Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологически активные вещества в ветеринарии
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология
Автореферат диссертации по теме "Биологически активные вещества в ветеринарии"
ОО3457782
КРЫЖАНОВСКАЯ ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА В ВЕТЕРИНАРИИ
03.00.23 - биотехнология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
12 т ¿т
Щелково - 2008 г.
003457782
КРЫЖАНОВСКАЯ ЕЛЕНА ВИКТОРОВНА
БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА В ВЕТЕРИНАРИИ
03.00.23 - биотехнология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
Щелково - 2008 г.
Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (ВНИТИБП), Кубанском государственном медицинском университете (г. Краснодар) совместно с ЗАО «Биопрогресс».
Научный консультант: доктор биологических наук, профессор, Албулов Алексей Иванович
Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Тихонов Игорь Владимирович
доктор ветеринарных наук, профессор Смоленский Владимир Иванович
доктор ветеринарных наук, профессор Балашов Владимир Михайлович
Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ)
Защита состоится 26 декабря 2008 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности:
141142, Московская область, Щелковский р-н, п/о Кашинцево, нос. Биокомбината, ВНИТИБП; тел. /факс: 526-43-74; Е-таП:упШЬр@таП.ги. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИТИБП.
Автореферат разослан 25 ноября 2008г.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук
1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1. Актуальность темы. Биологически активные вещества (БАВ), неспе-цифичсскис средства, которые производятся из компонентов различного природного происхождения (морепродукты, микроорганизмы, животные, растения и т.д.), используются в качестве подкормки для животных, птиц, насекомых и растений, оказывают стимулирующий иммунитет, антимикробное, сорбционное, антиокси-дантное воздействие, улучшают качество обрабатываемого продукта и находят все более широкое применение в ветеринарии.
Биологически активные вещества (БАВ), обладающие способностью воздействовать на иммунокомпетентные системы, делятся на экзогенные и эндогенные. Подавляющее большинство первых - это вещества микробного происхождения (бактериального и грибкового). БАВ эндогенного происхождения условно разделяют на две группы: иммунорегуляторные пептиды и цитокины. Пептиды представляют собой, в основном, экстракты из органов иммунной системы (тимуса, селезенки) или продукты их жизнедеятельности (костного мозга). Под цитокинами понимают всю совокупность биологически активных белков, продуцируемых лимфоцитами и макрофагами: иитерлейкины, монокины и интерфероны.
Незаразные болезни молодняка сельскохозяйственных животных в первые дни жизни широко распространены в животноводстве и являются одной из основных проблем ветеринарной практики. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных имеют повсеместное распространение и их лечение, и профилактика являются неотложными задачами ветеринарии.
Из незаразных заболеваний молодняка наиболее часто регистрируют желудочно-кишечные болезни, которые составляют у молодняка до 10-дневного возраста 6090%. Связано это, прежде всего с нарушением технологии содержания и кормления животных, а также несовершенством естественной защиты их организма к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Желудочно-кишечные болезни телят наносят огромный ущерб животноводству вследствие высокой заболеваемости и падежа (до 100%), затрат на лечебные
з
мероприятия, снижения продуктивных качеств и племенной ценности животных. Хотя изучение данной проблемы посвящено много работ, и для лечения этой группы заболеваний предложено много схем, все же до настоящего времени не удается достигнуть 100% сохранности молодняка. Гительсон С.С. (1974), Ежиков A.A. (1970), Зароза В.Г. (1984) и др. (1984) установили, что наибольшее распространение среди болезней телят имеет диспепсия, заболеваемость которой на молочных фермах и комплексах составляет 80%-95%, а летальность от 15% до 70%. Причем, заболевание имеет сложную этиологию, что создает трудности в диагностике и лечении. При заболеваниях в ранний период жизни регистрируется высокая летальность в связи с тем, что болезни чаще протекают на фоне иммунодефицитов.
Проблема иммунной недостаточности у молодняка сельскохозяйственных животных выходит на первое место, особенно при переводе хозяйств на промышленную основу и создания комплексов с большой концентрацией поголовья животных на малой территории. Это способствует тому, что у животных создается недостаточный иммунный фон и возможно снижение напряженности иммунитета. Болезни органов пищеварения у молодняка, как правило, протекают на фоне пониженной резистентности организма. Поэтому разработка новых препаратов и схем лечения желудочно-кишечных заболеваний у молодняка, способствующих повышению неспецифической резистентности, является перспективным направлением.
В связи с вышеизложенным, проблема поиска новых биологически активных препаратов для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка весьма актуальна.
Хигозан в настоящее время используется в различных областях народного хозяйства. Особого внимания заслуживает применение его в ветеринарии и медицине. Установлено, что хитозан является слабым аллергеном, обладает достаточно низкой токсичностью и гшрогенноегью (Скрябин К.Г., Вихорева Г.А., Варламов В.П., 2002; Быкова В.М., Немцев СВ., 2002; Allan G.G., Peyron М., 1989).
Хитозан способен образовывать гели в слабокислых растворах (рН 5-6). Кроме того, он может создавать пленку на коже и раневых поверхностях, а также на слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, обладает высокой адсорбционной емкостью, способен выводить токсичные вещества, стимулирует клеточных и гуморальный иммунитет (Албулов А.И., Самуйленко А.Я., Шинкарев СМ., Фролова М.А., 2001; Чсрвинец В.М., Бондаренко В.М., Комаров Б.А., 2002; Muzarelli г.а.а., 1988). Эти свойства хитозана могут быть использованы для создания средств лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных, приносящих большой экономический ущерб.
В зависимости от содержания в составе препарата фракций с различными молекулярными массами хитозан может проявлять в той или иной степени сорбционные, иммуномодулирующие, бактериостатическне, фунгиста-тические, противовоспалительные и другие свойства (Ильин Л.А.. Андрианова И.Е., Глушков В .А., 2003; Чсрвинец В.М., Албулов А.И., Чсрвинец Ю.В., 2006).
Туберкулез наносит значительный экономический ущерб животноводству страны, что связано с широкой распространенностью болезни, необходимостью убоя реагирующих на туберкулин животных в благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйствах и населенных пунктах (Смольянинов К).И., Донченко А.С и др., 2005.). Поэтому поиск новых препаратов для антимикробной терапии туберкулеза и других заболеваний является на сегодняшний день актуальной задачей (Капков Л.Г., Smith J., Wood Е., Domish М., 2004).
Принимая во внимание уникальные свойства хитина и хитозана, в последние годы значительно возрос интерес к изучению и практическому применению этих природных полимеров во многих областях, в том числе ветеринарии и медицине. Это определило интерес к изучению молекулярного механизма действия липолитических ферментов и поиску соединений, влияющих на липидный обмен. Хитозан, благодаря уникальной структуре и положительному заряду, является полифункциональным соединением, обладающим целым рядом уникальных свойств: высокой совместимостью с животными тканями, биоде-
градируемостью, отсутствием токсичности и др., что определяет перспективы его использования в качестве ингибитора липолитических ферментов (Sumiyoshi М., Mhurchu С).
Изучение биоактиоксидангов показало их существенную роль в поддержании уровня свободно радикальных реакций и регулировании обмена ли-пидоа.в мембранах клетки. Важно, что существование системы регуляции было обнаружено практически для всех изученных внутриклеточных и клеточных мембран клеток животных, растительных организмов и микроорганизмов.
Важнейшим элементом поддержания здоровья животных а, значит, продук-тиности и сохранности) являются доброкачественные корма, т.е. корма, свободные от чужеродных вредных для организма веществ. Одни из самых опасных чужеродных примесей - микотоксины (ядовитые низкомолекулярные метаболиты плесневых микроскопических грибов). Даже следы микотоксинов в кормах (30-100 мкг/кг) приводят к потере продуктивности, снижению иммунитета и воспроизводительных функций. Особо актуальна проблема микотоксинов у тех видов, у которых основу рациона составляет зерно и продукты его переработки у птиц.
Ужесточение требований к экологической безопасности продукции животноводства заставило пересмотреть многие методические подходы к вопросам оптимизации контроля над эпизоотическим процессом болезней, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора, и признать необходимость разработки нового поколения экологически безопасных препаратов, способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению биологической защиты животнык (Сафонов Г.А., Калинина Т.А., Романова В.П., 1992; Панин А.Н., Серых Н.И., 1993; Сидоров М.А., Субботин В.В., 1988; Тихонов И.В., Гаврилов В.А., 2003).
На основании литературных данных известно, что к числу высокоэффективных лечебно-профилактических средств специалисты относят пробиотики (Воронин Е.С., 1989; Панин А.Н., 2000; Fuller R., Gibson G., 2000 и др.). По мнению многих специалистов, основополагающим принципом при создании пробиогиков является использо-
вание микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры животных (Бов-кун Г.Ф., 1999; Сидоров М.А., 2000; Berg R., 1998 и др.).
Наиболее полно этим требованиям могут отвечать пробиотичсскис препараты, в состав которых входят живые бактерии из числа основных представителей нормального кишечного биоценоза, такие как лакггобациллы, бифидобактерии, стрептококки. Использование пробиотиков в ветеринарии затрагивает довольно широкий круг проблем, начиная ог коррекции кишечного биоценоза и распространении на коррекцию иммунной, гормональной и ферментной систем молодняка животных (Вилыпанская Ф.Л., 1987; Сидоров М.А., Скородумов ДИ., Федотов В.Б., 1995; Грачева Н.М., Партий О.С, Леонтьева Н.И., 1996; Парфенов А.И., 1998; Малик Н.И., 2002).
Широкое применение в медицине и ветеринарии препаратов на основе лактоба-цилл и бифидобактерии при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах показало их эффективность и перспективность (Малик Н.И., 2000; Субботин В.В., и др., 2001).
Одной из первых отраслей сельского хозяйства, перешедших на промышленную основу производства, является птицеводство. Доля препаратов для птиц составляет 95% мирового рынка лечебных препаратов для животных (более 7 млрд. долларов в стоимостном выражении).
В связи с этим все более актуальной становится проблема профилактики, лечения и нормализации микробного баланса в пищеварительном факте, минимизации последствий антибиотикотсрапии, повышения эффективности выращивания и сохранности птицы, улучшения качества конечного продукта. Один из способов ее решения -разработка и применение биологически активны веществ (БАВ) нового поколения, которые характеризуют высокой биодоступностью и положительно влияют на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта птицы, что приводит к оздоровлению всего организма в целом и снижению микробизма окружающей среды. К их числу относят эубиотики - пробиотики и прсбиотики (Антипов В.А., 1991; Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., 2003; Данилевская Н.В., Субботин В.В., 2005).
Наиболее перспективным является создание симбиотиков - комплексов про- и пребиотиков.
Многие из симбиогиков влияют на гуморальный и клеточный иммунитет, зоотехнические показатели, могут служить естественными стимуляторами роста и обладать токсико- и радиопротективным действием, снижающим влияние неблагоприятных экологических факторов.
Продовольственная проблема, связанная с недостатком биологически полноценных продуктов, со временем не только не теряег своей острота, но и становится одной из актуальнейших. Эффективность решения этой проблемы определяется использованием качественно новых методов производства продуктов питания, а также привлечением новых сбалансированных источников пищевого белка, одним го которых является белок микроорганизмов. Рабогы многих ученых посвящены вопросам изучения возможности использования микроорганизмов как источников белковых веществ (Коновалов В.А., 1975; Беликов В.М., 1977; Шкляр Б.Х., 1977; Лагов В.К., 1990; Римарева Л.В., 1993; Иванова Л.А., 1998; Неклюдов АД, 2000; и др.).
Наиболее перспективным источником пищевого белка является дрожжевая биомасса, что объясняется полноценностью белковых веществ, аминокислотный набор которых приближается к животному белку, а также безопасностью и абсолютным отсутствием токсичности дрожжей. Кроме того, наличие витаминов, ценных полисахаридов и микроэлементов позволяет рассматривать дрожжи как перспективные субстраты для получения биологически активных добавок.
Природные цеолиты обладают уникальными свойствами адсорбции, ионообменной, каталитической и детоксикационной способностью. Благодаря своему кри-сталлохимическому строению цеолиты биохимически активны и кислотоустойчивы. Поэтому их применение в различных отраслях постоянно расширяется.
В настоящее время животноводство и птицеводство в России испытывает большую потребность в кормовых белковых продуктах для своего развития и становления. Особенный дефицит кормовых белковых продуктов стал заметно ощущаться в настоящее время, так как в 90-х годах были остановлены крупнотоннажные заводы БВК, производящие кормовые дрожжи на основе углеводородов «паприн» (Ермишина И.Г. и др., 2005). Кормовые белковые продукты, полученные на основе микробиологического синтеза, по своему химическому составу и питательной ценности не усту-
пают традиционным белковым кормам, таким, как соевый шрот, мясокостная мука, рыбная мука и др.
Сложившаяся в мире ситуация с потреблением мяса и мясных продуктов требует рационального использования сырья, повышения эффективности производства и улучшения качества готовой продукции. Для решения вышеуказанных проблем необходимо разрабатывать и внедрять в производство новейшие методы обработки мяса с целью использования при производстве различных мясопродуктов не только высокосортного сырья, но и сырья, обладающего повышенной жесткостью и требующего длительной термообработки (Рогова Н.В., Снегур Ф.М. и др., 2007)
При разработке методов обработки низкосортного сырья, содержащего большой процент соединительной ткани, необходимо учитывать, чтобы метод не приводил к потере массы, не ухудшал органолептические свойства и технологические характеристики готового продукта и позволял интенсифицировать процесс производства мясопродуктов, отличающихся высокой пищевой и биологической ценностью.
Следовательно, исследования, теоретическое обоснование и разработка новых биологически активных веществ (БАВ) для нужд ветеринарии являются актуальными.
1.2. Цель и задачи исследований. Цель настоящих исследований - разработка теоретического обоснования и практического применения существующих и разработка принципиально новых биологических веществ с использованием современных методов биотехнологии для нужд ветеринарии. Для решения цели исследований были поставлены следующие задачи:
1 .Теоретически обосновать использование БАВ в ветеринарной практике. 2.Исследовать влияние хитозана на механизм гомеосгаза и гуморальную и нсспеци-фнческую защиту организма у животных.
3.Изучить антибактериальную активность хитозана к штаммам микобактерий и, в частности, для профилактики и лечения туберкулеза.
4.Провести работы по активации хитозана для повышения его сорбцион-ных свойств при использовании в качестве кормовых добавок для КРС.
5.Исследовать антиметастическую активность олигомеров хитозана и его применение в сочетании с экстрактом противоонкологического фитосбора.
6.Изучить антиоксидантную активность и ранозаживляющую способность хитозана при использовании на животных.
7.0босновать использование коллагеназы, пробиотиков, еинбиотиков для профилактики и лечения в ветеринарии.
8.Изучить возможность использования в качестве кормовых добавок и компонентов питательных сред цеолита, автолизата хлебопекарных дрожжей, яично-дрожжевого гидролизага для использования в различных отраслях сельского хозяйства.
9.0существить практическое использование рассмотрение БАВ в ветеринарии.
Ю.Рассчигать предполагаемую экономическую эффективность от широкого применения исследованных БАВ в ветеринарии.
1.3. Научная новизна. Применение препаратов низкомолекулярного сукцината хитозана вызывает усиление функционирования механизмов гомеостаза у животных (телят), усиливает ангигелогенез и увеличивает титры циркулирующих в крови антител, а также активирует факторы, характеризующие гуморальную и неспецифическую защиту организма.
Впервые экспериментально подтверждено, что хитозан обладает бакте-риостатическим и ранозаживляющим действием по отношению к патогенным возбудителям заболеваний животных и птиц и при нанесении им химических и термических ожогов.
Впервые разработана методика активации хитозана, которая позволила получить сорбент с емкостью на 40-60% больше, чем у исходного полимера. Показано, что ак-цинаг и сукцинат хитозана со степенью деацетилирования 87-97% и молекулярной массой 50-250 кДа обладает максимальной сорбционной емкостью (80-10 мг/г) и успешно испытан на животных и птицах.
Показано, что повышенная удельная активность радиоцезия в рационе животных обусловливает ряд негативных изменений, таких как снижение числа эритроцитов, гемоглобина в крови по сравнению с нормой. Скармливание дополнительно к
основному рациону препаратов хитозана оказало радиоироекторное действие.
Опыты по добавке низких доз хитозана к кормовому рациону молодняка сельскохозяйственных животных показали достоверное повышение привесов на 5-6% у животных опытных ipyim по сравнению с контролем.
Антиметастатический синергизм действия в фитохитодезтерапии возможен при сочетании олигомерной фракции хитозана с компонентами сложного состава экстракта противоонкологичсского фитосбора. Кроме этого, обнаруженный эффект может быть косвенным подтверждением наличия синсргстичсского антиоксидантного (и, по-видимому, поливакцинного) действия экстрактов лекарственного сырья, особенно для многокомпонентных фитосборов и при сочетании с полиэлектролитами природного происхождения.
Разработана технология получения фитохитодезов - биологически активных добавок к пище, состоящих из сухих экстрактов сбора лекарственных растений и хитозана полифракционного состава в виде его водорастворимой формы.
Впервые в результате анализа полученных экспериментальных данных установлено, что использование ферментного препарата коллагсназы улучшает качественные характеристики готового продукта при внесении его в мясное сырье.
Впервые разработанный кормовой бачок-добавка - синбиотик «Правита» по сравнению с другими кормовыми белковыми продуктами обладает более высокой питательной ценностью и биопротекторными свойствами в качестве кормовой добавки для птиц.
Результаты исследования кормовой биологической добавки (цеолит+культура Echerichia coli VL 613) подтвердили ее эффективность взамен дорогого кристаллического лизина.
Разработанная кормовая добавка с использованием цеолита при добавлении в питательную среду была успешно использована при культивировании клеток перепелиных эмбрионов глубинным способом, позволила увеличить конечную концентрацию клеток.
Все изготовленные серии препарата для борьбы с личинками кровососущих комаров Aedes aegipty с использованием кулыуры B.thusingiensis Н-14 шт. 1501 и авто-
лизата хлебопекарных дрожжей в качестве компонента питательной среды по биологической активности соответствовали требованиям НТД и оказались эффективными.
Применение яично-дрожжевого гидролизата в качестве лечебно-профилактической добавки для подкормки пчел, обеспечивает профилакгику заболевания пчел - нозематоза, компенсации белковой недостаточности и ускорения процессов жизнедеятельности пчелиных семей.
Впервые установлено, что бакгерии Ь.р1апШшт, шт. М-30 и В^иЫНк, шт. В-1948, обладают достаточным уровнем антагонистической активностью к условно-патогенным и патогенным микроорганизмам. Кроме того, они обладают достаточным уровнем устойчивости к широкому кругу антибиотиков, что позволяет сочетать антибиотическую и пробиогическую терапию в случае эпидемии в хозяйствах.
1.4. Практическая значимость работы. Результаты проведенных исследований были использованы при совершенствовании технологий производства хитозана, биопрепаратов, используемых для профилактики, лечения, а также повышения резистентности и продуктивности животных. Аттестовано производство и получено Свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных. Зарегистрировано в Российской Федерации. Утверждено заместителем Руководителя Федеральной службы по ветеринарному и фитосаниарному надзору Е.А.Непоклоновым 15 мая 2007г.
1.5. Апробация работы. Основные положения работы были представлены на следующих конференциях:
- Международной научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» ВНИТИБП, Щелково, 2007г.;
Ш Международном ветеринарном конгрессе по птицеводству, Москва,
2007г.
1.6. Основные положения и результаты, выносимые на защиту.
1. Теоретическое обоснование и практическое использование хитозана для гуморальной и неспецифической защиты организма животных, по антибактери-
альной активности, сорбционных свойств, антиметастической активности и ок-сидантной активности для профилактики и лечения в ветеринарии.
2. Использование ферментного препарата коллагеназы для улучшения качественных характеристик мяса и мясных продуктов.
3. Теоретическое обоснование и практическое применение пробиотиков, синбиотиков в сельском хозяйстве.
4. Исследование и практическое применение различных кормовых добавок и компонентов питательных сред при выращивании бройлерных цыплят, препаратов против кровососущих, нематоза пчел, антибиотико- и пробиотикоско-иию и повысить эффективность фитопрепаратов на основе хитозана в случае угрожающей ситуации в сельском хозяйстве.
1.7. Публикации. По результатам диссертации опубликовано 29 работ, в том числе 9 научных статей в реферируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ, 2 патента РФ, 25 докладов в сборниках научных конференций.
1.8. .Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 192 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы и данные о практическом использовании научных выводов, список использованной литературы 348 источников, в том числе 217 отечественных и 131 зарубежных. Работа содержит 18 таблиц, 9 рисунков, 52 страницы приложений.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы
Работа выполнена за период с 2000 по 2007 гг. во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (РАСХН) совместно с центром «Биоинженерия» (РАН), ЗАО «Биопрогресс» (Щелково, Россия), Кубанским государственным медицинским университетом (г. Краснодар) ГосНИИСинтезбелок по программе «Составить руководящие и информационно-справочные документы по обеспечению качества лекарственных средств для животных на этапах их разработки, апробации и производства в соответствии с Националь-
13
ным Законодательством и Международными Требованиями» (per. № ИС-01.200.2.08792) и в соответствии с планом НИР и ОКР ВНИТИБП отраслевых научных программ и Федеральной целевой научно-технической программы «Ветеринарное благополучие (2001-2005 гг.).
Изучение влияния низкомсшекулярного сукцинагга хтшана на иммунный агвет телят на фоне их плановой иммунизации против пасгереллеза телят проводили в 2006 году на базе МТФ ООО «Автобан» в Краснодарском крае. Титр специфических антител определялся методом непрямого ИФА, а фракции хитозана разделялись мембранным методом. Исследования сывороюк крови на содержание иммуноглобулинов различных классов проводились методом радиальной иммунодаффузии (РИД) в лаборатории иммунологии ВИЭВ под руководством члена корреспондента РАСХН Ю.Н.Федорова.
Опыты по определению антимикробного эффекта кислоторасгворимого хитозана и выживаемости микобакгерий проводили со следующими штаммами: типичными -Mycobacterium avium (штамм 1ЕКВМ УААН), Mycobacterium bovis и атипичными - М. fortuitum, M.smegmatis М. intracellulare предоставленными ННЦ «ИЗКВМ», Г. Харьков. Атипичные микобакгерии, как и возбудители туберкулеза, вызывают сенсибилизацию к туберкулину крупного рогатого скота. Они широко распространены во внешней среде и попадая в организм обуславливают повышенную чувствительность к туберкулину у млекопитающих. Данные бактерии часто используют гак тестовые при разработке дезинфицирующих препаратов при туберкулезе.
В работе использовали крабовые кислоторастворимые хитозаны с ММ 58 и 87 кДа, а также водорастворимые: сукцинат хитозана с молекулярной массой 380,0 кДа, и низкомолекулярный хишзан с молекулярной массой 38 кДа, производства ЗАО "Биопрогресс" (Щелково, Россия).
Определение антиоксидантной активности осуществляли с помощью прибора для определения антиоксидантной активности лекарственных препаратов, продуктов питания и биологически активных веществ «Яуза AAA 01» на базе ОАО «НПР «Хи-мавтоматика» по величине окислительно-восстановительного потенциала, определяемого амперометрическим титрованием. В качестве маркера для количественной оценки использовали дигидрокверцитин.
Раневые покрытия готовили следующим образом: хитозан производства ЗАО «Биопрогресс» растворяли в 1% янтарной кислоте, добавляли масляный раствор анестезина, эмульгировали в присутствии лецитина, частично осаждали из раствора содой и сшивали янтарным ангидридом. Полученный гель высушивали на воздухе при 25-30°С и получали пленки.
В качестве опытных животных использовали белых беспородных крыс с массой тела 180-200 г, которым под эфирным наркозом воспроизводили термический и химический ожоги на депилированной поверхности тела площадью 2 см.
В работе по изучению влияния ферментного препарата коллагеназы на мясопродукты препарат вводили в концентрациях 0,03%, 0,05% и 0,1% до стадии термообработки мясопродуктов.
Качество продукции оценивалось по следующим показателям: содержание влаги, содержание сухих веществ, содержание связанной влаги, потеря массы, общая органолептическая оценка.
Пребиотик «Авистим» для птиц приготовлен на основе культуральной жидкости высшего гриба Fusarium sambucinum MKF 2001 -3 и исследована его антиоксидантная
активность при защите птиц.
При разработке технологии получения лечебно-профилактических кормовых
белковых добавок-синбиотиков для птиц использовалась биомасса дрожжей-сахаромицетов, в которую добавлялась биомасса гриба Fusarium Sanbucinum МКГ-2001-3, пробиотики Bac.subtiiis и молочнокислые бактерии.
Препарат под наименованием «Провит» был испытан на бройлерных цыплятах.
В качестве наполнителя кормовой биологической добавки для цыплят был использован цеолит Хотынецкош месторождения Орловской области в виде мелкозернистой крошки размером частиц до 1 мм и биомасса E.coli VL 613, син тезирующая одну из незаменимых аминокислот - лизин в организме цыплят.
Для производства препарата для борьбы с личинками кровососущих комаров Aedes aegipty использовался автолизат энтопатогенной культуры Bacillus thuringien-sis Н-14 штамм ИПМ-1501 содержащей эндотоксин. Выращивание культуры
Bac.thuringiensis осуществлялась в биореакгоре АНКУМ-2 емкостью 10 л на питательной среде, содержащей автолизат хлебопекарных дрожжей.
Четыре опытные серии яично-дрожжевого гидролизата и подкормки пчел в сухом и жидком виде исследованы по основным физико-химическим характеристикам и прошли испытания на пасеке учхоза «Леоновский» Московской области, совхозе «Малынь» Шекинского района, Тульской области и пчелосовхоза «Беканский» Северная Осетия.
Исследования in vitro антагонистической активное™ и чувствительности к антибиотикам проводились по отношению бактерий L.plantarum,
шт.М-30, B.subtilis, шт.В-1975 и методом острогенного антагонизма в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов - S.tuphimurium, S.dublin, S.gallinfrum, 3- штаммов E.coli: К-88, К-99, А-20 и полевого изолята E.coli, выделенного от больной птицы. Об антогонисгической активносги штаммов судили по величине зоны задержки роста тест-культуры.
Для обеспечения качества и безопасности производства биологически активных вещесгв в биотехнологии необходимо соблюдать Международные правила GMP, требовании ИСО и анализа рисков БАССР.
Для анализа и статистической обработки экспериментальных данных использовались методы дискретного распределения, t-распределения Стьюдента, %- распределения, корреляционный анализ, одно и многофакторная регрессия, критерий значимости и доверительные интервалы (Н.Джонсон, Ф.Лион «Статистика и планирование эксперимента в технике и науке. Методы обработки данных. М.: Мир, 1980,с 611).
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЗЛ.Применепие низкомолекулярного сукцинита хитозана в качестве им-муномодулятора при вакцинации телят против пастереллеза
Разработан способ мембранного разделения фракции (ультрафильтрация) низ-комолекулряного хитозана, позволяющий получать полимер с заданной молекулярной массой. По сравнению с хроматографическими методами фракционирования улыра-фильтрация дает возможносгь получать достаточно высокий выход продукта с более 16
низкой себестоимостью.
Результаты исследования на токсичность фракций хитозана, полученных мембранным разделением по данной методике, представлены на рис. 1.
ЛД 50.4)00, мг/кг Ют 955'2
9 8-1 7 654 3 21 -0
05
891,5
¥
510
741,3
;
1020
2050
>50
кДа
Рис. 1. Зависимость токсичности хитозана от молекулярной массы при внутрибрюшинном введении белым мышам
Анализ уровня антител в сыворотке крови подопытных животных показал, что при введении хитозана у телят наблюдалось увеличение титра специфических антител, выявленных в непрямом ИФА, в сравнении с контролем. Средние титры антител у животных опытной и контрольной групп представлены в таблице 1.
Таблица I
Средний титр антител при вакцинации телят против пастереллеза в сочетании с препаратом хитозана
Группы животных Титры антител
Через 14 дней Через 21 день Через 60 дней
Опыт 1:700 1:1400 1:1700
Контроль 1:666 1:733 1:1200
Через 14 суток после вакцинации разница между титрами антител у животных опытной и контрольной групп составила 0,95%. Через 21-е сутки после вакцинации содержание антител у телят опытной группы прогрессивно возрас-
тало на 52,63% по сравнению с контролем. На 60-й день после вакцинации титры антител в обеих группах составляли 1:1700 и 1:1200 соответственно, т.е. у животных, вакцинированных совместно с хитозаном, титр антител на 70% выше, чем у контрольных животных, которым этот препарат не вводили (рис.2)
Титр антител
1:1600 1-.И00 1:1200 1:1000 1:800 1: 600 1:400 1:200
Фон 14 день 21 день 60 дней
Рис.2.Динамика титров антител в сыворотках крови КРС на фоне вакцинации совместно с хитозаном
Таким образом, на всех этапах исследования отмечена выраженная тенденция к повышению уровня выработки антител при применении хитозана по сравнению с контролем.
Результаты исследования сывороток крови на содержание иммуноглобулинов различных классов представлены в таблице 2.
Таблица 2.
Содержание иммуноглобулинов отдельных изотипов в крови телят опытной и контрольной групп
Гпуппы 1рГт. мг/мл (й М. мг/мл А. мг/мл
Через 14 суток после вакцинации
Опыт 20.50±1.73 2.73 ±0.28 0.24± 0.1
Контроль 20.30 ±1.36 2.47±0.14 0.22±0.01
Через 21 после вакиинапии
Опыт 21.14±2.01 3.35 ±0.3 0,21 ±0,03
Контроль 21,36 ±0,54 3,32 ±0,54 0,23 ± 0,04
Изучение влияния хитозана на иммунобиологический статус молодняка КРС при вакцинации против пастереллеза показало, что применение данного
полимера в качестве иммуномодулятора обусловило индукцию развития долгосрочного иммунитета, повышенную выработку специфических антител и образование иммунного ответа на месте введения вакцины. Таким образом, выявлено наличие иммуномодулирующих и адъювантных свойств используемого препарата хитозана при сочетанном его введении крупному рогатому скоту с пасте-реллезной вакциной.
Приведенные исследования показали, что использование препаратов хитозана может вызвать оптимизацию механизмов гомеостаза у животных, усиливать антителогенез и увеличивать титры циркулирующих в крови антител.
Обобщая данные, полученные в результате проведенных экспериментов, можно заключить, что введение хитозана 4-х месячным телятам одновременно с вакцинацией против пастереллсза обусловило:
-увеличение титра специфических антител в сравнении с контролем, выявленных в непрямом ИФА;
- предотвращение снижения уровня гемоглобина и повышение коэффициента
метаболической активации нейтрофилов крови к 14 суткам после вакцинации;
-активацию механизмов, обеспечивающих поглощение чужеродного материала
нейтрофилами к 21 суткам после вакцинации.
3.2 Антимикробный эффект влияния кислоторастворимого хитозана против возбудителей туберкулеза
В работе использовали крабовые низкомолекулярные водорастворимые хитозаны с молекулярной массой (ММ), равной 4;7;8;5;11 ;24 кДа и степенью дсацегилирования (СД) 85%, ¡^-сукцинил хитозан с ММ 396 «Да, и кислоторастворимые хитозаны с ММ 96, 177 и 380 кДа, полученные на базе ЗАО «Биопрогресс» (Щелково, Россия). Образцы низкомолекулярнош хитозана были получены ферментным гидролизом с помощью хитонолитического комплекса Б^ерЮтуссз кип^агхлЛ и из хитина восковой моли Со11спа та11опе11а.
Для изучения чувствительности клеток к антимикробному действию хитозана готовили 0,025; 0,05; 0,75; 0,1; 0,2; 0,3; 0,5; 1,0 % растворы хитозана в питательной яичной среде, после чего коагулировали при температуре 90°С в течение 60 минут. За-
тем высевали 0,5 мл микробной суспензии на чашку Петри с питательной средой в присутствии хитозана или без хитозана (контроль). Посевы с клетками культивировали в течение 28 дней при температуре 37°С, учет роста культур на средах проводили кавдые 7-10 дней.
Рабату проводили с штаммами микобактерий Mycobacterium smegmatis шт 211 (предоставлен лабораторией «Биотехнология стероидов», Центра «Биоинженерия» РАН), штаммы Mycobacterium avium (штамм Vailee) предоставлены ННЦ «ИЭКВМ), г. Харьков.
Зависимость процента гибели микобактерий от ММ хитозана приведена в таблице 3 и на рис.3. Оценка зависимости процента гибели бактерий от кислоторасгво-римого хитозана с различной ММ и времени экспозиции проводились методами регрессионного и корреляционного анализа.
Таблица 3
Влияние кислоторастворимого хитозана с различной ММ на гибель микобактерий M.smegmatis при экспозиции в течение 1 часа
t=37°C и рН=6,8 ед.рН
№ пп ММ, кДа X=lgx Y % гибели микобактерий
1. 4 0.60 80
2. 7 0.84 77
3. 8.5 0.93 75
4 11 1 04 68
5. 24 1.38 57
6. 96 1.9R 37
7. 177 2.25 18
8. 396 2.60 4
Предварительные исследования и аналитические соотношения позволяли
считать % гибели микробных клеток линейной функцией от логарифма молекулярной массы (ММ) хитозана. При этом регрессионная задача сводится к оценке параметров в уравнении /X) = А + Вх, где X - ^х (молекулярная масса хитозана), У - % гибели клеток (1)
О 24 96
177
396 х, ММ, кДа
Рис. 3. Зависимость процента гибели микобактерий M.smegmatis молекулярной массы хитозана через 1 час при t=37°C и pH- 6,8 ед.рН
График зависимости % гибели микобактерий от ММ хитозана представлен на
рис. 4.
0%
00
О 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0
Igx
Рис.4. Линеризованная зависимость % гибели микобактерий от lg (ММ) хитозана согласно уравнения (4).
Коэффициент корреляции R рассчитывался из уравнения вида:
_Jfr.-W-V ,„ (2)
(fl^-*)1}!^-^]) R= 0,9
Данные значения R свидетельствуют о тесной линейной связи между % гибели микобактерий и ММ кислоторастворимого хитозана, который особенно эффективен при низких значениях ММ = 4,7,8,5,11.
Первоначально опыты по определению выживаемости микобактерий были проведены на атипичном тестовом штамме M.smegmatis.bGieTKH M.smegraatic инкубировали с хитозаном краба с ММ-4-396 кДа и хитозаном восковой моли с ММ от 7-177 кДа в концентрациях 0,1% при температуре 37° С, на качалке. После этого пробы титровали и высевали на чашки Петри. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные хитозаном. По истечении 72 часов
инкубации определяли количество жизнеспособных клеток (КОЕ).
Из рис.3 следует, что процент гибели клеток М. smegmatis после 60 мин экспозиции при 37°С и pH 6,8 оставлял 0-76% в зависимости от ММ испытанных хитоза-нов. Наименьшей чувствительностью клетки обладали к высокомолекулярным образцам хитозана с ММ 96 и 177 кДа. Высокомолекулярный крабовый хитозан с ММ 396 кДа в концентрации ОД % не обладал антибактерийным действием. Максимальной активностью в агношении клеток микобактерий обладали низкомолекулярные хито-заны с ММ 4-8,5 кДа.
Полученные результаты сввдетеяылвуют о том, что хитозан обладает бакгериосга-тическим действием по отношению к возбудителю туберкулеза видов М. bovis и М. avium, что указывает на перспективность дальнейших исследований с целью применения его для лечения и профилактики туберкулеза сельскохозяйственных животных и птиц.
Наиболее выраженный антимикробный эффект в отношении всех изучаемых тест-культур показали препараты кислоторастворимого хитозана с молекулярной массой (ММ) 58 и 87 к Да и степенью деацетилирования 80-80,3% (см.табл. 4).
Антимикробный эффект хитозана в отношении изучаемых тест-культур
Конц, % Хитозан, ММ 87 кДа Хитозан, ММ 58 кДа
0,025 М. аушт М. ВОУ1Б М. йэг-ИпШт М. т1тасе1-1и1аге М. аушт М. ВОУ1З М. Гог-Шкит М. ¡Щгасе1-1и1аге
0.0 5 + ++++ ++++ ++++ + ++++ ++++ ++++
0,075 —■ ++ ++ — ++++ ++++
0,1 - +++ ++ ++ - +++ ++++ ++++
0,2 ++ ++ ++ ++ ММ +++
0,3 - - + + - - ++++ +
0,5 - - + + - - ++++ +
Проведенное исследование позволило сделать вывод, что изучаемые хитозаны, обладающие свободными аминогруппами, оказывали влияние на рост микобактерий. Наличие ЫН2-групп хитозана придаег полимеру положительный заряд, в результате чего он способен взаимодействовать с анионными группами поверхности клетки и за счет электростатических и ионных взаимодействий формировать полиэлектролитные комплексы с компонентами бактериальной поверхности, вызывая их гибель.
На рис. 5 показано, что при концентрации в среде 0,1% хитозана 58 кДа гибель клеток составила 40% и 50% в случае контакта клеток с хитозаном 87 кДа.
мол.масса
Рис. 5. Влияние образцов хитозана с различной ММ на гибель клеток М. avium и М. Bovis.
Низкомолекулярный кислоторастворимый хитозан с низким значением ММ обладал антибактериальной активностью по отношению к штаммам ми-кобактерий M.smegmatis и может быть использован в дальнейших исследованиях для инактивации (гибели) других патогенных и непатогенных микроорганизмов.
3.3. Сорбциоиные свойства хитозана и его применение при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных
Полученный активированный хитозан с высокой абсорбционной емкостью
был испытан как препарат «Энтеросорбент» вначале на лабораторных, а затем на молодняке сельскохозяйственных животных и птицы. По результатам научно-хозяйственных опытов в хозяйствах Московской, Тульской, Брянской и Курской областей, в том числе в зонах высокого загрязнения почвы продуктами распада тяжелых металлов, была проведена оценка лечебного воздействия хитозана при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят, а также его радиопротекторного действия.
Влияние препаратов хитозана на морфологический состав крови телят в условиях плотности загрязнения почв радиоцезием (Брянская область), представлены в таблице 5.
Опыты по добавке низких доз хитозана к кормовому рациону молодняка сельскохозяйственных животных показали достоверное повышение привесов на 5-6 % у животных опытных групп по сравнению с контролем. Данные о влиянии скармливания хитозана и фитохитодеза (водорастворимого хитозана с экстрактом лекарственных растений) на динамику живой массы телят представлены на рисунке 6.
Проведенные исследования показали, что повышенная удельная активность радиоцезия в рационе животных обусловила ряд негативных изменений, таких как снижение числа эритроцитов, гемоглобина в крови по сравнению с нормой. Скармливание дополнительно к основному рациону препаратов хитозана препятствовало развитию этих процессов, т.е. оказало радиопротекториое действие. 24
Влияние применения препарата хигозана на содержание клеток крови и гемоглобина в эритроцитах у молодняка крупного рогатого скота
Группы Эритроциты, 1о-2/л Гемоглобин, г/л Гемоглобин ВЭРИИИ- тах,г* 10 Лейкоциты, ш9/л Гематокрит,%
Перед началом опыта (п=12)
7,44±0,21 120,50±3,28 16,35±0,66 10,54±0,70
Через 63 суток использования препаратов (п=6)
1. 6,45±1,7 107,10±4,75 1б,66±0,75 10,43±2,31 34,17±0,70
2. 6,26±0,16 104,42±5,16 16,73±0,85 7,56±0,76 35,33±0,76
3. 7,28±0,54 109,00±6,24 15,34±1,37 8,02±0,88* 32,83±1,35
Через 85 суток использования препаратов при убое (п=3)
1. 7,35±0,19 138,67± 17,34 18,82±2,12 7,63±1,25 37,00±2,08
2. 8,34±0,19 146,67±20,74 17,51±2,32 10,47±2,14 43,00±1,53
3. 7,22±0,79 110,33±10,41 15,88±3,11 8,70±1,28 36,67±3,71
я §
со
1 2 3
Возрастные группы телят
Рис.б.Динамика роста живой массы телят при скармливании хито-зана и фитохитозана
Высокомолекулярная фракция хигозана обладает бактериостатическим
действием, пролонгирует действие растительного экстракта в составе препарата, связывает и выводит из организма токсины и ионы тяжелых металлов.
Олигомеры хитозана, всасываясь в кровь, быстро разносятся по всем органам и тканям, оказывая стимулирующий эффект на иммунную систему и неспецифические факторы резистентности организма, в первую очередь посредством активации Т- и В-клеток иммунной системы. Фракции с ММ 50 Кда в условиях топкого кишечника переходят в коллоидное состояние, в котором усиливаются хелатообразующие и комплексообразукмцие свойства хитозана оказывают детоксицирующее действие на организм.
3.4.Антиметастатическая активность олигомеров хитозана в фито-хитодезтерапии
Исследована антиметастатическая активность олигомеров хитозана. Смесь глюкозамина и его димера 50%) использовалась в качестве адъюванта в комбинированной терапии с цитостатиками в низких дозах в эксперименте по изучению антиметастатической активности на Ъ-карциноме. В опытах были использованы мыши-гибриды ВОР, весом 21-22 г. Инокулум составлял (106) опухолевых клеток, вводимых подкожно (табл. 6.).
Таблица 6
Антиметастатическая активность олигомеров хитозана
Ппепагегс Разовая лоза, мг/кг НИМ.
Глюкозамин + дймео 200 35.0
ПиклоЛосАан 30.0 40.0
Писплатин 1.5 2.0
Г ГиклогЬосгЬан + писплатин 30.0+1.2 57
(Циклофосфан + цисплатин) + (глюкозамин + димер)■: (30,0+1,2)+(200) 98
Как видно из таблицы 6, циклофосфан и цисплатин использованы в низких, неэффективных дозах. Антиметастатический эффект (индекс ингибирова-ния метастазов = ИИМ, %) в этих случаях составлял 40 и 2 %, соответственно, а для смеси циклофосфана с цисплатином и этих же количествах (30 +1,2) ИИМ= 57. При добавлении олигомеров хитозана этот показатель возрастал до 98 %. Антиметастатический синергизм действия возможен при сочетании оли-
гомерной фракции хитозана с компонентами сложного состава экстракта проти-воонкологического фитосбора. Кроме этого, обнаруженный эффект может быть косвенным подтверждением наличия синергетического антиоксидантного (и, по-видимому, поливалентного) действия экстрактов лекарственного сырья, особенно для многокомпонен тных фитосборов и при сочетании с полиэлектролитами природного происхождения.
3.5. Изучение биологической антиоксидантной активности хитозана и его производных
Таблица 7
Антиоксидантная активность различных образцов сырья природного происхождения
№ и/п Величина АОЕ Галоген Содержание антиокси- Исследуемые образцы сы-
1. мг на 1 купон Вг 0,024 Пектин цитрусовый
2. мг на 1 купон Вг 0,048 Хитозан
3. мг на 1 купон Вг 0,0001 Розвератроп
4. мг на 1 купон Вг 0,325 Кверцетин
В таблице 7 представлены результаты определения суммарной антиоксидантной
емкости (АОЕ) различных образцов сырья природного происхождения кулонометри-
ческим титрованием, которое является методом количественной оценки антиокси-
дантных свойств различных продуктов.
Представленные выше данные свидетельствуют о значительно более высокой
антиоксидантной активности хитозана по сравнению с биологически активными веществами растительного происхождения (в 2 раза выше, чем у пектина и в 266 раз, чем у розевератропа).
3.6. Ранозаживляющее свойство хитозана.
Из существующего в настоящее время широкого ассортимента полимерных покрытий на раны и ожоги, рассасывающиеся покрытия в наибольшей степени отвечают всем медико-биологическим требованиям, могут быть полезны как на ранних стадиях лечения ран и ожогов, так и на более поздних стадиях. Следовательно, разработка рассасывающихся прилипающих полимерных по-
крытий с различными сроками биодеструкции является в настоящее время актуальным направлением создания эфективных аппликаций на раны и ожоги.
Природный полисахарид хитозан обладает широким спектром действия. Его производные регулируют пролиферацию фибробластов и стимулируют нормальную регенерацию кожи. Болеутоляющее и антимикробное действие обусловлены уникальной способностью хитозана неспецифически взаимодействовать с болевыми рецепторами и клеточной стенкой микроорганизмов. Одной из причин эффективного влияния хитозана на заживление ран является стимулирующее воздействие на иммунную систему, т.к. его можно рассматривать как аналог липополисахаридов клеточных стенок микроорганизмов, выполняющих роль активаторов макрофагов. Существенной проблемой после-ожоговых участков являются рубцы, образующиеся в местах регенерации кожи. Использование хитина и его производных позволяет значительно снизить гиперразрастание гранулляционной ткани. Известно, что производные хитина имеют структурные характеристики подобные глюкозаминам кожи и могут служить подложкой для роста кератиноцитов и фибробластов.
Начиная с 3 дня после нанесения ран ежедневно накладывали хитозановые пленки (1 опытная группа крыс), 200 мг левомиколя (2 опытная группа крыс) и физраствора (контрольная группа). Раневую поверхность оценивали планиметрически в день образования ожога, после 3,6,11 и 15 обработок препаратами.
Результаты изучения скорости выхода анестезина в водную среду из хиго-зановой пленки представлены на рис.7- Как видно из представленных экспериментальных данных выход анестезина происходит не сразу. За первые 2 часа выходит около 35%. Далее в течение последующих 10 часов выход постепенно снижается. Кинетика выхода носит диффузионный характер. Полученная зависимость позволяет говорить о том, что в пленке анестезин распределен совместно с хитозаном, который и пролонгирует выход.
Полученные данные позволяют полагать, что биоактивный слой покрытия с анестезином и хитозаном позволит пролонгировать анестезирующее действие раневого покрытия. 28
% выжода
Рис. 7. Кинетика выхода анестезина из пленочного слоя хитозана
Результаты планиметрической оценки раневой поверхности при химическом и термическом ожогах представлены в таблицах 8 и 9. После 3-х кратных аппликаций хитозана и левомиколя гиперемия и отечность отсутствовали, раневая поверхность уменьшилась на 54% по сравнению с контролем (табл.8). Еще более значительные результаты были достигнуты после 6 аппликаций, а полное заживление ран и полноценное восстановление волосяного покрова наступало соответственно к 10 и 12 дню лечения. При этом образовавшаяся при регенерации ткань была очень похожа на интактную кожу. В контрольной группе полное восстановление раневой поверхности происходило только к 15 дню, волосяной покров восстанавливался не полностью.
На начальном этапе лечения химического ожога процент уменьшения раневой поверхности в группе животных, где применяли хитозановую пленку составил 8-11%, а к 11 дню лечения - 60% по сравнению с контролем. Полное заживление наступало на 15 сутки лечения, а в контроле - на 21 сутки.
Динамика сокращения раневой поверхности после термического ожога
Группы Количество аппликаций
3 6 11
Хитозан 45,7±3,8 17,0±2,7 0
Левомиколь 44,9+2,6 25,8+4,8 7,3+1,1
Контроль 96,7+4,5 64,1+3,8 27,0+2,1
Р<0,05
Таблица 9
Динамика сокращения раневой поверхности после химического ожога
Группы Количество аппликаций
3 6 11 15
Хитозан 80,7+1,8 42,0±2,3 18,9+1,7 0
Левомиколь 78,9+2,1 45,2+1,8 27,0+1,3 9,0+1,2
Контроль 90,7+2,5 51,4+1,8 33,7+2,4 14,8+2,3
Р<0,05
По данным, представленным в табл.9 видно, что стимулирующее действие хитозана и левомиколя в начале лечения существенно не отличается. Но к 11 суткам лечения эффективность хитозана возрастает до 23% по сравнению с левомиколем, а полное восстановление кожного покрова происходит на 3 суток быстрее.
3.7. Влияние ферментного препарата коллагеназы на функционально-технологические свойства мясопродуктов
Учитывая актуальность проблемы рационального использования мясного сырья, были проведены исследования по изучению влияния ферментного препарата коллагеназы различной концентрации на функционально-технологические свойства таких мясопродуктов, как голяшки говяжьи копчено-вареные и зельц.
В работе использован ферментный препарат коллагеназа. Изучали влияние препарата на функционально-технологические свойства сырья и готового продукта. Фермент вводили в концентрациях 0,03%, 0,05% и 0,1% до стадии термообработки (образцы №1,2 и 3 соответственно), зо
Оценивалось качество продукции по следующим показателям: содержание влаги, содержание сухих веществ, содержание связанной влаги, потеря массы, общая органолептическая оценка.
Полученные данные представлены в таблицах 10 и 11 .
Из таблицы 10 следует, что до термообработки лучшие результаты по сравнению с контрольным образцом, выявлены у ферментированного сырья с 0,03% концентрацией коллагеназы, а именно, у образца №1 отмечено большее на 8,2% и 6,7%, соответственно содержание общей и связанной влаги.
Таблица 10
Функционально-технологические свойства голяшек говяжьих копчено-вареных с добавлением ферментного препарата коллагеназа
Показатели До термообработки После термообработки
Контроль 1 2 3 контроль 1 2 Л 3
Содержание влаги,% 62,7 70,9 70,6 68,7 28,7 32,5 32,1 37,7
Содержание сухих веществ, 32,0 25,0 28,9 21,5 - - - -
Содержание связанной влаги, % к фаршу 64,4 71,1 71,3 73,9
Содержание связанной влаги, % общей влажности 94,6 94,8 86,2 94,1
Потеря массы, % - - - - 18,0 31,8 37,0 38,5
Общая органолептическая оценка, балл 3,9 4,2 3,9 3,7
Образцы №2 (0,05%о) и №3 (0,1%), в свою очередь, также имели на 7,9% и 6,0% большее содержание влаги по сравнению с контрольным образцом без ферментативного воздействия, но наряду с такой положительной динамикой у них были отмечены большие потери массы после термообработки и меньшее содержание связанной влаги (на 19,0-20,5%) и 0,6-8,4% соответственно).
С увеличением концентрации вносимого ферментного препарата у готового продукта отмечалось появление мажущейся консистенции. Данную тенденцию, по нашему мнению, можно использовать при производстве паштетных масс и ливерных колбас.
Таблица 11
Функционально-технологические свойства зельца с добавлением ферментного препарата коллагеназы
Показатели До термообработки После термообработки
Контроль 1 2 3 контроль 1 2 3
Содержание влаги,% 63,3 68,2 63,8 66,3 69,1 71,2 72,1 72,3
Содержание сухих веществ, % 49,9 46,2 48,1 52,5 - - - -
Содержание связанной влаги,% к фаршу 48,2 51,7 50,7 46,8
Содержание связанной влаги,% общей влажности 96,0 99,0 97,7 97,7
Потеря массы, % - - - - 40,0,0 46,7 53,3 56,7
Общая органо-лептическая оценка, балл 4,1 4,3 4,3 4,5
Анализируя данные исследований применения коллагеназы при производстве зельца (таблица 11) можно сделать вывод, что, как и в случае с голяшками говяжьими, лучшими функционально-технологическими свойствами отличался образец с 0,03% концентрацией ферментного препарата.
Таким образом, в результате анализа полученных экспериментальных данных установлено, что использование ферментного препарата коллагеназы улучшает качественные характеристики готового продукта при внесении его в мясное сырье в 0,03% концентрации и значительно сокращает длительность термообработки в среднем на порядок.
Обработку мясного сырья большими концентрациями препарата целесообразно
применять при производстве ливерных колбас и паштетных масс, так как это позволяет хорошо размягчать низкосортное сырье с высоким содержанием соединительной ткани и внедрить безотходные технологии для рационального использования сырья в мясоперерабатывающей промышленности.
Органолептическая оценка показала, что внесение ферментного препарата в концентрации 0,03% в сырье при производстве продуктов из говядины не оказывало существенного влияния на вкус, запах, внешний вид и т.д., то есть не ухудшало орга-нолептичсские характеристики исследуемого готового продукта. Голяшки говяжьи с 0,05% и 0,1% концентрацией ферментного препарата немного уступали контрольному и опытному (0,03% фермента) образцам.
3.8. Производство лечебно-профилактических кормовых белковых доба-вок-сипбиотиков для сельского хозяйства
Биомасса дрожжей и, прежде всего сахаромицетов вполне соответствует понятию «пребиотик» и влияет не только положительно на развитие микроорганизмов пробиогиков в кишечнике животного или птицы, но составляет основу белкового питания самого животного. Комплексы пробиотиков с пребиотическими веществами можно комбинировать, создавая новые биологически активные препараты «синбио-тики», в которых живые микроорганизмы сочетаются с субстратами, стимулирующими их рост.
В кормовой продукт «Провиг» входит и мицелий гриба Fusarium sambucinum, который также обладает высокой питательной ценностью и целебными свойствами.
Образцы кормовых белковых добавок-синбиогиков были направлены в институт птицеводства для испытаний на цыплятах бройлерах.
В результат е этих испытаний было установлено, ч то в процессе роста в течение 35 суток в опытной группе живая масса птицы достигла 2090,6 г, тогда как в контрольной - 1991,47, т.е. на 5,0% ниже.
Среднесуточный прирост в опытной группе превысил контроль на 5,1%. При этом затрата корма на 1 кг прироста в опыте на 6,9% ниже.
В результате испытаний сохранность птицы была высокой и в опыте и в контроле, однако в опыте она составила 100%, а в контроле только 98,6%.
В настоящее время штамм S.ccrcvisiae diastaticus ВКПМ-у-1218 внедрен в качестве продуцента кормового белкового продукта «Провита», который выпускает Новополоцкий завод БВК (Республика Беларусь).
Актуальность проблемы позволяет проводить исследования по созданию новых пробиотиков, профилактических и терапевтических биопрепаратов на их основе, в т.ч. полученных с помощью методов генной инженерии.
3.9. Кормовая биологическая добавка для выращивания цыплят бройлеров
Биологическая кормовая добавка (цеолит + культура Echerichia coli VL 613) была испытана для замены кристаллического лизина в кормовом рационе при выращивании цыплят бройлеров. Суточная доза кормовой добавки состояла из 2% цеолита от разовой дачи комбикорма и 200 млн культуральных микроорганизмов на 1-го цыпленка в день.
После высушивания контактно-конвекционным способом полученная смесь представляла собой сыпучий порошок, который легко перемешивается с комбикормом. Препарат расфасовывали в стерильные пластмассовые флаконы или полиэтиленовые пакеты и затем герметично их укупоривали.
В период выращивания учитывали основные зоотехнические показатели: сохранность поголовья, потребление корма, среднесуточный привес цыплят, вес тушки после откорма. В 21-и -дневном возрасте средняя масса одного цыпленка в опытной группе составил 780 г, в контрольной - 760 г, что на 2,6% ниже, чем в опытной. Полученные результаты подтверждают эффективность кормовой добавки.
Во второй период выращивания добавки кристаллического лизина в рационе контрольной группы были выше и составляли 260 г на 100 кг корма. В опытной группе доза кормовой добавки оставалась без изменения.
На 37-е сутки живая масса тушки контрольной и опытной групп была 2150г. и 2100г., соответственно. Снижение живой массы тела в опытной группе на 50г по сравнению с контрольной связано с недостаточным количеством поступающего в этот период лизина в организм цыплят. Чтобы его восполнить до необходимой величины, требуется в период с 21 по 37-й день увеличить количество микробных клеток Echerichiacoli VL 613,
Следовательно, кормовая добавка (цеолит+Е. coli) может служить заменой кристаллического лизина и подтверждены ее эффективность при выращивании бройлерных цыплят.
3.10. Испытание автализата хлебопекарных дрожжей в составе питательной среды при производстве препарата «Ларвиоль -паста»
Проведены испытания опытных образцов автолизатов хлебопекарных дрожжей, изготовленных по разработанной во ВНИТИБП технологии, в составе питательной среды при производстве препарата «Ларвиоль - паста». Препарат предназначен для борьбы с личинками кровососущих комаров, создан на основе энтомопатогенной культуры Bacillus Ihuringiensis (штамм ИПМ - 1501), содержит действующее начало -кристаллы дельта - эндотоксина.
По разработанному технологическому режиму было изготовлено 4 опытно -промышленные серии автолизата. Физико-химические характеристики изготовленных серий представлены в таблице 12 .
Таблица 12
Физико-химические показатели опытных серий автолизата хлебопекарных
дрожжей
Наименование показателя Сепия препарата, №
1 1 2 3 1 4
Внешний вид аморфныт светло-ко порошок от светло-кремового до ричневого цвета
Массовая поля влаги. % 4.30 4.02 3.92 3.92
Массовая доля аминного азота, % 3,0 3,02 3,03 2,87
Количество, кг 107 121 122 137
Было изготовлено 5 партий препарата «Ларвиоль - паста» объемом от 115л до 400 л. Биологическая активность каждой партии препарата была определена в соответствии с требованиями технической документации на тест - объекте -личинках комаров Aedes aegipty. Результаты исследований полученных партий препарата «Ларвиоль - паста» представлены в таблице 13.
Все изготовленные серии отвечают требованиям нормативно-технической документации (pH 4,5-5,0, биологическая активность < 0,0004 мл/л).
Таблица 13
Биологическая активность препарата «Ларвиоль - паста» на личинках комаров
Aedes aegipty
№ пап- Объем пао- РН ЛК50. мл/л
1 117 4.7 0,00025
2 115 4.8 0.00023
3 350 4.8 0.00035
4 395 4.7 0.00038
5 400 4.6 0,00032
3.11. Яичпо-дрожжевой гидролизат в качестве лечебно-
профилактической подкормка для пчел
Была разработана технология и изготовлены 4 опытные серии яично-дрожжевого гидролизата по 2,4; 3,6; 5,2 и 6,9 кг, каждая. Все изготовленные
серии были исследованы по основным физико-химическим характеристикам (см.табл.14).
Таблица 14
Физико-химические показатели качества опытных
серий яично-дрожжевого гидролизата_
№ Наименование Сепия ипепаоата
1 1 2 1 3 1 4
1 Внешний вид Тонкодисперсгный порошок от светло-бежевого до темно -бежевого цвета
2 Остаточная влажность, % 6,2 3,2 6,0 8,2
3 Массовая доля аминного азота, % 5,2 5,6 7,0 5,7
4 рН 1%-ного раствора 5,6 5,7 5,9 5,8
5 Количество, кг 2.4 3.6 6.9 5.2
При испытании препарата на пасеке учхоза «Леоновский» Московской области было установлено, что для компенсации белковой недостаточности в весенне-летнее время необходимо давать 30-50 мл препарата на 1 л сиропа или 1 кг канда, а при подкормке на зиму по 10 мл на 1 л сиропа. Подкормка пчел на зиму сиропом, содержащим яично-дрожжевой гидролизат, обеспечивает 100% профилактику нозематоза.
Применение препарата в совхозе «Малынь» Щекинского района Тульской области позволило получить на пасеке в среднем на семью по 10 кг товарного меда, при этом подопытная группа пчелиных семей превосходила контрольную по этому показа телю на 6-8 кг меда
Опытные серии гидролизата в сухом и жидком виде прошли испытания на пчелах для профилактики и лечения нозематоза, повышения устойчивости к заболеваниям, ускорения наращивания силы семей, при выходе маток, получении маточного молочка, пыльцы и пчелиного яда, а также для компенсации белковой недостаточности в весенне-летнее время.
3.12. Исследование in vitro антагонистической активности и чувствительности к антибиотикам бактерий-пробиотиков L.Plantarum шт. М-30 и B.Subtilis тт. В-1948
Наиболее значимыми, с точки зрения терапевтической эффективности и технологичности, параметрами штаммов микроорганизмов для производства пробиотиков являются экологическая принадлежность и принадлежность к физиологическим симбионтам, устойчивость к лизоциму, желчи и пищеварительным сокам, к антимикробным препаратам, высокая адгезивность и антагонистическая активность но отношению к патогенным и условно патогенным микроорганизмам.
Во ВНИТИБП разработан комплекс препаратов для птицеводства «Ави-лакт-форте», содержащий препарат «Авилакт-1К» (пробиотик на основе Lactobacillus acidophilus) и «Авистим» (пребиотик на основе культуралыюй жидкости высшего лечебного гриба Fuisarium sambucinum).
В 2006 году начаты исследования по разработке высокоэффективного син-биотического комплекса для птиц на основе препарата «Авилакт-форте» путем введения в его состав симбионтов ЖКТ (Lactobacillus plantarum М-30 и Bacillus sublilis В-1948) и азотобактерии (Azolobacler chroococcum).
С этой целью в рамках доклинических испытаний исследована in vitro антагонистическая активность и чувствительность к антибиотикам бактерий L.plantarum, шт. М-30, и B.subtilis, шт. В-1948.
Антагонистическую активность пробиотиков in vitro исследовали методом отсроченного антагонизма в отношении патогенных и условно патогенных микроорганизмов: S.tuphimurium, S. dublin, S. gallinarum, 3-х штаммов E.coli: IC88, K-99, A-20, а также полевого изолята E.coli выделенного от больной птицы в условиях опытного птицехозяйства.
Об антагонистической активности штаммов судили по величине зоны задержки роста тест-культур. Полученные результаты представлены в таблице 15.
Таблица 15
Результаты определения антагонистической активности бактерий B.subtilis и L.plantarum шт. М-30
Патогенные микроорганизмы Зона задержки роста, мм (п=3)
B.subtilis L.plantarum
S.tunhimurium 13-15 5-7
S. dublin 16-18 7-9
S. eallinarum 21-25 7-9
E.coli: K-R8 18-22 6-8
E.coli: K-99 18-20 7-9
E.coli:A-20 21-25 6-8
E.coli: (полевой изолят) 19-21 10-12
Величина зоны угнетения определяет чувствительность микроба к данному антибиотику. Диаметр зоны задержки роста бактерий измеряли линейкой с точностью до 1 мм, оценка результатов представлена в таблице 16.
Таблица 16
Расшифровка результатов опытов
Ключ к расшифровке результатов опыта
Диаметр зоны задержки Г1ПГ.ТЯ мм Чувствительность микроорганизма
25 высокочувствительный
15-25 чувствительны
11-15 умеренно чувствительный
11 устойчивый
Результаты определения чувствительности бактерий-пробиогиков к ряду широко применяемых антибиотиков приведены в таблице 17.
Таблица 17
Результаты определения чувствительности бактерий-пробиотиков к ряду широко ____применяемых антибиотиков_•
п/н Антибиотик Диаметр зоны задержки роста (мм)*
Вид нробиотика
Ь.р1ап1агит В.виЫШз
1. Кламоксил 50 24
2 Левомицстин 39 4
3 Тетрациклин 37 8
4 Цефазолин 29 22
5 Ампициллин 28 4
6 Рифампицин 27 16
7 Гентамицин 22 4
8 Офлоксацин 12 12
9 Ципрофлоксацин 12 12
10 Энрофлоп (5%) 12 9
11 Флавомицин 11 8
12 Линкомицин 11 9
Показано, что лактобактерии являются высокочувствительными к кламоксилу, левомицетину, тетрациклину, цефазолину, ампициллину, рифампицину и гентамици-ну; умеренно чувствительными к офлоксацину, ципролоксацину, энрофлону, фла-вомицину и линкомицину.
Наилучшие экономические показатели были получены при использовании про-биотика в сочетании с однократным применением антибиотиков за счет повышения сохранности на 3,0-3,3%, выхода мяса - на 0,7-1,3%. При этом рентабельность производства мяса бройлеров в этих группах составила 57,5 и 58,3%, что на 0,1 -0,8 выше.
3.13. Обеспечение качества и безопасности производства биологически активных веществ в биотехнологии
Разработка и изготовление многих биологически активных веществ относится к потенциально опасным технологиям, так как сырьем в некоторых случаях служат микроорганизмы различной степени патогенносги и вещества белковой природы, обладающие сенсибилизирующим действием на биосистему.
Для обеспечения безопасности производства БВК необходимо разработать и использовать документацию и методики согласно требованиям ОМР и ИСО:
- методика анализа и обеспечения антиконтаминантной защиты технологических процессов производства БВК с учетом требований ОМР;
-сформулировать исходные требования к технологическому оборудованию по обеспечению стерильности при производстве БАК;
- проанализировать и определить стадии БВК с использованием очистных помещений, согласно норм на микробиологическую чистоту и классов зон в
зависимости от стадии производства.
Важным аспектом деятельности биологического предприятия является охрана
окружающей среды, для чего создаются барьерные технологии, позволяющие минимизировать или предотвратить выделение микроорганизмов не только в производственную среду, но и за пределы производства. Эту работу проводят с учетом рекомендаций МС серии 14000 (экологический менеджмент).
4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
1. Использование хитозанов и его производных для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных (Св. о гос.регистрации лекарственного средства от 15.05.2007г.).
2. Получен аттестат ФГУ «ВГНКИ» на лекарственное средство для животных «Хито-зан» от 11.022008г.
3. Разработаны и утверждены Технические условия «ТУ - 9289-008-11734126-05» на хитозан.
4. Разработана и утверждена Федеральной службой по ветеринарному и фитосанитар-ному надзору инструкция по применению «Хитозана» для профилактики желудочно-кишечных заболеваний молодняка с/х животных от 15.05.2007г.
5. В результате проведенных исследований получены 3 патента, отчеты о результате изучения эффективности введения в рацион телят хитозана и фитохшшаиа, акты о применении низкомолекулярного хитозана на телятах и цеолита в сочетании с Е.соН УЬ 313 при выращивании цыплят бройлеров (материалы патентов, отчетов и актов прилагаются).
5. ВЫВОДЫ
1. Мембранное разделение и использование препаратов низкомолекулярного хитозана стимулирует механизмы гомсостаза у животных, усиливает антителоютез и увеличивает тигры циркулирующих в крови антител, а также активирует факторы, характеризующие гуморальную и неспецифическую защиту организма.
2. Низкомолекулярный хитозан обладает высокой антибактериальной активностью но отношению к штаммам микобактерий. Антимикробные свойства хитозана позволяют рекомендовать его с целью применения для профилактики и лечения туберкулеза в медицине и ветеринарии, в частности, в птицеводческой отрасли.
3. Для повышения сорбционных свойств хитозана проведена его активация и получен сорбент емкостью на 40-60% выше исходного полимера, определены оптимальные условия его растворения, переосаждения, концентрирования и режимы высушивания. Полученные данные свидетельствуют, что скармливание хитозана и фитохитоза телятам обуславливает их увеличение живой масы к 101-суточному возрасту более, чем на 5% по сравнению с контролем.
4. Исследована антиметастатическая активность олигомеров хитозана, которая проявляется при сочетании олигомерной фракции хитозана с компонентами сложного экстракта противоонкологического фитосбора.
5. Показано, что высокомолекулярная фракция хитозана обладает ан-тиоксидантной активностью, пролонгирует действие растительного экстракта в составе препарата, связывает и выводит из живого организма токсины и ионы тяжелых металлов.
6. Хитозан ускоряет регенерацию поврежденных тканей кожии направляет процесс по органотипичному пути при заживлении ран после термического и химического ожогов.
7. Экспериментально установлено, что использование ферментного препарата коллагеназы в 0,03% концентрации улучшает качественные характеристики мясных продуктов и сокращает длительность термообработки.
8. Для нужд животноводства и птицеводства разработаны, успешно испытаны и налажено производство синбиогиков - лечебно-профилактических кормовых добавок.
9. Показана возможность при выращивании цыплят бройлеров при замене в кормовой биологической добавке дорогого кристаллического лизина на цеолит + Echerichia coli VL.
10. Доказано, что автолизат хлебопекарных дрожжей может быть использован в составе питательной среды при производстве препарата против кровососущих (личинок комаров Aedes aegipty).
11. Установлено, что яично-дрожжевой гидролизаг является эффективным препаратом для применения его в пчеловодстве в качестве лечебно-профилактической подкормки против нематоза.
12 Установлено, что бактерии L.plantarum, шг. М-3,0, B.sublilis, шт. В-1948, обладают достаточной устойчивостью к широкому Kpyiy антибиотиков, что позволяет сочетать антибиотико- и пробиотикотсрапию в случае угрожающей ситуации в сельском хозяйстве.
13. Проведенные исследования позволили повысить эффективность фитопрепаратов на основе хитозана полифракционного состава, как надежных многоцелевых препаратов, практически не вызывающих осложнений и нежелательных побочных явлений.
14. Основной задачей производств, выпускающих БАВ является обеспечение качества препарата, безопасности изготовителя, потребителя и окружающей среды.
15. Использование хитозана, препаратов на его основе в качестве добавок к питательным средам позволило разработать и практически осуществить современную технологию производства вакцин (Болезни Марека) и гипериммунных сывороток против гемофиллеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней.
6. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Албулов А.И., Шинкарев СМ., Фролова М.А., Крыжановская Е.В., Чулков А.К., Грипь A.B., Шмидт Е.В. Сорбциоиные свойства хитозана и их применение при выращивании молодняка сельскохозяйственных животных и птиц. //Сб. науч. тр. ГОУ Прикаспийского зонального НИВИ «Основные проблемы ветеринарной медицины и стратегия борьбы с заболеваниями с/х животных в современных условиях», Махачкала. - 2007. - С.251-254.
2. Ярыгииа Е.И., Лукина В.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Поствакцинапьные антитела как критерий напряженности иммунитета птиц к болезни Марека /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - М.,-С. 121-125. Ъ. Ярыгина Е.И., Лукина В.А., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Сухая бивалентная вакцина против болезни Марека // /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - М., - С. 125-129..
4. Матвеева И.Н., Сивков Г.В., Гринь С.А., Кочиш Т.Ю., Кочиш И.И., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Концентрирование и очистка вируса аденовирусной инфекции крупного рогатого скота //Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С. 129-131.
5. Ярыгина Е.И., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Вакцинация стимулирует усиление вирулентных свойств вируса болезни Марека // /Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - М, -С.131-134.
6. Ярыгнна Е.И., Румянцева И.В., Самуйленко А.Я., Еремец В.И., Крыжановская Е.В., Чулкова А.К. Антигенные свойства неинфекциониых препаратов вируса герпеса индейки ///Мат. Ш межд. ветеринарного конгресса по птицеводству, - М., - С.135-136.
7. Сивков Г.В., Кочиш И.И., Кочиш Т.Ю., Гринь С.А., Матвеева И.Н., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Разработка компонентов тест-системы ИФА для определения уровня антител к возбудителю аденовирусной инфекции крупного рогатого скота //Маг. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково.-2007.-С. 132-137.
8. Кочиш И.И., Кочиш Т.Ю., Гринь С.А., Матвеева И.Н., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Разработка тест-системы ИФА для изучения иммунологической активности вакцин против пастереллеза животных //Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.234-238.
9.Грииь С.А., Школьников Е.Э., Коломшша Г.В., Меньшепин В.В., Крыжановская Е.В., Чулков А.К., Скородумов Д.И., Ставцева Л.Я., Малик Е.В. Получение гииериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза на свиньях-иродуцентах //Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.250-253.
10. Албулов А.И., Клюкина В.И., Крапивина Е.В., Иванов Д.В., Кузнецов П.А., Шмидт Е.В., Крыжановская Е.В. Эффективность применения хитозана на фоне вакцинации телят против пастереллеза //Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.266-270.
11. Голуб Ю.С., Албулов А.И., Шмидт Е.В., Фролова М.А., Шинкарев СМ., Гринь A.B., Крыжановская Е.В. Изучение антимикробного эффекта хитозана в отношении возбудителей туберкулеза // Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.270-275.
12. Неминущая JI.A., Скотникова Т.А., Еремец Н.К., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Крыжановская Е.В. Исследование in vitro антагонистической активности и чувствительности к антибиотикам бактерий-пробиотиков // Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.284-289.
13.Скичко Н.Д., Школьников Е.Э., Гуславский А.И., Крыжановская Е.В. Кормовые биологические добавки дня выращивания бройлерных цыплят // Маг. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.292-295.
14. Албулов А.И., Фролова М.А., Гасанова Л.А., Соколова Э.И., Кулиева И.М., Крыжановская Е.В. Результаты испытания автолиза хлебопекарных дрожжей в составе питательной среды при производстве препарата «Ларвиоль-паста» // Мат. межд. научно-практической коиф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.295-297.
15. Албулов А.И., Фролова М.А., Гасанова Л.А., Тюрина М.Ю., Крыжановская Е.В. Яич-но-дрожжевой гидролизат - эффективная лечебно-профилактическая подкормка для пчел» // Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. —С.314-316.
16. Воробьева Г.И., Максимова Г.Н., Неминущая Л.А., Токарик Э.Ф., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Крыжановская Е.В. Производство лечебно-профилактических кормовых белковых добавок-синбиотиков для сельского хозяйства // Мат. межд. научно-практической конф. «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», Щелково. -2007. -С.373-376.
17. Кузнецов П.А., Албулов А.И., Клюкина В.И., Гринь С.А., Крапивина Е.Б., Иванов
Д.В., Крыжановская E.B. Изучение иммуномодулирующих свойств сукцината хитозана // Ж. «Ветеринария и кормление», № 5. -М., 2007. - С. 12-13.
18. Албулов А.И., Шмидт Е.В., Варламов В.Г., Останина Е.С., Голуб Ю.С., Голуб О.Ю., Крыжановская Е.В. Противотуберкулезная активность хитозаиа //Ж. « Ветеринария и кормление», № 5. -М., 2007. - С. 10-12.
19. Крыжановская Е.В., Албулов А.И., Рубан Е.А., Самуйленко А.Я., Шинкарев СМ., Фролова М.А, Еремец Н.К., Бондарева H.A., Хабаров В.Б., A.B. Гринь. Антимикробный эффект кислоторастворимого хитозана //Ж. «Ветеринария и кормление», № 5. -М.,2008, -С.14-15.
20. Скотникова Т.А., Неминущая J1.A., Еремец Н.К., Самуйленко А.Я., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. Вопросы обеспечения безопасного производства иммунобиотехнологиче-ских ветеринарных препаратов //Мат. доклада Ш Межд. ветеринарного конгресса по птицеводству. М. - 2007. - С.59-60.
21. Крыжановская Е.В., Албулов А.И., Самуйленко А.Я.,.Шинкарев СМ, Фролова М.А., Гринь A.B., Хабаров В.Б. Сорбционные и адыовантные свойства хитозана. /Ж. «Ветеринария и кормление» № 4. - 2008. - С. 34-35.
22. Крыжановская Е.В. Биологически активные вещества в ветеринарии //Ж. «Достижения науки и техники агропромышленного комплекса», Ks 8. -М.-2008.-С.30-31.
23. Крыжановская Е.В, Гринь A.B., Шинкарев СМ., Фролова М.А., Албулов А.И., Бондарева H.A., Хабаров В.Б., Еремец Н.К., Рахманина Е.В., Бараковский И.А.. Изучение антимикробного действия низкомолекулярных фракций хитозана на микобакте-рии. /Ж. «Ветеринария и кормление» № 6. - 2008. - С.31-33.
24. Школьников Е.Э., Коломиина Г.Ф., Гринь С.А., Самуйленко А.Я., Шегидевич Э.А., Ставцева Л.Я., Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Крыжановская Е.В.. «Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза и пастереллеза свиней». Патент РФ №2333771
25. Школьников Е.Э.,.Коломнина Г.Ф, Самуйленко А.Я.,.Гринь CA, Шегидевич Э.А., Ставцева Л.Я., Сидоров М.А.,Скородумов Д.И., Панин А.Н., Малик Е.В., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. «Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококоза и пастереллеза свиней». Положительное решение на выдачу патента № 2007123692/13(025806) от 20.06.2007г.
26. Крыжановская Е.В., Шинкарев С.М., Фролова М.А., Гринь С.А., Албулов А.И., Рубан Е.А., Гринь A.B. Получение низкомолекулярного хитозана и изучение его антимикробных свойств. /Ж. «Достижения науки и техники агропромышленного комплекса», №11,- 2008. - С. 45-46.
27. Крыжановская Е.В., Варламов В.П., Самуйленко А.Я., Албулов А.И., Шинкарев С.М., Фролова М.А., Еремец Н.К., Бондарева H.A., Хабаров В.Б., Гринь A.B. Изучение антимикробного действия хитозана //Ж. «Сельскохозяйственная биология», № 6. -2008.-С. 119-121.
28. Антонов С.Ф., Крыжановская Е.В., Филиппов Ю.И., Шинкарев С.М., Фролова М.А. Изучение ранозаживляющих свойств хитозана //Ж. «Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук», -№ 6. - 2008. -С. 52-54.
Отпечатано в ООО "Мещера" М.О., г. Щелково, ул.Свирская, д.8а зак. № 997 тир. 100 экз.
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Крыжановская, Елена Викторовна
Список сокращений.
1.Общая характеристика работы.
1.1. Актуальность темы.
1.2. Цель и задачи исследований.
1.3. Научная новизна.
1.4. Апробация работы.
1.5. Основные положения и результаты, выносимые на защиту.
1.6. Публикации.
1.7. Структура и объем диссертации.
2. Литературный обзор.
3. Собственные исследования.
3.1. Материалы и методы.
3.2. Результаты исследований.
3.2.1. Применение низкомолекулярного сукцината хитозана в ка- 51 честве иммуномодулятора при вакцинации телят против пастерелле
3.2.2. Антимикробный эффект влияния кислоторастворимого хи- 57 тозана против возбудителей туберкулеза.
3.2.3. Сорбционные свойства хитозана и его применение при вы- 66 ращивании молодняка сельскохозяйственных животных.
3.2.4. Антиметастатическая активность олигомеров хитозана в 69 фитохитодезтерапии.
3.2.5. Изучение биологической антиаксидантной активности хито- 70 зана и его производных.
3.2.6. Антиоксидантная активность пребиотика для птиц 72 «Авистим».
3.2.7. Ранозаживляющие свойства хитозана.
3.2.8. Влияние ферментного препарата коллагеназы на функцио- 76 нально-технологические свойства мясопродуктов.
3.2.9. Производство лечебно-профилактических кормовых белко- 79 вых добавок-синбиотиков для сельского хозяйства.
3.2.10. Кормовая биологическая добавка для выращивания бройлерных цыплят.
3.2.11. Испытание автолизата хлебопекарных дрожжей в составе пи- ^ тательной среды при производстве препарата «Ларвиоль -паста»
3.2.12. Яично-дрожжевой гидролизат в качестве лечебно- 83 профилактической подкормки для пчел.
3.2.13. Исследование in vitro антагонистической активности и чув- 86 ствительности к антибиотикам бактерий -пробиотиков L.Plantarum шт.
М-30 и B.Subtilis шт. В-1948.
3.2.14. Обеспечение качества и безопасности производства биологически активных веществ в биотехнологии.
3.3 .Обсуждение результатов исследованийю.
4. Практические предложения.
5. Выводы.
Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологически активные вещества в ветеринарии"
Актуальность темы. Биологически активные вещества (БАВ), неспецифические средства, которые производятся из компонентов различного природного происхождения (морепродукты, микроорганизмы, животные, растения и т.д.), используются в качестве подкормки для животных, птиц, насекомых и растении, оказывают стимулирующий иммунитет, антимикробное, сорбционное, антиоксидантное воздействие и улучшает качество обрабатываемого продукта находят все более широкое применение в ветеринарии.
Биологически активные вещества (БАВ), обладающие способностью воздействовать на иммунокомпетентные системы, делятся на экзогенные и эндогенные. Подавляющее большинство первых - это вещества микробного происхождения (бактериального и грибкового). БАВ эндогенного происхождения условно разделяют на две группы: иммунорегуляторные пептиды и цитокины. Пептиды представляют собой, в основном, экстракты из органов иммунной системы (тимуса, селезенки) или продукты их жизнедеятельности (костного мозга). Под цитокинами понимают всю совокупность биологически активных белков, продуцируемых лимфоцитами и макрофагами: интерлейкины, монокины и интерфероны.
Незаразные болезни молодняка сельскохозяйственных животных в первые дни жизни широко распространены в животноводстве и являются одной из основных проблем ветеринарной практики. Болезни молодняка сельскохозяйственных животных имеют повсеместное распространение, их лечение и профилактика являются неотложными задачами ветеринарии.
Из незаразных заболеваний молодняка наиболее часто регистрируют желудочно-кишечные болезни, которые составляют у молодняка до 10 - дневного возраста 60-90%. Связано это, прежде всего, с нарушением технологии содержания и кормления-животных, а также несовершенством естественной защиты их организма к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Желудочно-кишечные болезни телят наносят огромный ущерб животноводству вследствие высокой заболеваемости и падежа (до 100%), затрат на лечебные мероприятия, снижения« продуктивных качеств и племенной ценности животных. Хотя изучению данной проблемы, посвящено много работай для лечения этой группы заболеваний предложено много схем, все же до настоящего времени не удается достигнуть 100% сохранности молодняка. Гитель-сон G.G. (1974), Ежиков A.A. (1970), ЗарозаВ.Г. (1984) и др. установили, что наибольшее распространение среди болезней телят имеет диспепсия, заболеваемость которой на молочных фермах: и комплексах составляет 80-95%, а летальность, от 15% до 70%. Причем, заболевание1 имеет сложную этиологию,- что создает трудности в диагностике и лечении. При заболеваниях в ранний период жизни регистрируется высокая летальность в связи с тем, что болезншчаще протекают на фоне иммунодефицитов.
Проблема, иммунной недостаточности у молодняка сельскохозяйственных животных выходит на первое место, особенно при. переводе, хозяйств на промышленную основу и создания комплексов ^ большой концентрацией поголовья, животных, на малой территории. Это способствует тому, что у животных создается недостаточный иммунный фон и возможно снижение напряженности иммунитета. Болезни органов- пищеварения у молодняка, как правило; протекают на. фоне, пониженной резистентности организма. Поэтому разработка новых препаратов и схем лечения желудочно-кишечных заболеваний у молодняка, способствующих повышению-неспецифической резистентности, является перспективным- направлением:
В связи с вышеизложенным, проблемашоиска новых биологически активных препаратов для-профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка весьма актуальна.
Хитозан, в настоящее время используется в различных областях народного хозяйства. Особого внимания заслуживает применение его в ветеринарии и медицине. Установлено; что хитозан является слабым аллергеном, обладает достаточно низкой токсичностью и; пирогенностыо (Скрябин K.F., Вихорева Г.А., Варламов В.П., 2002; Быкова В.М., Немцев GB':, 2002; Allan G.G., Peyron М., 1989).
Хитозан способен образовывать гели в слабокислых растворах (рН 56). Кроме того, он может создавать пленку на коже и раневых поверхностях, а также на слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, обладает высокой адсорбционной емкостью, способен выводить токсичные вещества, стимулирует клеточный и гуморальный иммунитет (Албулов А.И., Самуйленко А .Я., Шинкарев СМ., Фролова М.А., 2001; Червинец В.М., Бондаренко В.М., Комаров Б.А., 2002; Muzarelli R:A.A., 1988). Эти свойства хитозана могут быть использованы для создания средств леченйя и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у сельскохозяйственных животных, приносящих большой экономический ущерб.
В зависимости от содержания в составе препарата фракций с различными молекулярными массами хитозан может проявлять в той или иной степени сорбционные, иммуномодулирующие, бактериостатические, фунгиста-тические, противовоспалительные и другие свойства (Ильин. Л.А., Андрианова И.Е., Глушков В.А., 2003; Червинец В.М., Албулов А.И., Червинец Ю.В., 2006).
Туберкулез наносит значительный экономический ущерб животноводству страны, что связано с широкой распространенностью болезни, необходимостью убоя реагирующих на туберкулин животных в благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйствах и населенных пунктах (Смолья-нинов Ю.И., Донченко А.С и др., 2005.). Поэтому поиск новых препаратов для антимикробной терапии туберкулеза и других заболеваний является- на сегодняшний день актуальной задачей (Капков Л.Г., Smith J., Wood Е., Domish М., 2004).
Принимая во внимание уникальные свойства хитина и хитозана, в последние годы- значительно возрос интерес к изучению и практическому применению этих природных полимеров во многих областях, в том числе ветеринарии и медицине. Это определило интерес к изучению молекулярного механизма действия липолитических ферментов и поиску соединений, влияющих на липидный обмен. Хитозан, благодаря уникальной структуре и положительному заряду, является полифункциональным соединением, обладающим целым рядом уникальных свойств: высокой совместимостью с животными тканями, биодеградируемостью, низким порогом токсичности и др., что определяет перспективы его использования в качестве ингибитора липо-литических ферментов (БштуоБЫ М., М1шгс1ш С).
Изучение биоактиоксидантов показало их существенную роль в поддержании уровня свободно радикальных реакций и регулировании обмена липидов в мембранах клетки. Важно, что существование системы регуляции было обнаружено практически для всех изученных внутриклеточных и клеточных мембран клеток животных, растительных организмов и микроорганизмов.
Важнейшим элементом поддержания здоровья животных а, значит, продуктиности и сохранности являются доброкачественные корма, т.е. корма, свободные от чужеродных, вредных для организма веществ. Одни из самых опасных чужеродных примесей - микотоксины (ядовитые низкомолекулярные метаболиты плесневых микроскопических грибов). Даже следы ми-котоксинов в кормах (30-100 мкг/кг) приводят к потере продуктивности, снижению иммунитета и воспроизводительных функций. Особо актуальна проблема микотоксинов у таких видов, как птица у которых основу рациона составляет зерно и продукты его переработки.
Ужесточение требований к экологической безопасности продукции животноводства заставило пересмотреть многие методические подходы к вопросам оптимизации контроля над эпизоотическим процессом болезней, возбудителями которых является условно-патогенная'микрофлора, и признать необходимость разработки нового поколения экологически безопасных препаратов,' способных занять свое место в системе мероприятий по обеспечению биологической защиты животных (Сафонов Г.А., Калинина Т.А., Романова В .П., 1992; Панин А.Н., Серых Н.И., 1993; Сидоров М.А., Субботин В.В., 1988; Тихонов И.В., Гаврилов В.А., 2003).
На основании литературных данных известно, что к числу высокоэффекгивных лечебно-профилактических средств специалисты относят пробиотики (Воронин Е.С., 1989; Панин А.Н., 2000; Fuller R., Gibson G., 2000 и др.). По мнению многих специалистов, основополагающим принципом при создании пробио-тиков является использование микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры животных (Бовкун Г.Ф., 1999; Сидоров М.А., 2000; Berg R., 1998 и
ДР-)
Наиболее полно этим требованиям могут отвечать пробиотические препараты, в состав которых входят живые бактерии из числа основных представителей нормального кишечного биоценоза, такие как лактобациллы, бифидобактерии, стрептококки. Использование пробиотиков в ветеринарии затрагивает довольно широкий круг проблем, начиная от коррекции кишечного биоценоза и распространении на коррекцию иммунной, гормональной и ферментной систем молодняка животных (Вилыпанская Ф.Л., 1987; Сидоров М:А., Скородумов Д.И., Федотова В.Б., 1995; Грачева Н.М., Партий О.С, Леонтьева Н.И., 1996; Парфенов А.И., 1998; Малик Н.И., 2002).
Широкое применение в медицине и ветеринарии препаратов на основе лак-тобацилл и бифидобактерий при острых кишечных инфекциях и дисбактериозах показало их эффективность и перспективность (Малик Н.И., 2000; Субботин В.В., и др. 2001).
Одной из первых отраслей сельского хозяйства, перешедших на промышленную основу производства, является птицеводство. Доля препаратов для птиц составляет 95% мирового рынка лечебных препаратов для животных (более 7 млрд. долларов в стоимостном выражении).
В связи с этим все более актуальной становится проблема профилактики, лечения и нормализации микробного баланса в пищеварительном тракте, минимизации последствий антибиотикотерапии; повышения эффективности выращивания и сохранности птицы, а также улучшения качества конечного продукта. Один из способов ее решения - разработка и применение биологически активны веществ (БАВ) нового поколения, которые характеризуют высокой биодоступностью и положительно влияют на микробиоценоз желудочно-кишечного тракта птицы, что приводит к оздоровлению всего организма в целом и снижению микробизма окружающей среды. К их числу относят эубиотики - пробиотики и пребиотики (Ан-типов В.А., 1991; Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., 2003; Данилевская Н.В., Субботин В.В., 2005).
Наиболее перспективным является создание симбиотиков - комплексов про-и пребиотиков. Многие из симбиотиков влияют на гуморальный и клеточный иммунитет, зоотехнические показатели, могут служить естественными стимуляторами роста и обладать токсико- и радиопротективным действием, снижающим влияние неблагоприятных экологических факторов.
Продовольственная проблема, связанная с недостатком биологически полноценных продуктов, со временем не только не теряет своей остроты, но и становится одной из актуальнейших. Эффективность решения этой проблемы определяется использованием качественно новых методов производства продуктов питания, а также привлечением новых сбалансированных источников пищевого бежа, одним из которых является белок микроорганизмов. Работы многих ученых посвящены вопросам изучения возможности использования микроорганизмов как источников белковых веществ (Коновалов В.А., 1975; Беликов В.М., 1977; Шкляр Б.Х., 1977; Латов В.К., 1990; Римарева Л.В., 1993; Иванова Л.А., 1998; Неклюдов А. Д., 2000; и др.).
Наиболее перспективным источником пищевого белка является дрожжевая биомасса, что объясняется полноценностью белковых веществ, аминокислотный набор которых приближается к животному белку, а также безопасностью и абсолютным отсутствием токсичности дрожжей. Кроме того, наличие витаминов, ценных полисахаридов и микроэлементов позволяет рассматривать дрожжи как перспективные субстраты для получения биологически активных добавок.
Природные цеолиты обладают уникальными свойствами адсорбции, ионообменной, каталитической и детоксикационной способностью. Благодаря-своему кристаллохимическому строению цеолиты биохимически активны и кислотоустойчивы. Поэтому их применение в различных отраслях постоянно расширяется. и
В настоящее время животноводство и птицеводство в России испытывает большую потребность в кормовых белковых продуктах для своего развития и становления. Особенный дефицит кормовых белковых продуктов стал заметно ощущаться в настоящее время, так как в 90-х годах были остановлены крупнотоннажные заводы БВК, производящие кормовые дрожжи на основе углеводородов «паприн» (Ермишина И.Г. и др., 2005). Кормовые белковые продукты, полученные на основе микробиологического синтеза, по своему химическому составу и питательной- ценности не уступают традиционным белковым кормам, таким, как соевый шрот, мясокостная мука, рыбная мука и др.
Сложившаяся- в мире ситуация, с потреблением мяса и мясных продуктов требует рационального использования сырья, повышения эффективности производства и улучшения качества готовой продукции. Для решения вышеуказанных проблем необходимо -разрабатывать и внедрять в-производство новейшие методы обработки мяса с целью использования при производстве различных мясопродуктов не только высокосортного сырья, но и сырья, обладающего повышенной жесткостью и требующего длительной термообработки. (Рогова Н.В., Снегур Ф.М. и ДР., 2007)
При разработке методов, обработки низкосортного сырья, содержащего большой процент соединительной ткани, необходимо учитывать, чтобы метод не приводил к потере массы, не ухудшал органолептические свойства и технологические характеристики готового продукта и позволял интенсифицировать процесс производства мясопродуктов, отличающихся высокой пищевой и биологической ценностью.
Следовательно, исследования, теоретическое обоснование и разработка новых биологически активных веществ (БAB) для нужд ветеринарии являются* актуальными.
Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Крыжановская, Елена Викторовна
5. ВЫВОДЫ
1. Мембранное разделение и использование препаратов низкомолекулярного хитозана стимулирует механизмы гомеостаза у животных, усиливает антителогенез и увеличивает титры циркулирующих в крови антител, а также активирует факторы, характеризующие гуморальную и неспецифическую защиту организма.
2. Низкомолекулярный хитозан обладает высокой антибактериальной активностью по отношению к штаммам микобактерий. Антимикробные свойства хитозана позволяют рекомендовать его с целью применения для профилактики и лечения туберкулеза в медицине и ветеринарии, в частности, в птицеводческой отрасли.
3. Для повышения сорбционных свойств хитозана проведена его активация и получен сорбент емкостью на 40-60% выше исходного полимера, определены оптимальные условия его растворения, переосаждения, концентрирования и режимы высушивания. Полученные данные свидетельствуют, что скармливание хитозана и фитохитодеза телятам обуславливает увеличение живой массы к 101-суточному возрасту более, чем на 5% по сравнению с контролем.
4. Исследована антиметастатическая активность олигомеров хитозана, которая проявляется при сочетании олигомерной фракции хитозана с компонентами сложного экстракта противоонкологического фитосбора.
5. Показано, что высокомолекулярная фракция хитозана обладает ан-тиоксидантной активностью, пролонгирует действие растительного экстракта в составе препарата, связывает и выводит из живого организма токсины и ионы тяжелых металлов.
6. Подтверждена высокая антиоксидантная активность пробиотика «Авистим», особенно в условиях различных стрессов у птиц.
7. Экспериментально установлено, что использование ферментного препарата коллагеназы в 0,03% концентрации улучшает качественные характеристики мясных продуктов и сокращает длительность их термообработки.
8. Для нужд животноводства и птицеводства разработано, успешно испытано и налажено производство синбиотиков - лечебно-профилактических кормовых добавок.
9. Показана возможность при выращивании бройлерных цыплят при замене в кормовой биологической добавке дорогого кристаллического лизина на цеолит + Echerichia coli VL.
10. Доказано, что* автолизат хлебопекарных дрожжей может быть использован в составе питательной среды при-производстве препарата против кровососущих (личинок комаров Aedes aegipty).
11. Установлено, что яично-дрожжевой гидролизат является эффективным препаратом для применения его в пчеловодстве в качестве лечебно-профилактической подкормки, а также как средство против нозематоза.
12. Установлено, что бактерии L.plantarum, шт. М-3,0 и B.subtilis, шт. В-1948 обладают достаточной устойчивостью к широкому кругу антибиотиков, что позволяет сочетать антибиотико- и пробиотикотерапию в случае угрожающей ситуации в сельском хозяйстве.
13. Проведенные исследования позволили повысить эффективность фитопрепаратов,на основе хитозана полифракционного состава, как надежных многоцелевых препаратов, практически не вызывающих осложнений и нежелательных побочных явлений.
14. Годовая экономическая эффективность от применения^ хитозана и кормовых белковых добавок - сенбиотиков за счет увеличения сохряемости поголовья составит 1,972 млн.р. из расчета поголовья птицы в количестве 100 тыс.голов.
15.Использование хитозана, препаратов на его основе в качестве добавок к питательным средам позволило разработать и практически осуществить современную технологию производства вакцин (Болезни Марека) и гипериммунных сывороток против гемофиллеза, стрептокок-коза и пастереллеза свиней.
Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Крыжановская, Елена Викторовна, Щёлково
1. Абрамов С.С., Арестов И.Г., Карпуть И.М. Профилактика незаразных болезней молодняка. М. 1990. С. 24-56.
2. Агеев Е.П., Вихорева Г.А., Голуб М.А., Матушкина H.H. Транспортные свойства хитозановых пленок //Новые достижения в исследовании хитина и хитозана. Материалы 5 Международной конференции. /Под ред.: В.П.Варламова и др. М.: ВНИРО, 1999. - С.205-206.
3. Албулов А.И., Комаров Б.А., Самуйленко А.Я., Фоменко A.C., Шин-карев С.М. Разработка технологии получения натриевой соли сукцината хитозана. //Материалы 5 конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. - С. 7-9.
4. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве. //Ветеринария, 1991, № 4. С. 55-58.
5. Антипов В.А., Ермакова Т.И. Новые отечественные пробиотики (Пропиацид и энтерацид). //Тезисный доклад Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля с.-х. продукции». М., 1995. - С. 71-72.
6. Араки Я., Ито Е. Метаболический путь образования хитозана. Ферментативное деацетилирование хитина. //Biochemical and Biophisical Research Communications, 1974. T.56. С. 669-675.
7. Арион В.Я. Иммунобиология гормонов тимуса. Киев, 1989. - С. 103-125.
8. Бабкина М.П. Коррекция иммунного статуса и повышение продуктивности цыплят бройлеров пробиотиками. «Акту-альн.пробл.интенсивн.развития животноводства». Горький, 1998. С. 201207.
9. Базт М.Р., Вихорева Г.А., Гальбрайх JL. Обрзование амидных связей в карбоксиметиловом эфире хитозана. //Хим.волокна. № 5. - М., 1990. -С. 5-6.
10. Белов А.Д., Рогожина Л.В., Лебедев В.А. Оценка влияния Т-активина на некоторые показатели крови крупного рогатого скота /Сб.научных тр. /Использование физических и биохимических факторов в ветеринарии и животноводстве. М., 1992. С.31.
11. Белявская В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацилл новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственных белков в организм. /Сборник научных трудов сотрудн. НИКТИ, Бердск, 1996.-С.141-143.
12. Бессарабов Б., Крыканов А., Мельникова И., Донкор Джозеф. Влияние пробиотиков на рост и сохранность цыплят. //Птицеводство, 1996, № 1. -С. 23-25.
13. Бовкун Г.Ф., Имманов А.Н., Семенченко В.Ф., Рожкова И.В., Бор-сенкова А.Н. Профилактическое действие бификорма при желудочно-кишечных болезнях цыплят. //Ветеринария, 1998, № 12. С. 51-53.
14. Богданов В.Д. Эмульсионные системы, содержащие хитозан. //Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержа-щих отходов криля и пути их использования. М.: ВНИРО, 1992. - С. 76-83.
15. Болотина E.H. Продуценты токоферолов микроорганизмы пищеварительного тракта птицы. //Научн.конф. профес.-препод. состава, сотрудн. и аспирантов. /Самарская гос.с.-х.академия, Самара, 1997, ч.1. - С. 45-47.
16. Борода В.А., Крапивина Е.В., Кривопушкина Е.А. и др. Эффективность применения хитозана и фитохитодеза при выращивании телят. //Сб.научн.работ «Научные проблемы производства продукции животноводства и улучшения ее качества», Брянск, 2004. С.276-280.
17. Бурлакова Е.Б. Гибридные антиоксиданты. «Биоантиоксидант». Материалы 7-ой Межд.конф. 25-26 октября 2006г., Москва. М.: Изд-во РУДН.-С.З.
18. Буянов A.A., Видении В.Н., Гречухин А.Н. Влияние хитозана на иммунную и эндокринную системы поросят //Ветеринария, М., 2002. С. 4751.
19. Быкова В.М., Немцев C.B. Сырьевые источники и способы получения хитина и хитозана. //В кн.: Хитин и хитозан: получение, свойства и применение. /Под ред.: К.Г.Скрябина, Г.А.Вихоревой, В.П.Варламова. М.: Наука, 2002. - С. 7-23.
20. Быков В.П., Быкова В.М., Кривошеина Л.И. и др. //Тезисы докл. IV Всероссийкой конференции «Производство и применение хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1995. С. 26-27.
21. Быков В.П. Состояние и перспективы развития производства хитина, хитозана и продуктов на их основе из панциря ракообразных. //Материалы 5 конференции «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999. - С. 12-15.
22. Бычков A.B., Быкова В.М., Кривошеина Л.И. Применение «Хитана» в клинической практике. //Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. /Материалы 7 Международной конференции. Под ред.: В.П.Варламова и др. М.: ВНИРО, 2003. - С. 156-157.
23. Варламов В.П., Стояченко И.А. Ферментативный гидролиз хитозана //Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержа-щих отходов криля и пути их использования. /Материалы 3 Всесоюзной конференции. М.: ВНИРО, 1992. - С. 56-62.
24. Варламов В.П., Быкова В.М., Немцев C.B. и др. //Материалы V конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 1999.-296с.
25. Варламов В.П., Быкова В.М., Немцев C.B. и др. //Материалы VI конф. «Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана». М.: ВНИРО, 2001.-398с.
26. Взнуздаев O.A. и др. Влияние хитозана на JgM и JgG антителообра-зующей клетки у мышей. //Иммунология, 1984, № 21. С. 53-55.
27. Вихорева Г.А. Синтез и свойства водорастворимых производных хитина. //Дис. д.х.н. М.: МГТУ, 1998. 316с.
28. Воробьева A.A., Медуницин Н.В. Новые принципы и методы создания иммунобиологических препаратов. //Медицина, М., № 10, 1999. - С. 16-17.
29. Воронин Е.С., Девришов Д.А. Иммунотерапия острых респираторных заболеваний (ОРЗ) телят. // Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных. М., 1988.-С. 102-103.
30. Галактионов В.Г. Как работает иммунная система. //Соросовский образовательный журнал, 1997, № 2. С. 2-9.
31. Гальбрайх JT.C., Вихорева Г.А., Горбачева И.Н., Скорикова Е.Е., Колядка М.Г. Влияние pH среды на структуру и свойства гидрогелей полиэлектролитных комплексов хитозана. //Всесоюзн.научн.-техн.конф.: Тезисы докл. Суздаль, 1990. - С. 179-180.
32. Гамзазаде А.И., Насибов С.М., Лукин О.В. Антибактериальная активность хитозанов. Мат. Восьмой Междунар. конф. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана». — Казань. 2006. - С. 183-186.
33. Гамзазаде А.И. Производные хитина/хитозана контролируемой структуры в качестве потенциально новых биоматериалов.: Автореф. дисс. доктора хим.наук, М., 2005,48 с.
34. Гамзазаде А.И., Скляр A.M., Рогожин C.B. Некоторые особенности получения хитозана. //Высокомолекулярные соединения. 1985. — Т. А. — XXVII.- №6. -С. 1325-1331.
35. Гартман O.P. Способ и термодинамика получения хитина и хитозана. //Дисс. .канд.хим.наук. Барнаул, Алтайский государственный университет, 1998.- 115с.
36. Герасименко Д.В., Авдиенко И.Д., Банникова Г.Е., Ильина A.B. и др. Антибактериальная активность низкомолекулярного хитозана. //Материалы 7 Международной конференции. /Под ред.: В.П.Варламова и др. М.: ВНИРО, 2003. - С. 233-239.
37. Гладышев Д.Ю., Скорикова Е.Е., Вихорева Г.А., Гальбрайх JI.C. Свойства карбоксиметилового эфира хитозана. //Техисы докл. Третьей Все-союзн. конф. «Водорастворимые полимеры и их применение». Иркутск, 1987.-С.141.
38. Горовой Л.Ф., Косяков В.Н. Сорбционные свойства хитина и его производных. Монография «Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение». М., 2002. С. 127-141.
39. Грачева Ю.А. Исследование иммунологической активности белковых компонентов из культуры ткани женьшеня. Автореф.дисс. на со-иск.учен.степ.канд.биол.наук. —С.-Петербург, 1998. 24с.
40. Гусева Е.В., Балахина В.И. Иммуномодуляторы. Владимир, 1995. -С. 152.
41. Данилевская Н.В., Субботин A.B. Методика фармаэкономического анализа результатов применения ветеринарного препарата при откорме бройлеров на примере пробиотика ЛАКТОБИФАДОЛ. //Ветеринария и кормление, № 2, 2005. С. 24-25.
42. Денисов Е.Т. Реакции и реакционная способность радикалов анти-оксидантов. «Биоантиоксидант». Материалы 7-ой Межд.конф. 25-26 октября 2006 г., Москва. М.: Изд-во РУДЫ. С. 37.
43. Дервишов Д.А. Иммунотерапия острых респираторных заболеваний (ОРЗ) телят. //Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. Животных. -М., 1988.-С. 102-103.
44. Дервишов Д.А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезни молодняка сельскохозяйственных животных. Автореф.дисс.докт.биол.наук. М., 2000. -С. 53.
45. Джанова З.Ф. Сочетанное применение пробиотика бифидумбакте-рина и иммуномодулятора тималина для профилактики колибактериоза у цыплят. Автореферат дисс. .канд.вет.наук, г.Санкт-Петербург, 2001. 25с.
46. Донченко A.C., Аликин Ю.С., Найманов Д.И. Применение биооги-чески активных веществ в качестве иммуномодуляторов в ветеринарии и медицине. -Новосибирск. 1989. С. 8-29.
47. Донченко A.C., Багрин В.А., Донченко В.Н. Иммуностимуляторы нуклеиновой природы как стимуляторы неспецифической резистентности и продуктивности молодняка крупного рогатого скота //Рекомендации РАСХН. Н. 1992.-С. 8-16.
48. Дубинская A.M., Добротворская А.Е. Применение хитина и его производных в медицине. //Химико-фармацевтический журнал. Т.23, № 5. -1989.-С. 623-628.
49. Дудников С.А. Неспецифическая иммуностимуляция в профилактике острых расстройств пищеварения, новорожденных телят //Сб.науч.тр. /Профилактика и лечение незаразных болезней животных в спецхозах. М. 1987.
50. Ежова Е.А. Модификация холодного способа деацетилирования хитина // Материалы 7 конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана», С-Пб-Репино, 2003, с. 17-19.
51. Егоров И., Куренева В., Паньков П., Егорова Т. Пробиотики в кормлении цыплят-бройлеров. //Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве. Экспресс-информ., 1995, № 1-2. С. 35-37.
52. Ермишина И.Г., Фоменко A.C., Фролова М.А., Албулов-А.И., Шин-карев С.М., Гасанова J1.A. Разработка и внедрение в производство гидролиза-тов коллагена: Мат.Международной научно-практической конференции. -Щелково, 2005. С.530-533.
53. Ершов Б.Г., Исаков О.В.,Рогожин С.В., Гамзазаде А.И. Радиацион-но-химические превращения хитозана. //Докл. АН СССР. Т. 295, № 5. -1987.-С. 1152-1156.
54. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.Н. Препараты на основе хитина, хитозана в медицине и рациональном питании. Серия: Медицина 21 века. СПб. 2000.-С. 15-20.
55. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Цыган В.Н., Егоров В.Н. Хитозан в медицине и рациональном питании. Серия: Медицина в 21 веке. СПб.2000. -24с.
56. Жоголев К.Д., Щедрина В.Ю., Никитин В.Ю., Ващенко В.И. Имму-нокорригирующее действие препарата хитозан при бактериально и гриппозной инфекции. //Иммунокоррекция при инфекционной патологии. JL, 1998. -С. 32.
57. Журавская Н., Алехина JL, Отряшенкова Л. Исследование и контроль качества мяса и мясопродуктов. М.: Агропромиздат, 1985. - 296с.
58. Заявка 2-240101 Япония, МКИ С 08 Б 37/08, а 61 К 7/00. Способ получения сульфонированного хитозана /Комияма Н., Сано X., Мупасаки К., Мацунага А. (Япония). -J61-63033; Заявл. 14.03.89; Опубл. 25.09.90.
59. Заявка 62-4702 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Получение водорастворимого акрилоилированного хитозана /Ито X., Сано X., Сибасаки Д. (Япония). № 60-142710; Заявл. 28.06.85; Опубл. 10.01.87.
60. Заявка 2-69502 Япония, МКИ С 08 В 37/08, А 61 К 7/001. Водорастворимые низкомолекулярные хитозаны и способ их получения /Танако К., Цумаки К., Нива Т. (Япония). - № 63-220377; Заявл. 5.09.88; Опубл. 8.03.90.
61. Заявка 3-220202 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Хитозановые олигоме-ры и способ их получения /Исоган А., Хосэгава М. (Япония). № 2-15659; Заявл. 24.01.90; Опубл. 27.09.91.
62. Заявка 63-120701 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Получение хитозана низкой молекулярной массы /Морита И., Камино К. (Япония). № 61-267989; Заявл. 11.11.86; Опубл. 25.05.88.
63. Заявка 2-22301 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Способ получения водорастворимого хитозана /Камаяма X., Сэкигути Т. (Япония). № 63-171796; Заявл. 12.07.88; Опубл. 25.10.90.
64. Заявка 2-11601 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Способ получения хи-тозана низкого молекулярного веса /Накамура Т. (Япония). № 63-159364; Заявл. 29.06.88; Опубл. 16.01.91.
65. Заявка 2-41301 Япония, МКИ С 08 В 37/08. Способ получения водорастворимого хитозана /Иноуэ Т. (Япония). № 63-191933; Заявл. 30.07.88; Опубл. 9.02.90.
66. Заявка 469304 Япония. МКИ А 01 43/16. Ингибитор роста болезнетворных бактерий рода Fisarium /Такаси Н., Окусона К. (Япония). № 2180558; Заявл. 10.07.90; Опубл. 4.03.92.
67. Заявка 61-268626 Япония. МКИ А 61 К 31/715. Противомикробные препараты /Судзуки С., Судзуки М., Катаяма X. (Япония). № 60-109854; Заявл. 22.05.85; Опубл. 28.11.86.
68. Заявка 59-46223 Япония. МКИ А 61 К 31/73, 31/63. Противомикробные препараты /Такамуцо Т., Китао Е., Кохати К. (Япония). № 57150398; Заявл. 30.08.84; Опубл. 15.03.84.
69. Заявка 59-27827 Япония. МКИ А 61 К 31/715; А 61 К 35/65. Проти-вомикробный препарат /Судзуки С., Окава Й., Хасимото К., Окура Я., Судзуки С., (Япония). № 57-137929; Заявл. 10.08.82; Опубл. 14.02.84.
70. Земсков A.M. Иммуномоделирующие свойства дрожжевой РНК (Актуальные вопросы иммунологии). М., 1981.
71. Зинченко Е.В. Иммунопробиотические препараты для профилактики и лечения болезней животных. Автореферат дисс. доктора биол. наук. М., 2002.-36с.
72. Зинченко Е.В., Панин А.Н. Иммунобиотики в ветеринарной практике. Пущино, 2002. - 163с.
73. Иванов В.П.Выявление и анализ биологических свойств новых иммуномодулирующих пептидов. Автореф.дисс. на соиск.учен.степ. канд.биол.наук. М., 1992. - 23с.
74. Ильина A.B., Ткачева Ю.В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом целловиридин Г20х //Прикл.Биохим.Микробиол. Т.38, № 1. - 2002. - С.5-13.
75. Ильина A.B., Варламов В.П. Влияние степени ацетилирования на ферментативный гидролиз хитозана препаратом целловиридин Г20х //Прикладная биохимия и микробиология. Т.39, № 3. - 2003. - С.273-277.
76. Ильина A.B., Ткачева Ю.В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярных хитозанов ферментным препаратом целловеридин Г20х. //Прикладная биохимия и микробиология. Т.38, № 2. - 2002. - С.132-135.
77. Информационная брошюра. Биологически активная добавка к пище «Микровет», применение для восстановления нарушенных функций организма. М., 1998. С. 35-41.
78. Кайминып И.Ф. Физико-химические свойства хитозана и возможности его практического использования. //Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. /Материалы 5 конференции. М.: ВНИРО, 1999. - С. 230-231.
79. Карпуть И.М., Соврюк И.З., Пивовар JI.M., Ульянов А.Г. Прогнозирование и диагностика иммунопатологии у животных. //Уч. Записки Витебской Гос.акад.вет.мед., 1994, Т.31.-С. 16-21.
80. Карпуть И.М., Пивовар JI.M. Аутоиммунная диспепсия новорожденных животных //Сб. научн.тр./ Ветеринарная наука производству. Минск.: Урожай. 1984. - С.22.
81. Кашина С.В. Характеристика иммунологических свойств препарата «Вермин». Автореф.дисс.канд.мед.наук. Пермь, 1999. - 21с.
82. Ковалев В.К., Волков И.Б., Б.В. Виолин и др. М.: Агропромиз-дат, 1988. - 223с. Антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны в ветеринарии: Справочник.
83. Ковальская Л.А. и др. Препараты для птиц «Авилакт-1К» и «Ави-норм-3» биофармкомплексы на основе пробиотиков и биологически активных добавок. /Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции 8-9.06.2000, Щелково-2000. - С.346.
84. Коваль Ю.Ф., Жоголев К.Д., Никитин В.Ю., Буланьков Ю.И., Де-сятова A.B. Изучение биологической активности препаратов хитина и хито-зана. //Матери алы 1 съезда иммунологов России (23-25 июня 1992). Новосибирск, 1992. - С. 219.
85. Козырев Д.К. Влияние молока, подкисленного муравьиной кислотой и обогащенного хитозаном, полизином и дегидроквертицином на рост и резистентность телят в молочный период выращивания: Авто-реф,дисс.канд.биол.наук. М., 2007.
86. Комаров A.A. Способ получения, физико-химическая характеристика и иммунобиологическое действие аминокислотно-пептидного препарата для птиц. Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1995. 26с.
87. Коромыслов Г.Ф., Полоз Д.Д., Крюкова H.H. и др. Применение иммуностимуляторов в ветеринарии. //Сб.научн.тр.ВНИИ экспер.ветер. М., 1985, №62.-С. 3-7.
88. Красников Г.А., Цымбал A.M., Клепина Н.В. и др. Эффективность применения иммуномодулирующих препаратов для комплексного лечения бронхопневмонии. //Ветеринария, 1987, № 62. С. 6-11.
89. Кузнецова М.Н. и др. Влияние комплексного использоания бифи-думбактерина на гематологические показатели у цыплят. /Тезисы докладов Всероссийской конференции «Пробиотики и пробиотические продукты». М., 1999.-С.63.
90. Лазарева Д.М., Алехин E.K. Стимуляторы иммунитета. М. 1985.225с.
91. Лапин A.A., Зеленков В.Н. Применение антиоксидантного статуса в фитотерапии. //Материалы 6-ой Международ.конф. «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения в современной медицине». Черноголовка, 2006. С.146-153.
92. Лапин A.A., Зеленков В.Н. Антиоксидантные свойства растительных полисахаридов. «Биоантиоксидант». Материалы 7-ой Межд.конф. 25-26 октября 2006 г., Москва. М.: Изд-во РУДН. С. 175.
93. Лихотин А.К. Препарат «Овогид» для пчел //Пчеловодство. -1993.-№3.-С.21-22.
94. Лихотин А.К. Лечебно-профилактические подкормки //Пчеловодство. 2007. - № 3. - С.45.
95. Лопухин Ю.М., Петров Р.В. Коррекция нарушений иммунитета в клинике и эксперименте //Сборник научных трудов. М., 1985. - С. 3-5.
96. Малик Н.И., Панин А.Н. Ветеринарные пробиотические препараты. //Ветеринария, 2001, № 1. С. 24-26.
97. Малинина В.В., Хавинсон В.Х. Сранвительная эарактеристика иммуномодуляторов //Иммунология. М., 1999, № 2. - С. 23-25.
98. Марквичева Е.А., Купцова C.B., Вихорева Г.А. и др. //Материалы 6-ой Международной конф. «Новые достижения в исследовании хитина и хи-тозана». М.: ВНИРО, 2001. С. 212-216.
99. Марквичева Е.А. Хитозан и его производные в биоинкапсулировании. //В кн.: Хитин и хитозан: получение, свойства и применение. Под ред.: К.Г.Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П.Варламова. М.: Наука, 2002. - С. 315327.
100. Масычева В.И. и др. Ранозаживляющее действие хитозана. //Ветеринария, 1998, № 7. С. 49-52.
101. Меркурьева Е.К. «Биометрия в животноводстве». Колос. М., 1964.-423с.
102. Михайлова A.A. Индивидуальные миелопептиды лекарства «нового поколения», используемые для иммунореабилитации. //Immunoreabilit., 1996, №2.-С. 27-31.
103. Михайлова A.A. Миелопептиды новая группа регуляторных пептидов. //Иммунология. - М., 1999, № 4. - С. 14-17.
104. Михайлова A.A. Миелопептиды враги рака. //Intern., Наука, 1999,12.
105. Мишарина Т.А., Теренина М.Б., Крикунова Н.И. Антиоксидантная активность эфирных масел. «Биоантиоксидант». Материалы 7-ой Межд.конф. 25-26 октября 2006 г., Москва. М.: Изд-во РУДН. С. 33.
106. Мозгов И.Е. Фармакологические стимуляторы в животноводстве. М.: Колос, 1964.-352с.
107. Молохова Е.И. Биофармацевтические аспекты пробиотиков. //Сборник материалов конференции «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». М., 2002. - С. 61-62.
108. Мухамбетов Д. Использование иммуномодуляторов в постреанимационный период. Целиноград, 1990, № 490-493.
109. Насибов С.М., Большаков И.Н., Кулаев Д.В. //Материалы 3-й Все-союзн. Конф. «Совершенствование производства хитина и хитозана из пан-цирьсодержащих отходов криля и пути их использования». М.: ВНИРО, 1992.-С. 63-71.
110. Немцев C.B., Авдиенко И.Д. Росторегулирующее действие низкомолекулярного хитозана // Новые достижения в исследовании хитина и хитозана / Материалы Междунар. конф. Под редакцией В.П.Варламова и др., М., ВНИРО, 2001, с. 94-97.
111. Ноздрин Г.А., Наумкин И.В. Биологически активные вещества и перспективы их применения в ветеринарии: Лекция/НГАУ Новосибирск, 1992.-36с.
112. Ноздрин Г.А., Наумкин И.В. Влияние полирибоната и его комплексов с другими БАВ на неспецифическую резистентность телят //Сб.науч.трудов / РАСХЕ. Сиб.отделение ИЭВ С и ДВ. - Новосибирск, 1992. - С.81-87.
113. Ноздрин Г.А., Соколов В.Д. Лекарственные средства. Новосибирск, 1993.-С. 107-115.
114. Нудьга Л.А. Производные хитина и хитозана и их свойства. //Хитин и хитозан. Получение, свойства, применение. М.: Наука, 2002. - С. 141-142.
115. Нудьга Л.А., Петрова В.А., Денисов В.М., Петропавлоский Г.А. Аллилирование хитозана //ЖПХ. № 1. - 1991. - С. 229-232.
116. Нудьга Л.А., Плиско Е.А., Данилов С.Н. В-алкилирование хитозана. //ЖПХ. 1973. - Т.23, № 12, - С. 2756-2760.
117. Нудьга Л.А., Плиско Е.А., Данилов С.Н.О-алкилирование хитозана. //ЖПХ. 1973. - Т.23, № 12. - С. 2752-2756.
118. Нудьга Л.А. // Материалы 3-й Всесоюзн.конф. «Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования». М.: ВНИРО, 1992. С. 40-44.
119. Ордман P.A., Михин Г.Г., Цибарт А.Э. Апробация энроксила при желудочно-кишечных заболеваниях телят и поросят.Ветеринария, 1995. № №. - С.9.
120. Осипенко В.И. Диспепсия телят //Сб.научн.тр. /Неразарные болезни телят. Харьков. 1988. С. 19-25.
121. Панин А.Н., Малик Н.И., Чупахина H.A. Влияние пребиотической добавки на микробиоценоз кишечника цыплят. /Сборник материалов конференции «Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования». М., 2002. - С. 31-34.
122. Патент РФ № 1077089, кл. МКИ А61К35/28 29.09.95. Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующим действием //Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., Сидорова A.M.
123. Патент 02057760 Cl 19960410. Олигомер хитина и хитозана и способ его получения. /Етсуко НаКао. Заявл. 29.08.1989. Опубл. 10.04.1996.
124. Патент РФ № 02073016 Cl 19970210. Способ получения низкомолекулярного водорастворимого хитозана. /Варламов В.П., Стояченко И.А., Буданов М.В. Заявл. 31.12.1992. Опубл. 10.02.1997.
125. Патент РФ № 2144040 от 07.04.1998. Способ получения натриевой соли сукцината хитозана. /Комаров Б.А., Албулов А.И., Белов М.Ю., Самуй-ленко А.Я., Фоменко A.C., Шинкарев С.М., Трунов A.M.
126. Патент РФ № 2204402 от 14.06.2001. Способ получения фитохи-тодезов. /Комаров Б.А., Албулов А.И., Трескунов К.А., Погорельская Л.В., Червинец В.М.
127. Патент СССР № 1836954, кл. МКИ А61К35/28 30.09.93. Способ получения иммуномодулирующих пептидов. //Мотавкина Н.С., Туркеутно-ков В.Б., Коленник Т.Т.
128. Петров Р.В. Структура и функции иммунорегуляторных пептидов. //Итоги науки и техники. /Серия Иммунология. М., 1988, т.22. - С. 68-90.
129. Петрянкин Ф.П., Пыркина Л.В, Крылова И.М. Использование БАВ при выращивании молодняка //Ветеринария. 1994. - № 4. - С. 13-15.
130. Пивняк И.Г., Шайдулина Р.Г., Заболотский В.А. Каротинобакте-рин новый пробиотик для птицы. //Зоотехния, М., 1998, № 3. - С. 11-14.
131. Пигарева Н.В., Симбирцев A.C., Колобов A.A. и др. Изучение им-муномодулирующей активности нового пептидного соединения бестима. //Иммунология. -М., 2000, № 1. С. 33-35.
132. Плиско Е.А., Нудьга JI.A., Данилов С.Н. Хитин и его химические превращения. //Успехи химии. Т.46, № 6. - 1977. - С. 1470-1478.
133. Подберезный В.В., Полянцев Н.И. Влияние эндобактерина на иммунный статус организма и паренхиматозные органы коров при мастите. //С.-х. биология. Сер. Биология животных, 1994, № 6. С. 26-30.
134. Предыбайло Н.Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных и птиц, профилактика и лечение их иммуномодуляторами. — М., 1991. -43с.
135. Простяков А.П., Дрожкин В.И., Максимок H.H. Биокоррекция резистентности цыплят и поросят пептидосодержащими препаратам I Всероссийская научная конференция /Иммунодефициты сельскохозяйственных животных. Тезисы докладов. М., 1994. - С. 64-66.
136. Родин В.В. Изучение влияния комплексного пробиотического препарата на сохранность бройлеров. //Сб. «Современные достижения биотехнологии», Старополь, 1995. С. 126-129.
137. Самойлова H.A., Рыженков В.Е., Ямсков И.А. Хитозансодержа-щий гиполипидемический энтеросорбент. //Новые перспективы в исследовании хитина и хитозана. /Материалы 5 Международной конференции. Под ред.: В.П.Варламова и др. М.: ВНИРО, 1999. - С. 191-193.
138. Самуйленко А.Я., Шинкарев С.М., Албулов А.И. и др. Различные виды хитозана для ветеринарии и животноводства. Ж. «Аграрная Россия». М., 2004.-С.8-12.
139. Сафонов Г.А. и др. Пробиотики как фактор, стабилизирующий здоровье животных. //Ветеринария, 1992, № 7. С.З.
140. Сафронова Т.М., Ким Т.Н. //Материалы Четвертой Международн. научн.-техн.конф. «Пища. Экология. Человек». М.: МГУПБ, 2001. С. 132141.
141. Сборник технологических инструкций по заготовке эндокринно-ферментного и специального сырья. //Севастьянов Б.А. Пищевая промышленность. - М., 1990. - 137с.
142. Силкина В.А., Проворов Е.Л., Солдатова В.В., Лаптев Г.Ю. Использование пробиотика «Целлобактерин» при кормлении кур-несушек. //Материалы 3-й Украинской конф. По птицеводству, Борки, 2001, выпуск 51. -С. 48-51.
143. Скворцова М.М., Горшина Е.С., Качепай Д.П. Биологически активные добавки на основе биомассы высшего гриба." //Материалы первого Всероссийского конгресса по медицинской миологии «Успехи медицинской микологии». М., 2003, Т.1.-С. 305-307.
144. Смоленский В.И. Средства и методы специфической профилактики болезней птиц вирусной этиологии.» /Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук. М., 1999. — 44с.
145. Смолянинов Ю.И., Донченко A.C. и др. «Экономический ущерб от туберкулеза крупного рогатого скота в-России //Ветеринарный консультант. -2005.-№1(92).-С. 3-5.
146. Соколов В.Д. Андреева H.A., Соколов A.B. Иммуностимуляторы в ветеринарии //Ветеринария. 1992. - № 7-8. - С. 58-60.
147. Соколов В.Д., Ноздрин Г.А., Наумкин И.В. Терапевтическая эффективность диацетина при желудочно-кишечных заболеваниях молодняка. /Новые фармакологические средства в ветеринарии: Тез.докл.б-й Меж-гос.научн. практ.конф., М., 2004, т. 2. с. 64-66.
148. Степаненко И.П. Влияние пробиотического препарата «Стрепто-бифида-форте» на иммуногенез и формирование кишечного микробиоценоза цыплят. /Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М., 2001. 24с.
149. Степаненко Р.Н., Рязанов Н.К., Молдокулов O.A., Василенко Р.Я. Миелопептид: иммунокоррегирующая активность при переломах лицевых костей и травматическом остеомелите. //Иммунология. М., 1991, № 1. - С. 44-47.
150. Столбушкина П.П., Вихорева Г.А., Банникова Г.Е., Дрозд H.H., Макаров В.А. Сульфатирование низкомолекулярного хитозана. //Материалы7.ой Международной конференции. «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана. М.: ВНИРО, 2003. - С. 50-52.
151. Струков С.М., Киреева Е.Г. и др. Иммунорегулятор «Альфа-1» -тимозинингибитор ферментативной активности альфа-1-тромбина. //Докл. АН СССР, 1989. -М.,№ 1.-С.306.
152. Субботин В.В., Данилевская Н.В. Применение пробиотического препарата «Лактобифадол» при промышленном откорме бройлеров. //Ветеринария и кормление, 2004, сигнальный номер. С. 11-13.
153. Субботин В.В., Сидоров М.А. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения. //Аграрная наука, 1998, № 3. С. 70-72.
154. Субботин В.В., Сидоров М.А. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи. //Ветеринария, 2001, № 4. С. 30-33.
155. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифидола, бифа-цидобактера и его лечебно-профилактический эффект. /Автореферат диссертации доктора биол. наук, М., 1999.
156. Сходова С.А. Влияние миелопептидов на функции макрофагов. Автореф.дис.канд.биол.наук. М., 1990. - 23с.
157. Тараканов Б.В., Николичева Т.А. Пробиотический потенциал Lactobacillus casei subsp. pseudoplantarum при выращивании телят. //Ветеринария, 2001, №3.-С. 23-27.
158. Тесленко А.Я., Попов В.Г. Хитин и его производные в биотехнологии. //Обзор, информ. Гл.управл.микробиол.пром-ти при Сов. М-ов СССР. -М., 1982.-40с.
159. Топурия Л.Ю. Пробиотикотерапия сальмонеллезов сельскохозяйственной птицы. //Актуальные вопросы ветеринарии, Оренбург, 1997. — С. 79-83.
160. Фомичев Ю.П. Сорбционно-детоксинационные технологии в животноводстве и ветеринарной медицине. Ж. «Аграрная Россия», 2004. № 5. -С. 3-7.
161. Фомичев Ю.П., Донник И.М., Федоров Ю.Н. и др. Эффективность применения энетросорбентов при выращивании молодняка крупного рогатого скота в техногенных зонах России. //Аграрная Россия. № 5, 2004. - С. 4548.
162. Хитин и хитозан: получение, свойства и применение. //Под редакцией К.Г.Скрябина, Г.А.Вихоревой, В.П.Варламова. М.: Наука, 2002. -368с.
163. Хитозан: нераскрытый веер возможностей. Выпуск № 1. М., 2003. С.17. '
164. Червинец В.М. Изменение микробиоценоза пари воспалительных и эрозивно-язвенных поражениях пищевода, желудка и двенадцатиперстной кишки и пути его коррекции. Автореферат диссертации док.мед.наук (03.00.07 микробиология). Москва, 2002 г., с. 43.
165. Червинец В.М., Бондаренко В.М., Смоленская Л.П., Албулов А.И. Ацилакт и пищевой хитозан в лечении язвенной болезни: Мат: VIII съезда
166. Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. -2002.-С. 273-274.
167. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса. //Вопросы питания, 1999, № 2. С. 32-39.
168. Шинкарев С.М. Разработка и усовершенствование промышленных технологий получения препаратов на основе хитозана для лечения и профилактики болезней животных. Дисс. на соискание учен.степ, канд.биол.наук, Щелково, 2001. 124с.
169. Эмануэль Н.М. Химическая физика старения и стабилизации полимеров. М: Химия. 1982. С. 282.
170. Эрнст JI.K., Злочевский Ф.И., Ерохин В.А., Клецкер Н.Г. и др. Пчеловодство, № 5, 2001. С. 51-57.
171. Adams M.R., Hall C.J. Growth inhibition of food-born patogens by lactic and acetic acids and their mixtures //Int.J. Food Sein. Technol. 1988. V. P. 287-292.
172. Affitives, antibiotics and probioties: Choices for the future. Poultry intern vol 35, № 4, 1996. P. 34-39.
173. Allan G.G., Petron M. Chitin and Chitosan: Sources, Chem., Biochem., Phys. Prop., and Appl. //Proc. 4th Int. Cont. Trondhum. 1989. - P. 443-466.
174. Argulles-Monal W., Peniche C.C. Preparations of novel polyampholyte from chitosan and citric acid //Macromol. Chem. Rapid. Commun. V.14, № 12. -1993.-P. 735-740.
175. Barry R. Goldin. Healt benefits of probioties. British Jornal of Nutrition, 1998. 80, Suppl. 2 P. 203-207.
176. Berth G., Dautzenberg H. The degree of acetylation of chitosans and its effect on the chain conformation in aqueous solution //Carbohydr. Polym. V.47. -2002.-P. 39-51.
177. Berton F.F., Adickes E.D. Chitosan: effects on wound healing in urogenital tissue: preliminary report //J. Urology. 1988. - Vol. 140. - P. 1134-1137.
178. Bross G. Colloid chemistry in microencapsulation technology. Sverdlovsk: Oural University Press, 1991.- 171p.
179. Byun H.G., Kim Y.T., Park P.J., Kim S.K. Chitooligosaccharides as a novel fl-secretase inhibitor //Carbohydr. Polym. V.61. - 2005. - P. 198-202.
180. Cachi Prof.T. Gradual release of anti-caner drugs using chitosan //Techno Japan. V.22, № 5. - 1989. - P. 1100.
181. Chatov L., Trenev N. Probioties Publishing Group, Northamptonshive, England, 1990.-P. 141-142.
182. Chen R.H., Chang J.R., Shyur J.S. Effects of ultrasonic conditions and storage in acidic solutions on changes in molecular weight and polydisersity of treated chitosan. //Carbohydr. Res. V.299. - 1977. - P. 287-294.
183. Chung Y.C., Su Y.P., Chen C.C. //Acta. Pharmacol. Sin. 2004. -V.25. - № 7. — P. 932-936.
184. Cokcaliscan C., Gursoy N., Alcan M. Chitosan-based vaccine delivery system for immunization against the foot and mouth disease //Advances in chitin science. Antalia, 2007. V.10, P.231-236.
185. Crary R.S., Taylor, Christine M. Williams. Effects of probiotics and prebioties on blood lipids British Jornal of Nutrition, 1988. P. 225-230.
186. Domzny J.G., Roberts G.A.F. Evaluation of infared spectroscopic techniques for analysing chitosan. //Macromol. Chem. V. 186, № 8. - 1985. - P. 1671-1677.
187. Dutkicwicz Y., Szosland L., Kukharka M. Structure-bioactivity relationship of chitin derivatives. The effect of solid chitin derivatives on blood coagulation //J.Bioact. and Compat. Polym. V.5, № 3. - 1990. - P. 293-304.
188. Dutkicwicz Y., Yudkicwicz L., Kucharka M. Some properties of chito-san-heparin complex //33rd IUPAC Int. Symp. Macromol. Vontreal. - 8-13 Yuly 1990. - Bood Abstr. - P. 2609-2620.
189. Fosher B., Massoli A., Torri G. High-molecular-weight chitosan 6-0-sulfate synthesis, ESR and NMR characteridsation. //Macromol. Chem. V. 187, № 1.- 1986.-P. 2609-2620.
190. Fukamozo Y., Kramer K. Mechanism of chitin hydrolysis by thebinary chitinase system in insect moulting fluid //Insect Biochem. V. 15, № 2. - 1985. -P. 141-145.
191. Fududa H., Kikuchi Y. Polyelectrolyte Complexes of Sodium Dextran Sulfate with Chitosan. //Macromol. Chem. 118, № 10. - 1977. - P. 2895-2899.
192. Fuller. Probiotics in man and animals. A review //J.Appl. Bacteriol, 1989. V. 66, №5. P. 365-378.
193. Gamzazade A.I., Shlimak V.M., Sklar A.M., Shtikova E.V., Pavlova S.A., Rogojin S.V. //Actq Polymerica. V.36, № 8. - 1985. - P. 420.
194. Gil G., del Monaco S., Cerrutti P., Galvagno M. Selective antimicrobial activity of chitosan on beer spoilage bacteria and brewing eyasts //Biotechnology Letters. 2004. - V.26. - P. 569-574.
195. Girand-Guille M.M., Bouligand Y. Chitin-protein molecular organization in atropod. //In Chi tin in Nature and Technology. Ed. By Muzzarelli R.A.A., C.Janiaux, Gooday G.W. Plenum Près: New York and London. 1986. - P. 29-35.
196. Giambrone J J. et al. Field trials with an oil emulsion infectious bursal disease vaccine in broiler breeder pullets. //Poultry Science. V. 63. - 1984. - P. 2162-2166.
197. Grant W.D., Fermor T.R., Wood D.A. Production of bacterial cell walls during growth of agaricus bisporus on Bacillus subtillis //J. Gen. Microbiol. -V.30, № 4. 1984. - P. 761-769.
198. Guillot S.-F. Role tes probiotiques utilises on alimentation animale. C.R. Acad. Agr. Fr., 1997, Vol.83. P.87-96.
199. Hadwiger L.A. Beckman J.M., Adams M.J. Localization of fungal components in the Pea-Fusarium interaction detected immunochemically with anti-chitosan and anti-fungal cell wall antisera //Plant Physiology. V.67. - 1981. - P. 170-175.
200. Hans Selye. A yndrome Produced by Diverse Nocuous Agents. //J. Neuropsychiatry Clin Neurosci. № 10. - 1998. - P. 230-231.
201. Hirano S., Koishibara Y., Kitaura S., Yaneko T. Ghition biodégradation in sand dunes //Biochem. Syst. Ecol. V.19, 3 5. - 1991. - P. 379-384.
202. Hirano S., Kondo Y., Fuketa M. Structure and properties of some chito-san-Halogen complexes. //Chitin-chitosan Proc. Int. Conf. 2nd. 1982. - P. 57-62.
203. Hirano S., Noishiki Y. The blood compability of chitosan and N-acylchitosan //J.Biomed. Mater. Res. V. 19, № 14. - 1985. - P. 413-417.
204. Holt L.B. Quantitative studies in diphtheria prophylaxis: an attempt to derive a mathematical characherization of the antigenicity of diphtheria prophylactic. //Biometrics. V. 11, № 1. - 1955. - P. 83-94.
205. Hong Lin, Haiying Wang, Changhu Xue, Mei Ye. Preparation of chitosan oligomer by immobilized papain //Enzyme and Microbial Technology 31, 2002, № 36. P. 588-592.
206. Hua Zang, S.H. Neay. In vitro degradation of chitosan by a commertial enzyme preparation effect on molecular weight and degree of deacetilation. //Biomaterials. V. 22. - 2001. - P. 1653-1658.
207. Hudson S.M., Kim B.B. Chitosan acetate polymers. //Polym. Prepr. American Chem. Soc. V.31, № 1. -1990. -P. 629-630.
208. Isogai A. Molecular mass distribution of chitin and chitosan. //In book: Chitin handbook. Ed.: R.A.A. Muzarelli, M.G. Peter Italy: Atec, Grottamare. -1997.-P. 103-108.
209. Jay J.M. Antimicrobial properties of diacetil //Appl. Environ. Microbiol, 1982. V. 44. P. 525-532.
210. Jeon Y.J., Kim S.K. Production of chitooligosaccharides using an ultrafiltration membrane reactor and their antimicrobial activity. //Carbohydr. Polym. -V. 41.-2000.-P. 133-141.
211. Juang R-S., Shao H-J. A simplified equilibrium model for sorbtion of heavy matal ions from aqueous solutions on chitosan. //Water Research. V. 36, № 12. - 2002. - P. 2999-3008.
212. Kaifu K., Komai T. Wetting characterstics and blood clothing on surfaces of acylated chitins. //J.Biomed. Mater. Res. V. 16, № 6. - 1982. - P. 757766.
213. Kameyama H.; Sekiguchi T. Manufacture of water-soluble chitosan. JP 02 22, 301,1990.
214. Kauss H., Jeblick W., Young D.H. Chitin deacetylase from the plant pathopgen colletotrichum lindemuthianum. //Plant Sci. Lett. V. 28. - 1982/1983. -P. 231.
215. Kawashima Y., Kasai A. Preparation of a prolonged release tablets of aspirin with chitosan. //Chem. And Pharm. Bull. V. 33, № 5. - 1985. - P. 21072113.
216. Kea-Yong K., Dong-Sun M. Wound covering material from chitosan-N-vinylpyrrolidone copolymer. //YUPAC 32th Int. Symp. Macromol., Kyoto. -1988.-P. 105.
217. Kikuchi Y., Kubota N. Permeability control of polyelectrolyte complex membrane Including chitosan derivative as component. //Bull. Chem. Soc. Jap. -V. 61, № 8. 1988. - P. 2943-2974.
218. Kim K.K., Escobedo J.O., St.Luce N.N., Rusin O., Wong D., Stongin R.M. Postcolumn HPLC detection of monosaccharides with a chemosensor. //Organic Letters. V. 5, № 26. - 2003. - P. 2007-5010.
219. Kochanska B., Kedzia A. Suscebility of Candida, Geotrichum and Rhodotorula to chitosan ascorbat //Chitosan in Pharmacy and Chemistry. Eds.: R.A.A.Muzzarelli, C. Muzzarelli. Atec. Italy. 2002. P. 165-170.
220. Komazawa H., Saiku J., Nishikawa N., Yoneda I. //Clin. Exp. Metastasis.-V. 11, №6.- 1993.-P. 482-491.
221. Kumar A.B.V., Gowda L.R., Tharanthan R.N. Non-specific depoly-merization of chitozan by pronase and characterization of the resultanr products. //Eur. J.Biochem. V. 271. - 2004. - P. 713-723.
222. Kurita K. Studies on Chitin. IV.Evidence for Formation of Block and Random Copolymers of N-acetyl-L-glucosamine and D-glucosamine by heteroand homogeneous hydrolyses. //Macromol. Chem. V. 178. - 1977. - P. 31973202.
223. Kurita K., Ikikawa M., Ishizeki S., Jujisaki H., Iwakura I. Studies on chitin. VIII. Modification reactions of chltin in highly swollen state with aromatic cyclic carbohylic acid anhydrides. //Macromol. Chem. V. 183. - 1982. - P. 11621166.
224. Latlief.S.L. Effects of chitin and its derivativer as coagulation aid. //J. Appl. Polym. Sei. V. 27. - 1982. - P. 4467-4470.
225. Lilly D.M., Stillwell R.H. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms //Science, 1965, V. 147. P. 747-748.
226. Lim S.-H., Hudson S.M. Review of chitosan and its derivatives as an-timicrobal agents and their uses as textile chemicals. //J. Macromol.Sei. V. 43, № 2.-2003.-P. 223-269.
227. Lin H., Wang H., Xue C., Ye M. Preparation of chitosan oligomer by immobilized papain //Enzyme and Microbial Technology. V.31, 2002. - P. 588592.
228. Liu X.F., Guan Y.L., Yang D.Z., Li Z., Yao K.D. Antibacterial action of chitosan and carboxymethylated chitosan //J.Appl. Polym. Sei. V.79, 2001. -P. 1324-1335.
229. Lopatin S.A., Ilyin M.M., Pustobaev V.N., Bezchetnikova Z.A., Var-lamov V.P., Davankov V.D. Mass-soectromeric analysis of N-acetylchitooligosaccharides prepared through enzymatic hydrolysis of chitosan. //Anal. Biochem. V. 227. - 1995. - P. 285-288.
230. Malaeh M., Charlet G., Arul J. Depolymerisation of chitosan. //In book: Chitin and chitosan in life and science. Ed.: T. Uragimi, K. Kurita, T. Fukamizo. Tokyo: Kodasha Scientific LTD. 2001. - P. 28-35.
231. Malewska-Bartcsk M., Zetany Т. Badania nad wykorzystanien chito-sanu z kryla arttyczeniu medycznym. //Pr. Inet. Wtok. №31. -1981. - P. 87-102.
232. Miyasakl S., Ihii R., Nadai T. The use of chitin and chitosan as a drug carriers. //Chem. And Pharm. Bull. V. 91, № 10. - 1981. - P. 3067-3069.
233. Moore G.K., Roberts G.A.P. Reaction of chitosan. II. Preparation and reactivity or N-acyl derivatives of chitosan //Int. J. Biol. Macromol: V.3, 1981. — P. 292-296.
234. Muzzarell R.A.A., Tanfani F. N-permethylation of chitosan and the preparation of N-trimethylchitosan iodide. //Carbohydr. Polym. V. 5, № 4. -1985.-P. 297-307.
235. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C., Tarsi R., Miliani M., Gabbanelli F., Cartolari M. Fungistatic activity of modified chitosans against Saprolignia parasitica //Biomacromolecules. V. 2, 2001. - P. 165-169.
236. Muzzarelli R.A.A. Chitin. Oxford: Pergamon Press. 1977. - 309p.
237. Muzzarelli R.A.A. et al. Partial depolimerization of chitosans with aid of papain. //Chitin enzymology. Edited by Muzzarelli R.A.A., Atec. Italy. 2001. -P. 63-71.
238. Muzzarelli R.A.A. Хитозан /Пер. С англ. Н.Новгород: Вектор ТиС, 2001.-С. 196-197.
239. Ottoy М.Н., Varum K.M., Christensen B.E., Anthonsen M.W., Smids-rod O. Preparative and sise-exclusion chromatography of chitosans. //Carbohydr. Polym. -V. 31. 1996. - P. 253-261.
240. Pandit S., Cevher E., Gulrez Zariwala M., Somavarapu S., Oya H. Enhancement of immuno response of HbsAg loaded poly (L-lactic acid) microspheres against Hepattitus В through incorporation of alum and chitosan //J.Microencapsul, 2007.-24 (6). P.25-28.
241. Park, Pyo-Jam, Lee H., Kim S. Preparation of heterochitooligosaccha-rides and their antimicrobisl activity on Vibrio parahaemolyticus //J.Microbiol. Biotechnol. V.14, № 1, 2004. - P. 41-47.
242. Parker R.B. Probiotics the other half of the antibiotics story //Anim. Nutrition and Health., 1974. V. 29. P. 4-8.
243. Parova J., Kumprecht I., Robosova E. The effect of probioties based on Bacllus CIP 5832 on utility and ecolomical pavamaters in duck fattening. Zivo-cisna Vyroba. 199, R 39. P. 11.
244. Pat. 4, 804, 750 USA, CI. С 07 H 1/00. Protection of water-soluble chi-tin-oligomers by partial hydrolysis of chitin/Nishimura Tatsumi, Eto Eiichl, Ya-mada Toyofumi (USA). № 382-456; 13.07.90; 24.06.92.
245. Pat. 4, 950, 751 USA, CI. С 07 H 1/00. Depolymerisation and sulfation of polysaccharides /Naggi A., Torri G. (USA). № 536-128; 2.06.89; 21.08.90.
246. Pat. 2, 640, 628 France, CI. С 07 H 13/02. Preparation of B-(l-4)-olygomers of 2-acetamido-2-deoxyglucoses and a-galactoses as drags /Defaue C., Gadelle A., Pedersen C. (France). 16.12.88; 22/01/90.
247. Pat. 4, 952, 618 USA. CL A 61 15/00, С 08 L 1/00. Hydrocolloidal adgesive composition /Olsen Roger A. (USA). № 189614; 3.05.88; 28.08.90.
248. Pat. 4, 952, 618 USA. CI A 61 L 15/00, С 08 L 1/00. Hydrocolloidal adhesive composition /Olsen R.A. (USA). № 524117; 3.05.88; 28.08.90.
249. Pat. 6060429. Composition and method for controlling plants diseases caused by fungi. /Ben-Shalom Noach, Elad Yigal, Fallik Elazar, Pinto Rivka. 09.05.2000.
250. Pat. 6306835. Biocidal chitosan derivatives. /Daly, William H., Manuszak-Guerrini, Melissa А. Заявл. 16.09:1998, опубл. 23.10.2001.
251. Pat. 6492350. Chitin oligosaccharides and/or chitosan oligosaccharides for preventing or treating common cold or treating pain. /Konno, Allen I., Gauthier, Jay H., Matahira, Yoshiharu. Заявл. 12.01.2001. Опубл. 10.12.2001.
252. Pat. 6391318. Vaccine compositions including chitosan for intranasal administration and use thereof. //Ilium Lisbeth, Chatfield Steven Neville. Заявл. 01.06.1998, опубл. 21.05.2002.
253. Patterson J.A., Orban S.I., Sutton A.L., Richards G.N. Selektive enrichment of bifidobacteria in the intestinal tract of broilers by termally produced
254. Kestoses and effect on broiler perfomance. Poultry Sc., 1997, vol. 76, № 3. P. 497-500.
255. Rabbea E.I., Badawy M.E.-T., Stevens C.V., Smagghe G., Steurbaut W. Chitosan as antimicrobal agent: applications and mode of action. //Biomacromolecules. V. 4, № 6. 2003. - P. 1457-1465.
256. Radhika Desikan, Sohekia A.-H.-Makerness, John T.Hancock, Steven J.Neil. Regulation of the Arabidopsis Transcriptome by Oxidative Stress. Plant Physiol.-V. 127, 2001.-P. 159-172.
257. Ramisz A. et al. The influence of chitosan on health and production in sheep //Rosz Nauk. Zoot, 1998. № 25. - P.207-214.
258. Reinicke B., Bluemel R., Giesbrecht P. Reduced degradabillty by ly-sozyme of staphylococcal cell wassl after chloramphenical treatment. //Arch. Microbiol. V. 99, № 23. - 1983. - P. 184.
259. Richards R.L., Hayre M.D., Hockmeyer W.T., Alving C.R. Liposomes, lipid A, and aluminum hydroxide enhance the immune response to a synthetic malaria sporozoite antigen //Infection Immunology. № 56(3), 1988. - P. 682-686.
260. Rhoades J., Roller S. Antimicrobal actions of degraded and native chitosan against spoilage organisms in laboratory media and foods //Appl. Environ. Microbiol. V. 66, № 1, 2000. - P. 80-86.
261. Roberts R.L., Cabib E. Serratia marcesces chitinase: one-step purification and use for the determination of chitin. //Anal. Biochem. V. 127. 1982. - P. 402.
262. Roller S., Covill N. The antifungal properties of chitosan in laboratory media and apple juice. //Int. J. Food Microbiol. V. 47, № 1-2. - 1999. - P. 67-77.
263. Sasaki С., Kristiansen A., Fukamizo Т., Varum K.M. Biospecific fractionation of chitosan. //Biomacromolecules. V. 4. - 2003. - P. 1686-1690.
264. Savard Т., Beaulieu C.,Boucher I., Champagne C.P. Antimicrobal action of hydrolyzed chitosan against spoilage yeasts and lactic acid Bacteria of fermented vegetables //J.Fool Prot. V. 65, № 5, 2002. - P. 828-833.
265. Sawayanagi Y., Nambu N. Use of chitosan for substained-release pre-porations of water-soluble drugs. //Chem. And Pharm. Bull. V. 30, № 11.— 1982.-P. 4213-4216.
266. Schatz C., Viton C., Delair Т., Pichot C., Domard A. Typical physico-chemical behaviors of chitosan in aqueous solution. //Biomacromol. V. 4. -2003.-P. 641-648.
267. Shepherd R., Reader S., Falshaw A. Chitosan Functional properties Givcoconj J., 1997, Vol. 14, № 4. P. 535-542.
268. Shoib H.K., Sayed A.N., Sofony S.A. Response of broiler chicks to probiotic (pronifer) supplementation. Assinf. Vet. Med. 7, V. 36, № 71, 1996. P. 104-114.
269. Sirica A.E., Woodman R.G. Aggregation of leucomic cells In vitro by chitosan and derivatives //Fed.Proceed. V. 29, № 2, 1970. - P. 396-411.
270. Smith J., Wood E., Dornish M. Effect of chitosan on epithelial cell tight junctions //Pharmaceutical Research. 2004. - V.21. - № l. - P.43-49.
271. Sorlier P., Denuziere A., Viton C., Domard A. Relation between the degree of acetylation and the electrostatic properties of chitin and chitosan. //Biomacromolecules. V. 2, № 3. - 2001. - P. 765-772.
272. Sorlier P., Viton C., Domard A. Relation between properties and degree of acetylation of chitosan: role of aging. //Biomacromolecules. V. 3. - 2002. - P. 1336-1342.
273. Suzuki K., Mikami Т., Okawa Y. Antitumor effect of N-hexaacetylchitohexaoze and chitohexose. //Carbohydr. Res. V. 151. - 1986. - P. 403-408.
274. Takahahi K., Akiba Y., Matsuda A. Effect of a probiotika on immune responses in boiler chick unter different sanitary conditions or immune activations. Anim. Sc. Technikol, 1997, Vol. 68, № 6. P. 537-544.
275. Tan-Tian R., Ynoue K., Mashida Y., Sannad Т., Nagai T. Chitin and chitosan derivatives for directly compressed tablets of water-soluble drug. //J. Pharm. Sci. and Technol. V. 48, № 4.- 1988. - P. 318-321.
276. Terbojevich M., Cosani A. Molecular weight determination of chitin and-chitosan. //In book: Chitin handbook. Ed.: R.A.A. Muzarelli, M.G. Peter Italy: Atec, Grottamare. 1997. - P. 87-101.
277. Tian C., Jun Y., Rongnan X., Yan X. Water-solubility of partly N-acetylated chltosans. //Chi. J. Appl. Chem. V. 6, № 3. - 1989. - P. 90-92.
278. Tizard I.R. Veterinsty immunology. An Introducion. Six edition. -2000. - 482p.
279. Tsai G.-J., Su W.-H., Chen H.-C., Pan C.-L. Antimicrobal activity of shrimp chitin and chitosan from differenttreatments offish preservation. //Fisheries Science.-V. 68, № 1,2002.-P. 170-177.
280. Tsai G.-J., Hwang S.-P. In vitro and in vivo antibacterial activity if shrimp chitosan against some intestinal bacteris. //Fisheries Sci. V. 70. - 2004. -P. 675-681.
281. Tsai G.-J., Zhang S.L., Shieh P.L. Antimicrobal activity of a low-molecular-weight chitosan obtained from cellulase digestion of chitosan. //J. Food Prot. V. 67, № 2. - P. 396-398.
282. Uchida Y. Antibactireal activity by chitin and chitosan //Food chemical. 1988. - V.2. - P.22-29.
283. Ura W.H., Doszi J., Keknan P.B. Antacid and antiulker properties of the polysaccharide chitosan in the rat. //Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. V. 115, № 4. - 1964.-P. 1108-1112.
284. Usami Y., Okamoto Y., Munami S. Et al. Chitin and chitosan induce migration of bovine polimorhonuclear cells. J. Vet. Med. Sci., 1994, Vol. 56. P. 761-762.
285. Wang M., Ganquan H. A novel preconcentration technique using crosslinked chitosan for the determination of mercury by CV AAS. //Frtssenius Journal of Analytical Chemistry, 7/1997, Vol. 358 (7/8)/ P. 856-858.
286. Wang W., Bo S., Li ., Qin W. Determination of the Mark-Housink equation for chitosans with different degree of deacetylation. //Int. J. Biol. Macro-mol.-V. 13, №5.- 1991. -P. 281-285.
287. Yamada H., Imoto T. A convinient ¿yntl>esis of glicolchitin, a substrate of lysozime. //Carbohydr. Res. V. 92, № l. - 1981. - P. 160-163.
288. You H.J., Park K.H., Kim Y.H., Kim Y.J., Choi J.H., Lee S.H. Separation and purification of low molecular weight chitosan using multi-step membrane separation process. US Patent 5.730.876.
289. Young M.E., Bell R.L., Carroad P.A. Kinetics of Chitinase production. Chitin hydrolysis. //Biotechnol. And Bioeng. V. 15, № 2. - 1985. - P. 141-145.
290. Yang F., Cui X., Yang X. Interaction of low-molecular-weight chitosan with mimic membrane studied by electrochemical methods and surface plas-mon resonance. //Biophys. Chem. V.99, № 1, 2002. - P. 99-106.
291. Zhang M., Tan T., Yuan H., Rui C. Insecticidal and fungicidal activities of chitosan and oligo-chitosan. //J. Bioact. Compat. Polym. V. 18. - 2003. - P. 391-400.
-
Крыжановская, Елена Викторовна
-
доктора биологических наук
-
Щёлково, 2008
-
ВАК 03.00.23
- Фармако-токсикологическая оценка препарата "Ильметин" и изучение его эффективности при диспепсии новорожденных телят
- Фармакокоррекция нитроксидергических процессов, морфобиохимического и иммунологического статуса у телят при бронхопневмонии и диспепсии
- Фармако-токсикологическая оценка и терапевтическая эффективность препарата "Трисульфан" при желудочно-кишечных болезнях телят
- Оценка лечебно-профилактической эффективности пробиотиков при диспепсии новорожденных телят
- Физиолого-биохимические и продуктивные показатели песцов при включении в рацион препаратов "Сувар", "Янтарос плюс" и "Комбиолакс"
