 2007). Научные разработки экспонировались на различных выставках, в том числе: на Международной флористической выставке «Flowerex» (Москва; 2006, 2007), на Международной выставке «Мир биотехнологии - 2007», на XI Международной выставке «Цветы - 2007»; на II Фестивале науки в г. Москве, (МГУ, 2007).

Заключение Диссертация по теме "Ботаника", Васильева, Ольга Григорьевна

выводы

1) Обоснована возможность прогнозирования регенерационного потенциала у представителей рода Rhododendron по емкости вегетативных почек интактных растений.

2) Оптимальным сроком изоляции эксплантов видов рододендрона является период до начала активного роста побегов (май), в который наблюдается наименьшее накопление фенольных соединений в почках интактных растений.

3) В качестве первичных эксплантов наиболее эффективно использовать верхушки стерильных проростков и апикальные почки побегов текущего года, характеризующиеся наибольшим регенерационным потенциалом.

4) Виды рода Rhododendron отличаются по способности к размножению в культуре in vitro. Наблюдается снижение регенерационного потенциала в следующей последовательности - Rh. ledebourii (12,0) и Rh. roseum (11,8); Rh. dauricum (11,0); Rh. japonicum (9,7); Rh. luteum (9,0); Rh. canadense (7,8); Rh. schlippenbachii (6,7); Rh. vaseyi (6,2); Rh smirnowii (5,3); Rh. catawbiense (4,0); Rh.maximum (2,5); Rh. brachycarpum (1,9).

5) Для размножения in vitro представителей рода Rhododendron оптимальной является питательная среда Андерсона с добавлением зеатина (1,0-1,5 мг/л) и зеатина (1,0-1,5 мг/л) в сочетании с ИУК (1,0 мг/л).

6) Оптимальным способом аппликации ауксинов на этапе укоренения является выдерживание микропобегов в растворе ИМК (30 мг/л в экспозиции 4 ч.), сокращающим период укоренения с 3,0 до 1,5 месяцев.

7) Выявлено, что интродуцированные виды рода Rhododendron отличаются по способности к синтезу фенольных соединений: у вечнозеленых видов она значительно выше по сравнению с полувечнозелеными и листопадными.

8) Растения-регенеранты характеризуются значительным снижением синтеза фенольных соединений по сравнению с интактными растениями.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Васильева, Ольга Григорьевна, Москва

1. Аболь Э.Я. Фармакогностическое изучение листа рододендрона Унгерна // Труды Тбилисского научно-исследовательского химико-фармацевтического ин-та. 1956. - № 8. - С. 31-34.

2. Александрова М.С. Полезные свойства рододендронов природной флоры СССР // Тр. Ботанического ин-та АН СССР. 1970. - Сер. 6. - Вып. 3. С. 35-37.

3. Александрова М.С. Рододендроны природной флоры СССР. М., 1975. - 112 с.

4. Александрова М.С. Зимостойкость видов рододендрона и перспективность их интродукции в СССР. Бюлл. Гл. бот. сада АН СССР, 1985, вып. 136. С. 3-10.

5. Александрова М.С. Рододендрон. Лесная промышленность, 1989.-72 с.

6. Александрова М.С. Рододендроны. Москва, Фитон+, 2001. 192 с.

7. Александрова М.С. Рододендроны. М.: Кладезь-Букс, 2004. - 96с.

8. Байбурина Р.К., Мухаметвафина A.A., Миронова Л.Н. Особенности регенерации гибридов азиатских лилий из фрагментов соцветий в культуре in vitro / Сельскохозяйственная биология, 2006. 1: 80-85 С.

9. Бандюкова В.А., Оганесян Э.Т. Распространение флавоноидов в некоторых семействах высших растений. Сообщение 8. Сем. Ericaceae II Раст. ресурсы. 1973. - Т. 9. - № 2. - С. 297-303.

10. Батыгина Т.Е., Васильева В.Е., Маметьева Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro (эмбриоидогенез у покрытосемянных) // Ботан. журн. 1978. - 63, № 1.-С. 87-111.

11. Батюкова B.C., Колесников Д.Г. Способы выделения и структура флавоноидов Crataegus curvisepala Lindm. // Материалы .1-го Всесоюз. симпозиума по фенольным соединениям "Фенольные соединения и их биологические функции". М.: Наука, 1968. - С. 45-49.

12. Белова Н.В., Юшатова Г.А. Тритерпены видов рододендрона / В сб.: Совещание по вопросам изучения и освоения растительных ресурсов СССР. Новосибирск, «Наука». - 1968. - С. 67-69.

13. Белоусов М.В., Комиссаренко Н.Ф., Березовская Т.П., Точкова Т.В. Содержание флавоноидов и кумаринов в сибирско-дальневосточных видах сем. Ericaceae II Растит, ресурсы. 1994. - Т. 30. - № 4. - С. 44-47.

14. Белоусов М.В., Грахов В.П., Березовская Т.П., Дмитрук С.У., Комиссаренко К.Ф. Свободные фенолкарбоновые кислоты видов сем. Ericaceae флоры Сибири и Дальнего Востока России (Вересковые)5// Растит, ресурсы. 1999. - Т. 35. - № 3. - С. 74-81.

15. Ботяновский И.Е. Культура рододендронов в Белоруссии. Минск : Наука и техника, 1981. - 96 с.

16. Булыгин Н.Е. К методике учета влияния низких температур на сезонное развитие деревьев. В кн.: Докл. феносектора ГО СССР. Л.: Географ, о-во СССР. - 1966. - Вып. 2 (18). - С. 113-122.

17. Булыгин Н.Е. Дендрология. Методические указания к проведению учебной практики с элементами научных исследований для студентов лесохозяйственного факультета по специальности. Л., 1987. - С. 47.

18. Бутенко Р.Г. Рост и дифференциация в культуре клеток растений / Рост растений и природные регуляторы. М.: Наука, 1977. - 95 с.

19. Бутенко Р.Г. Культура клеток растений и биотехнология. М.: Наука, 1986.-280 с.

20. Бутенко Р.Г. Клеточные и молекулярные аспекты морфогенеза растений in vitro II I Чайлахян. Чтения. Пущино: Пущинский НЦ, 1994. -С.7-26.

21. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнология на их основе. М.: ФБК-ПРЕСС, 1999. - 160 с.

22. Буш. H.A., Буш Е.А. К динамике зарослей кавказского рододендрон// Ботанический журнал СССР. 1937. - С 22-26.

23. Быков А.И. Биологически активные флавоноиды некоторых видов боярышника: Автореф. дис. канд. фарм. наук. М., 1974.

24. Василенко Ю.К., Лисевицкая Л.И., Бандюкова В.А., Казаков А.Л., Оганесян Э.Т., Фролова Л. М. Гиполипидемические свойства полифенольных соединений // Тез. докл.: четвертый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям. Ташкент: Фан, 1982. - С. 12-13.

25. Васильева О.Г., Александрова М.С. биологические особенности клонального размножения и регенерация in vitro интродуцированных видов рода Rhododendron // Бюллетень ГБС РАН. 2005. № 189. - С. 252-259.

26. Вечернина H.A. Методы биотехнологии в селекции, размножении и сохранении генофонда растений. Барнаул: Изд-во Алт. ун-та, 2004. - 205 с.

27. Витолыня А.К. О микотрофности рододендронов // Тр. ботан. сада Латв. гос. ун-та, 1972. 18. - 193-206 С.

28. Волынец А.П., Прохорчик P.A. Ароматические соединения -продукты и регуляторы фотосинтеза. Минск: Наука и техника, 1983. - 80 с.

29. Волынец А.П. Фенольные соединения и генеративное развитие растений // Тез. докл.: пятый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям. Таллинн: Бит, 1987. - С. 21-22.

30. Высоцкий В.А. Биотехнологические методы в системе производства оздоровленного посадочного материала плодово-ягодных культур: Автореф. дисс. . докт. с.-х. наук. М., 1998. - 44 с.

31. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В. Особенности клонального микроразмножения актинидии // Международн. научн. конф. «Биология культурных клеток и биотехнология». Новосибирск, 1988. - Ч.2.- С. 317-318.

32. Высоцкий В.А., Бартенева Л.В., Упадышев М.Т. Введение в культуру дикорастущих видов актинидии, способы размножения in vitro II Сб. Научн. трудов ВНИИ садоводства. 1990. - Вып. 57.- С. 39-40.

33. Высоцкий В.А., Бартенева JI.B. Особенности клонального размножения актинидии // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М., 1991.-С.213-216.

34. Гаджиев В.Д. О распространении и составе зарослей рододендрона кавказского в Азербайджанской ССР // Известия АН Азербайджанской ССР. 1955.-№10.-С. 95-105.

35. Гамбург К.З., Рекославская Н.И., Швецов С.Г. Ауксины в культурах тканей и клеток растений. Новосибирск, 1990.- 140 с.

36. Гертнере Д.Х. Возможности клонального микроразмножения растений рода Rhododendron / В сб. «Роль селекции в улучшении Латвийских лесов». Рига, 1990г. - С. 98-104.

37. Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. Клеточная инженерия растений Киев: Наукова думка, 1984.- 260 с.

38. Грязнова Е.А., Подколзина JI.A. Материалы к химическому изучению рододендрона желтого и кавказского / Уч. зап. Пятигорского фармацевтического ин-та. 1957. - С. 23-25. h

39. Гудковский В.А., Каширская Н.Я., Цуканова Е.М. Стресс плодовых растений. Воронеж: Кварта, 20056. - 128 с.

40. Деревья и кустарники СССР. Т. 5.- M.-JL, 1960. - 544 с.

41. Дерфлинг К. Гормоны растений М, 1989. - 160 с.

42. Джуренко Н.И., Паламарчук Е.П. Изменчивость флавонолов в листьях плодово-ягодных растений // Тез. докл. VI симпозиума по фенольным соединениям. М., 2004.- С. 29.

43. Долгих Ю.И. Сомаклональная изменчивость растений и возможности ее практического использования (на примере кукурузы): Автореф. дисс. . д-ра биол. наук. М., 2005. - 45 с.

44. Доспехов Б.Ф. Методика полевого опыта с основами статистической обработки результатов исследований. М. Агропромиздат, 1985. - 352 с. .

45. Загоскина Н.В. Фенольный метаболизм растительных клеток и влияние на него биотических и абиотических факторов // Тез. докл. VI симпозиума по фенольным соединениям, 28-30 апр. 2004 г. М., 2004. - С. 35.

46. Загоскина Н.В. Полифенолы и их роль в защите растений от действия стрессовых факторов // Материалы VI междунар. симпозиума «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования». М.: РУДН, 2005. - Т. 3. - С. 300-302.

47. Зайцева С. М. Образование и локализация фенольных соединений в растениях тиса (Taxus baccata L., Taxus canadensis Marsh.) и в инициированных из них каллусных культурах: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 2007. - 22 с.

48. Запрометов М.Н. Биохимия катехинов. М.: Наука, 1964. - 296 с.

49. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высш. школа, 1974. - 214 с.

50. Запрометов М.Н., Загоскина Н.В., Стрекова В.Ю., Морозова Г.А. Образование фенольных соединений и процесс дифференциации в каллусной культуре чайного растения // Физиология растений. 1979. - Т. 26.-С.485-491.

51. Запрометов М.Н. Специализированные функции фенольных соединений в растениях // Физиология растений. -1993а.-Т.40-№ 6-С.921-931.

52. Запрометов М.Н. Фенольные соединения: Распространение, метаболизм и функции в растениях. М.: Наука, 19936. - 272 с.

53. Запрометов М.Н. Фенольные соединения и их роль в жизни растения. М.: Наука, 1996. - 45 с.

54. Зарнадзе Н.Ж., Кутубидзе В.В., Кунах В.А. Получение каллюсных тканей от Actinidia chinensis и deliciosa И Субтропические культуры,- 1993. -№ 1-2. С. 17-24.

55. Землинский С.Е. Лекарственные растения СССР. М.: изд-во МОИП.- 1951.-245 с.

56. Золотарев П.Л. О культуре рододендронов // Журнал садоводства, издаваемый Российским общ-вом садоводства. 1896. - № 2. - С. 21-25.

57. Зорикова В.Т. Рододендроны Приморского края и их хозяйственное использование. / В сб.: Научные основы хозяйственного освоения юга Приморского края. Владивосток, 1971. - С 56-59.

58. Игнатова С.А. Биотехнологические основы получения гаплоидов, отдаленных гибридов и соматических регенерантов зерновых и бобовых культур, в различных системах in vitro. Автореф. дис. .докт. биол. наук. -Ялта, 2004. 23 с.

59. Калашникова Е.А. Влияние факторов гормональной и негормональной природы на морфогенетический потенциал интактных растений пшеницы в культуре in vitro II Сельскохозяйственная биотехнология. 2000.- Т.2 - С. 71-80.

60. Калинин Ф.Л., Бутенко Р.Г. Методы культуры тканей в физиологии растений. Киев: Наукова думка, 1980. - 425 с.

61. Катаева Н.В., Бутенко Р.Г. Клональное микроразмножение растений. М.: Наука, 1983. - 230 с.

62. Керкадзе Н.Г. Некоторые вопросы генетики чайного растения // Субтропические культуры. 1983. - № 1. - С. 42-48.

63. Кириллова Э.Н., Балмуш Г.Т. Изменения содержания флавоноидов в органах спуровых сортов яблони в связи с плодообразованием // Тез. докл.: пятый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям. Таллинн: Бит, 1987. - С. 57-58.

64. Кириченко Е.Б., Фернандо Ш.С., Кузьмина ТА., Чернядьев И.И. Особенности органогенеза эфиромасличных роз при клональном микроразмножении // Бюллетень Гл. ботан. сада. 1993, - Т 167. - С. 96-102.

65. Ковалева И.С., Данилова Т.В., Молканова О.И. Усовершенствование методики микроклонального размножения малино-ежевичного гибрида Тайберри // Бюлл. Гл. ботан. сада. 2000. - Вып. 179. - С. 74-80.

66. Коваленко О.В. Генетические аспекты морфогенеза растений // Успехи соврем. Биологии. 1993. - Т. 113. - №3. - С. 269-285.

67. Кондратович Р.Я. Рододендроны в латвийской ССР. Рига «Зинатне», 1981. - 330 с.

68. Корнацкий С.А. Особенности клонального микроразмножения сливы в системе производства оздоровленного посадочного материала: дис. . канд. с.-х. наук. М., 1991.- 121 с

69. Коротков О.И. Формирование и комплексное изучение коллекции клематисов (род Clematis L.): биотехнологические и молекулярно-генетические аспекты: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 2008. - 23 с.

70. Костина В.М., Загоскина Н.В. Способность растений рода Rhododendron к образованию фенольных соединений // Тез. VI Симпозиума по фенольным соединениям. М. 2004. - С. 45-46.

71. Красильникова Т.А. Факторы оптимизации репродуцирования in vitro различных представителей рода Rosa L.: Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 1999.-22 с.

72. Круглова H.H., Горбунова В.Ю., Куксо П.А. Морфогенез в культуре in vitro: роль фитогормонов // Успехи современной биологии. 1999. - Т. 119, вып. 6. - С. 567-577.

73. Кузьмина H.A. Культура клеток и тканей растений. Омск: Омский ГПУ, 1999. - 270 с.

74. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функции. МД973. - 98 с.

75. Куренцова Г.Э. Реликтовые растения Приморья.Л.:Наука, 1968.-71 с.

76. Кутас E.H. Научные основы клонального микроразмножения растений на примере интродуцированных сортов голубики высокой и брусники обыкновенной.: Автореф. дисс.канд. биол. наук. М., 1997. - 24 с.

77. Лапин П.И., Сиднева С.В. Оценка перспективности интродукции древ, растений по данным визуальных наблюдений. В кн. «Опыт интродукции древесных растений». - М.: ГБС АН СССР, 1973. - С. 7-67.

78. Литвиненко В.И. Этапы развития химии природных фенольных соединений // Тез. докл. VI симпозиума по фенольным соединениям. М., 2004.-С. 9-10.

79. Макаров В.А., Оганесян Э.Т. К фармакологии полифенольного комплекса рододендрона желтого и рододендрона кавказского // Вопросы курортологии, фармации и фармакологии. Пятигорск, 1967. - С. 101-102.

80. Малаева Е.В. Биологические и молекулярно-генетические особенности дальневосточных видов рода Actinidia Lindl. Автореф дисс. .канд. биол. наук. М., 2008. 20 с.

81. Медведева Р. Г., Клец Э. И. О фитонцидных свойствах сибирских рододендронов. Иркутск, 1957. - 184 с.

82. Мийдла X., Мардистэ М. Фенольные соединения яблони в период листопада // Материалы 1-го Всесоюз. симпозиума по фенольным соединениям "Фенольные соединения и их биологические функции". М.: Наука, 1968. - С. 238-243.

83. Михалевская О.Б. О внутри- и внепочечной фазах в развитии элементарных побегов древесных растений // Онтогенез. 2002а.- Т.ЗЗ, - №4. -С. 258-263.

84. Михалевская О.Б Морфогенез побегов древесных растений. Этапы морфогенеза и их регуляция. Типография МГПУ, 20026. - 67 с.

85. Молканова О.И., Чурикова O.A., Коновалова Л.Н., Окунева И.Б. Клональное микроразмножение интродуцированных сортов Syringa vulgaris L. // Вестн. Моск. ун-та. Сер. Биология. 2002. - №4. - 8-14.

86. Молканова О.И. Использование биотехнологических методов для сохранения генофонда растений ex stu / XII съезд Русского ботанического общества. Фундаментальные и прикладные проблемы ботаники в начале XXI века. Часть 2. Петрозаводск, 2008. - С. 28-33.

87. Муромцев Г.С., Бутенко Р.Г., Тихоненко Т.И., Порофьев М.И. Основы сельскохозяйственной биотехнологий. М: Наука, 1990. - 120 с.

88. Немойкина A.JI. Влияние света и гормонов на морфогенез юкки слоновой в культуре in vitro / Автореф. дис.канд. биол. наук. Томск, 2003.-19 с.

89. Оганесян Э.Т. Урсоловая кислота из рододендрона желтого // Растительные ресурсы. 1966. - Т.2. - №4. - С. 616-517.

90. Орлов П.А. Клеточные и генно-инженерные технологии модификации растений. Минск: Тонпик, 2006. - 284 с.

91. Осипов В., Салминен Ю.-П., Осипова С, Хаукиойя Э., Пихлая К. Фенольные соединения листьев березы: состав и роль в устойчивости к насекомым-фитофагам // Тез. докл. VI симпозиума по фенольным соединениям. М., 2004. - С. 65.

92. Юб.Пачулия К.Г. Биологические и анатомо-морфологические особенности некоторых интродуцированных и дикорастущих рододендронов Абхазии: Автореф. дис. .канд. биол. наук. Сухуми, 1971. - 29 с.

93. Первухин Ф.С. Дубильные растения и введение их в культуру. -Новосибирск: изд-во АН СССР. 1963. - 123 с.

94. Пирназарова Ф.Н., Сагдуллаев Х.Х., Исмаилов А.И., Садыков A.C. К вопросу о функциональной роли полифенольных соединений в растительной клетке // Тез. докл.: четвертый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям. Ташкент: Фан, 1982. - С. 79.

95. Полетико О. М. Род рододендрон / В кн.: Деревья и кустарники СССР. М,- Л.: Изд-во АН СССР, 1960. - Т. 5. - С. 375-381.

96. Пояркова А.И. Род рододендрон / В кн.: Флора СССР. Л.: Изд-во АН СССР, 1952. - Т. 18. - С. 425-432.

97. Размахнин Е.П. Закономерности гаплопродукции в культуре пыльников пырея сизого Agrohyron glaucum Desf.: Автореф. . дис. канд. биол. наук. Новосибирск, 2003. - 145 с.

98. Родина С.Ф., Дягилева A.A. Качество брусничного листа, заготовляемого потребительской кооперацией // Брусничные в СССР. -Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние. 1990. - С. 145-146.

99. Роллов А.Х. Дикорастущие растения Кавказа, их распространение, свойства и применение. Тифлис. - 1908. - С.599.

100. Российский Д. М. Рододендрон — как сердечно-сосудистое средство // Фармакология и токсикология. 1954. - Вып.17. - № 4. - С. 69-70.

101. Российский Д.М. Новые фитотерапевтические средства. // Врачебное дело. 1955. - №2. - С. 107-112.

102. Рубин Б.А., Арциховская Е.В., Аксенова В.А. Биохимия и физиология иммунитета растений. М., - 1975.- 412 с.

103. Румынии В.А. Массовое размножение in vitro луковичных и клубнелуковичных растений: Тез. докл. У Междунар. конф. «Биология культивируемых клеток и биотехнология». Новосибирск, 1988. - С. 368.

104. Сабинин Д.А. Физиология развития растений. М.: Изд. АН СССР, 1963.- 196 с.

105. Савельев Н.И., Леонченко В.Г., Макаров В.Н., Жданова Е.В., Черепкова Т.А. Биохимический состав плодов и ягод и их пригодность для переработки. Мичуринск: ГНУ ВНИИГиСПР им. И.В.Мичурина Россельхозакадемии, 2004. - 124 с.

106. Сарапуу Л. П., Кефели В. И. Фенольные соединения и рост растений // Материалы 1-го Всесоюз. симпозиума по фенольным соединениям "Фенольные соединения и их биологические функции". М.: Наука, 1968. -С. 129-138.

107. Сарапуу Л.П. Физиологическая роль и метаболизм флоридзина в яблоне: Автореф. дис. д-ра. биол. наук. М., 1971. - 42 с.

108. Серебряков И.Г. Морфология вегетативных органов высших растений. Изд. «Советская наука», 1952. - 391 с.

109. Серебрякова Т.И. Морфогенез побегов и эволюция жизненных форм злаков. М., 1971.

110. Скорикова Ю.Г. Полифенолы плодов и ягод и формирование цвета продуктов. М.: Пищ. пром-сть, 1973. - 232 с.

111. Тахтаджян А. Л. Система и филогения цветковых растений. М.-Л.: Наука, 1966. - С. 221-222.

112. Тимонин А.К. Ботаника: в 4 т. Т. 3. Высшие растения. М.: Издательский дом «Академия», 2007. - 352 с.

113. Тиссера Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений // Биотехнология растений: культура клеток. М.:ВО «Агропромиздат», 1989. -С. 97-127.

114. Тюкавкина H.A. Некоторые аспекты современных исследований в области фенольных соединений // Тез. докл. VI симпозиума по фенольным соединениям, 28-30 апр. 2004 г., Москва. М., 2004. - С. 11-12.

115. Упадышев М. Т. Проблемы оздоровления и размножения in vitro растений рябины обыкновенной // Сб. науч. тр. «Плодоводство и ягодоводство России». М., 1994. - С. 72-77.

116. Упадышев М.Т. Аспекты оздоровления от вирусов и ускоренного размножения нетрадиционных садовых культур / Состояние и перспективы развития нетрадиционных садовых культур ВНИИС. Воронеж: Кварта, 2003.-С. 220-223.

117. Упадышев М.Т. Роль фенольных соединений в процессе жизнедеятельности садовых растений / ВСТИСП. М.: Изд. Дом МСП, 2008. - 320 с.

118. Флора СССР. Т. 18. М.-Л., - 1952. - 650 с.

119. Французенок В.В. Совершенствование микроклонального размножения лилий.: Автореф. дис. . канд. с.-х. Наук. Горки, 1997. - 20 с.

120. Хасеневич А.И., Вечер A.C., Юрченко Л.А. Фенольные соединения сортовых яблочных соков и виноматериалов // Тез. докл.: четвертый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям. Ташкент:Фан,1982.-С. 73.

121. Хмара К.А. Эндогенные и экзогенные фитогормоны и формирование структур in vitro ели обыкновенной: Автореф. дисс. . канд. наук. -М, 1983.-23 с.

122. Черепанов С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств. Санкт-Петербург, «Мир и семья-95», 1995.

123. Чурикова O.A. Морфогенетические процессы при масс-клональном размножении некоторых декоративных луковичных и клубнелуковичных растений: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. М., 1993.

124. Чурикова O.A. Изучение закономерностей функционирования верхушечной меристемы побега и особенностей морфогенетических процессов в культурах растений разных таксономических групп // Вестн. Моск. ун-та. Сер. Биология. 2005. - №3. - 52-64.

125. Шалашвили А.Г., Таргамадзе И.Л. Выделение и идентификация флавоноидных соединений из листьев лимона //Тез.докл.четвертый Всесоюз. симпозиум по фенольным соединениям.- Ташкент: Фан, 1982.- С. 84-85.

126. Шварцман А.Г. Глюкозид из листьев рододендрона желтого // Генная химия СССР. 1941. - Вып.2, - №5,6. - С.467.

127. Шевелуха B.C., Дегтярев C.B., Артамонова Г.М. и др., Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Изд-во МСХА, 1995. - 310 с.

128. НЗ.Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др., Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Выс. шк., 2003. - Изд. 2. - 469 с.

129. Шнякина Г.П., Седельникова В.А., Цыганкова Н.Б. О содержании арбутина в листьях некоторых растений советского Дальнего Востока// Растит, ресурсы. 1981. - Т. 17.- № 4.- С. 568-571.

130. Энциклопедический словарь лекарственных, эфиромасличных и ядовитых растений. М., 1959. - 488 с.146ЛОшев А. А. Краткая энциклопедия по выращиванию плодовых и ягодных культур. СПб., 1993. - 182 с.

131. Яковлева В.А. Изучение фенольного состава некоторых сортов земляники в связи со степенью их усточивости кафеленхоидозу-коринебактериозу: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1974. - 26 с.

132. Anderson W.C. Tissue culture propagation of red raspberries / Proc. Conf. on nursery production of fruit plants through tissue culture-application and feasibility. Beltsville Md. 1980. - P. 7-34.

133. Anderson W.C. A revised tissue cultured medium for shoot multiplication of rhododendron. J Am Soc Hortic Sei . 1984. - Vol. 109, P.343-347.

134. Avigud G. Sucrose and other disaccharides / In: Locwns F.A., Tanner W. (Eds.), Encyclopedia of Plant Physiology, New Series 13 A. N.Y.: Springer. -1982.- P. 217-347.

135. Bahf L. R., Compton M. E. Competence for in vitro bulblet regeneration among eight Lilium genotypes // Hort. Science. 2004. - №1. - P. 127-129.

136. Bajaj Y. P. S. Biotechnology in Agriculture and Forestly. High-Tech and Micropropagation II / ed. By Y.P. S. Bajaj. Verlag Berlin Heidelberg. - 1982. -Vol. 18.-P. 166-180.

137. Bate-Smith E.C. The phenolic constituents of plants and their taxonomic significance/1 Botan. J. Linn. Soc. London. 1962. - V. 58. - № 371. - P. 95-173.

138. Berg J., Krüssmann G. Freiland Rhododendron. Stuttgart, 1951. - 164 s.

139. Berg J. Heimatgebiete und Einfuhrung der Rhododendron. DRG Jahrbuch, Bremen, 1952. - S. 29-41.

140. Berg J., Heft L. Rhododendron und immergrüne Laubgehölze. Stuttgart, 1969.-288 s.

141. Blazich F.A., Giles C.G., Haemmerle C. M. Micropropagation of cultivars of Rhododendron champanii II J. Environment Hortic. 1986. - Vol. 4, №1. - P. 26-29.

142. Block R. Maßnahmen zur Verbesserung der z«-vzYro-Kultivierbarkeit ausgewählten GenotypenderGattungMalus//Fak. Rhein. Friedrich-Wilhelms-Univ. Bonn. 1993. - 122 s.

143. Bonnier F.J.M., Hoekstra F.A., Ric De Vos C.H., Van Tuyl J.M. Viability j loss and oxidative stress in lily bulbs during long-term cold storage // Plant Sei. 1997. - V.122. - № 2. - P. 133-140.

144. Bowers C. G. Rhododendrons and azaleas. New York, 1960. - 525 p.• 161. Challice J.S., Williams A.H. Phenolic compounds of the genus Pyrus. A chemotaxonomic survey // Phytochemistry. 1968. - V. 7. - № 10. - P. 1781-1801.

145. Compton M.E., Preece J.E. Effects of phenolic compounds on tobaco callus and blackberry shoot cultures // J. Amer. Soc. Hort. Sei. 1988. - V. 113. -№ l.-P. 160-163.

146. Debergh P.C., Maene L.J. A scheme for commercial propagation of ornamental plants by tissue culture // Sei. Hort. 1981. - №4. - P. 17-19.

147. Douglas G.C. The propagation of high bush blueberries by soft wood cuttings // Euphytica. 1966. - Vol. 15. - №3 - P. 304-312.

148. Douglas G.C. The propagation of eight cultivars of Rhododendron in vitro using agar solidified and liquid media // Sei. Hortic. 1984. - Vol. 24. - №3 - P. 337-347.

149. Economov A. S., Read P. E. In vitro shoot proliferation of Minnesota deciduous azaleas // Hort Sei. 1984. - Vol. 19, №1 - P. 60-61.

150. Ettingert T. L., Preece J. E. Micropropagation of Rhododendron P. J. M. hybrids // Hort Sei. 1984. - Vol. 60. - №2 - P. 269-274.

151. Friedrich H., Schonert J. Investigation on some components of the leaves and fruit of Vaccinium myrtillus II Planta Med. 1973. - V. 24. - №1. - P.90-100.

152. Grochowska M.J. Occurrence of free phloretic acid (p-hydroxy-dihydro-cinnamic acid) in xylem sap of the apple tree // Bull. Acad. pol. sei. Ser. sei. biol. -1967. V. 15. - №8. - P. 455-459.

153. Harada H. In vitro organ culture of Actinidia chiensis PI. as a technique for vegetative multiplication // J. Hort. Sei. 1975. - Vol. 50. - P. 81-83.

154. Harborne J.B. The flavonoids. L.: Champan and Hall., 1975.- P.1056-1095.

155. Harborne J.B., Williams C.A. Advances in flavonoid research since 1992 // Phytochemistry. 2000. - V. 55. - № 6. - P. 481-504.

156. Hegnauer R. Chemotaxonomie der Pflanzen. Bazel. -Stuttgardt. - 1964. -Bd. 3. - 743 s.

157. Jisaburo O. Flora of Japan. Washington, 1965. - 321 p.

158. Kingdon-Ward F. Observations on the classification of the genus Rhododendron. Rhodod. Yearbook, 19.47. - P. 99-114.

159. Kondratovics R. Rododendri. Riga, 1965. - 124 1pp.

160. Kondratovics R. Rododendri. Riga, 1978. - 180 1pp.

161. Krüssmann G. Rhododendron, andere immergrüne Laubgehölze und Koniferen. Berlin-Hanburg, 1968. - 192 s.

162. Kumar S., Kashyap M., Sharma D.R. In vitro regeneration and bulblet growth from lily bulb scale explants as affected by retardants, sucrose and irradiance // Biologia Plantarurm 2005. - 49, № 4. - P. 629-632.

163. Leach D. G. Rhododendrons of the world. New York, 1961. - 544 p.

164. Mantley J.A., Buslig B.S., Eds. Flavonoids in the living system // Adv. Exp. Med. and Biol., Plenum Press: New York. 1998. - V. 439. - P. 278.

165. McCown B.H., Lloyd G.B. (1981) Woody plant medium (WPM) a mineral nutrient formulation for microculture of woody plant species. // Hort Sei 16:453 (Abstr).

166. McCown B.H., Lloyd G.B. A survey response of Rhododendron to in vitro culture II Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 1982. - Vol. 2. - № 1. - P. 77-85.

167. Meyer M. M. In vitro propagation of Rhododendron catawbiense from flower buds // J. Hort. Science. 1982. - Vol. 17. №6 sect. 1. - P. 891-892.

168. Moyer R.A., Hummer K.E., Finn C.E., Frei B., Wrolstad R.E. Anthocyanins, phenolics, and antioxidant capacity in diverse small fruits: Vaccinium, Rubus, and Ribes II J. Agric. Food Chem. 2002. - V. 50. - P. 519-525.

169. Murashige T., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue culture // Physiol, plant. 1962. - Vol. 15. - № 3. - P. 473-497.

170. Norton M.E., Norton C.R Shoot proliferation in vitro in twenty Ericaceous plants. // Plant Propagator. 1986.- Vol.3. - №2. P. 2-5.

171. Osawa T., Sakuta H., Negishi 0., Kajiura J. Identification of species -specific flavone glucosides useful as chemotaxomic markers in the genus Pyrus II Biosci. Biotechn. Biochem. 1995. - V. 59. - No 12. - P. 2244-2246.

172. Pierik R.L.M., Steegmans H.H.M. Vegetative propagation of Freesia through the isolation of shoots in vitro //Neth. J. Agr. Sci.-1976.- №4. P.274-277.

173. Rehder A. Manual of cultivated trees and shrubs. New York, 1956.-996 p.

174. Schneider F. Tropisch-malesische Rhododendron in Boskoop. DRG Jahrbuch, Bremen. - 1965. - S. 29-35.• 194. Sleumer H., Cowan J.M. die systematische Gliederrung der Gattung Rhododendron. DRG Jahrbuch Bremen, 1952. S. 74-80.

175. Stafford H.A. Proanthocyanidins and the lignin connection // Phytochemistry. 1988. - V.27. - N 1. - P. 1-6.

176. Stevenson J.B. The species of Rhododendron. 2. Edinburgh, 1947. 861 p.130

177. Strack D. Phenolic metabolism // Plant Biochemistry, Acad. Press: London, U.K. 1997.

178. Walewska E. Wystepowanie pirozydu w subowcach arbutynawych / Dissert. Pharmac. Pharmacol. PAN. 1966. - V. 18. - P. 75.

179. Van Aartrijk J., Blom-Barnhoorn G.J. Growth regulator requirements for adventitious regeneration from Lilium bulb-scale in vitro, in relation to duration of bulb storage and cultivar // Sci. Hortic. 1981. - 14. - P. 261-268.

180. Webby R.F., Markham K.R. Flavonol 3-O-triglucosides from Actinidia species // Phytochemistry. 1990. - V. 29. - № 1. - P. 289-292.