Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические особенности местных штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium и эффективность их использования при выращивании цыплят-бройлеров
ВАК РФ 03.02.14, Биологические ресурсы

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности местных штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium и эффективность их использования при выращивании цыплят-бройлеров"

!

уГ

Петрукович Андрей Георгиевич

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МЕСТНЫХ ШТАММОВ Еи^егососсив Ыгае И Е^егососсив Гаесшт И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ ЦЬШЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

Специальность 03.02.14 - биологические ресурсы

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

" 9 П£|{ 20"!0

Владикавказ - 2010

004616284

Диссертационная работа выполнена на кафедре биологической и химической технологии ФГОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ и РСО-Алания

доктор сельскохозяйственных наук, профессор Цугкиев Борис Георгиевич

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор

Дзагуров Борис Авдрахманович

Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Дмитриев Анатолий Федорович

Ведущее предприятие: ФГОУ ВПО «Саратовский государственный

аграрный университет».

Защита диссертации состоится » декабря 2010 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 220.023.04 при ФГОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет» по адресу: 362040, РСО-Алания, г.Владикавказ, ул.Кирова, 37, факультет биотехнологии, зал заседаний диссертационного совета.

Тел./факс 8-(8672)-53-99-26

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет», с авторефератом на официальном сайте: www.gorskigau.ru

Автореферат диссертации разослан «¿%Оу> ноября 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета /п/С)

Д 220.023.04, доцент ГревцоваС.А.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Молочнокислые микроорганизмы с давних пор привлекают к себе внимание, так как еще много веков тому назад человек нашел практическое применение молочнокислым бактериям: при приготовлении кисломолочных продуктов, выработке сыра, консервировании овощей, фруктов и т.д.

Луи Пастер стал первым ученым, чьи научные работы позволили сделать важные шаги в изучении данной, очень важной для человека, группы микроорганизмов. Развитие микробиологии позволило расширить область использования молочнокислых микроорганизмов, что, в свою очередь, дало толчок к развитию новых отраслей народного хозяйства - производство новых кисломолочных напитков, пробиотических препаратов, бактериальных силосных заквасок и т.д.

Выдающийся русский ученый И.И. Мечников стал первым, кто привлек внимание исследователей к антагонистическим свойствам молочнокислых бактерий, которые могли быть использованы в борьбе с гнилостной микрофлорой кишечного тракта. С целью предотвращения преждевременной старости он рекомендовал регулярное употребление в пищу простокваши, приготовленной на штаммах болгарской палочки.

Повышение качества, улучшение вкусовых свойств и питательной ценности продуктов, готовящихся из молока, является одной из важных проблем пищевой промышленности. Основные потребительские свойства большинства молочных продуктов зависят, в основном, от сырья и применяемых заквасок. Одним из способов решения этой проблемы является поиск и селекция новых, производственно ценных, штаммов лактобакгерий, обладающих повышенной биохимической активностью, по сравнению с традиционными видами микроорганизмов, применяемых при производстве молочной продукции.

Целесообразным является выделение местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу, из природных источников, так как такие штаммы более приспособлены к эколого-географическому ареалу в конкретной климатической зоне.

Молочнокислые бактерии являются важной составляющей нормальной микрофлоры пищеварительного тракта и гениталий млекопитающих (Доронин А.Ф., Шендеров Б.А., 2002). Кроме того, они входят в состав резидентной микрофлоры полости рта. Как отмечает Е.И.Квасников (1975) молочнокислые палочки в сочетании с бифидобактериями составляют основное звено микрофлоры кишечника.

В настоящее время выработка кисломолочных напитков на молочных заводах имеет целью обеспечение населения диетическими продуктами, во многих случаях с лечебными целями. В основе производства диетических кисломолочных продуктов лежит синтез молочной кислоты, который обычно возникает и развивается в молоке при внесении в него закваски из молочнокислых микроорганизмов, подавляя все остальные процессы.

В производстве кисломолочных продуктов традиционно применяют различные виды молочнокислых бактерий и дрожжей: молочнокислые стрептококки, болгарскую палочку, ацидофильную палочку, ароматобразующие бактерии, молочные дрожжи и т.д. Каждый продукт изготовляют с помощью определенных культур микроорганизмов.

Лактозосбраживающие бактерии, используемые в молочной промышленности, как правило, выделяют из природных источников. Для получения улучшенных форм микроорганизмов с целью селекции применяют как различные мутагенные факторы, так и адаптацию. Наиболее перспективно воздействие на штаммы мутагенных факторов. Мутанты обладают повышенной биохимической активностью, что позволяет ускорить процесс сквашивания молока при производстве молочных продуктов.

Молочнокислые бактерии встречаются в природе практически повсеместно. Общим свойством микроорганизмов этой группы является их высокая сахаролитическая способность (Н. Уаяш й. а1., 1999). Благодаря этому объясняется их высокая требовательность к различным источникам питания.

Молочнокислые бактерии обладают высокой биологической и функциональной активностью, что предопределяет их практическое использование в качестве пробиотиков и в производстве пищевых продуктов лечебно-профилактического направления (А.Ф.Доронин, Б.А. Шендеров, 2002; Б.А. Шендеров, 2001). Кроме того, установлена высокая эффективность использования молочнокислых бактерий в составе бактериальных силосных заквасок.

Учитывая значимость практического использования молочнокислых микроорганизмов для человека, выделение культур этих микроорганизмов из различных природных источников является перспективным методом получения новых, высокоэффективных штаммов, способных найти широкое применение в молочной промышленности.

Цель и задачи исследований. Целью диссертационной работы явилось выделение чистых культур местных штаммов бактерий, способных сбраживать лактозу, установление их видовой принадлежности и биологических особенностей, а также определение их важнейших производственно-ценных свойств.

В задачи исследований входило:

1. Изолирование чистых культур бактерий, сбраживающих лактозу, с поверхности растений, произрастающих в РСО-Алания и содержимого кишечного тракта молодняка животных.

2. Идентификация выделенных штаммов бактерий.

3. Определение биолого-физиологических и технологических свойств выделенных штаммов бактерий.

4. Установление эффективности использования местных штаммов лактозосбраживающих бактерий при силосовании зеленой массы растений.

5. Практическое использование чистых культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий при выращивании цыплят-бройлеров.

Научная новизна диссертационной работы заключается в том, что в условиях РСО-Алания впервые выделены, идентифицированы и депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов биологически активные и технологически высокоэффективные культуры Ег^егосоосцв Ыгае (1 штамм) и Еп(сгососсиз Гаесшт (2 штамма). Установлена целесообразность использования местных штаммов Егйегосоосиз Ыгае и ЕШегососсия faec¡um в качестве пробиотиков при выращивании цыплят-бройлеров, а также в качестве бактериальных силосных заквасок.

Практическая значимость работы заключается в обосновании целесообразности выделения местных штаммов лактозосбраживающих бактерий из различных природных субстратов в РСО-Алания, а также идентификации выделенных штаммов с изучением комплекса их свойств: морфологических, тинкториальных, биолого-физиологических и технологических.

Установлена эффективность использования культур местных штаммов Е^егосоосиБ Ыгае и ЕМегососсиБ Гаесшт в составе бактериальных силосных заквасок и в качестве пробиотиков при выращивании цыплят-бройлеров.

Местные штаммы Егйегососсиэ Ыгае и ЕшегососсиБ Гаесшт существенно ускоряют скорость сквашивания молока.

Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту:

• Результаты идентификации местных штаммов лактозосбраживающих бактерий - Ег^егососсиБ Ыгае и Егиегососсиэ Гаесшт.

• Показатели основных технологических свойств выделенных штаммов.

• Показатели качества силосов, приготовленных с применением в качестве бактериальной закваски культур местных штаммов Егиегососсиэ Ыгае и Еп(егососси5 Гаесшт.

• Результаты использования культур местных штаммов Еп1егососси5 Ыгае и Е^егососсиз Гаесшт при выращивании цыплят-бройлеров:

- динамика живой массы и приростов;

- морфологические и биохимические показатели крови;

- иммунологические показатели организма;

- экономическая эффективность использования испытуемых штаммов.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и получили положительную оценку на Международной научно-практической конференции «Рациональное использование биоресурсов в АПК» (Владикавказ, 2006); на Международной научно-практической конференции «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки» (Владикавказ, 2010); на Всероссийской научно-производственной конференции «Новые направления в решении проблем АПК на основе современных ресурсосберегающих инновационных технологий» (Владикавказ, 2010), на ежегодных научно-практических конференциях ФГОУ ВПО «Горский государственный аграрный университет» (2006-2010 г.г.).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертационной работы опубликованы 9 научных работ, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК РФ - 3 работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов, предложений производству, библиографии. Содержит 36 таблиц, 13 рисунков. Список литературы включает 237 наименований, в том числе 75 на иностранных языках.

2. ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность поиска новых, высокоэффективных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу, сформулированы научная новизна, практическая значимость и основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

В обзоре научной литературы приведены сведения о распространенности в окружающей среде микроорганизмов, синтезирующих молочную кислоту -на поверхности растений, организме человека и животных, в молоке и молочных продуктах и т.д. Приведены целесообразность и способы селекции молочнокислых микроорганизмов из различных природных субстратов. Показана эффективность использования молочнокислых микроорганизмов в качестве пробиотиков для профилактики желудочно-кишечных заболеваний, в особенности для детей раннего возраста, а также для повышения интенсивности роста молодняка животных, с раскрытием механизма благотворного действия на макроорганизм. Установлена эффективность использования лактобактерий в составе бактериальных силосных заквасок и при консервировании овощей.

На основе анализа литературных данных сформулированы цель и задачи диссертационного исследования.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалом для выделения чистых культур молочнокислых бактерий послужили пробы, отобранные из различных природных источников: 27 проб от растений, 11 проб из фекалий животных : 3 от поросят, 5 от телят и 3 от овец (всего 38).

В качестве питательной среды для первичного выделения чистых культур лактозосбраживающих бактерий использовали молоко «Кубанская Буренка» с 0,5% содержанием жира, которое разливали в пробирки по 10 мл и после укупорки ватно-марлевыми пробками автоклавировали при 0,5 атм в течение 45 мин.

Подготовку растительных образцов для посева производили общепринятым методом - растиранием в стерильных фарфоровых ступках.

Перед взятием образцов кала у молодняка животных область ануса обрабатывалась теплой кипяченой водой, обтиралась стерильной салфеткой, после чего раздражали стерильной стеклянной палочкой анальное отверстие,

вызывая у них рефлекс дефекации. Образцы кала собирали в стерильные стеклянные бюксы.

Из каждого образца посев производился в 3 пробирки, которые инкубировались в термостате при температуре 30 °С, 37 °С и 45 °С.

С целью получения чистой культуры бактерий, сквашивающих лактозу, производились ежедневные перевивки до получения в пробирках с молоком ровного, плотного сгустка без разрывов и пузырьков газа.

Окончательное выделение чистых культур штаммов бактерий, сквашивающих лактозу, осуществляли путем рассева сгустка молока на агаризованное гидролизованное молоко в чашках Петри, с целью получения изолированных колоний, которые отсевались на косой агар.

В молоке, используемом для выделения культур бактерий, определяли следующие показатели: сухое вещество - по ГОСТ 3626-73; массовая доля жира - по ГОСТ 5867-90; кислотность - по ГОСТ 3624-92; плотность - по ГОСТ 3625-84; степень чистоты - по ГОСТ 8218-89; наличие фосфатазы - по ГОСТ 3623-73; микробиологические показатели - по ГОСТ 9225-84

В сквашенном штаммами изучаемых микроорганизмов молоке определяли: пищевую ценность; органолептаческие показатели - по ГОСТ Р 51331-99; кислотность - по ГОСТ 3624-92; микробное число - методом серийных разведений; антибиотическую активность - методом диффузии в агар.

Определение видовой принадлежности выделенных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу, проводили по Л.А Банниковой (1975) и были изучены следующие показатели: морфологические, тинкгориальные, культуральные и физиолого-биохимические свойства; рост в молоке при различных температурах; устойчивость к поваренной соли; устойчивость к желчи; рост в мясо-пептонном бульоне; образование МН3 из аргинина; устойчивость к фенолу; терморезистентность; устойчивость к метиленовому голубому; активность кислотообразования; предел кислотообразования; способность сбраживать углеводы и спирты.

Общая схема диссертационного исследования приведена на рис.1.

В образцах силосов, приготовленных с использованием местных штаммов бактерий, определялись следующие показатели: первоначальная влажность -высушиванием в сушильном шкафу при температуре 60-65 °С, ГОСТ 1396.3-92 (27548.98); гигроскопическая влажность - высушиванием в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С, ГОСТ 1396.3-92 (27548-97); «сырой» протеин - по Къельдалю, ГОСТ 1396.4 (28074-89); «сырой» жир - в аппарате Сокслета, ГОСТ 13496.15; «сырая» клетчатка - по Геннебергу и Штоману (модификация ЦИНАО), ГОСТ 1396.2-91; «сырая» зола - методом сухого озоления (температура 400 - 450 °С), ГОСТ 26226-95; БЭВ - расчетным путем; кальций и фосфор - объемным методом.

Для установления эффективности использования в рационах кормления цыплят-бройлеров культур лактозосбраживающих бактерий на птицефабрике «Михайловская» Пригородного района РСО-Алания провели 3 опыта. В каждом опыте было сформировано 6 групп суточных цыплят-бройлеров кросса «Русь», по 100 голов в каждой.

Рисунок 1. Схема основных этапов исследования

Условия содержания и кормления, по основному рациону, во всех группах цыплят были одинаковыми. Разница в кормлении групп цыплят-бройлеров состояла в том, что цыплята контрольных групп в составе рациона кормления получали по 5% (I опыт), 10% (II опыт) и 15 % (III опыт), от основного рациона, обезжиренного молока, а цыплята опытных групп - такие же количества обезжиренного молока, сквашенного культурами Lb.acidophilum ВКПМ В-842 из музея ВКПМ (первые группы), а также культурами штаммов нашей селекции: Ent. hirae ВКПМ В-9069 (вторые группы), Ent. faecium ВКПМ В-9070 (третьи группы), Ent. faecium ВКПМ В-9071 (четвертые группы), смесью культур Ent. hirae ВКПМ В-9069 + Ent. faecium ВКПМ В-9070 + Ent. faecium ВКПМ В-9071 (пятые группы).

В ходе проведения опытов на цыплятах-бройлерах были изучены следующие показатели: динамика живой массы подопытной птицы, путем еженедельного взвешивания (утром перед кормлением); морфологические и биохимические показатели крови: гемоглобин - по методу Сали; количество эритроцитов и лейкоцитов - в счетной камере Горяева; общий белок -рефрактометрическим методом; общий кальций - по Вичеву и Каракашову; неорганический фосфор - по Аммону и Гинсбергу в модификации С.А.Ивановского; кислотная емкость — по Неводову; каротин — по В.Ф.Коромыслову и Л. А .Кудрявцевой.

При изучении питательной ценности молока, сквашенного культурами отобранных штаммов лактозосбраживающих бактерий, а также в образцах кормов, использованных в опьгге, были определены по выше указанным методам следующие показатели: первоначальная влажность; «сырой» протеин; «сырой» жир; «сырая» клетчатка; «сырая» зола; БЭВ; кальций и фосфор.

Видовая принадлежность отобранных штаммов бактерий подтверждена Всероссийской коллекцией промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУ Гос НИИгенетика.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ЗЛ Результаты селекции местных штаммов молочнокислых бактерий

Путем многократных пересевов нами были получены 38 чистых культур лактозосбраживающих бактерий: 27 от растений, 11 из фекалий поросят, телят и овец.

В процессе предварительных исследований из выделенных 38 культур, были отобраны 6 штаммов микроорганизмов, способных сбраживать молочный сахар, с наиболее стабильными технологическими свойствами (табл.1).

Таблица l.Xa рактеристика отобранных штаммов бактерий

№ Название штамма Источник выделения Морфология штамма

1 1-Як. Якон (зеленая масса) Стрептококки

2 2-Бат. Батат (зеленая масса) Стрептококки

3 З-Гр.сах. Гречиха сахалинская (зеленая масса) Стрептококки

4 4-Крап. Крапива (зеленая масса) Микрококки

5 5-Кл. Клевер (зеленая масса) Стрептококки

6 6-Топ. Топинамбур (соцветие) Микрококки

Источником выделения всех отобранных 6 штаммов бактерий явились образцы разных видов растений. По морфологии все штаммы оказались кокковидной формы (стрептококки и микрококки), спор не образуют, по Граму окрашиваются положительно, все штаммы, за исключением 4 Кр., подвижны.

При предварительном изучении физиолого-биохимических свойств указанных в таблице 1 штаммов, наиболее перспективными из них оказались штаммы 1-Як., 2-Бат., З-Гр.сах., которые и были отобраны для их детального изучения и идентификации.

3.1.1. Культуральные и физиолого-биохимичсскне свойства отобранных штаммов.

Культуральные свойства изучаемых штаммов устанавливали по особенностям роста на плотной питательной среде - агаризованном гидролизованном молоке.

В ходе проведенных исследований установлено, что все 3 штамма бактерий имеют выпуклый профиль, точечный размер, белый цвет, края колоний гладкие, консистенция мягкая, структура мелкозернистая.

Физиолого-биохимические исследования являются одним из методов идентификации молочнокислых микроорганизмов. Исследование искомых показателей наиболее существенно характеризуют производственную ценность выделенных культур бактерий.

Результаты определения физиологических свойств изучаемых штаммов приведены в таблице 2.

Таблица 2. Физиологические свойства испытуемых штаммов бактерий

п = 25

Показатели 1-Як. 2-Бат. З-Гр.сах.

Рост в молоке при температуре:

15 °С - - -

40 °С + + +

45°С + + +

Рост в гидролизованном молоке, содержащем ЫаС1,%

2 + + +

3 + + +

4 + + +

6,5 - - -

Рост в молоке, содержащем метиленовый голубой, %

0,005 + + +

0,01 + + -

0,1 - - -

Нагревание в течение 30 мин при температуре, "С

55 + + +

60 + + +

Рост в гидролизованном молоке, содержащем желчь, %

20 + + +

30 + + +

40 + + +

Рост в мясопептонном бульоне, при рН

9,2 - - -

9,6 - - -

Образование ЫНз из аргинина - + -

Окраска по Граму + + +

Подвижность + + +

Установлено (табл.2), что культуры изучаемых штаммов бактерий растут при 40-45°С и не растут при температуре 15°С, растут в молоке с 0,01% метиленового голубого и 2-4% №С1, выдерживают нагревание в течение 30 мин. при температуре 55-60°С, все культуры окрашиваются по Граму, подвижны, не растут при 0,1% метиленового голубого, только штамм 2-Бат. образует аргинин из МНз.

Способность исследуемых штаммов расщеплять и усваивать в качестве субстрата различные сахара и аминокислоту аргинин определена на питательных средах, содержащих в своем составе раффинозу, сорбитол, маннитол, арабинозу, сорбозу, аргинин, рибозу, лактозу и сахарозу. Полученные результаты приведены в таблице 3.

Таблица 3. Результаты усваивания исследуемыми штаммами Сахаров и аргинина

п= 15

Название штамма RAF SOR MAN ARA SOE ARG RIB LAC SUC

1-Як. + - - - - + + + +

2-Бат. + - + + - + + + +

З-Гр. сах. - + + - + + + +

Примечание: RAF - раффиноза; SOR - сорбитол; MAN - маннитол; ARA - арабиноза; SOE -сорбоза; ARG - аргинин; RIB - рибоза; LAC - лактоза; SUC - сахароза.

Установлено (табл.3), что все испытуемые штаммы усваивают раффинозу, аргинин, рибозу, лактозу и сахарозу, не усваивают сорбитол и сорбозу. Штаммы 2-Бат. и З-Гр.сах. усваивают маннитол, арабинозу, тогда как штамм 1-Як. не разщепляет данные углеводы.

На основании анализа материалов, приведенных в таблицах 2 и 3 мы сделали заключение, что штамм 1-Як можно отнести к Егй. Ыгае, а штаммы 2-Бат. и З-Гр.сах. - к Еп!.. 1"аесшт.

Результаты идентификации, проведенной нами, подтверждены Всероссийской коллекцией промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ГосНИИ генетика и штаммы депонированы в ВКПМ под коллекционными номерами: Егйегососсиз Ыгае 1-Як. ВКПМ В-9069; ЕтегососсиБ Гаесшт 2-Бат. ВКПМ В-9070; ЕШегососсиз 1аесшт З-Гр.сах. ВКПМ В-9071.

3.1.3 Технологические свойства местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу.

Технологические свойства местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу, определяли с использованием обезжиренного коровьего молока, в котором перед его использованием определяли содержание сухого вещества и жира.

Одним из важнейших свойств лактозосбраживающих бактерий является скорость образования сгустка в сквашиваемом молоке.

Определяя данный показатель установлено, что штаммы ЕгНегососсиз Ыгае 1-Як. ВКПМ В-9069; ЕШегососсиэ 1"аесшт 2-Бат. ВКПМ В-9070 и ЕМегососсиэ Гаесшт З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 свертывают молоко за 5 часов инкубирования, что позволяет считать их технологически ценными штаммами.

В процессе культивирования в молоке испытуемые штаммы микроорганизмов снижали содержание жира в исходном молоке с 0,5% до

0,1-0,2%. Снижение содержания жира в сквашенном молоке, вероятно, связано с тем, что в процессе своего метаболизма часть жира испытуемые микробы расщепляют и используют его составляющие (гидролизаты) в качестве субстрата для своего полноценного роста и развития.

В зависимости от того, как бактерии с течением времени меняют кислотность сквашиваемого молока, можно судить об интенсивности их роста и размножения в данной среде.

Результаты, полученные нами при определении почасового повышения кислотности сквашиваемого молока до момента его свертывания, приведены в таблице 4.

Таблица 4. Почасовое нарастание кислотности в сквашиваемом молоке, °Т

п=15

Штамм

Часы Етегососс1К Ыгае 1-Як. Егиегососаш Гассшт Ег^егососсш faecium

ВКПМ В-9069 2-Бат. ВКПМ В-9070 2-Бат. ВКПМ В-9071

Кислотность сквашиваемого молока, "Т

1 31,68±0,49 35,2±0,16 29,92±0,21

2 39,6±0,21 38,72±0,19 40,48±0,28

3 66,86±0,36 68,64±0,15 65,12±0,49

4 70,4±0,18 77,44±0,17 73,04±0,38

5 73,92±0,18* 80,08±0,16 75,68±0,93*

6 - 83,б±0,13* -

Примечание: *• молоко свернулось

Из анализа материалов, приведенных в таблице 4 следует, что кислотность молока в момент его свертывания штаммами Е^егососсиБ Ыгае 1-Як. ВКПМ В-9069; ЕШегососсиз Гаесшш 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Егйегососсиз &есшт З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 составляет 73,92, 83,60, 75,68°Т, т.е., в течение 5 часов инкубирования в молоке накапливается оптимальное для кисломолочных напитков содержание молочной кислоты, что еще раз подтверждает их ценность как активных кислотообразующих бактерий.

Кислотообразующая способность микроорганизмов прямо пропорционально связана с консервирующей способностью данного микроорганизма при использовании его в составе заквасок для производства кисломолочных напитков, при сквашивании овощей, силосовании кормов и т.д.

Исходя из этого, была определена предельная кислотообразующая способность изучаемых штаммов микроорганизмов, а полученные результаты приведены в таблице 5.

Таблица 5. Предельная кислотообразующая способность изучаемых штаммов бактерий

п=15

Кислотообразующая способность штаммов, иТ

Сутки ЕШегососсиз Ыгае Ег^егососсиз Гаесшт Еп1егососсиз Гаесшш

1-Як. ВКПМ В-9069 2-Бат. ВКПМ В-9070 2-Бат. ВКПМ В-9071

2 114,4±0,56 110±0,88 128,4±1,18

3 141,68±0,56 130,2±0,82 130,2±0,89

4 142,5±0,74 146,9±0,99 140,8±0,96

Установлено, что все 3 штамма исследуемых микроорганизмов обладают примерно одинаковой способность нарастания кислотности при предельном его показателе 140,80 - 146,96°Т. Исходя из среднего уровня способности изучаемых штаммов бактерий к накоплению молочной кислоты, можно предполагать, что продукты, производимые с их использованием, могут сохраняться длительное время.

Исследуя свойства сквашенного культурами местных штаммов бактерий молока, определяли в образцах готового продукта микробное число в 1 мл, методом серийных разведений, а также антибиотическую активность по отношению к Staphylococcus aureus и Escherichia coli. Показатели микробного числа приведены в таблице 6.

Таблица 6. Микробное число в 1 мл сквашенного молока

п =25

Штаммы бактерий Enterococcus hirae 1-Я к. ВКПМ В-9069 Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071

Микробное число 10ш 10* 10ш

Установлено, что во всех образцах молока, сквашенного культурами местных штаммов бактерий микробное число является высоким и составляет 109 - Ю10, что позволяет сделать вывод о молоке, как благоприятной среде для роста культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий.

Антагонистическая активность любого молочнокислого микроорганизма является одним из самых важных и основных микробиологических показателей. По этому показателю судят о том, какими лечебно-профилактическими свойствами обладает тот или иной штамм, используемый в составе закваски для производства кисломолочной продукции.

Нами была исследована антибиотическая активность штаммов микроорганизмов, способных сбраживать лактозу, местной селекции, методом диффузии в агар. Полученные данные приведены в таблице 7.

В результате проведенных исследований выявлена высокая степень чувствительности Staphylococcus aureus и Escherichia coli к антибиотическим веществам, вырабатываемым культурами штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 - зона стерильности составила 23 - 26 мм.

Таблица 7. Антагонистическая активность культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий

п = 25

Тест - микроб

Объект-микроб Staphylococcus aureus Escherichia coli

Зона стерильности, мм

Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069 24 ± 0,82 26 ±0,68

Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 26 ± 0,69 24 ±0,75

Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 24 ±0,91 23 ± 0,68

3.2.Практическое использование местных штаммов лактозосбраживаннцих микроорганизмов.

3.2.1.Силосованпе надземной массы растений с использованием местных штаммов лактозосбраживающих бактерий.

Эффективным методом улучшения качества силоса, а также способом ускорения процесса консервирования корма является внесение в силосуемую массу заквасок из культур молочнокислых микроорганизмов.

С этой целью, для направленного и ускоренного протекания процесса силосования, нами были использованы в составе закваски чистые культуры местных штаммов Еш. Гаесшт ВКПМ В-9070, выделенного с поверхности листьев батата, Еп1. 1пгае ВКПМ В-9069, выделенного с поверхности листьев якона, и Еп1. Гаесшт ВКПМ В-9071, выделенного с поверхности листьев горца сахалинского.

Были применены 3 дозы бактериальной закваски: 1%, 5% и 10% от силосуемой массы, испытуемые штаммы были использованы в равных количествах (1:1:1). Для сравнения был взят контрольный образец, в который не вносилась бактериальная закваска.

В качестве силосуемой массы была взята зеленая масса топинамбура сорта Скороспелка в фазе бутонизации, так как в этот вегетационный период в данном растении содержится наибольшее количество сбраживаемых Сахаров. После закладки силоса на 3 сутки и через каждые последующие 24 часа мы исследовали экспериментальные образцы.

Важным свойством силоса является показатель его рН - чем быстрее снижается рН, тем быстрее происходит консервирование корма.

Через три дня, с начала силосования, в опытных образцах силоса рН колебался от 4,51 (10 % закваски) до 4,90 (1 % закваски). В то же время в контрольных образцах силоса, в среднем, через 3 дня показатель рН был равен 5,4. На шестой день показатель рН в опытных образцах силоса был равен, в зависимости от дозы внесенной закваски, от 4,17 до 4,32, а в контрольных образцах - 4,80, т.е. существенно выше.

Наибольшее содержание молочной кислоты установлено в силосе, в который вносили 10% закваски. Однако общая консервирующая способность испытанных доз бактериальной закваски и качество силосов в целом практически одинаково. Можно сделать заключение, что внесение закваски во время закладки силоса улучшает качество корма, ускоряет время его созревания, но экономически более оправданной является доза закваски, равная 1 % от массы силосуемого корма.

Также установлено, что содержание питательных веществ в силосе от дозы внесенной бактериальной закваски зависит несущественно. Так, сухих веществ в силосе при использовании 1% бактериальной закваски содержалось 27,1%, при 5% - 28,0%, а при внесении 10% бактериальной закваски - 28,2% против 27,7% в контрольных образцах силоса, т.е. по наличию сухих веществ незначительно предпочтительней является внесение 10% бактериальной закваски.

В то же время наибольшим количеством протеина в сухом веществе отличались образцы силоса при внесении 5% бактериальной закваски, среднее содержание в которых данного компонента сухого вещества составило 9,86% против 9,17% в контрольных образцах и 9,11% при внесении 10% закваски.

Таким образом, проведенными нами исследованиями установлено, что зеленая масса топинамбура сорта Скороспелка лучше силосуется при внесении бактериальной закваски, полученный таким образом силос отвечает требованиям продукта хорошего качества, а рекомендуемая нами доза внесения закваски составляет 1 %.

Следующим этапом наших исследований явилось использование местных штаммов ЕШ. Ыгае ВКПМ В-9069 и Еп! Гаесшт ВКПМ В-6970 и ЕШ. Гаесшт ВКПМ В-6971 в отдельности при приготовлении силоса из нетрадиционных силосных растений: сильфии пронзеннолистной, сиды обоеполой и девясила высокого при использовании 1% бактериальной закваски от общей массы силосуемого корма. Результаты представлены в таблице 8.

Таблица 8. Характеристика силосов из разных растений

__п=5

Штамм микроорганиз мов рн Всего кислот % содержания кислот % соотношения кислот

уксусная молочная масляная уксусная молочная масляная

Сильфия пронзеннолистная

Ей. Ыгае ВКПМ В-9069 4,4± 0,100 1,13 ± 0,008 0,07 + 0,012 1,06 ± 0,017 - 6,03 ± 1,082 93,97± 1,082 -

ЕШ. Гаесшт ВКПМ В-9070 4,5± 0,096 1,65 ± 0,016 0,46 ± 0,014 1,19 ± 0.021 - 27,85 ± 0,873 72,15± 0,873 -

Ет. Гаесшт ВКПМВ-9071 4,2± 0,042 0,93 ± 0,010 0,14 ± 0,014 0,79 ± 0,023 - 15,25 ± 1,357 84,75± 1,357 -

Контроль 4,3± 0,091 1,48 ± 0,014 0,27 ± 0,016 1,21 ± 0,022 - 18,30 ± 1,104 81,70± 1,104 -

Девясил высокий

Ей. Ыгае ВКПМ В-9069 4,8 ± 0,084 2,71 ± 0,015 0,3 ± 0.016 2,41 ± 0,0250 - 10,91 ± 0,388 89,09± 0,388 -

ЕШ. Гаесшт ВКПМ В-9070 4,6 ± 0,055 2,54 ± 0,007 0,33 ± 0,011 2,21 ±0,009 - 13,50 ± 0,723 87,01± 0,779 -

ЕШ. Гаесшт ВКПМВ-9071 4,5 ± 0,125 2,77 ± 0,012 0,41 ± 0,001 2,36 ± 0,0004 - 14,80 ± 0,309 85,20± 0,309 -

Контроль 4,5 ± 0,124 2,21 ± 0,014 0,36 ± 0,010 1,86 ± 0,017 - 16,05 ± 0,475 83,95± 0,475 -

Сида обоеполая

ЕШ. Ыгае ВКПМ В-9069 4,2 ± 0,082 0,88 ± 0,012 0,10 ±1 0,008 0,79 ± 0,010 - 10,84 ± 0,764 89,16± 0,764 -

ЕШ. Гаесшт ВКПМ В-9070 4,4 ± 0,117 1,03 ± 0,014 0,12 ± 0,013 0,91 ± 0,020 - 12,01 ± 1,253 87,99 ± 1,253 -

Еы. Гаесшт ВКПМ В-9071 4,3 ± ' 0,089 0,89 ± 0,010 0,13 ± 0,008 0,76 ± 0,004 - 14,52 ± 0,735 85,48 ± 0,735 -

Контроль 4,6 ± 0,065 1,00 ± 0,010 0,19 ± 0,009 0,8 ± 0,0130 - 20,00 ± 0,952 80,00 ± 0,952 -

Установлено, что культуры местных штаммов Ent. hirae ВКПМ В-9069, Ent. faecium ВКПМ В-9070, Ent. faecium ВКПМ В-9071 являются эффективными добавками в качестве бактериальной закваски в силосуемые корма, ускоряя процесс созревания силоса и улучшая его качество и состав. Особого внимания заслуживают образцы, сквашенные Ent. hirae ВКПМ В-9069, в которых содержание молочной кислоты на конец эксперимента составило 89,09 - 93,97% от общей суммы кислот, против 80,0 - 83,95% в контрольных образцах.

3.2.2. Использование штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium 3-Fp.cax. ВКПМ В-9071 в качестве пробиотиков при выращивании цыплят-бройлеров.

Показатели сохранности и прироста живой массы цыплят-бройлеров.

При использовании в составе рациона кормления цыплят-бройлеров 5% обезжиренного молока (I опыт) сохранность поголовья колебалась от 92 до 96% против 91% в контрольной группе, цыплята которой в составе рациона кормления получали аналогичное количество не сквашенного обезжиренного молока. При этом необходимо отметить, что более эффективными оказались местные штаммы бактерий Ent. hirae ВКПМ В-9069, Ent. faecium ВКПМ В-9070, Ent. faecium ВКПМ В-9071, по сравнению с музейной культурой Lact, acidophilum ВКПМ В-842, как в отдельности, так и в смеси.

Аналогичные результаты сохранности цыплят получены во II и III опытах.

В ходе проведения опытов на цыплятах-бройлерах установлено, что использование культур местных штаммов Ent. hirae ВКПМ В-9069, Ent.faecium ВКПМ В-9070, Ent. faecium ВКПМ В-9071 селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ как в монокультуре, так и в смеси, а также культура штамма Lact, acidophilum ВКПМ В-842, полученная из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов, способствует повышению интенсивности роста цыплят-бройлеров, что, безусловно, связано со способностью микроорганизмов, усваивающих лактозу, синтезировать молочную кислоту, углекислоту и антибиотические вещества, которые в комплексе повышают переваримость и усвояемость компонентов кормовых рационов (табл.9).

Анализ данных, приведенных в таблице 9 указывает на то, что в ходе проведения 1 опыта более эффективным оказалось использование культуры Ent.hirae ВКПМ-9069. В данной группе цыплята-бройлеры превосходили своих аналогов из контрольной группы по абсолютному приросту живой массы на 9,2%. Почти такой же результат получен при использовании Ent. faecium ВКПМ В-9070 (7,6 %), а несколько худшие результаты получены при использовании Ent. faecium ВКПМ В-9071 (5,6 %) и Lac. acidophilum ВКПМ В-842 (3,1%).

Таблица 9. Показатели прироста живой массы цыплят-бройлеров, г

п=25

Показатель Опытные группы

Контроль Ьас1 ас!с1орЫ1ит ВКПМ В-842 ЕШ. Ыгае ВКПМ В-9069 Ет.Гаесшт ВКПМ В-9070 Ет.Гаесшт ВКПМ В-9071 Смесь штаммов ЕШ.Ыгае, Еп1.Гаес1ит

I опыт

Живая масса 1 головы, г: в начале опыта в конце опыта 35,4±0,41 2540±14,23*" 34,8±0,39 2617±15,44*" 35,1±0,30 2770± 15,09*" 35,1±0,36 273 0± 14,17*" 35,2±0,38 2680±13.65*" 35,1±0,34 2695± 12,59*

Прирост живой массы, г: абсолютный среднесуточный в % к контролю 2504,6 44,73 100 2582,2 46,11 103,1 2734,9 48,84 109,2 2694,9 48,12 107,6 2644,8 47,23 105,6 2659,9 47,5 106,2

II опыт

Живая масса 1 головы, г: в начале опыта в конце опыта 35,6±0,12 2750±18,57 35,1±0,23 2942,2± 16,68*" 35,0±0,19* 3010±17,26*" 35,1 ±0,22 2963,9±18,79*" 35,0±0,24*" 2988,3±23,50*" 34,9±0,17*" 2978,5±12,Ю"*

Прирост живой массы, г: абсолютный среднесуточный в % к контролю 2714,4 48,47 100 2907,1 51,91 107,1 2975 53,15 109,6 2928,8 52,3 107,9 2953,3 52,74 108,8 2943,6 52,55 108,4

III опыт

Живая масса 1 головы, г: в начале опыта в конце опыта 35,2±0,19 2570±22,41 34,8±0,24* 2830±18,50*" 35,2±0,27 2990±20,15*" 35,1±0,20 2934,9±20,9*" 35,3±0,22 ' 2887±23,15*" 34, ±0,186 2830±24,16*"

Прирост живой массы, г: абсолютный среднесуточный в % к контролю 2534,8 45,26 100 2795,4 49,92 110,3 2954,8 52,76 116,6 2803,5 50,06 110,6 2899,8 51,78 114,4 2851,7 50,92 112,5

Примечание: р — достоверность различий по сравнению с контролем (критерий Стьюдента) —р<0,05, —р<0,01; —р<0,001.

По суммарному приросту живой массы во II опыте также предпочтительней оказалось использование Ent. hirae ВКПМ В-9069 в рационе кормления цыплят-бройлеров, которые дали прирост живой массы ЗОЮ г, т.е. превзошли по данному показателю аналогов из контрольной группы на 9,6%. В опытных группах менее эффективным оказалось использование культуры Lac. acidophilum ВКПМ В-842 - цыплята данной группы превосходили контрольных аналогов всего на 7,1%. Превосходство над контрольными аналогами у цыплят-бройлеров, которые в составе рационов кормления получали культуры Ent.faecium ВКПМ В-9070, Ent. faecium ВКПМ В-9071 и смесь штаммов Ent.hirae и Ent.faecium составило 7,9, 8,8 и 8,4%.

Как и в I опыте, во II опыте разные штаммы Ent. faecium оказывают несколько разное влияние на развитие цыплят-бройлеров, что свидетельствует об индивидуальных особенностях разных штаммов одного и того же вида микроорганизма.

В III опыте также наиболее эффективным оказалось введение в кормовой рацион цыплят культуры Ent. hirae ВКПМ В-9069. Цыплята, получавшие культуру Ent. hirae ВКПМ В-9069 превосходили по суммарному приросту живой массы тела своих контрольных аналогов на 420 г или 16,6%. Превосходство над контролем цыплят, которые в составе кормового рациона получали 15% молока, сквашенного культурой Ent. faecium ВКПМ В-9071 составило 365 г или 14,4%. Цыплята—бройлеры групп, получавших культуры Lac. acidophilum ВКПМ В-842, Ent.faecium ВКПМ В-9070 и смесь штаммов Ent.hirae и Ent.faecium превосходили аналогов из контрольной группы соответственно на 10,3,10,6 и 12,5%.

Таким образом, проведенными нам исследованиями установлена эффективность использования в кормовых рационах цыплят-бройлеров культур лактозосбраживающих микроорганизмов, которые способствуют как повышению сохранности поголовья, так и увеличению показателей прироста живой массы, что подверждает целесообразность поиска новых, биологически активных штаммов микроорганизмов данной группы.

Морфологические и биохимические показатели крови цыплят-бройлеров. При даче пробиотиков в количестве 5 % и 10 % от основного рациона, содержание гемоглобина в крови цыплят-бройлеров повышается в среднем на 33,75 г/л и 27,25 г/л соответственно, в то время как, при аналогичных дозах применения музейного штамма ацидофильной палочки гемоглобин повышается не более, чем на 20 г/л и 12 г/л. Внесение бактериальной закваски в размере 15% от основного рациона так же сопровождалось увеличением гемоглобина, однако установленные значения были несколько ниже, чем в I и II опытах, в среднем превосходство над контрольными аналогами составило 16,25 г/л.

Аналогичное превосходство наблюдалось и в сравнении с опытной группой цыплят-бройлеров получавших в своем рационе молоко сквашенное Lact, acidophilum ВКПМ В-842.

В ходе проведенных исследований установлено, что биологически активные добавки, приготовленные на основе обезжиренного молока,

сквашенного штаммами бактерий нашей селекции, оказывают стимулирующее действие на гематологические показатели цыплят-бройлеров кросса «Русь».

Уровень эритроцитов в крови птицы проявлялся значениями, находящимися в прямой зависимости от содержания гамоглобина. Так, в ходе проведения трёх научно-хозяйственных опытов у цыплят-бройлеров выявлено большее количество эритроцитов, чем у контрольных аналогов и опытной группы, получавшей в своем рационе обезжиренное молоко, сквашенное музейным штаммом ацидофильной палочки. Наибольшее значение во всех опытах по содержанию эритроцитов выявлено при использовании штамма Ent. hirae ВКПМ В-9069, составившее в первом опыте 3,9*1012 /л, что на 0,8х1012 /л и 0,6*1012 /л больше чем у цыплят-бройлеров контрольной группы и цыплят-бройлеров опытной группы, получавшей Lact, acidophilum ВКПМ В-842. Во втором опыте данное превосходство составило 1,1х1012/л и 0,8*10|2/л, соответственно. В третьем научно-хозяйственном опыте преобладание по количеству эритроцитов у цыплят-бройлеров, получавших штамм местной селекции Ent.hirae ВКПМ В-9069 над сравниваемыми группами составила 0,9х1012/л.

Таким образом, в ходе определения содержания гемоглобина и количества эритроцитов в крови птицы, установлено позитивное влияние местных штаммов на эти показатели. При этом наиболее выраженный эффект установлен при использовании штамма Ent. hirae ВКПМ В-9069.

Характер течения обменных процессов в организме отражается показателями резервной щелочности, содержанием минеральных веществ и каротина. С введением в рацион кормления цыплят бройлеров 5%, 10% и 15% обезжиренного молока, сквашенного местными штаммами лактозосбраживаемых бактерий и музейным штаммом ацидофильной палочки, выявлено увеличение резервной щелочности. Аналогичная картина обнаруживается по содержанию каротина и минеральных веществ, при этом максимальные значения выявлены при 15% введении Ent. hirae В-9069 и Ent. faecium ВКПМ В-9071 в рацион кормления цыплят-бройлеров.

Лейкоциты крови не однородны как морфологически, так и по функциональному значению, что имеет свое выражение в лейкограмме. Лейкограмма свидетельствует об уровне адаптивности и приспособляемости организма, в связи с чем был установлен её количественный состав.

В целом по общему количеству лейкоцитов (табл.10) существенных различий между группами не обнаружено. Выявленное увеличение показателей при использовании отдельных штаммов и в симбиотической ассоциации было незначительным и статистически недостоверным.

По количеству псевдоэонозофилов наиболее выраженное преобладание выявлено при использовании штаммов местной селекции Ent. hirae ВКПМ В-9069 и Ent. faecium ВКПМ В-9071. Аналогичная картина обнаружилась по содержанию эозинофилов и моноцитов. Цыплята остальных опытных групп также превосходили по содержанию этих клеток

контрольных аналогов, однако превосходство было минимальным. По содержанию базофилов во всех группах были примерно равные значения. ТаблицаЮ. Лейкограмма крови цыплят-бройлеров

п=5

Лейкоциты, 10»/л Нейтрофилы, % (псевдоэонозофилы) о4

Используемый микроорганизм Юные Палоч-коядер-ные Сегмен-тоядер-ные g о я м о Г) ■Л и 3 о X о 2 Н Я о 8 и н S я о ■е- s ч

Контроль 20,4±0,36 - - 25,9 7,9 6,3 2,0 57,9

Lac. acidophilum ВКПМ В-842 20,5±0,32 - - 26,4 8,1 6,3 2,2 57,0

Ent. hirae ВКПМ В-9069 20,8±0,29 - - 29,6 7,8 8,4 2,2 52,0

Ent. faecium ВКПМ В-9070 20,7±0,29 - - 27,0 7,9 6,5 2,4 56,2

Ent. faecium ВКПМ В-9071 20,5±0,28 - 28,4 8,6 8,1 2,2 52,7

Смесь штаммов Ent.hirae, Ent. faecium 20,7±0,41 - - 26,7 8,2 6,4 2,1 56,6

В целом по общему количеству лейкоцитов (табл. 10) существенных различий между группами не обнаруживается и находится в пределах физиологической нормы. Выявленное увеличение показателей при использовании отдельных штаммов и в симбиотической ассоциации было незначительным и статистически недостоверным.

При использовании штаммов местной селекции Ent. hirae ВКМП В-9069 и Ent. faecium ВКПМ В-9071 количественное преобладание пссвдоэонозофилов наиболее выражено. Аналогичная картина обнаруживалась по содержанию эозинофилов и моноцитов. Цыплята остальных опытных групп также превосходили по содержанию эозинофилов контрольных аналогов, однако превосходство было минимальным. Содержанию базофилов в крови у птиц всех исседуемых групп существенно не отличались.

Таким образом, выявленные показатели лейкограммы и ее состава свидетельствуют о позитивном влиянии на характер естественной резистентности и устойчивости птицы, при этом обеспечивая высокую интенсивность роста в условиях промышленного вскармливания птицы.

Результаты контрольного убоя цыплят-бройлеров. В связи с тем, что технологически более целесообразным является включение в рацион кормления цыплят-бройлеров 10% сквашенного микроорганизмами молока, для определения убойных показателей взяли цыплят из II опыта, т.к., несмотря на то, что в III опыте

прирост живой массы был значительно выше, чем в I и II опытах, мы не рекомендуем вводить в рационы кормления 15% сквашенного молока, в связи с тем, что комбикорм при смешивании с таким количеством молока теряет свою сыпучесть и нарушается технология кормления птицы.

Для убоя были отобраны цыплята, которые соответствовали средним показателям живой массы соответствующих групп. В таблице 11 приведены результаты убоя цыплят-бройлеров.

Таблица 11. Результаты убоя цыплят-бройлеров

п=25

Использованный микроорганизм Преду бойная масса, г Масса полупотрошеной тушки, г Масса потрошеной тушки, г Убойный выход, %

Контроль 2750±18,57 2359,5±25,30 1805,4±15,43 65,65

Lact. acidophilum ВКПМ В-842 2942,2± 16,68* 2497,2±20,19" 1942,5±14,52** 66,02

Ent. hirae ВКПМ В-9069 30Ю,0±17,2б" 2568,3±21,40" 2071,2±16,96*" 68,81

Ent.faecium ВКПМ В-9070 2963,9±18,79* 2514,1±24,8б" 2011,2±17,80" 67,86

Ent. faecium ВКПМ В-9071 2988,3±23,50" 2556,9±20,13" 2033,1±13,78" 68,04

Смесь штаммов Ent.hirae, Ent.faecium 2978,5±12,10*' 2518,5±22,2l" 2007,2±12,05** 67,39

Примечание: р - достоверность различий по сравнению с контролем (критерий Стьюдента) -р<0,05; "-р<0,01.

В результате убоя птицы подопытных групп в возрасте 56 дней установлено, что масса потрошеной тушки наименьшей оказалась в контрольной группе и составила 1805,4 г; в лучшей опытной группе, цыплята которой получали в составе рациона культуру Ent.hirae ВКПМ В-9069 масса потрошеной тушки составила 2071,2 г, или на 265,8 г (14,7%) больше, чем в контрольной группе. Из опытных групп масса потрошеной тушки наименьшей была в группе, цыплята которой получали в составе рациона кормления культуру Lact, acidophilum ВКПМ В-842 и она равна 1942,5 г, что на 7,6% больше, чем в контрольной группе. В опытных группах цыплят-бройлеров, которые в составе рационов кормления получали культуры микроорганизмов Ent.faecium ВКПМ В-9070, Ent.faecium ВКПМ В-9071, смесь штаммов Enthirae и Ent.faecium превосходили своих аналогов из контрольной группы по массе потрошеной тушки соответственно на 11,4%, 12,6% и 11,1%. Наивысшим убойным выходом (68,81%) отличилась птица из группы, получавшей культуру Ent.hirae ВКПМ В-9069.

Таким образом, установлено, что по массе потрошеной тушки цыплята бройлеры, получавшие при кормлении культуры местных штаммов лактозосбраживающих микроорганизмов превосходили аналогов из контрольной группы на 11,1 - 14,7%.

Большое потребительское значение придается соотношению в потрошеной тушке птицы мышечной и костной тканей, т.е. съедобных и несъедобных частей. Учитывая это, нами определена в тушках масса отдельных групп мышц, кожи и подкожного жира и костей.

Анализируя морфологический состав тушек цыплят-бройлеров (табл.12) необходимо отметить, что по данному показателю птица всех опытных групп, получавших в составе рациона кормления культуры разных микроорганизмов, по массе мышечной ткани превосходят аналогов из контрольной группы. Эта разница в лучшей группе, получавшей культуру Ent.hirae ВКПМ В-9069 составила 120,5 г или 33,6%. В группе, цыплята которой получали культуру Lact, acidophilum ВКПМ В-842, полученной из ВКПМ, превосходство над аналогами из контрольной группы составило 79,7 г или 9,0%. В опытных группах цыплят-бройлеров, которые в составе рационов кормления получали культуры микроорганизмов Ent.faecium ВКПМ В-9070, Ent.faecium ВКПМ В-9071, смесь штаммов Ent.hirae и Ent.faecium превосходили своих аналогов из контрольной группы по массе мышечной ткани, соответственно, на 96,4 г, 105,0 г и 102,4 г или 10,9%, 11,9% и 11,6%.

Таблица 12. Морфологический состав тушек цыплят-бройлеров

п=5

Показатель Грудная мышца Бедренная мышца Мышцы голени Мышцы туловища Итого мышц Кожа и подкожный жир Кости

Контроль 355,1± 2,63 198,7± 2,92 166,9± 2,32 163,7± 1,47 884,4± 4,47 373± 3,32 529,6± 2,20

Lact, acidophilum ВКПМ В-842 389,4± 2,28*** 212,9± 0,85* 182,8± 1,23*** 175,0± 1,18*** 964,1± 6,94*** 378,5± 3,37 567,8± 5,76***

Ent. hirae ВКПМ В-9069 409,5± 2,92*** 237,5± 3,52*** 194,6± 2 99*** 183,3± 2,58*** 1004,9± 10,96*** 399,2± 5,11** 574,9± 5,11***

Ent.faecium ВКПМ В-9070 393,9± 2,94 220,6± 6,26* 184,1± 5,12* 182,2± 5,24** 980,8± 9,73*** 382,4± 4,39 568,1± 6,31***

Ent. faecium ВКПМ В-9071 401,9± 8,52*** 223,4± 4,92** 184,6± 3,32** 179,5± 3,45** 989,4± 10,64*** 387,9± 5,59 569,7± 4,5***

Смесь штаммов Ent.hirae, Ent.faecium, 399,4± 4,48 219,8± 2,71*** 184,3± 3,65** 183,3± 4,14** 986,8± 8,91*** 384,0± 3,73 567,0± 5,90***

Примечание: р - достоверность различий по сравнению с контролем (критерий Стьюдента) '-р<0,05\ "-р<0,01; "'-р<0,001.

Одним из важных показателей эффективного действия лактозосбраживающих микроорганизмов на мясную продуктивность птицы является изменение химического состава мяса и, в первую очередь, грудной мышцы, так как данная мышца птицы считается наиболее диетической.

Анализируя данные, представленные в таблице 13, необходимо отметить, что содержание сухих веществ во всех образцах примерно одинаковое и колеблется от 25,8 до 27,0%. Наибольшим содержанием сухого вещества в грудной мышце отличилась группа, цыплята-бройлеры которой вместе с кормом получали смесь культур разных штаммов Ет.Ьпае и Еп^аесшт с незначительным превосходством над контрольными аналогами.

Таблица 13. - Химический состав грудной мышцы подопытной птицы

п=5

Используемые микроорганизмы Химический состав грудной мышцы, %

Вода Сухое вещество Белок Жир Минеральные вещества

Контроль 74,0±2,06 26,0±2,06 18,15±1,73 6,75±0,47 1.1 ±0,11

Lact, acidophilum ВКПМ В-842 74,2±1,56 25,8±1,56 18,61±0,1 6,09±0,37 1,1±0,1

Ent. hirae ВКПМ В-9069 73,2±1,39 26,8±1,39 20,78±1,37 4,72i=0,23" 1,3±0,08

Ent.faecium ВКПМ В-9070 73,6±1,52 26,4±1,52 19,07±1,55 6,12±0,57 1,2±0,1

Ent. faecium ВКПМ В-9071 73,8±1,56 26,2±1,56 18,87±1,97 6,13±0,67 1,2±0,15

Смесь штаммов Ent.hirae, Ent.faecium, 73,0± 1,17 27,0±1,17 20,7±0,99 5,24±0,45* ],1±0,08

Примечание: р - достоверность различий по сравнению с контролем (критерий Стьюдента) -р<0,05\ -р<0,01.

Установлено, что цыплята-бройлеры, получавшие с кормом культуру Ent. hirae ВКПМ В-9069 превзошли аналогов из контрольной группы по содержанию белка в грудной мышце на 2,63%, а цыплята-бройлеры, получавшие смесь штаммов Ent.hirae и Ent.faecium - на 2,55%. Превосходство цыплят-бройлеров из других групп менее значительно.

Следовательно, в процессе своей жизнедеятельности в пищеварительном тракте птицы, местные штаммы лактозосбраживающих видов бактерий способствуют повышению в мясе белка. Это, вероятно, связано с продуктами обмена веществ данных микроорганизмов, которые всасываются в кровеносную систему птицы и участвуют в сложных биохимических процессах, протекающих в организме.

По содержанию жира в грудинке цыплят-бройлеров показано, что больше всего жира оказалось в образцах, отобранных от цыплят контрольной группы - 6,75%. Менее других опытных и контрольной групп жира содержалось в грудной мышце цыплят-бройлеров, получавших с кормом культуру Ent. hirae ВКПМ В-9069 - 4,72% и культуры разных штаммов Ent.hirae и Ent.faecium - 5,24%. Грудная мышца цыплят-бройлеров, получавших культуры Lact, acidophilum ВКПМ В-842, Ent.faecium ВКПМ В-9070, Ent.faecium ВКПМ В-9071 по содержанию в ней жира не отличалась от таковой у аналогов из контрольной группы.

По содержанию минеральных веществ в грудной мышце цыплята контрольной и опытных групп практически не отличались друг от друга при показателях от 1,1 до 1,3%. По данному показателю превосходство цыплят-бройлеров, получавших с кормом культуру Ent. hirae ВКПМ В-9069 составило 0,2%.

Таким образом, установлено, что штаммы лактозосбраживающих бактерий и, в большей степени местные штаммы нашей селекции,

оказывают существенное влияние на содержание в сухом веществе мяса птицы питательных веществ. Необходимо отметить, что данные микроорганизмы способствуют повышению в мясе птицы белка, снижая в то же время содержание в нем жира.

В связи с тем, что лучшие показатели при выращивании цыплят-бройлеров кросса «Русь» получены, используя в составе рациона кормления культуру штамма Еп1. Ыгае ВКПМ В-9069, расчет экономической эффективности произвели по результатам II опыта.

Согласно данным, приведенным в таблице 9, превосходство по приросту живой массы цыплят-бройлеров опытной группы, над аналогами из контрольной группы составило 260,6 г, что, с учетом процента убойного выхода в данной группе (68,81%) равно 179,3 г куриного мяса. При реализационной цене 1 кг куриного мяса 95 руб. на птицефабрике «Михайловская» (2010 г), разница в пользу птицы из опытной группы, в расчете на 1 голову, составила 9,739 руб.

Следовательно, включение, как пробиотика, штамма Ей. Ыгае ВКПМ В-9069 в рацион кормления цыплят-бройлеров кросса «Русь» в условиях республики Северная Осетия - Алания целесообразно и экономически оправдано.

Таким образом, установлено, что из проб разных природных субстратов, отобранных в РСО-Алания, выделяются физиологически активные и технологически ценные штаммы лактозосбраживающих микроорганизмов, высокоэффективных при консервировании растений и при выращивании цыплят-бройлеров. Выделенные штаммы могут также найти широкое применение для лечения и профилактики болезней желудочно-кишечного тракта человека и животных, так как являются высокоэффективными антагонистами представителей патогенной и условно патогенной микрофлоры.

Выводы

1. Различные природные субстраты в РСО-Алания (растения, содержимое пищеварительного тракта животных) в значительной степени обсеменены лактозосбраживающими бактериями, что позволило выделить и исследовать 38 штаммов разных видов микроорганизмов.

2. При изучении важнейших технологических свойств культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий установлено, что скорость свертывания молока выделенными штаммами колеблется от 4 до 14 часов; почасовое нарастание кислотности в сквашиваемом молоке составляет, в среднем, 4,6°Т, а показатель предельной кислотности - 72,4 - 318,7 °Т. Полученные результаты позволяют утверждать, что выделенные в РСО-Алания штаммы лактозосбраживающих бактерий перспективны для производства различных кисломолочных продуктов.

3. Отобраны 3 культуры технологически наиболее ценных штаммов бактерий, идентифицированных как Еп1егососсиз Ыгае, Ёйегососсиз Гаесшт (1) и ЕтегососсиБ 1Гаесшт (2). Результаты идентификации подтверждены Всероссийской коллекцией промышленных микроорганизмов ГосНИИ

генетика и штаммы депонированы в ВКПМ под коллекционными номерами: Enterococcus hirae 1-Як. - ВКПМ В-9069; Enterococcus faecium 2-Бат. - ВКПМ В-9070; Enterococcus faecium З-Гр.сах. - ВКПМ В-9071.

4. Установлено, что культуры штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium 3-Гр.сах. ВКПМ В-9071 обладают высокой антагонистической активностью по отношению к тест-культурам Staph, aureus и Е. coli, о чем свидетельствуют значительные зоны подавления роста тест-культур: у Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069 - соответственно 24-26 мм; Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 - 26-24 мм и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 - 22-21 мм.

5. Доказано, что использование при силосовании зеленой массы растений культур местных штаммов Ent. hirae и Ent. faecium способствует ускорению созревания и улучшению качества силосов: уровень оптимального показателя pH в опытных образцах силосов устанавливался на третий день, а в контрольных образцах - на четвертый день.

6. Установлено, что применение культур штаммов местной селекции Ent. hirae и Ent. faecium высокоэффективно при силосовании зеленой массы таких нетрадиционных кормовых культур, как сильфия пронзеннолистная, девясил высокий и сида обоеполая, обеспечивая оптимальное соотношение молочной и уксусной кислот и снижая «угар» сухого вещества.

7. Использование в рационах кормления цыплят-бройлеров кросса «Русь» культур Lact, acidophilum ВКПМ В-842 из коллекции ВКПМ и местных штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071, в зависимости от вносимой дозы (5,10 и 15% от рациона) способствует:

• повышению сохранности поголовья - на 4-5%;

• увеличению приростов живой массы при применении:

Lact, acidophilum ВКПМ В-842 - на 3,1 - 7,1-10,3%;

Enterococcus hirae 1-Як.ВКПМ В-9069 - на 9,2 -9,6-16,6%;

Enterococcus faecium 2-Бат. - ВКПМ В-9070 - на 7,6-7,9-10,6%;

Enterococcus faecium З-Гр.сах.-ВКПМ В-9071 -на 5,6-8,8-14,4%;

Смеси штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium - на 6,2-9,1-12,5%.

8. Культуры Lact, acidophilum ВКПМ В-842, Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах ВКПМ В-9070 улучшают убойные качества цыплят-бройлеров:

• повышают убойный выход на:

Lact, acidophilum ВКПМ В-842 - 0,31%;

Enterococcus hirae 1-Як.ВКПМ В-9069 - 3,11%;

Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 - 2,16%;

Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 - 2,33%;

Смесь штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium - 1,68%;

• увеличивают выход мышечной массы в целом на 9,0 - 13,6%, а грудной мышцы - на 9,7 - 15,3%.

9. Несмотря на то, что более высокие показатели приростов живой массы цыплят-бройлеров получены при включении в состав рационов кормления 15% обезжиренного молока, сквашенного культурами лакгозосбраживающих бактерий, целесообразным является использование 10% сквашенного молока, во избежание нарушения сыпучести комбикормов при автоматической раздаче корма.

10. Проведенными исследованиями установлено, что значительно лучшие результаты при выращивании цыплят-бройлеров получены при использовании культур штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium собственной селекции, по сравнению с культурой Lact, acidophilum ВКПМ В-842, полученной из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизом.

При этом необходимо отметить, что наиболее эффективным является использование Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069.

Предложение производству

На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, рекомендуем птицеводческим хозяйствам, с целью повышения сохранности и приростов живой массы поголовья, а также увеличения убойного выхода и улучшения качества мяса, использовать при выращивании цыплят-бройлеров культуры штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 нашей селекции.

Животноводческим хозяйствам рекомендуем использовать при силосовании зеленой массы кормовых растений бактериальную закваску из культур штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071, в количестве 1% от силосуемой массы.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

1. Петрукович, А.Г. Производственно-ценные штаммы молочнокислых микроорганизмов и их практическое значение. / А.Г. Петрукович, Б.Г. Цугкиев // Рациональное использование биоресурсов в АПК.: материалы междунар. науч.-прак. конф. -Владикавказ, 2006. -ГГАУ. - С. 104-105.

2. Петрукович, А.Г., Эффективность использования чистых культур местных штаммов лактобактерий при силосовании топинамбура. / А.Г. Петрукович, Б.Г. Цугкиев // Рациональное использование биоресурсов в АПК.:

Материалы междунар. науч.-прак. конф. - Владикавказ, 2006. с ГГАУ. - С. 105.

3. Петрукович, А.Г.. Эффективность использования чистых культур местных штаммов лактобактерий при силосовании зеленой массы разных растений/ А.Г. Петрукович, Б.Г. Цугкиев // Рациональное использование биоресурсов в АПК.: материалы междунар. науч.-прак. конф. - Владикавказ, 2006.-ГГАУ.-С. 106

4. Петрукович, А.Г., Использование зеленой массы сильфии пронзеннолистной, силы обоеполой, девясила высокого и топинамбура для

заготовки силоса. / А.Г. Петрукович, Б.Г. Цугкиев // Кормопроизводство. -2007. -№ 7- С. 28-29.

5. Петрукович, А.Г. Влияние местных штаммов молочнокислых микроорганизмов на анатомическое развитие тушек цыплят-бройлеров. / Р.Г. Кабисов, A.B. Стельмухов, Э.И. Рехвиашвили, А.Г. Петрукович // Известия Горского ГАУ. - 2008. - часть 1. - том 45. - С. 84-86.

6. Петрукович, А.Г. Влияние лактозосбраживающих энтерококков селекции Горского ГАУ на убойные качества цыплят-бройлеров. / А.Г. Петрукович, A.M. Хозиев, Б.Г. Цугкиев // Труды Всерос. науч.-производ. конф. «Новые направления в решении проблем АПК на основе современных ресурсосберегающих инновационных технологий». - 2010 - Владикавказ: Горский ГАУ-С. 285-286.

7. Петрукович, А.Г. О влиянии штаммов микроорганизмов из коллекции Горского ГАУ на морфологию цыплят-бройлеров. / А.Г. Петрукович, A.M. Хозиев, Б.Г. Цугкиев // Известия Горского ГАУ. - 2010. -часть 1. - том 47. - С. 169-170.

8. Петрукович, А.Г., Результаты использования штаммов лактобактерий селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ в кормлении цыплят-бройлеров / А.Г. Петрукович, Б.Г. Цугкиев, A.M. Хозиев, A.B. Стельмухов // Молодые ученые в решении актуальных проблем науки.: Междунар. науч.-прак. конф. - 2010. - Владикавказ. - С. 303-304.

9. Петрукович А.Г. Результаты идентификации лактозосбраживающих микроорганизмов в РСО-Алания. / А.Г. Петрукович // Вестник МАНЭБ. - СПб., 2010 -Т.15. -№4.

Сдано в набор 16.11,10г., подписано в печать 18.11.10г. Гарнитура Тайме. Печать трафаретная. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 351.

Типография ООО НПКП «МАВР», Лицензия Серия ПД №01107, 362040, г. Владикавказ, ул. Августовских событий, 8, тел. 44-19-31

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Петрукович, Андрей Георгиевич

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Распространение лактозосбраживающих бактерий.

1.2. Выделение молочнокислых бактерий из природных субстратов.

1.3. Практическое использование молочнокислых бактерий.

1.3.1. Использование молочнокислых заквасок при консервировании растений.

1.3.2. Пробиотические свойства лактозосбраживающих микроорганизмов.

ГЛАВА 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Материал и методика исследований.

2.2 Результаты собственных исследований.

2.2.1. Результаты селекции местных штаммов лактозосбраживающих бактерий.

2.2.2. Результаты первичной идентификации местных штаммов лактозосбраживающих бактерий.

2.2.3. Результаты изучения технологических свойств местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу.

2.2.4. Показатели образцов молока, сквашеных разными культурами местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу.

2.2.5. Результаты идентификации штаммов лактозосбраживающих микроорганизмов местной селекции, отобранных после предварительной идентификации.

2.2.6 Эффективность использования чистых культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий при силосовании биомассы растений.

2.2.7. Эффективность использования местных штаммов лактобактерий при выращивании цыплят бройлеров.

2.2.8. Результаты контрольного убоя цыплят-бройлеров.

2.2.9. Экономическая оценка использования Ent. hirae ВКПМ В-9069 при выращивании цыплят-бройлеров.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЕ ПРОИЗВОДСТВУ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические особенности местных штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium и эффективность их использования при выращивании цыплят-бройлеров"

Молочнокислые микроорганизмы с давних пор привлекают к себе внимание, так как еще много веков тому назад человек нашел практическое применение молочнокислым бактериям: при приготовлении кисломолочных продуктов, выработке сыра, консервировании овощей, фруктов и т.д.

Луи Пастер стал первым ученым, чьи научные работы позволили сделать важные шаги в изучении данной, очень важной для человека, группы микроорганизмов. Развитие микробиологии позволило расширить область использования молочнокислых микроорганизмов, что, в свою очередь, дало толчок к развитию новых отраслей народного хозяйства — производство новых кисломолочных напитков, пробиотических препаратов, бактериальных силосных заквасок и т.д.

Выдающийся русский ученый И.И. Мечников стал первым, кто привлек внимание исследователей к антагонистическим свойствам молочнокислых бактерий, которые могли быть использованы в борьбе с гнилостной микрофлорой кишечного тракта. Для борьбы с преждевременной старостью он рекомендовал регулярное употребление в пищу простокваши, приготовленной на штаммах болгарской палочки.

Повышение качества, улучшение вкусовых свойств и питательной ценности продуктов, готовящихся из молока, является одной из важных проблем пищевой промышленности. Основные потребительские свойства большинства молочных продуктов зависят, в основном, от сырья и применяемых заквасок. Одним из способов решения этой проблемы является поиск и селекция новых, производственно ценных, штаммов лактобактерий, обладающих повышенной биохимической активностью, по сравнению с традиционными видами микроорганизмов, применяемых при производстве молочной продукции.

Целесообразным является выделение местных штаммов бактерий, сбраживающих лактозу, из природных источников, так как такие штаммы более приспособлены к эколого-географическому ареалу в конкретной климатической зоне.

Молочнокислые бактерии являются важной составляющей нормальной микрофлоры пищеварительного тракта и гениталий млекопитающих (Доронин А.Ф., Шендеров Б.А., 2002). Кроме того, они входят в состав резидентной микрофлоры полости рта. Как отмечает Е.И.Квасников (1975) молочнокислые палочки в сочетании с бифидобактериями составляют основное звено микрофлоры кишечника.

В настоящее время выработка кисломолочных напитков на молочных заводах имеет целью обеспечение населения диетическими продуктами, во многих случаях с лечебными целями. А.М.Скородумова (1961) указывает, что в основе производства диетических кисломолочных продуктов лежит синтез молочной кислоты, который обычно возникает и развивается в молоке при внесении в него закваски из молочнокислых микроорганизмов, подавляя все остальные процессы.

В производстве кисломолочных продуктов традиционно применяют различные виды молочнокислых бактерий и дрожжей: молочнокислые стрептококки, болгарскую палочку, ацидофильную палочку, ароматобразующие бактерии, молочные дрожжи и т.д. Каждый продукт изготовляют с помощью определенных культур микроорганизмов (Е.И.Квасников, 1960).

Молочнокислые бактерии, используемые в молочной промышленности, как правило, выделяют из природных источников. Для получения улучшенных форм микроорганизмов с целью селекции применяют как различные мутагенные факторы, так и адаптацию. Наиболее перспективно воздействие на штаммы мутагенных факторов. Мутанты обладают повышенной биохимической активностью, что позволяет ускорить процесс сквашивания молока при производстве молочных продуктов.

Молочнокислые бактерии встречаются в природе практически повсеместно. Общим свойством микроорганизмов этой группы является их высокая сахаролитическая способность (Н. УаБШ е^ а1., 1999). Благодаря этому объясняется их высокая требовательность к различным источникам питания.

Молочнокислые бактерии обладают высокой биологической и функциональной активностью, что предопределяет их практическое использование в качестве пробиотиков и в производстве пищевых продуктов лечебно-профилактического направления (А.Ф.Доронин, Б.А. Шендеров, 2002; Б.А. Шендеров, 2001).

Учитывая значимость практического использования молочнокислых микроорганизмов для человека, выделение штаммов этих микроорганизмов из различных природных источников является перспективным методом получения новых, высокоэффективных молочнокислых микроорганизмов, способных найти широкое применение в молочной промышленности.

Научная новизна диссертационной работы заключается в том, что в условиях РСО-Алания впервые выделены, идентифицированы и депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов биологически активные и технологически высокоэффективные культуры Еп1егосоосш Ыгае (1 штамм) и Е^егососсиэ Гаесшт (2 штамма). Установлена целесообразность использования местных штаммов ЕгйегосоосиБ Ыгае и Ег^егососсш Гаесшт в качестве пробиотиков при выращивании цыплят-бройлеров и в качестве закваски при силосовании.

Целью работы явилось выделение чистых культур местных штаммов бактерий, способных сбраживать лактозу, установление их видовой принадлежности и биологических особенностей, а также определение их важнейших производственно-ценных свойств.

В задачи исследований входило:

1. Изолирование чистых культур бактерий, сбраживающих лактозу, с поверхности различных растений, произрастающих в РСО-Алания.

2. Идентификация выделенных штаммов бактерий.

3. Определение биолого-физиологических и технологических свойств выделенных штаммов бактерий.

4. Практическое использование чистых культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий при выращивании цыплят-бройлеров.

5. Установление эффективности использования местных штаммов лактозосбраживающих бактерий при силосовании зеленой массы растений.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

• Результаты идентификации местных штаммов лактозо сбраживающих бактерий - Е^егосоосиэ Ыгае и Е^егососсиБ Гаесшш.

• Показатели основных технологических свойств выделенных штаммов.

• Показатели качества силосов, произведенных с применением в качестве бактериальной закваски чистых культур местных штаммов Ег^егосоосиБ Ыгае и Е^егососсиэ Гаесшт.

• Результаты использования чистых культур местных штаммов Егйегосоосш Ыгае и ЕМегососсиэ Гаесшт при выращивании цыплят-бройлеров:

- динамика живой массы и приростов;

- морфологические и биохимические показатели крови;

- иммунологические показатели организма;

- экономическая эффективность использования испытуемых штаммов. 1

Заключение Диссертация по теме "Биологические ресурсы", Петрукович, Андрей Георгиевич

Выводы

1. Различные природные субстраты в PCO-Алания (растения, содержимое пищеварительного тракта животных) в значительной степени обсеменены лактозосбраживающими бактериями, что позволило выделить и исследовать 38 штаммов разных видов микроорганизмов.

2. При изучении важнейших технологических свойств культур местных штаммов лактозосбраживающих бактерий установлено, что скорость свертывания молока выделенными штаммами колеблется от 4 до 14 часов; почасовое нарастание кислотности в сквашиваемом молоке составляет, в среднем, 4,6°Т, а показатель предельной кислотности - 72,4 -318,7 °Т. Полученные результаты позволяют утверждать, что выделенные в РСО-Алания штаммы лактозосбраживающих бактерий перспективны для производства различных кисломолочных продуктов.

3. Отобраны 3 культуры технологически наиболее ценных штаммов бактерий, идентифицированных как Enterococcus hirae, Enterococcus faecium (1) и Enterococcus faecium (2). Результаты идентификации подтверждены Всероссийской коллекцией промышленных микроорганизмов ГосНИИ генетика и штаммы депонированы в ВКПМ под коллекционными номерами: Enterococcus hirae 1-Як. - ВКПМ В-9069; Enterococcus faecium 2-Бат. - ВКПМ В-9070; Enterococcus faecium З-Гр.сах. - ВКПМ В-9071.

4. Установлено, что культуры штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 обладают высокой антагонистической активностью по отношению к тест-культурам Staph, aureus и Е. coli, о чем свидетельствуют значительные зоны подавления роста тест-культур: у Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069 - соответственно 24-26 мм; Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 - 26-24 мм и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 -22-21 мм.

5. Доказано, что использование при силосовании зеленой массы растений культур местных штаммов Ent. hirae и Ent. faecium способствует ускорению созревания и улучшению качества силосов: уровень оптимального показателя рН в опытных образцах силосов устанавливался на третий день, а в контрольных образцах — на четвертый день.

6. Установлено, что применение культур штаммов местной селекции Ent. hirae и Ent. faecium высокоэффективно при силосовании зеленой массы таких нетрадиционных кормовых культур, как сильфия пронзеннолистная, девясил высокий и сида обоеполая, обеспечивая оптимальное соотношение молочной и уксусной кислот и снижая «угар» сухого вещества.

7. Использование в рационах кормления цыплят-бройлеров кросса «Русь» культур Lact. acidophilum ВКПМ В-842 из коллекции ВКПМ и местных штаммов Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071, в зависимости от вносимой дозы (5, 10 и 15% от рациона) способствует:

• повышению сохранности поголовья - на 4-5%;

• увеличению приростов живой массы при применении:

Lact. acidophilum ВКПМ В-842 - на 3,1 - 7,1 - 10,3%;

Enterococcus hirae 1 -Як.ВКПМ В-9069 - на 9,2 - 9,6 - 16,6%;

Enterococcus faecium 2-Бат. - ВКПМ В-9070 - на 7,6 - 7,9 - 10,6%; Enterococcus faecium З-Гр.сах.- ВКПМ В-9071 - на 5,6 - 8,8 - 14,4%; Смеси штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium - на 6,2-9,112,5%.

8. Культуры Lact. acidophilum ВКПМ В-842, Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069, Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium З-Гр.сах ВКПМ В-9070 улучшают убойные качества цыплят-бройлеров:

• повышают убойный выход на:

Lact. acidophilum ВКПМ В-842 - 0,31%;

Enterococcus hirae 1-Як.ВКПМ В-9069 - 3,11% ;

Enterococcus faecium 2-Бат. ВКПМ B-9070 - 2,16%; Enterococcus faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 - 2,33%; Смесь штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium - 1,68%; • увеличивают выход мышечной массы в целом на 9,0 — 13,6%, а грудной мышцы — на 9,7 - 15,3%.

9. Несмотря на то, что более высокие показатели приростов живой массы цыплят-бройлеров получены при включении в состав рационов кормления 15% обезжиренного молока, сквашенного культурами лактозосбраживающих бактерий, целесообразным является использование 10% сквашенного молока, во избежание нарушения сыпучести комбикормов при автоматической раздаче корма.

10. Проведенными исследованиями установлено, что значительно лучшие результаты при выращивании цыплят-бройлеров получены при использовании культур штаммов Enterococcus hirae и Enterococcus faecium собственной селекции, по сравнению с культурой Lact, acidophilum ВКПМ В-842, полученной из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизом. При этом необходимо отметить, что наиболее эффективным является использование Enterococcus hirae 1-Як. ВКПМ В-9069.

Предложение производству.

На основании данных, полученных в ходе экспериментальных исследований, рекомендуем птицеводческим хозяйствам, с целью повышения сохранности и приростов живой массы поголовья, а также увеличения убойного выхода и улучшения качества мяса, использовать при выращивании цыплят-бройлеров культуры штаммов ЕЫегососсиБ Ыгае 1-Як. ВКПМ В-9069, Е^егососсиз £аес1иш 2-Бат. ВКПМ В-9070 и Епгегососсш faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071 нашей селекции.

Животноводческим хозяйствам рекомендуем использовать при силосовании зеленой массы кормовых растений бактериальную закваску из культур штаммов Е^егососсш Ыгае 1-Як. ВКПМ В-9069, Е^егососсш Гаесшш 2-Бат. ВКПМ В-9070 и ЕЫегососсиБ faecium З-Гр.сах. ВКПМ В-9071, в количестве 1% от силосуемой массы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Петрукович, Андрей Георгиевич, Владикавказ

1. Авраменко, И.Ф. Влияние ПАБК на развитие поросят после отъема / И.Ф. Авраменко, Ю.Ю. Витковский, М.М. Пасько // Свиноводство. 1975. - № 5. С 19.

2. Алешукина, A.B. Видовой состав лактобактерий, выделенных от людей с дисбактериозами кишечника / A.B. Алешукина // Материалы VIII съезда Всерос. о-ва эпидемиол., микробиол. и паразитологов. М., 2002. - Т. 1. - С. 127-128.

3. Анатовский, A.B. Биомолоко и его лечебные свойства / A.B. Анатовский, C.B. Патрушев //-Орджоникидзе, 1956. С. 3-15.

4. Андреевский, И.Л. Пути использования нефтяной микробиологии в нефтедобывающей промышленности / И.Л. Андреевский // Тр. / ВНИГРИ. -1959.-Вып.131. С. 403.

5. Ауэрман, Л.Я. Технология хлебопекарного производства. / Л.Я. Ауэрман // -М.: Пищевая промышленность, 1972. 416 с.

6. Баканов, В.Н. Кормление сельскохозяйственных животных / В.Н. Баканов, В.К. Менькин. Москва : Агропромиздат, 1989. - 511 с

7. Банникова, JI.A. Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности. / Л.А. Банникова // М., Пищевая промышленность, 1970. - 406 с.

8. Банникова, Л.А. Селекция молочнокислых бактерий и их применение в молочной промышленности. / Л.А. Банникова // М.: Пищевая промышленность, 1975 - 112 с.

9. Банникова Л.А., Эффективность использования препарата лактобактерий на основе соевого молока при выращивании свиней / Л.А. Банникова, А.К. Максимова // Молочн. пром-сть. 1969. - № 3. - С. 15.

10. Банникова, Л.А. К вопросу селекции сливочного молочнокислого стрептококка. / Л.А. Банникова, Л.К. Мытник // Молочная промышленность -1971.-№4.-С. 18-21.

11. Баранова, И.П. / И.П. Баранова, Н.С. Егоров // Биол. науки. 1973. - №. 4. - С. 106.

12. Баранова, И.П. / И.П. Баранова, Н.С. Егоров // Прикл. биохим. и микробиол. -1969.-№5.-С. 175.

13. Беленчук, В.И. Опыт рационального использования биологических препаратов при заготовке силоса / В.И. Беленчук // Сельскохозяйственная биология. -1987.- №9. -С. 105-111.

14. Бельмер, С.В. Дисбактериоз: ликвидация первопричины / С.В. Бельмер // Чаша здоровья. 2004. - Выпуск 4 - № 8. - С. 8.

15. Богданов, В.М. Усиление аромата закваски для масла / В.М. Богданов // Молочная промышленность. 1968. - № 8. - С. 22-25.

16. Богданов, В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. / В.М. Богданов // М.: Пищепромиздат, 1962. - 268 с.

17. Богданов, В.М. Молочнокислая микрофлора молока и молочных продуктов различных климатических зон. / В.М. Богданов // «Труды ВНИМИ». 1959. -Вып. 20.-С. 25-39.

18. Богданов, В.М. Выделение чистых культур для призводства кефира. / В.М. Богданов,И.Н. Пятницына // «Труды ВНИМИ». 1959. - вып. 20. - С. 40-51.

19. Бовкун, Г.Ф. Профилактическое действие бифинорма при желудочно-кишечных болезнях цыплят / Г.Ф. Бовкун // Ветеринария 1998. - № 12. - С. 44-47.

20. Бондаренко, В.М. Дисбактериозы кишечника у взрослых / В.М. Бондаренко, Н.М. Грачева, Т.В. Мацулевич // КМК Scientific Press. 2003. - С. 224.

21. Бондаренко, В.М. Дисбактериоз кишечника как клинико-лабораторный синдром: современное состояние проблемы. / В.М. Бондаренко, Т.В. Мацулевич // ГЭОТАР-Медиа 2007. - С. 304.

22. Боровкова, Ю.А. Эстеразная способность молочнокислых микроорганизмов на различных твинах / Ю.А. Боровкова, М.С. Уманский, Н.П. Климовский // Интенсификация производства и улучшние качества натуральных сыров. -Барнаул, 1974.- С. 59

23. Войткевич, A.B. Применение ацидофильных культур в животноводстве / A.B. Войткевич // Доклады ВАСХНИЛ. 1948. - Вып. 3. - С. 15-20.

24. Габрилович, И.М. Основы бактериофагии. / И.М. Габрилович // Минск: Высшая школа, 1973. -221 с.

25. Гаврилова, H.H. Закваски, применяемые для силосования кормов в СССР / H.H. Гаврилова // С.-х. биология 1985. - № 7. - С. 111 - 115.

26. Геймбегрг, В.Т. // Вопросы гигиены питания./ В.Т Геймбегрг, С. Я. Михилин, Л.И. Петрухина // 1962. - № 23. С. 37

27. Герасименко, В.В. Обмен веществ и продуктивные качества гусей при использовании пробиотиков : автореф. дис. . д-рабиол. наук/ В.В. Герасименко. Боровск, 2008. - 44 с.

28. Гольцева, A.A. Нормальная микрофлора желудочно-кишечного тракта телят : автореф. дис. . канд. с.-х. наук / A.A. Гольцева. Свердловск, 1953. 39 с.

29. Горская, Е.М. Теоретические и прикладные аспекты изучения адгезии бактерий к слизистой оболочке пищеварительного тракта / Е.М. Горская. -Медицинские аспекты микробной экологии, 1991. 41 - 45с.

30. Гриневич, А.Г. Молочнокислые бактерии. Селекция пром. Штаммов / А.Г. Гриневич-Мн.: Высш. школа, 1981. 112 е.

31. Гришина, Д. Морфологические и морфометрические показатели печени бройлеров / Д. Гришина, X. Баймишев // Птицеводство. 2007. - № 8. - С. 36 -37.

32. Трошева, Г.А. Взаимосвязь факторов естественной устойчивости организма птиц и иммунитета при вакцинации / Г.А. Грошева // Ветеринария. 2000. - № 8.-С. 24-27.

33. Гудков, A.B. Приготовление и применение заквасок для силосования кормов. Научные основы консервирования растительных кормов. / A.B. Гудков, Э.Д. Михлин, А.Н. Полянин и др. М.: НЦБИ, 1976. - 50 с.

34. Гудков, A.B. Взаимодействие молочнокислых палочек и маслянокислых бактерий, вызывающих порчу сыров / A.B. Гудков, К.П. Алексеева // Молочная промышленность. 1970. - № 1. - С.27 - 30.

35. Гудков, A.B. Использование молочнокислых бактерий для подавления нежелательных брожений в сыре / A.B. Гудков, К.П. Алексеева, С.Н. Карликанова // Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочнокислой промышленности. М., 1970. - С. 13-18.

36. Гудков, A.B. Пути улучшения качества заквасок для сыров с низкими температурами второго нагревания / А.А.Андреев, Н.А.Климовский, В.В.Звягинцев // Докл. межвуз. конф. по молочному делу. Ереван, 1971.

37. Гурьева Г.Д. // Тр. / Семипалатинский зоовет. ин-т. 1966 (1967) Т. 4 - С. 88.

38. Гудков, A.B. Антагонистическая активность молочнокислых бактерий применяемых в производстве мелких твердых сыров / A.B. Гудков, Р.Н. Хандак, Т.П. Трофимова // Труды. ВНИИМС. 1974. - Вып. 12. - С. 54-56

39. Гусейнов, Г.Г. Влияние биологического препарата ПАБК на продуктивность птиц / Г.Г. Гусейнов, K.M. Сафарова // Уч. записки аспирантов Азерб. с.-х. инта. 1966.-№3.-С. 69-72.

40. Диланян, З.Х. Бактериальные закваски важнейшее звено при формировании вида и качества сыра / З.Х. Диланян // Докл. межвуз. конф. по молочному делу. -Ереван, 1971.-С.159-162.

41. Диланян, З.Х. Накопление свободных аминокислот протеолитически активными молочнокислыми палочками / З.Х. Диланян, В.А. Туманян // Биологический журнал Армении. 1968. - № 8. - С. 37-42.

42. Дмитриевский С.П. Соление и квашение овощей / С.П. Дмитриевский. М. : Экономика, 1966. - 112 с.

43. Доронин, А.Ф. Функциональное питание / А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров. М.: Грантъ, 2002.-296 с.

44. Дубинский, Р. А. Количественная концентрация антибиотика, выделяемого ацидофильной палочкой. // Молочная промышленность 1957 - №9. - С. 2730.

45. Дьяченко, П.Ф. К изучению протеолитической активности молочнокислых бактерий / П.Ф. Дьяченко, В.П. Шидловская // Тр. ВНИМИ. -1970. вып. 27. С. -147.

46. Дьяченко, П.Ф. / П.Ф. Дьяченко, В.П. Шидловская // Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-ти. 1970. - вып. 27. - С. 9.

47. Евтухова, JI.H. К разработке метода оценки антагонистической активности препаратов для бактериотерапии / JI.H. Евтухова, C.B. Лесняк // Труды МНИИЭМ -1975. T. XV - С. 131-132.

48. Егоров, Н.С. / Н.С. Егоров, И.П. Баранова, В.Н. Максимов и др. // Изв. АН СССР, сер. биол. 1973. - № 1. - С. 99.

49. Егоров, Н.С. Микробиология / Н.С. Егоров, И.П. Баранова, А.Х. Мохамед. М. : Экономика, 1968.-215 с.

50. Ерзинкян, JI. А. Микробиология молока и молочных продуктов в Армянской ССР / Л.А. Ерзинкян // Изд. Академии наук Арм.ССР, биология науки. — 1961 — Т. 19.-№9.-С. 23-30.

51. Ерохина, М.В. Исследование химического состава микрофлоры и товарных свойств квашеной капусты при разных температурных режимах ферментации и хранения : автореферат дис. . канд. технических наук / М.В. Ерохина. М, 1967.-24 с.

52. Жербовский, Л.М. Приготовление ацидофильно-дрожжёванного корма на Братцевской птицефабрике / Л.М. Жербовский, В.И. Лисицина, В.А. Шафров // Молочная промышленность. 1960. - №20. - С. 23-26.

53. Живаева, А.Б. Антагонистическая активность лактобактерий в зависимости от условий и времени культивирования / А.Б. Живаева, А.Г. Гриневич // Биология микроорганизмов и их использование в народном хозяйстве. 1975. - Вып. 2. -Иркутск. С. 68-69.

54. Залашко, М.В. Биосинтез липидов дрожжами / М.В. Залашко. Мн. : КолосС, 1971.-156 с.

55. Погорелый, Л.В. Совершенствование технологии и технических средств производства силоса из кукурузы восковой спелости с предварительным плющением / Л.В. Погорелый, Н.П. Мечта, С.А. Дякин и др. К.: РОСНИИНТИ Госплана УССР, 1991. - 72 с.

56. Подбор и использование в сыроделии активных рас молочнокислых бактерий. В сб.: «Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности». / М.В. Залашко, К.В. Мочалова. - М., 1970, - С. 55-60.

57. Ибрагимова, А.З. Использование усовершенствованной молочнокислой закваски в производстве маргарина / А. 3. Ибрагимова, К. П. Авдонина, Н.Д. Шамраева // Соверш. технол. перераб. и хранения мяс. и молоч. продуктов. Л. -1984.-С. 66-71.

58. Иванова, С.И. Микробиология / С.И. Иванова. М. : Высшая школа, 1949. -312 с.

59. Иванова, А.Б. Влияние пробиотического препарата ветом 3 на качество мяса цыплят-бройлеров / А.Б. Иванова, Г.А. Ноздрин // Сиб. вестн. с.-х. науки. -2007.-№8.-С. 69-74.

60. Ильненко-Петровская, Т.П. Товароведение пищевых жиров, молока и молочных товаров / Т. П. Ильненко-Петровская, Э.Ф. Бухтарева. М. : Экономика, 1980.- 129 с.

61. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / под ред. Г.Г. Онищенко, В.А. Алешкина, С.С. Афанасьева, В.В. Поспеловой. М.: ГОУ ВУНМЦ Минздрава РФ, 2002. 608 с.

62. Карпуть, И.М. Постовариальная иммунология цыплят-бройлеров и ее корреляция пробиотиком бактерилом / И.М. Карпуть // Изв. Академии аграр. наук Респ. Беларусь. 1998. - № 1. - С. 65-68.

63. Карпуть, И.М. Профилактика иммунных дефицитов и желудочно-кишечных болезней у цыплят-бройлеров / И.М. Карпуть // Ветеринария. 2000. - № 11.-С. 41-44.

64. Квасников, Е.И. Биология молочнокислых бактерий / Е.И. Квасников. -Ташкент: Изд-во АН Уз ССР, 1960. 162 с.

65. Квасников, Е.И. Спиртоустойчивость молочнокислых бактерий / Е.И. Квасников // Микробиология. 1952. - Т. 22. - Вып. 2. - С. 160-165.

66. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е.И. Квасников, O.A. Нестеренко. М.: Высшая школа, 1975. - 342 с.

67. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии и пути их использования / Е.И. Квасников, В.И. Суденко // Цитология и генетика. 1967. -№ 2. - С. 1,61.

68. Квасников, Е.И. Микробиологические основы силосования кормов в условиях Узбекистана / Е.И. Квасников, М.Г. Сумневич М. Ташкент: Изд-во АН УзССР, 1954.

69. Квасников, Е.И. Молочнокислые бактерии в эпифитной микрофлоре растений Средней Азии / Е.И. Квасников, М.Г. Сумневич // Микробиология. 1953. Т. 22. Вып. З.-С. 267-274.

70. Квасников, Е.И. / Е.И. Квасников, И.Ф. Щеколова // Изв. АН СССР, сер. биол. -1968.-№4,.-С. 543.

71. Климовский, И.И. Биохимические и микробиологические основы производства сыр / И. И. Климовский. М.: Экономика, 1966. - 167 с.

72. Климовский, И.И. Биохимические основы производства сыра и значение бактериальных заквасок / И.И. Климовский // Молочная промышленность. -1967.-№1.-С. 24-28.

73. Климовский, И.И. Совершенствование методов подбора, производства и применения бактериальных заквасок с целью улучшения качества сыра / И.И.

74. Климовский, A.B. Гудков, В.И. Звягинцев. Отчет ВНИМС по теме №4. Углич, 1968.

75. Кокорина, JI.M. Вопросы физиологии микроорганизмов / JIM. Кокорина. -Физиология животных. 1970. - С. 21.

76. Королева, Н.С. Выделение и сохранение свойств биологически активных ацидофильных бактерий : автореф. дис. . канд. биол. наук / Н.С. Королева. -М., 1960.-17 с.

77. Королева, Н.С. Техническая микробиология кисломолочных продуктов / Н.С. Королева. М.: Высшая школа, 1966. - 216 с.

78. Микроэкология влагалища. Коррекция микрофлоры при вагинальных дисбактериозах / В.М. Коршунов и др.. М.: ВУНМЦ Минздрава РФ, 1999. -80 с.

79. Куликов, А.Н. Микробиологические основы технологии пастеризации зернистой икры осетровых рыб : автореф. дисс. . канд. технических наук / А.Н. Куликов. М, 1952. - 24 с.

80. Курносова, H.A. Микрофлора кишечника при мегаколону детей и нормализация ее колибактерином / H.A. Курносова, Т.А. Атагельдыев // Труды ВНИИЭМ. -1969. Т. 13. - С. 290-295.

81. Кухлинг, Э. Мясная индустрия СССР / Э.Кухлинг. 1965 г. -158 с.

82. Леванова, Л.Л. Возрастные особенности микробиоценоза кишечника у жителей г. Кемерово / Л.Л. Леванова, В.А. Алешкин, А.Л. Воробьев и др. // Журн. микробиол. 2001. - № 3. - С. 72—75.

83. Лемминг, Э.Я. Виды, причины и пути снижения потерь питательных веществ при силосовании основных кормовых культур : автореф. дис. . канд. с.-х.н. / Э.Я. Лемминг. Тарту, 1971. - 20 с.

84. Ленцнер, A.A. Лактобациллы микрофлоры человека : автореферат дис. . док. биолог. Наук / A.A. Ленцнер. Тарту, 1973. - 22 с.

85. Ленцнер, A.A. Липолитическая активность лактобацилл, выделенных из различных сыров / A.A. Ленцнер, Х.П. Ленцнер, М.А. Тоам, Р.Е.Вельдре. // Докл. межвуз. конф. по молочному делу. Ереван, 1971.

86. Леонович, В.В. Применение ацидофильных культур в животноводстве / В.В. Леонович, М.С. Полонская // Социалистическое жиовтноводство. 1950. - Т. 3. -№ 1. - С. 19-20.

87. Леонович, В.В. Применение ацидофильного препарата в животноводстве / В.В. Леонович, М.С. Полонская // Использование микроорганизмов в сельском хозяйстве. 1961. -№ 3. - С.18-21.

88. Литвина, Л.А. Экологически безопасные препараты / Л.А. Литвина и др. // Проблемы сельскохозяйственной экологии. Новосибирск - 2000. - С. 53-54.

89. Литвина, Л.А. Микробиоценоз кишечника и его роль в поддержании гомеостаза / Л.А. Литвина // Проблемы сельскохозяйственной экологии. 2000. №3.-С. 51-52.

90. Луковникова, Л. Новая разновидность молочнокислого стрептококка / Л. Луковникова // Молочная промышленность. 1965. - №11.-е. 38-40.

91. Лушников, К.В. Альтернатива кормовым антибиотикам / К.В. Лушников // Eurofarmer. 2005. - № 1. - С. 33-35.

92. Использование микроорганизмов в животноводстве и для защиты растений : в сб. / М.М. Макарова, A.A. Голикова, A.B. Шушунова, Н.М. Барбашова. Л., 1968.- 168-172 с.

93. Максимова, A.K. Образование аромата в заквасках для масла / А.К. Максомова // Молочная промышленность. 1954. - №8. - С. 19-21.

94. Максимова, А.К. / А.К. Максимова // Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-ти. 1968-Вып. 26.-С. 52.

95. Максимова, А.К. / А.К. Максимова // Труды Всес. н.-и. ин-та молочн. пром-ти -1970-Вып.27,-С. 32.

96. Максимова, А.К. К вопросу изучения протеолитической активности молочнокислых стрептококков и палочек. / А.К. Максимова // «Труды ВНИМИ» 1968 - вып.26 - С. 52-69.

97. Малявин, А.Г. Об эффективности биологического препарата витамина Bi2 -ПАБК / А.Г. Малявин // Ветеринария 1960. - № 1. - с. 50-52.

98. Мельникова, Е.В. Разработка принципов подбора термофильных молочнокислых бактерий для симбиотических заквасок.: автореф. дис. . канд. техн. наук. / Е.В. Мельникова М., 1973. - 21 с.

99. Меркурьева, Е.К. Биометрия в селекции и генетике сельскохозяйственных животных / Е.К. Меркурьева. М.: Колос, 1970. - 423 с.

100. Михайлова, А.Е. Изучение роли молочнокислых батерий при посоле окороков.: Автореф. Дис. канд. технических наук. / А.Е. Михайлова М., 1968. - 24 с.

101. Мишустин, E.H., Силос и бактериальные закваски / E.H. Мишустин, В А. Мирзоева Изв. АН СССР, сер. биол., - 1963. - №6. - с. 785.

102. Мишустин, E.H., Микробы и зерно / E.H. Мишустин, Л.А. Трисвянский М, Изд-во АН СССР, 1963. - 124 с.

103. Монтиэль, Э. Значение иммунной системы для промышленного птицеводства // Ключевая роль иммунодефицита в промышленном птицеводстве: причины и следствия / Э. Монтиэль // 1998. - С. 2-4.

104. Мочалова, К.В. Выделение и подбор местных штаммов молочнокислых сртептококков для заквасок, используемых в сыроделии. // Основные направления в селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности, / К.В. Мочалова // М 1970 - С. 60-62.

105. Мудрецова-Висс, К.А., Микробиология, санитария и гигиена / К.А. Мудрецова-Висс, A.A. Кудряшова, В.П. Дедюхина. М.: «Деловая литература» - 2001. - с. 378.

106. Муравьева, В.В. Микробиологическая диагностика бактериального вагиноза у женщин репродуктивного возраста: Автореф. дис. . канд. биол. наук. / В.В. Муравьева. М., 1997. - 23 с.

107. Ноздрин, Г.А. Научные основы применения пробиотиков в птицеводстве / Г А. Ноздрин. Новосибирск: Новосиб. гос. аграр. ун-т, 2005. - 224 с.

108. Ноздрин, Г.А. Фармакопрофилактика и фармакотерапия при гинекологических заболеваниях у коров с использованием пробиотиков: метод, рекомендации / Г.А. Ноздрин, А. Б. Иванова, О.Ю. Леденева, А.Г. Ноздрин. Новосибирск, 2002. - 27 с.

109. Ноздрин, Г.А., Пути повышения естественной резистентности новорожденных телят / Г.А. Ноздрин, A.C. Донченко // Тез. докл. межвуз. конф. Новосибирск, Актуальные вопросы ветеринарии: Новосибирск, Изд-во Новосиб. аграр. унта, 1997.-С. 4-5.

110. Николаева, Т.Н., Иммуностимулирующая и антиканцерогенная активность нормальной лактофлоры кишечника / Т.Н. Николаева, В.В. Зорина, В.М. Бондаренко // Эксперим. клин, гастроэнтерол. 2004. - №4. - С.39-43.

111. Овсянников, А.И. Основы опытного дела в животноводстве / А.И. Овсянников. -М.: Колос, 1976.-189 с.

112. Овчарова, Т.П. Применение низина в консервной промышленности / Т.П. Овчарова. -М.: Экономика, 1972. 168 с.

113. Овчарова, Т.П. Антибиотики в пищевой промышленности / Т.П. Овчарова, Н.М. Масленникова.- М.: Пищевая промышленность, 1969. 282 с.

114. Отраслевой стандарт «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» (ОСТ 91500.11.0004-2003, утвержден Приказом Министерства здравоохранения РФ № 231 от 09.06.2003 г.).

115. Панин, А.Н. Немного о пробиотиках / А.Н. Панин и др. // Vitinform. 1953. -№2.-С. 16-19.

116. Панин, А.Н., Пробиотики в системе рационального кормления животных / А.Н. Панин, Н.И. Малик. // Пробиотики, пребиотики, симбиотики и функциональные продукты питания. 2007. - С. 59.

117. Планельес, X., Побочные явления при антибиотикотрапии бактериальных инфекций / X. Планельес, А. Харитонова. М., Медгиз, 1960. - 216 с.

118. Подкопаев, В.М. Изучение кишечной микрофлоры телят и поросят, лечение диспепсии и обоснование профилактики / В.М. Подкопаев // Матер. Всесоюз. конф. по болезням молодняка с.-х. животных и птиц. Мн., 1964, С. 109-111.

119. Полонская, М.С. Антибиотические вещества ацидофильных бактерий. / М.С. Полонская // Микробиология. 1952. - Т. 21. - Вып. 12. - С. 303-310.

120. Рогов, И.А. Синбиотики в технологии продуктов питания: Монография / И.А. Рогов, Е.И. Титов, В.И. Ганина и др. -М.:МГУПБ, 2006. 218 с.

121. Рыбальский, Н.Г., Консорциумы микроорганизмов / Н.Г. Рыбальский, С.П. Лях. Москва: ВНИИПИ, 1990. 164 с.

122. Сафроненко, Л.В. Микробиология и биотехнология на рубеже 21 столетия / Л.В. Сафроненко, О.В. Ласковнева, Н.К. Жабанос // Матер. Междунар. конфер. -Минск,-2000.-С. 207.

123. Свечникова, З.Л. К вопросу изучения антагонистических свойств молочнокислого стрептококка / 3 Л. Свечникова // Тр. Ин-та микробиологии и вирусологии АН КазССР. 1961 - Т. 4. - С 16-20.

124. Селибер, Г.Л. История микробиологии хлебопечения / Г.Л. Селибер, А.Я. Пумпянский // Микробиология. 1959.- Т. 28.- №2. - С.287.

125. Сергеева, Т.Я. Применение биологического препарата витамина В12 в животноводстве / Т.Я. Сергеева, В.И. Пушкарева // Ветеринария. 1959. - № 5.- С. 29.

126. Сизова, A.B. Значение микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных и использование бактерий симбионтов в животноводстве /A.B. Сизова. - М. : ВНИИТЭИСХ, 1974. - 67 - 69с.

127. Скородумова, A.M. Диетические и лечебные кисломолочные продукты (микробиологические основы) / A.M. Скородумова. Л.: Нева, 1961. - 316 с.

128. Соколовский, В.П. Пищевая и лечебная ценность молока и молочных продуктов / В.П. Соколовский, Г.Г. Вольфсон. М. : Высшая школа, 1968. -185 с.

129. Соловьев, П.М. Выпаивание животным ацидофильной культуры / П.М. Соловьев, Т.Г. Кольцова // Сельское хозяйство Северо-Западной зоны. 1961. -№ 12. - С.77-79.

130. Сорокин, Ю.Ю. Исследование и выбор протеолитически активных штаммов молочнокислых бактерий для производства голландского сыра : автореф. дис. . канд. техн. Наук / Ю.Ю. Сорокин. Вологда, 1967, - с. 27.

131. Старостин, А. Мясная индустрия СССР / А. Старостин, Ж. Козлова. — 1961 г. — с. 6,15.

132. Тавелич, М.Б. Биологические свойства Str. Lactis : автореф. дис. . канд. биологических наук / М.Б. Тавелич. Киев, 1961. -20 с.

133. Талачкене, Р.И. Выделение мезофильных молочнокислых стрептококков в условиях Литовской ССР / Р.И. Талачкене // В сб.: Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочной промышленности. М., 1970. -с. 66-69.

134. Тараканов, Б.В. / Б.В. Тараканов // Труды Всес. н.-и. ин-та физиологии и биохимии с.-х. животных. 1965. - Вып. 2. - С. 250.

135. Тараканов, Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве / Б.В. Тараканов. Калуга : Департ. Сельского хозяйства и продовольствия, 1998.

136. Тараканов, Б.В. Пробиотики в кормлении животных / Б.В. Тараканов и др. // Ветеринария. 1999.- №7. - С. 18-21.

137. Твердохлеб, Г.В. Технология молока и молочных продуктов / Г.В. Твердохлеб, З.Х. Диланян, JI.B. Чекулаева, Г.Г. Шилер. М. : Агропромиздат., 1991 - с. 219.

138. Тменов, И.Д. Использование продуктов микробиологического синтеза в животноводстве / И.Д. Тменов, Б.Г. Цугкиев.- Владикавказ : Горский ГАУ, 1996,-с. 142.

139. Уйбу, Я.А. Количественный состав лактобациллярной флоры фекалий здоровых людей : автореферат дис. .канд. биол. Наук / Я.А. Уйбу. Тарту,1972.-24 с.

140. Уманский, М.С. Исследование липидных компонентов твердых натуральных сыров : автореф. дисс. . канд. технических наук / М.С. Уманский. Ереван,1973.-26 с.

141. Фробишер, М.П. Основы микробиологии / М.П. Фробишер. М.: «Мир», 1965, -с. 678.

142. Цугкиев, Б.Г. Возрастная динамика нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта поросят и ее зависимость от фактора кормления / Б.Г. Цугкиев Владикавказ: Эра, 1996. - 84 с.

143. Чернух, A.M. Антибиотики группы тетрациклинов / A.M. Чернух, Г.Я. Кивман. М.: Медгиз, 1962. - 210 с.

144. Чужова, З.П. Подбор ароматообразующих стрептококков для заквасок / З.П. Чужова // В сб.: Основные направления селекции молочнокислых бактерий в молочно промышленности. М.: 1970, - С. 73-79.

145. Чужова, З.П. Ароматизация сладкосливочного масла / З.П. Чужова, Е.А. Сидорова, Г.А. Кулешова // Молочная промышленность. 1972. - №6. - С. 32.

146. Шайдулина, Р.Г. Новые пробиотики для молодняка сельскохозяйственных животных и птицы. / Р.Г. Шайдулина, Заболотский В.А. Стукалова Л.Ы. и др. //

147. Тез.докл. Ш межд. конф. «Актуальные проблемы биологиив животноводстве». Боровск, 2000. - С. 440-441,

148. Шамис, З.Х. / З.Х. Шамис // В сб. : Микробиология кормов. Труды совещания по микробиологии кормов. Алма-Ата, 1961.-С. 168-172.

149. Шендеров, Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание / Б А. Шендеров // Пробиотики и функциональное питание. 2001. - Т. 3: - М.: Грантъ. - 288 с.

150. Шин, А.П. Новые штаммы лактобацилл сильных антагонистов гнилостной микрофлоры хлеба / А.П. Шин, A.B. Витавская, Т.Н. Дудикова // Достиж. микро-биол. - практ.: Тез. Докл. VII съезда Всес. микробиол. о-ва: Алма-Ата, -1985.-Т.1 -Ч.2-С. 126.

151. Шкундова, Ю.В. Молочнокислые микроорганизмы в производстве пищевых продуктов / Ю.В. Шкундова // Прикл. биохим. и микробиол. 1968. № 5. - с. 4, 599.

152. Эпштейн-Литвак, Р.В. Бактериологическая диагностика дисбактериозакишечника (Методические материалы) / Р.В. Эпштейн-Литвак, Ф. Л. Вилынанская. М., 1969.-218 с.

153. Abo-Elnaga, I.G. / I.G. Abo-Elnaga, О. Kandier // Zbl. Bakt. 1965 II Abt 119. P. 1661.

154. Alderman, G. Europe pans inoculants / G. Alderman // Farmers weekly. 1985. - V. 102.-№25.-P. 87-88.

155. Allen, L.A. Lactobacterium / L.A. Allen, J. Harrison, S.J. Watson, W.S. Ferguson // J. Agric. Sci.- 1937. P. 27,271.

156. Benjamin, F. Phage susceptibilitu of encapsulated Lactobacillus casei / F. Benjamin, N. Hammond, B. Williams //Nature. 1965. - V. 206. - № 4989. - P. 1173.

157. Bisset, K.A. Lactobacilli / K.A. Bisset, G.H.G. Davis. London : The microbial flora of the mouth, 1960.-189 p.

158. Bolsen, K.K. New technology in forage conservation feeding systems / K.K. Bolsen // Proc. XV Int. Grassland Congress, aug. 24 -31, 1985. Kyoto, Japan. -1986.-P. 82-88.

159. Bottazzi, V. Acetaldehyde and diacetyl production by Streptococcus thermophilus and other lactic streptococcus / V. Bottazzi, F. Dellaglio // Dairy Res. 1967. - V. 34.-№2.-P. 109-113.

160. Bottazzi, V. Carbonyl compounds produced by yoghurt Bacteria / V. Bottazzi, M. Vescovo // Nederl. melk-en zuiveltijdschr. 1969. - V.23. - №1. - P. 71-78.

161. Boyd, I.S.K. Immunity of lysogenic bacteria / I.S.K. Boyd // Nature. 1956. - V. 178.-P. 141.

162. Bratovanova, P. To the issue of formation of acetoin and diacetyl in dough part manufactured products / P. Bratovanova // Biotechnol. and Biotechnol. Equip. 2001. -V. 15-№2-P. 124-127.

163. Castberg, H. Degradation of milk proteins by enzymes from lactic acid bacteria used in cheese making / H. Castberg, Morris H. // Milchwissen-schaft Bd. 1976. - H. 31.-№2.-S. 85-90.

164. Cunningham, A. / A. Cunningham, A.M. Smith // Zbl. Bact., II. Abt. 1939. - № 100.-P. 394.

165. Done, D.L. Silage inoculants / D.L. Done // Reserch and development in agriculture. 1986. - V.3. - № 2 - P. 83 - 87.

166. Facklam, R.R. Enterococcus / R.R. Facklam, D.F. Sahw, L.M. Teixeira // Manual of Clinical Microbiology. 7th ed. Washington: ASM Press. 1999. - P.297-306.

167. Feldheim, G. / Ernährungsforschung. 1958. - № 3 - P. 193.

168. Fryer, T.E., Lipolytic activity of lactic acid bacteria / T.E. Fryer, B. Reiter, R.C. Lawrence // Dairy Sei.". 1967 - № 3 - p. 338.

169. Fuller, R. Probiotics in man and animals / R. Fuller // J. Appl. Bacteriol. 1989. -Vol. 66.-№5.-P. 365-378.

170. Fuller, R. Nutrition of Pigs and Poultry / R. Fuller // Butterworths & Co. Ltd., London.- 1962, 315 p.

171. Giraffa, G. Enterococcal bacteriocins: their patential as antilisteria factors in dairy technology / G. Giraffa // Food Microbiol 1995. - V. 12. - № 4. - P. 291-299.

172. Goren E. Reproduction of salmonella infection of broilers by spray applica tion of intestinal flora a longitudinal study / E. Goren // Veter. Quarterly. 1988. - Vol. 10 -№4.-P. 249-255.

173. Granwell P. Nutrition Abstracts and Reviews P. Granwell. 1968 - V. 38. - № 3 -P. 721-730.

174. Gyllenberg, H., Survival of bifid bacteria in water as compared with that of coliform bacteria and enterococci / H. Gyllenberg, S. Niemela, T. Sormunen // Appl. Microbiol. 1960. -№ 8. P. 20.

175. Haenel, H. J. Some rules on the ecology of the intestinal microflora of man / H. J. Haenel // Appl. Bacteriol. 1961, - № 24. - 242.

176. Haenel, H.J. / HJ. Haenel, L. Wiss// Karl Marx Univ. Leipzig: Math-naturwiss. Reihe.- 1962.-№ IIP 757.

177. Haenel, H., / H. Haenel, W. Müller-Beuthow, A. Scheunert // Zbl. Bakt., I. Abt. -1957-P. 169,45.

178. Jarvis, B., / B. Jarvis, M.D. Morisetti I I Internat. Biodeteriorat. Bull. 1968. - P. 5, 39.

179. Jensen, R.G., The characteristics of some rumen Lactobacilli / R.G. Jensen, K.L. Smith, J.E. Edmondson, C.P. Merilan// J. Bacteriol. 1956. - V. 2 - №72 - P. 72, 253.

180. Jernigam M.A. et al. Probiotics in poultry nutrition. // World's Poultry Sci. 1985. -V. 41. - № 5-P. 99-107.

181. Johnson, E.C., / E.C. Johnson, S.F. Gilliland, M.L. Speck // Appl. Microbiol. 1971, p. 21, 316.

182. Jordens, J.Z., Faecal carriage and nosocomial spread of vancomycin-resistant Enterococcus faecium / J.Z. Jordens, J. Bates, D.T. Griffiths // J. Antimicrob Chemother. 1994. -№ 34. - P. 515-28.

183. Kandler, 0. Nosporing grampositur rods weiss. n. regular / O. Kandler // Bergy's manua of systematic bacteriology. 1986. - V. 2. - P.35.

184. Kelly, D., Commensal gut bacteria: mechanism of immune modulation / D. Kelly, S. Conway, R. Aminov // Trends Immunol. 2005. - № 26. - P. 326-333.

185. Klein, G. Taxonomy, ecology and antibiotic resistance of enterococci from food and the gastro-intestinal tract. / G. Klein // Int. J. Food Microbiol. 2003. № 88. - P. 123-131.

186. Kolodjieva, V., Incidence of virulence determinants in enterococcal strains of probiotic and clinical origin / V. Kolodjieva et. al. // New Insights Into and Old Enemy. 2006. - P. 367-370.

187. Koneman, E.W. Color atlas and textbook of diagnostic microbiology. / E.W. Koneman et al. // 1997. Vol.19. - P. 1140 -1143.

188. Kornchild, H., Process of making sausage / H. Kornchild, R.H. Olsen // Dairy Technicks Inc. 1971.

189. Koser, S.A., / S.A. Koser, E. Hdges, I. Tribbi, J.T. Stuedell // J. Infect. Dis. 1960 -№60.-p. 106.

190. Mallick, B.B. Nonspecifis immunostimulation against viruses // Comp. Jmmun. / B.B. Mallick//Microbiol. Jnfect. Dis. 1995. - Vol. 8 - № 1. -P.53-63.

191. Marth, E. Salmonellae and salmonellosis associated with milk products / E. Marth // J. Dairy Sei. 1969. - v. 52, 1873-1879.

192. Marugg, J.D. Bacteriocins, their role in developing natural products // Food biotechnol / J.D. Marugg- 1991. -№ 3. -P.305-312.

193. Mattick, A.JA. Mattick, A. Hirsch //Nature. 1944. -№ 3919. - P. 557.

194. McCarthy A.E., Risk factors for acquiring ampicillin-resistant enterococci and clinical outcomes at a Canadian tertiary-care hospital / A.E. McCarthy, G. Victor, K. Ramotar, B. Toye // J. Clin. Microbiol. 1994. -№ 11. - P. 2671.

195. Meyer, F. Z. Krafttutter. 1968. - № 12. - P. 588

196. Mon, L., Peptidase activities in group N streptococci / L. Mon, J. Sullivan, G. Jago // J. Dairy Res. 1975. - v. 42. - № 1. - P. 147 - 155.

197. Morishita, Y. Specific establishment of lactobacilli in the digestive tract of Germ free, chickens jap. / Y. Morishita // Microbiol. 1971. - № 15. - P. 531-538.

198. Müller, G. / G. Miller // Lebensmittel Ind. 1968. - P. 15,21.

199. Niven, C.F. Enterococcus in food / C.F. Niven // Food Manufacture. 1953. -462 p.

200. Orillo, C.A. Lactic acid bacterial fermentation of burong dalag / C.A. Orillo , C.S. Pederson // Appl. Microbiol. 1968 - V. 16 - № 11 -P. 1669-1671.

201. Orla-Jensen, G.K. The lactis acid bacteria. / G.K. Orla-Jensen Kobenhavn: 2-d ed., I Komission hos Ejnar Muchksgard. 1942. 138 p.

202. Oxford, AE. Diplococcin, an anti-bacterial protein elaborated by certain milk streptococci. / A.E. Oxford // Biochem J. 1944. - V. 38 - № 2. - P. 178-182.

203. Padiglione, A.A. Fecal colonization with vancomycin-resistant enterococci in Australia Grabsch / A.A. Padiglione, D. Olden, M. Hellard // Emerg. Infect. Dis.2000.-№6.-P. 534.

204. Pederson, CS. A Study of the Species Lactobacillus plantarum (Orla-Jensen) Bergey et al. / C.S. Pederson // J Bacteriol. 1936. - № 3. - P.217-224.

205. Reuter, G. Intern. J. // Food Microbiol. 1985 - № 2. - P. 55-68.

206. Reuter, G., Entwicklung der Mikroflora in schenell-reifender deutscher Rohwurst und analoge quantitative Aminosäureanalyse bei einer Salami / G. Reuter, H . J . Langner, and H. J . Sinell. // Fleischwirtschaft. 1968. № 48. - P. 170-176.

207. Ries, P., Nutrition of Animal of Agricultural Importans P. Ries, P. Jakobsen // -1969. Parti.

208. Rushmann, G., Harder L. // Zbl. Bact., II. Abt. 1931. - P. 83, 325.

209. Rushmann, G., Koch R. // Zbl. Bact., II. Abt. 1930a. - P. 80.

210. Rushmann, G., Koch R. // Zbl. Bact., II. Abt. 1930b - P. 81.

211. Sarantinopoulos, P., Citrate metabolism by Enterococcus faecalis FAIR-E 229 / P. Sarantinopopoulus, G. Kalantzopulos, E. Tsakalidou // Appl. Environ. Microbiol.2001. V. 67(12). - P. 5482 - 5487.

212. Sherman, J.M. A Contribution to the Bacteriology of Silage. / J.M. Sherman // J Bacteriol. 1916. - V. 1. - № 4. - P. 445-452.

213. Shovlin F.E., Biochemical and antigenic studies of lactobacilli isolated from deep dentinal caries./ F.E. Shovlin, R.E. Gillis I. Biochemical aspects. // J Dent Res. -1969. -V. 3. -№48. P. 356-360.

214. Singh, J., Antibacterial activity of lactobacilli / J. Sign, H. Laxminarayana.-Indian // J. Daiiy Sei. 1973. - V. 26. - № 2. - P. 135-136.

215. Stark P. Concerning the Habitat of Streptococcus lactis / P. Stark, J.M. Sherman //J Bacteriol. 1935. - № 6. - P. 639-646.

216. Van der Zant, W.C. Proteolysis by Str.lactis grown in milk with and without controlled pH / W.C. Van der Zant, F.E. Nelson // Dairy Sei. 1953. - v.36. - №10 -P. 1104-1111.

217. Van Niel, CW. Lactobacillus therapy for acute infectious diarrhea in children: a meta-analysis. / CW. Van Niel, C. Feudtner, MM. Garrison, DA. Christakis // Pediatrics. 2002 - № 109 - P. 678-684.

218. Vedamuthu, E.R., Microbiologically induced desirable flavors in the fermented food of the west / E.R. Vedamuthu // Develop. Ind. Microbiol., Proc. 35th Gen. Meet. Soc. Ind. Microbiol., Houston. Tex., 1978. Arlington: Va, 1979. - P. 187-202.

219. Vrignaud, Y. Actualites desidustries alimentaires et agroindustrielles / Y. Vrignaud // Ind. alim. etagr. 1982. - V.99. -№3. - p. 143-160.

220. Weigmann, H. Forchungen auf dem Gebiete der Milchwirtschaft und Molkereiwesens / H. Weigmann, A. Wolff. 1922 - 207p.

221. Williamson, W.T. Proteolysis and curd tension in milk associated starter culture growth / W.T. Williamson, M.L. Speck // Dairy Sci. 1962. - v.54. - №2, - p. 164169.

222. Williamson, W.T. Extracellular proteinase of Streptococcus lactis / W.T. Williamson, S.B. Tove, M.L. Speck // Bacteriology. 1964. - 87. - №1. - p. 49-53.

223. Zubrzycki, L. Studies on the stability of the normal fecal flora / L. Zubrzycki, E.H. Spaulding // J. Bacteriol. 1962. - № 83. - p. 968 - 974.