Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологически активные вещества шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) при интродукции в условиях in vitro
ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Биологически активные вещества шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) при интродукции в условиях in vitro"

На правах рукописи

003054442

ОКЛАДНИКОВА Наталия Николаевна

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО (.SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI) ПРИ ИНТРОДУКЦИИ И В УСЛОВИЯХ IN VITRO

03.00.05-ботаника 03.00.12 - физиология и биохимия растений

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск

-2007

003054442

Работа выполнена на кафедре физиологии растений и биотехнологии ГОУ ВПО Томский государственный университет и в лаборатории интродукции лекарственных растений Сибирского ботанического сада Томского государственного университета

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор

Карначук Раиса Александровна

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, Харина Татьяна Георгиевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор,

Олонова Марина Владимировна

кандидат биологических наук, доцент

Минич Ирина Борисовна

Ведущая организация: Центральный Сибирский ботанический

сад, г. Новосибирск

Защита состоится «Ь> марта 2007 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.267.09 при Томском государственном университете по адресу: 634050 г. Томск, просп. Ленина, 36.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Томского государственного университета

Автореферат разослан ««&?» января 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

В.П. Середина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время растительное сырьё служит источником более трети всех лекарственных средств (Завражнов, 1993). Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi) семейства яснотковых (Lamiaceae Lindl.) - одно из древнейших растений традиционной медицины Китая, Монголии, Японии, Кореи, Дальнего Востока (Базарон и Асеева, 1984; Минаева, 1991; Kopp, а. о., 2003). Ареал данного вида сокращается, а в Приморье, Читинской области и Республике Саха (Якутия) шлемник байкальский включен в региональные Красные книги. В связи с тем, что лекарственным сырьем S. baicalensis являются корни, происходит уменьшение численности данного вида. Надземная часть шлемника байкальского изучена недостаточно, несмотря на то, что именно в ней происходят первичные этапы синтеза биологически активных веществ (ВАВ) и их предшественников.

Существует несколько путей получения ценного и дефицитного лекарственного сырья: интродукция и создание искусственных плантаций; метод культуры тканей и клеток лекарственных растений. Промышленные культуры, по сравнению с ресурсными заготовками гарантируют компактность размещения площадей, получение лекарственного растительного сырья стандартного качества, значительное увеличение биомассы растений в сочетании с высокой концентрацией БАВ. Технология in vitro позволяет получать экологически чистое сырьё круглый год, независимо от климатических условий и трудностей сбора сырья, увеличивать выход БАВ, регулируя их накопление в культуре. Учитывая особенности данных путей получения БАВ, представляет интерес исследование фитохимических особенностей S. baicalensis при интродукции и в культуре in vitro.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было исследование морфобиологических особенностей и динамики накопления биологически активных веществ S. baicalensis при интродукции и в культуре in vitro. Для достижения поставленной цели были выдвинуты следующие задачи:

1. Исследовать ритм роста и развития разновозрастных растений S. baicalensis;

2. Определить степень изменчивости и взаимосвязи морфологических признаков при исследовании надземной части шлемника байкальского в условиях интродукции;

3. Изучить некоторые особенности репродуктивной биологии S. baicalensis при интродукции: длительность цветения соцветия и цветка, фертильность пыльцы; семенную продуктивность (СП) и качество эремов, как показатели степени адаптации семенного размножения данного вида к конкретным условиям;

4. Получить каллусную культуру шлемника байкальского, исследовать динамику роста каллусной культуры 5. baicalensis на модифицированных питательных средах;

5. Выявить сезонную динамику накопления БАВ (аскорбиновой кислоты, углеводов, флавоноидов и дубильных веществ) S. baicalensis по морфологическим группам сырья;

6. Изучить динамику накопления аскорбиновой кислоты и флавоноидов в каллусной культуре 5. baicalensis.

Защищаемые положения.

1. Обоснование возможности возделывания и перспективности S. baicalensis как ценного лекарственного растения в результате изучения ритмологических, морфологических, репродуктивных особенностей вида в условиях интродукции.

2. Накопление биологически активных веществ в надземной части шлемника байкальского является основой рационального использования лекарственного сырья данного вида.

3. Каллусная культура S. baicalensis - продуцент биологически активных веществ. Физиологически активные вещества (фитогормоны и гуминовые кислоты) значительно влияют на рост каллусной культуры шлемника байкальского и накопление в пей флавоноидов и аскорбиновой кислоты.

Научная новизна. Впервые изучены адаптационные возможности S. baicalensis при интродукции на юге Томской области и выявлены ритмологические, антэкологические и морфобиологйческие особенности данного вида в новых условиях произрастания. Проведено комплексное исследование динамики накопления аскорбиновой кислоты, саХаров, флавоноидов и дубильных веществ, которое позволит расширить их физиологической роли. Впервые изучена динамика накопления аскорбиновой кислоты и влияние фитогормонов на её содержание в каллусной культуре шлемника байкальского.

Практическая значимость. Результаты настоящей работы могут быть использованы при разработке ресурсосберегающих методов сбора лекарственного сырья S. baicalensis в естественных местообитаниях и технологии возделывания его на юге Томской области. На основе анализа морфологических признаков и показателей семенной продуктивности были отобраны особи для создания высокопродуктивной агропопуляции. Результаты фитохимического исследования S. baicalensis свидетельствуют о возможности комплексного и рационального использования как надземной, так и подземной части растения для нужд фармацевтической промышленности. Каллусная культура шлемника байкальского является продуцентом аскорбиновой кислоты и флавоноидов, а также может быть основой для получения суспензионной культуры данного вида.

На экспериментальном участке Сибирского ботанического сада Томского госуниверситета создана плантация S. baicalensis, площадью 150 м2. Результаты исследований используются при чтении курсов: «Биотехнология лекарственных растений», «Фитохимия», «Избранные главы биохимии».

Личный вклад соискателя. Автором проведена экспериментальная работа и интерпретация результатов. Постановка задач, решение методических проблем осуществлялось совместно с профессором, доктором биологических наук P.A. Карначук, старшим научным сотрудником СибБС ТГУ кандидатом биологических наук Т.Г. Хариной.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены: на молодежной конференции «Исследования молодых ботаников Сибири»

(Новосибирск, 2001); Международном совещании «Проблемы охраны растительного мира Сибири» (Новосибирск, 2001); XI Съезде русского ботанического общества «Ботанические исследования в Азиатской России» (Новосибирск, 2003); VI Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004); III Молодежном научном семинаре «Биоразнообразие природных и антропогенных экосистем» (Екатеринбург, 2004); VI Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Пущино-на-Оке, 2005), XII Международном симпозиуме «Нетрадиционное растениеводство. Эниология. Экология» (Алушта, Украина, 2005); Международной конференции, посвященной 60-летию Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН «Ботанические сады как центры сохранения биоразнообразия и рационального использования растительных ресурсов» (Москва, 2005); III Международной конференции, посвященной 120-летию Гербария им. П.Н. Крылова Томского государственного университета (Томск, 2005) V Международной научно-практической конференции «Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии» (Барнаул, 2006), VII Открытой окружной конференции молодых ученых «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2006), Заочной электронной конференции Российской Академии Естествознания (Москва, 2006 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, 1 статья в ведущем научном журнале из перечня ВАК.

Структура диссертации и её объем. Диссертационная работа изложена на 175 страницах, содержит 30 рисунков, 11 таблиц и 9 приложений. Работа состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 332 источников, из них 206 отечественных и 126 иностранных.

Список условных обозначений: 2,4-Д - 2,4-дихлорфенилуксусная кислота; АК - аскорбиновая кислота; БАВ - биологически активные вещества; БАП - 6-бензиламинопурин; ВИЧ - вирус иммунодефицита человека; ВС -восстанавливающие сахара; ГСО - Государственный стандартный образец; ГПС - гидролизуемые полисахариды; ГК - гуминовые кислоты; ДВ -дубильные вещества; ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота; ИУК -индолилуксусная кислота; КК - корневой каллус; КСП - коэффициент семенной продуктивности; J1PC - лекарственное растительное сырье; ЛК -листовой каллус; MS - среда Мурасиге и Скуга (1962 цит. по Бутенко, 1999); ОП1ЛК, ОП1СК, ОП2ЛК, ОП2СК, ОП2КК - каллусные культуры, полученные от разных эксплантов; ПС - полисахариды; ПСП - потенциальная семенная продуктивность; РСП - реальная семенная продуктивность; СибБС ТГУ -Сибирский ботанический сад Томского государственного университета; СК .стеблевой каллус; СП - семенная продуктивность; ФС - фенольные соединения.

Благодарность. Автор выражает глубокую благодарность научным руководителям профессору, д-ру биол. наук, Р.А. Карначук и старшему научному сотруднику СибБС, канд. биол. наук Т.Г. Хариной за внимательное и чуткое отношение, помощь в интерпретации полученных результатов исследования. ,

Искренне признательна доценту, канд. биол. наук Р.И. Лещук за консультации при освоении методик фитохимического анализа и за моральную поддержку на протяжении всего периода исследований.

Благодарю доцента канд. биол. наук, С.В Пулькину за помощь в освоении методик по определению фертильности пыльцы; канд. мед. наук E.H. Амосову за предоставленный метчик байкалеина, профессора д-ра хим. наук, В.И. Литвиненко за предоставленный ГСО байкалина; сотрудников и студентов кафедры физиологии растений и биотехнологии ТГУ, лаборатории лекарственных растений СибБС ТГУ.

1.ШЛЕМНИК БАЙКАЛЬСКИЙ КАК ИСТОЧНИК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

Первая глава состоит из четырех разделов. В первом разделе представлены данные об ареале и экологии шлемника байкальского, доказана необходимость охраны популяций и рационального использования лекарственного сырья S. baicalensis. Во втором разделе описаны основные действующие вещества шлемника байкальского, характерные, главным образом, для корней. В третьем разделе описано историческое развитие фармакологических и клинических исследований препаратов S. baicalensis. Четвертый раздел посвящен интродукционным исследованиям и введению шлемника байкальского в культуру in vitro.

2.ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объект исследования. Объектами исследования являются интродуцированные растения и каллусная культура шлемника байкальского. Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis Georgi) из семейства яснотковых (Lamiaceae Lindl.) — многолетнее поликарпическое растение. Является перспективным источником Б AB для фармацевтической промышленности.

Физико-географическая характеристика района исследований. В этом разделе описаны особенности климата юга Томской области и состава почв учебно-производственного участка Сибирского ботанического сада Томского государственного университета.

Методы исследований. Методы интродукционных исследований. В семилетнем эксперименте находились растения 1, 2, 3, 4, S лет, выращенные через рассаду и посевом в открытый грунт. В первой декаде июня высевали стратифицированные и нестратафицированные эремы для определения влияния стратификации на грунтовую всхожесть эремов i1. baicalensis. Во второй декаде июня высаживали рассаду S. baicalensis в открытый грунт широкорядным способом - междурядья шириной 60 см, между растениями в ряду - 20 см. Ритм роста генеративного побега трехлетних растений шлемника байкальского определяли еженедельным измерением высоты генеративного побега в течение мая, июня и июля. Для исследования ритма развития использовали метод фенологических фаз И.Н. Бейдеман (1974). Накопление сырой массы

определяли в фазах вегетации, бутонизации, цветения и плодоношения. Количество ранне-, средне-, и позднецветущих растений шлемника байкальского устанавливали в фазе массового цветения на разновозрастных особях. Длительность цветения соцветия и отдельного цветка S. baicalensis определяли по методике А.П. Пономарева (1960) в фазе массового цветения на 25 маркированных соцветиях от момента раскрытия первого цветка до момента завязывания плода и опадения венчика.

Морфометрический анализ шлемника байкальского проводили на 17-45 маркированных разновозрастных особях в фазе цветения (Методика исследований при интродукции лекарственных растений, 1984) по следующим параметрам: число генеративных побегов на особь, высота генеративного побега, число листовых узлов на генеративном побеге, длина и ширина листовой пластинки 10 яруса, число побегов второго, третьего порядка, число цветков, располагающихся на побегах первого, второго и третьего порядков у растений.

Для определения степени фертильности свежесобранной пыльцы S. baicalensis использовали метод дифференциальной окраски по методике P. Alexander (1969). Микрофотосъемку проводили с помощью микроскопа Olympus СХ41 и фотоаппарата Olympus Т7070 при увеличении х 400. Семенную продуктивность (СП) определяли по общепринятым методикам (Вайнагий, 1974; Методические указания по семеноведению интродуцентов, 1980) с учетом того, что плод шлемника байкальского представлен четырехэремным ценобием. При изучении СП за элементарную единицу выбрали генеративный побег, вычисляли потенциальную семенную продуктивность (ПСП), реальную семенную продуктивность (РСП) и коэффициент семенной продуктивности (КСП). При изучении морфобиологических особенностей эремов S. baicalensis определяли массу 1000 эремов, их размеры (длину и ширину), всхожесть и энергию прорастания (Методика исследований при интродукции лекарственных растений, 1984). Для определения влияния стратификации на прорастание эремов S. baicalensis их закладывали на 10, 20, 30 суток стратификации при температуре 0-4 °С. После завершения срока стратификации определяли всхожесть и энергию прорастания стратифицированных и нестратифицированных (контроль) эремов (Методика исследований при интродукции лекарственных растений, 1984).

Культивирование каллусиой культуры. Для введения в культуру in ritro эремы S. baicalensis стерилизовали 30 секунд в 80 % этаноле, затем в течение 10 минут в 0,1 % растворе сулемы и трижды промывали в стерильной дистиллированной воде. Затем простерилизованные эремы помещали на питательную среду Кнопа. Экспланты листьев, сегменты стеблей и корней растений, выращенных в условиях in vitro, помещали на модифицированную питательную среду с минеральной частью по прописи Мурасиге и Скуга (MS) (1962, цит: по Бутенко, 1999), с тиамином (1 мг/л), никотиновой кислотой (0,5 мг/л) и пиридоксином (0,5 мг/л), сахарозой (30 г/л) и агаром (9 г/л). Затем каллусную культуру пассировали на среде с различным содержанием индолилуксусной кислоты (ИУК), кинетина.

Совместно с С.В. Песяком была получена каллусная культура ОП1 из эксплантов листьев (ОП1ЛК) S. baicalensis. В июне 2004 г. была предпринята вторая попытка получить каллус от эксплантов интактных растений S. baicalensis. Апикальные почки побегов второго порядка пятилетнего растения шлемника байкальского стерилизовали и эксплантировали на питательную среду MS, содержащей 1 мг/л ИУК и 0,1 мг/л кинетина. Культура ОП2ЛК была отмечена как наиболее интенсивно растущая. На 6-ом субкультивировании на основе ОП2ЛК исследовали влияние фитогормонов на ростовые процессы и накопление биологически активных веществ: аскорбиновой кислоты и флавоноидов.

При исследовании морфологических особенностей ткани S. baicalensis, её окрашивали метиленовым синим, а затем на давленых препаратах (Шамина и др., 1966) определяли длину и ширину 100 клеток. Объем клеток вычисляли по формуле Ю.А. Целникер и А.Т. Мокроносова (1978: цит. по Головацкой и Карначук, 1999). Для определения ростового индекса каплусной культуры шлемника байкальского взвешивали каллус перед культивированием и после, отмечая отношение прироста сырой и воздушно-сухой биомассы к начальной массе каллуса. Для определения воздушно-сухой массы каллуса S. baicalensis взвешивали сырой каллус, а затем высушенный (10 повторностей) в термостате на чашках Петри первоначально при t = 110° С в течение 15 минут, а затем при t = 55 - 60° С в течение 12 часов.

Аналитические методы. Сбор лекарственного проводили в фазе вегетации, бутонизации, цветения и плодоношения. Для определения БАВ растения шлемника байкальского разделяли на морфологические группы сырья: листья, стебли и корни. В свежесобранном растительном материале определяли содержание свободной и связанной аскорбиновой кислоты (АК). Для получения средней пробы сырье сушили 15 минут в термостате при t = 110115 °С, а затем 10-12 часов при t = 55-60 °С.

Определение содержания свободной и связанной АК (витамина С), основанное на восстановлении 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, проводили титрометрическим способом (Методы биохимического исследования растений, 1987). Микрометод определения Сахаров в растительном сырье был основан на восстановлении феррицианида калия редуцирующими сахарами в щелочной среде до ферроцианида, последний в присутствии желатина образует с сернокислым окисным железом устойчивую синюю окраску (Швецов, Лукьяненко, 1968: цит по Методы биохимического исследования растений, 1987). Дубильные вещества определяли пермангонатометрическим методом с предварительным осаждением дубильных веществ (ДВ) раствором желатина (Андреева и Калинкина, 2000). На современном этапе исследований, разработана методика определения суммарного содержания флавоноидов в корнях и корневищах шлемника байкальского - временная фармакопейная статья Rizomata el radices Scutellariae baicalensis (ВФС У 42-1-92); для надземной массы методика не разработана. В связи с этим были использованы две различные методики спектрофотометрического определения суммарного содержания флавоноидов в экстрактах шлемника байкальского. Экстрагирование лекарственного сырья

проводили трижды на водяной бане с 70 % этанолом. Первая методика спектрофотометрического определения суммарного содержания флавоноидов, основана на комплексообразовании флавоноидов с хлоридом алюминия (III), измерение оптической плотности исследуемых растворов проводили на длине волны X = 415 нм. Содержание флавоноидов рассчитывали с учетом поглощения ГСО рутина в 96 % этаноле. В основе второй методики -временная фармакопейная статья для корней и корневищ шлемника байкальского. Оптическую плотность исследуемых растворов измеряли на длине волны X = 279 нм, расчет суммарного содержания флавоноидов проводили с учетом поглощения ГСО байкалина в 70 % этаноле. Содержание флавоноидов в каллусной культуре определяли только по второй методике.

Методы обработки данных. Статистические процедуры проводили с помощью электронных таблиц «MS Exell 2003» и пакета программ «STATISTICA 6.0.». Графические объекты обрабатывали при помощи пакета программ «Adobe Photoshop CS 8.0.». При статистическом анализе вычисляли среднее арифметическое анализируемых параметров, X, стандартную ошибку среднего, .Vj. При исследовании объема клеток каллусной культуры вычисляли среднее кубическое (Лакин, 1980). На гистограммах высота столбцов характеризует среднее арифметическое, а планки погрешности - доверительный интервал при уровне доверительной вероятности Р = 0,05. Для определения уровня изменчивости признаков (Мамаев, 1969: цит по Магомедмирзаеву, 1990) при проведении морфометрического анализа вычисляли коэффициент вариации V%. При сравнивании выборок данных использовали непараметрический критерий Манна-Уитни (U-тест) (Р < 0,05). Оценку линейной связи между количественными переменными проводили с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмана-rs(P< 0,05).

3. МОРФОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI ПРИ ИНТРОДУКЦИИ

При изучении ритма роста генеративного побега S. baicalensis установили, что наиболее интенсивный рост побега приходился на последнюю декаду июня и суточный прирост составлял 2,24 см. Наибольший прирост биомассы был отмечен в фазе плодоношения. Для растений шлемника байкальского, выращенных через рассаду, было характерно значительное накопление надземной биомассы, которое у двулетних достигало 59,5 ± 3,8 г (Рис. 1а), а у трехлетних растений - 157,1 ± 8,7 г (Рис. 16). Масса корня была меньше: у двулетних растений она составляла 22,4 ± 1,4, а у трехлетних растений она составляла 60,2 ± 8,2 г. Следствием интродукции шлемника байкальского в более северном регионе, относительно его естественных местообитаний, стало снижение апикального доминирования, образование значительного количества паракладиев в течение всего генеративного периода.

Шлемник байкальский проходит полный цикл сезонного развития в условиях юга Томкой области, он вегетирует, цветет и плодоносит. Отмечено, что 50 % растений, высаженных через рассаду, зацветают уже в первый год жизни, и только 11 % посевных растений (Харина и др., 2003). При этом у

однолетних особей шлемника байкальского отмечена тенденция к сокращению фазы вегетации и увеличению периода плодоношения, что отражает ритмояогячсские особенности адаптации данного вида к условиям интродукции.

Рисунок 1 - Изменение надземной и подземной сырой массы 5 Ьшсе^епхк в процессе сезонного развития: 1 - вегетация, 2 - бутонизация, 3 — цветение, 4 -плодоношения, а - у двулетних особей, б -• у трехлетних особей

[ ¡ачало генеративного периода многолетних растений шлемника байкальского приурочено ко второй декаде июля, а плодоношение и созревание эрсмов - к августу и сентябрю, что согласуется с темпами сезонного развития в природных местообитаниях (Фруентов, 1987). По существующей классификации, за основу которой взят характер ритма развития зеленой ассимилирующей поверхности (Серебряков, 1964; Голубев. 1965; Борисова, 1965), 5. Ьшса1еп51$ относится к длительновегетирующим летнезеленым растениям с зимним типом покоя. По типу цветения шлемник относится к С ред н е-П О 3 Д н е л етн И М растениям (Голубев, 1965). Стабильность последовательности смены фенофаз свидетельствует о приспособленности вида к конкретным условиям.

Исследования разновозрастных особей по срокам цветения показали наличие 5-17 % раннецветущих, 60-85 % средне цветущих и 5-16 % позднецветущих особей. Раннецветущие особи имеют большое значение при культивирован ни растений в зоне рискованного земледелия. Тпким образом, особенности ритма развития шлемника байкальского в условиях ШПрОдукций проявились в длительности фаз, в гетерогенности особей по срокам зацветания и также в ускорении темпов развития.

При проведении морфологического анализа разновозрастных особей от 1 до 5 лет было выявлено, что двулетние и трехлетние особи Ьтсакти, культивируемые рассадиым способом, являются наиболее продуктивными. На первом году жизни рассадных растений 5 ЬтсЫеШШ формируется один генеративный побег высотой 24-33 см, нарастающий моноподиально, несущий 12-19 листовых узлов, побегов второго порядка - 2-7 шт., побегов третьего порядка 1-3 шт. (Рис. 2) (Окладникова и др., 2005). Для двулетних растений,

ж ^ 1К0 т

20 £

2 .1 4

Фс но фазы

! 2 3 4

Феиофазы

ОН масса корня, г

ЬХ^ы масса надземной части растертия, г

независимо от способа выращивания характерно увеличение числа генеративных побегов, числа листовых узлов, побегов второго и третьего порядков. Отмечено, что двулетние растения, выращенные через рассаду, не уступают трехлетним растениям, выращенным в посевах, по количеству генеративных побегов, в],1 соте. V трехлетних рассадных растений происходит значительное увеличение количества генеративных побегов, которое может достигать 9-14 шт. на особь. В результате проведенных исследований установлено, что растения, выращенные через рассаду (Рис. 2а), но сравнению с растениями, культивируемыми н посевах (Рис. 26), характеризуются более высоким развитием побегов первого, второго и третьего порядков, что приводит к значительному увеличению надземной массы.

60 т

Т _

60

20

2 3

BoipacT растений

20 -

О 4-

2 3

Софист р.1 и

.о 250% х

I 200%

л X CL

в 150% ■ £

I 100%

5

I

Й 50%

„250%

сши

0% —

LA aJ

Возраст растений

2 3

Возраст рааений

ЕЭ Число генеративных побегов, шт. О Высота, см

0 Число листовых узлов, шг QЧисло побегов второго порядка, шг О Число побегов третьего порядка, шт

Рисунок 2 - Морфологические признаки и коэффициенты вариации соответствующих признаков и у разновозрастных растений Sbaicaknsis: а -морфологические признаки растении в посевах, б - морфологические признаки растений, выращенных через рассаду; в - коэффициенты вариации признаков растений в посевах; г - коэффициенты вариации признаков растений, выращенных через рассаду

Повышенный, высокий, очень высокий и аномально высокий уровень коэффициента вариации отмечен для побегов первого (К= 34,3- 53,2 %), второго (К= 41,0 - 115,9 %) и третьего (более 100 %) порядка, а низкий и средний - для высоты генеративного побега (У~ 9,2 - 24,0 %) и числа листовых узлов (К=8,5-21,3 %) (Рис. 2 в, 2г) (Харина и др., 2005).

При проведении корреляционного анализа была установлена положительная связь между следующими морфологическими признаками: высотой генеративных побегов и числом листовых узлов, высотой генеративных побегов и числом побегов второго порядка, шириной листовой пластинки и числом побегов третьего порядка. Кроме этого были отмечены значимые уровни гг для следующих пар признаков: число генеративных побегов и ширина листа, высота генеративного побега и длина листа, число листовых узлов и число побегов второго порядка, длина и ширина листа.

Таким образом, при проведении морфологического анализа разновозрастных особей впервые выявлены возрастные изменения, определен уровень изменчивости и взаимосвязи морфологических признаков Я. Ьа1са1е11.^1.ч. Отмечено, что в условиях интродукции уже трехлетние растения шлемника байкальского способны образовывать больше 8 побегов, в естественных зарослях образование такого количества побегов происходит только к пятнадцати годам (Атлас ареалов..., 1976).

В естественных условиях у 5. Аа/са/еи^« было отмечено только семенное возобновление (Атлас ареалов..., 1976; Дулепова, 1986; Банаева, 1994), в связи с этим представляло интерес изучить особенности семенного размножения данного вида. При исследовании продолжительности и ритмики цветения соцветия ¿я/ся/едай выявлена акропетальная последовательность: первыми зацветают бутоны в нижней части флоральной единицы, что обуславливает наложение фаз бутонизации и цветения, цветения и плодоношения, а одном соцветии могут быть бутоны, цветки и плоды. Продолжительность распускания цветков в соцветии составляет 14-16 дней, отдельного цветка - 5-8 дней. Для генеративного побега шлемника байкальского свойственны ритмологические характеристики истинных синфлоресценций (Кузнецова, 1992): акропетапьное зацветание в пределах флоральной единицы и базипетальное для паракладиев в пределах синфлоресценции.

В формировании семян и наследственных свойств большую роль играет пыльца (Поддубная-Арнольди, 1982). Для пыльцевых зерен шлемника байкальского характерны апертуры в виде трех борозд, которые имеют четко выраженную полярность и проходят меридианно от полюсов. При изучении фертильности пыльцы, выявлено, что с возрастом происходит снижение этого показателя, так у трехлетних растений она составляет 98,7 % (Харина и др., 2001), в то время как у семи-, восьми- и девятилетних 88-92 %.

Семенная продуктивность (СП) - один из показателей адаптации вида к конкретным условиям обитания, определяющий возможность внедрения новых видов и сортов, ранее не произраставших в данном регионе (Некрасов, 1980). За элементарную единицу СП выбран генеративный побег и выделены следующие элементы: число генеративных побегов на особь, число цветков первого второго и третьего порядков на генеративный побег, число эремов собранных с

соответствующих особей. При изучении СП 5. Ьтса1етш установлено, что с возрастом происходит увеличение показателей семенной продуктивности. Так, у однолетних растений количество цветков составляет 38,2 ± 6,7 шт. на генеративный побег, ПСП - 152,6 ± 26,9 шт., РСП - 56,6 ± 11,5 шт. и КСП -37,1 %. У двулетних растений увеличивается число цветков на генеративном побеге - 249,3 ± 36,7 шт., возрастает ПСП - 997,2 ±146,7 шт., РСП - 634,0 ± 114,6 шт., значительно повышается КСП - 63,6%. У трехлетних особей количество генеративных побегов у трехлетних равно 14 шт.; число цветков на генератавном побеге - 327,7 ± 24,5 шт.; ПСП - 1310,7 ± 98,0 шт.; РСП - 836,2 ± 67,0 шт.

В ходе многолетних исследований установили, что растения, выращенные из семян собственной репродукции, обладают более высокими показателями КСП. Так, двулетние растения шлемника байкальского характеризовались увеличением этого показателя от 45 % до 64 %, а трехлетние растения - с 54 % до 64 %, что свидетельствует о процессе адаптации данного вида к условиям интродукции (Окладникова и Харина, 2005).

Наличие семян - один из важных показателей соответствия условий произрастания биологическим потребностям вида. В условиях интродукции на юге Томской области отмечен высокий КСП у двух и трехлетних особей шлемника байкальского, который достигает 64 %, по сравнению с 28 % в естественных местообитаниях (Пшеничкина и Банаева, 1988). На основе данных морфологического анализа и исследования семенной продуктивности была определена интенсивность развития признаков у разновозрастных маркированных растений (2004) и отобраны особи с максимальной реализацией признаков для последующего размножения в условиях юга Томской области.

Показатели семенной продуктивности дают в большей степени количественную характеристику плодовитости особи. Качество полученного материала определяли проверкой на всхожесть. Лабораторная всхожесть эремов /ад/со/етк вео^, хранившихся полгода, составляла 79,5 % (Харина и др., 2001). Всхожесть эремов 5. Ъа\са1епз\8 после 10 дней стратификации была равна 98,5 %, после 20 дней - 99 %, после 30 дней - 98,5 %. Нестратифицированные эремы прорастали 14-15 суток, стратифицированные-8-9 суток. При изучении температурного режима прорастания эремов шлемника байкальского, выявили наиболее высокую всхожесть при 10° С в темноте, максимальную энергию прорастания (54 %) отмечали на 7 день, всхожесть достигала 68 %.

Грунтовая всхожесть эремов шлемника байкальского была Невысока II составляла 16,5 %, предварительная стратификации увеличивала её ДО 22,0 %. Подзимний Посев сухими эремаММ был неэффективен,

4;КУЛЬТУРА ТКАНИ ШЛНМНИКД БАЙКАЛЬСКОГО

Каплусная культура 5. Ьтсакт^я была получена на эксплантах листьев, стеблей и корней на модифицированной среде МБ с различными концентрациями стимуляторов роста. Каллус образовывался на местах поранения листьев или среза у сегментов стеблей и корней. Ткани

эпигенетически различных эксплантов отличались скоростью каллусогенеза. Листовой каллус образовывался в течение 40-50 суток, корневой - 60-80 суток, стеблевой - 20-30 суток. Стеблевые экспланты были более чувствительны к высоким концентрациям ауксинов (1-2 мг/л), которые способствовали образованию вначале побегов, а затем через 10-15 суток и корней. Препарат гуминовых кислот (ГК) совместно с ИУК и кинетином стимулировал каплусообразование у листового и корневого каллуса S. baicalensis. Применение более низких концентраций 2,4-Д (0,2 мг/л) приводило к дедифференцировке листового каллуса. В 2004 г. были получены каллусные культуры ОП1ЛК (из листьев) и ОП1СК (из стеблевых сегментов). В 2005 году была получена новая интенсивно растущая культура ОП2ЛК.

При определении объема клеток ОП1ЛК и ОП1СК S. baicalensis отмечали, что размеры клеток каллуса шлемника байкальского составляли 20-35 мкм, объем клеток - 7000-33000 мкм3. На первых этапах культивирования клетки стеблевого каллуса на средах с относительно высоким содержанием ИУК (1 мг/л) и добавкой ГуК (0,1 мг/л), растягивались, так, что соотношение длины клетки к её ширине составляло 1,8-2,2.

При исследовании динамики ростовых процессов каллусной культуры ОП1ЛК S. baicalensis в течение 10-ого пассажа на среде MS, содержащей 0,2 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина (Рис. За) отмечено, что в первые 15 суток культивирования объемы клеток увеличивались. К 20 суткам происходило резкое снижение (до 10447 мкм3), а затем снова наблюдали подъем до максимального значения на 25 сутки (20740 мкм3).

25000

о 15000

н

4J

510000

s

S 5000 -О

О

1 2 3 4 5

4,0

3,5

я 3,0

о 2,5 И о.

В 2,0

и

3 1,5

г>

~ 1,0 -0,5 -0,0

б 7 Сутки

10 15 20 25 30 35 Сутки

2,00

1,50 -

Ú 5 1,00

>, D.

0,50 -

0,00

Ú4

Сутки

Рисунок 3 - Динамика ростовых процессов каллусной культуры ОП1ЛК 5. baicalensis в течение 10-го субкультивирования на среде МБ, содержащей 0,2 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина: а - изменение объема клеток; б - динамика индекса роста, в — накопление воздушно-сухой массы

Удвоение воздушно-сухой массы происходило к 20-м суткам культивирования, а после 25-ых суток кривая роста выходит на плато, дальнейшие изменения массы были незначительны. На 15 сутки отмечали снижение воздушно-сухой массы, что могло быть связано с катаболическими процессами. В течение 30 суток с 1 литра среды можно получить 1,27-1,41 г воздушно сухой массы каллусной культуры.

Н А. Трофимова (1982) предложила использовать высокие концентрации ауксинов - 2 мг/л, Однако при таких высоких концентрациях ауксинов мы наблюдали потемнение к гит у сн ой ткани. К! связи с этим необходимо было оценить влияние различных концентраций фитогормонов (ИУК и кинетина) на размеры и объем клеток, индекс роста и накопление воздушно-сухой биомассы каллусной культуры 5. Ьшса1еп.ч1$ ОП2ЛК (Рис, 4).

Было установлено, что наибольшие размеры и объем клеток характерны для каллусной ткани, выращенной на среде, содержащей 0,2 мг/л ИУК и 0,5 мг/л кинетина (Рис. 4 а). Максимальный индекс роста составлял 10,1 и был отмечен на среде с 0,5 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина (Рис, 46), Наибольшее количество воздушно-сухой массы также выявили на среде, содержащей 0,5 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина (6,65 г воздушно-сухой массы/л среды). Вероятно, большой объем клеток на с-раде, с ОД мг/л ИУК и 0,5 мг/л шнешна обусловлен их оводненностью.

ИУК

□ KmiCTHII U,2 мг/л В Кшн'ткм 0.5 мг/л ■ Кинстмн [ мг/л

Рисунок 4 - Влияние различных концентраций ИУК и кинетина на размеры клеток каллусной культуры ОП2.ЛК шлемника байкальского на 30 сутки 6 субкультивирования на модифицированной среде MS: а - объем клеток, б -индекс роста, в - накопление воздушно-сухой массы

5.БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА SCUTELLARIA BAICALENSiS GEORG1 ПРИ ИНТРОДУКЦИИ И В КУЛЬТУРЕ IN VITRO

Содержание аскорбиновой к И сжтгь! (АК) определяли в двулетних (2004, 2005) И трехлетних (2002, 2005 гг.) растениях 5, ЬаШа1гпШ [РИС, 5). Установлено, что наибольшее количество свободного и связанного В(гГаШШа С в растениях, выращенных через рассаду, накапливалось в Листьях в фазы вегетации или бутонизацйи И могло достигать 182 мг/100 г сырой массы (Рис, 5 г). В условиях интродукции АК наиболее интенсивно синтезировалась на первых этапах развития генеративных побегов (Окладникова и др., 2006). В стеблях шлемника байкальского накапливалось значительно меньше АК, а максимум был приурочен к фазе бутонизации, и составлял 43,9 мг/100 г сырой массы. В корнях отмечали два максимума: и фазе бутонизации и фазе

плодоношения. У двулетних растений в фазе бутонизации содержание ЛК было равно 21 мг/100 г сырой массы (2004 г.) к 26 мг/100 г сырой массы (2005 г.), в фазе плодоношения - 24,07 мг/100 г сырой массы и 27,9 мг/100 г сырой массы. Вероятно, это могло свидетельствовать о накоплении этого витамина. Сравнительный анализ двух- и трехлетних растений S. baicaletisis (2005 г.) показал, что в двулетних растениях содержится не меньше витамина С, чем в трехлетних.

Рисунок 5 - Динамика накопления АК в двулетних (2004 и 2005 гг.) и трехлетних (2002, 2004, 2005 гг.) растениях S. baicalensis: а - в листьях двулетних растений; б - в стеблях двулетних растений; в - в корнях двулетних растений; г - в листьях трехлетних растений; д — в стеблях трехлетних растений; е - в корнях трехлетних растений

Изучение динамики накопления Сахаров в надземной части трехлетних растений S. baicalensis показало, что максимальное количество восстанавливающих Сахаров (ВС) было приурочено к фазе цветения (Рис, 6) — 72 мг/г (2002 г.) и 68 мг/г воздушно сухой массы (2005 г.) (Рис. 6а). В стеблях ВС было меньше - 30 мг/г (2002 г.) и 24 мг/г воздушно-сухой массы (2005 г.) в фазе бутонизации (Рис.6 6). Максимальное содержание ВС в корнях было отмечено в фазе вегетации и составляло 26 мг/г воздушно-сухой массы (Рис. 6в), а затем происходило снижение к фазе плодоношения до 12 мг/г воздушно-сухой массы.

Гидролизуемые полисахариды (ГПС) запасались и откладывались во всех частях растений S. baicalensis в фазе плодоношения, так в листьях их содержание достигало 50 мг/г (2002 г.) или 40 мг/г воздушно-сухой массы (2005 г.) (Рис. 6 г). В стеблях ГПС было меньше - 33 мг/г {2002 г.) и 29 мг/г воздушно-сухой массы (2005 г.) (Рис. бд). В корнях максимальное количество ГПС в фазе плодоношения составляло 34 мг/г воздушно-сухой массы (2005 г.) (Рис. бе).

й 100 1 801 60 " |

| 20 I 0

О г

2002 2 005

201)2 2005

560 ■

|Г % £20 ¡5 =

ч С

30

У" II»j J J

, I i "lilft

' Л V V ' T

Д Д

2002 2005

о о

2002 200з

II

5 S

зо -

25 20 -15 10 s-1

iM

Я Вегетация С Бутомюодкя

□ I J.№ ГСНИС ы; 'пидо поивши;

2005

Рисунок 6 — Динамика накопления восстанавливающих сахарок (ВС) и гилролизуемых полисахаридов (ГПС) в трехлетних растениях & Ьа1са1ещ1$'. а -ВС в листьях; б - ВС в стеблях; в - в корнях; г - ГПС в листьях; д - ГПС в стеблях; е - ГПС в корнях

Качественный анализ дубильных веществ (ДВ) показал, что в лекарственном сырье Я. Ьшсак/к'^ присутствовали преимущественно конденсированные ДВ, что согласовывалось с данными Л.М. Дьяконовой (1953), При количественном определении ДВ в пересчете на танин установили максимальное содержание ДВ в корнях в фазе бутонизации у двулетних (10,0%) и трехлетних (13,0 %) растений (Рис. 7в). Содержание ДВ в фазе плодоношения согласован ось с данными Н.П. Макс юти ной с соавторами (1985) и составляло у двулетних растений - 2,4 %, у трехлетиях растений - 4,9 %. В надземной части наибольшее содержание ДВ было отмечено в листьях у двулетних растений в фазы бутонизации (4,6 %) и цветения (5,2 %) и у трехлетних растений — в фазе бутонизации (4,6 %) (Рис. 7а), В стеблях шлемника байкальского происходило увеличение содержания ДВ к фазе бутонизации до 1,9 % (Рис. 76).

При определении флавоноидов в 5. Ьа1ба1еш13 были использованы две методики. Обе методики показали увеличение флавоноидов в фазе цветения в листьях двулетних растений шлемника байкальского и их содержание варьировало от 8,1 % до 13,6 % и от 9,2 % до 11,7 %от воздушно-сухой массы (Рис. 8 а, 8г; 9 а, 9г). У трехлетних растений максимальное количество ф л нво но идо в в листьях отмечали в фазе бутонизации - 14,0% и в фазе цветения -11,5 % от ьоздушно-еухой массы.

2 I »ла 3 года

£ Й 2,5%

я а

I 2,0%

® 1 1.5% £ и 1,0%

га О

* | о,5%

I

<-1 5

Й

£

2 года 3 года 3

е И5%

° а § | »*

» й-| | з%

« | о%

мЖ

2 3 года

Я Во^тиция

(Л Ёугониавцил

□ Цветение

□ Плодоношение

Рисунок 7 - Динамика накопления дубильных веществ (ДВ) у двухлетних и трехлетних растений 5 Ьыса/епш: а - в листьях; б - в стеблях; в - в корнях

14 12

^ ю

а « | *

° 2 о

111

200 2004 2 0(15

2001 2004 2005

>1 о

о Я

з 25,0 1 ¡20,0 115,о ^

г-ш,о

с-1

0,0

2001 2004 2005

Рисунок 8 - Динамика накопления флавоноидов 5й&абгса/еи,т& (методика 1, основанная на комплексообразоваиии флавоноидов с хлоридом алюминия (III) и стандартизации по ГСО рузина): а - в листьях двулетних особей; б - в стеблях двулетних особей; в — в корнях двулетних особей, г - в листьях трехлетних особей; д - в стеблях трехлетних особей; е - в корнях трехлетних особей

Ч ¿В 1

у

у □ Цпсгеннс

° □Плодоношение

Рисунок 9 - Динамика накопления флавоноидов в двулетних растениях £ Ьа»са1епш (методика 2, основанная на стандартизации то ГСО байкалик&у. а - в листьях двулетних растений; б- Й стеблях двулетний растений; в — в корнях двулетних растений, г - п листьях трехлетних растений; д - в стеблях трехлетних растений; е - в корнях трехлетних растений

Содержание флавоноидов в стеблях £ ШШса1еп$1$ было невелико и составляло 2-5 % от воздушно сухой массы. При исследовании динамики накопления флавоноидов в корнях отмечали, что использование разных методик давало сопоставимые результаты, наблюдались общие тенденции. Так, использование методики 1, основанной на стандартизации по ГСО рутина и комплексообразовании флавоноидов с А1С13) показало, что в наибольшее количество флавоноидов у двулетних растений отмечалось в фазе цветения от 19 % до 21 % от воздушно сухой массы; у трехлетних - от 24 % до 28 % от воздушно сухой массы (Рис. Й). Применение Методики 2, основаннаЙ на стандартизации но ГСО баи Калина, выявила также увеличение количества флавоноидов в фазе Цветения, но у Двулетних растений оно составляло 25-29 % и у трехлетних растений - 21 %. (Рис. 9). V двулетних растений, йырашенных чрез расеаду, наблюдалось незначительной снижение суммарное содержания флавоноидов в фазу плодоношения по сравнению с трехлетними особями. Для трехлетних растений из посевов (2004 г.) было отмечено более низкое содержание флавоноидов в корнях, чем у рассадных растений, но характерно увеличение к фазе плодоношения до 22 % .

При изучении содержания АК в каллусной культуре 5. Ьаса{епхи ОП1ЛК впервые было выявлено, что максимальное количество этого витамина

отмечалось !ta 25 сутки субкультивирования и составляло 17,2 мг/100 г сырой массы (Рис. 10). В первые 20 суток количество этого витамина не превышало 8 мг/100 г сырой массы.

ц 24

о о 20

s 2 16.

о

< S 12

« 1 1 S

Iй 4

U

И

з 1 '4%

а '>2% ,1 1,0% £ 0,8% ï 0,(i% -1 0,4% -10,2% " 0,0%

3 20

g g я г

Ci, 3

H

ч в"

s а

и &

— Г

Сутки

Суттги

Сутки

Рисунок 10 - Динамика накопления биологически активных веществ каллусной культуры 5 Ьаюа&т^ь ОП1ЛК 10 су б кул ьти ви р о ван и е; а -аскорбиновой кислоты, б - содержание флавоноидов, в - выход флавоноидов с 1 л питательной среды

На уровень АК в каллусной культуре шлемника байкальского значительно влияли фитогормоны. Так, с увеличением уровня ИУК происходило увеличение АК в каллусной культуре шлемника байкальского ОП2ЛК с 12,0 мг/100 г сырой массы на среде с 0,2 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина до 20,5 мг/100 г сырой массы на среде с 1 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина. При повышении концентрации кинетина в среде наблюдалось снижение содержания витамина С в каллусе (Рис, 11а).

3

и

ИУК ОКннстин 0.2 мг/л

■ Ккнетин 0,5 мг/л

■ Кипами I мг/л

0,2 мг/л

0,5 мг/л

1мг/л

loo -,

80 4 60 \ 40 4

| 20 1 £ о ■

¿Г

ИУК

П Кннстин 0,2 мг/л ■ Кимстмн 0,5 мг/л К Khhcimk I мг/л

0.2 иг/л

0,5 мг/л

ИУК и Киистин 0,2 иг/л ■ Кя к пп 0,5 мг/л Я KMHtTHH I мг/л

Рисунок 11 - Влияние различных концентраций ИУК и кинетина в питательной среде на накопление биологически активных веществ в каллусной культуре 5. ЬтсЫеп.т ОП2Л1С: а - аскорбиновой кислоты, б - флавоноидов, в -выход флавоноидов с 1 литра питательной среды

При изучении динамики накопления флавоноидов в каллусной культуре (ОГП Л К) 5, Ьа/'Сакпзц, установили, что в процессе культивирования содержание флавоноидов постепенно возрастало к 30-ым суткам до 1,21 % от воздушно сухой массы (Рис. 106, 10в). Это количество было сопоставимо с содержанием флавоноидов в стеблях интактного растения. Предполагаем, что

снижение в накоплении флавоноидов и аскорбиновой кислоты на 20 сутки, возможно связано с наиболее интенсивными ростовыми процессами в этот период, уменьшением размеров клеток (Рис. 3). Исследование влияния фитогормонов на накопление флавоноидов в каллусной культуре ОП2ЛК S. baicalensis показало, что наибольшее количество флавоноидов синтезировалось в каллусе, выращенном на модифицированной питательной среде MS, содержавшей 1 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина (Рис. 116, 11в). Таким образом, была изучена динамика накопления флавоноидов и АК, выявили, что накоплению этих веществ предшествовала фаза интенсивного роста. Было подобрано оптимальное сочетание фитогормонов для максимального выхода БАВ.

ВЫВОДЫ

1. В условиях юга Томской области шлемник байкальский проходит все стадии развития. Обнаружено явление снятия апикального доминирования генеративного побега. Выявлена ритмологическая, временная поливариантность агро-попуции шлемника байкальского.

2. Для разновозрастных особей шлемника байкальского выявлены признаки обладающие разными уровнями изменчивости. Низкий уровень изменчивости характерен для высоты растений и числа листовых узлов; высокий уровень изменчивости - для числа побегов второго и третьего порядка. Установлена корреляционная зависимость между высотой генеративных побегов и числом листовых узлов; высотой генеративных побегов и числом побегов второго порядка; числом побегов третьего порядка и шириной листа среднего яруса;

3. Для интродуцированных растений Scutellaria baicalensis Georgi установлена акропетальная последовательность распускания цветков в пределах фло-ральной единицы и базипетальная для паракладиев синфлоресценции. Показан высокий процент фертильности пыльцы, который снижается с возрастом растений. С возрастом увеличиваются все показатели семенной продуктивности, что связано с увеличением числа генеративных побегов на особь и числа цвет-коб на генеративном побеге. Эремы шлемника байкальского обладают высокой лабораторной и низкой полевой всхожестью. Стратификация увеличивает всхожесть на 20 % относительно контроля.

4. Интенсивный синтез и накопление биологически активных веществ (аскорбиновой кислоты, Сахаров, дубильных веществ, флавоноидов) в надземной массе Scutellaria baicalensis Georgi приурочен к фазе бутонизации, а в подземной - к фазе цветения. Выявлено, Что содержание биологически активных веществ существенно изменяется в ходе сезонного развития.

5. Использование двулетних растений шлемника байкальского, культивируемых через рассаду, как наиболее перспективных, обусловлено их ритмологиче-скими и морфобиологическими особенностями, высоким содержанием биологически активных веществ.

6. Получена каллусная культура шлемника байкальского из листовых экс-плантов на модифицированных питательных средах. Наибольший прирост биомассы отмечен на 20 сутки субкультивирования.

7. Максимальное накопление биологически активных веществ в каллусной культуре шлемника байкальского отмечено на 25-30 сутки субкультивирования. Этому предшествует фаза интенсивного роста. Максимальное содержание аскорбиновой кислоты, флавоноидов и высокие темпы роста каллусной культуры Scutellaria baicalensis Georgi обнаружены на среде MS, содержащей 1 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина.

По теме диссертации опубликовано 11 работ:

1.Харина Т.Г., Окладникова Н.Н., Гусева А.В. Некоторые особенности выращивания Scutellaria baicalensis Georgi в лесЕЮй зоне Западной Сибири // Тезисы молодежной Конференции «Исследования молодых ботаников Сибири», Новосибирск, февраль 2001. - Новосибирск, 2001. - С. 85-86.

2. Окладникова Н.Н., Харина Т.Г., Лещук Р.И. Накопление флавоноидов в надземной части шлемника байкальского с Сибирском ботаническом саду // Проблемы охраны растительного мира Сибири: Тезисы докладов Международного совещания. - Новосибирск, 2001. - С. 73-74.

3. Харина Т.Г., Родионова Н.Н., Лещук Р.И. Значение онтогенетических исследований для целей интродукции на примере Scutellaria baicalensis Georgi // Ботанические исследования в Азиатской России. XI Съезд Русского ботанического общества: Материалы докладов, Т.З., - Новосибирск, 2003. -С. 274-275.

4. Родионова Н.Н., Лещук Р.И., Харина Т.Г. Особенности накопления флавоноидов в шлемнике байкальском // VI Симпозиум по фенольным соединениям: Тезисы докладов:, Москва, апрель 2004. - М., 2004. - С. 77.

5. Харина Т.Г., Окладникова II.Н., Лещук Р.И., Интродукция шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) в лесную зону Западной Сибири // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования: Материалы VI международного симпозиума, Москва - Пущино, июнь 2005. -М.: Изд-во Российского ун-та Дружбы Народов, 2005. - С. 386-388.

6. Харина Т.Г., Окладникова Н.Н., Лещук Р.И. Морфобиологические и биохимические особенности шлемника байкальского при интродукции // Ботанические сады как центры сохранения биоразнообразия и рационального использования растительных ресурсов: Материалы международной конференции, посвященной 60-летию Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН (5-7 июля 2005 г. Москва). - М., 2005. - С. 517-519.

7. Харина Т.Г., Окладникова Н.Н. Новые нетрадиционные растения на юге Томской области // Нетрадиционное растениеводство. Энилогия. Экология. 2-й съезд селекционеров: Материалы XIV международного симпозиума, Алушта, 3-11 сентября 2005 года. - Семфирополь, 2005. - С. 300-303.

8. Окладникова Н.Н., Харина Т.Г., Лещук Р.И. Морфобиологические особенности Scutellaria baicalensis Georgi при выращивании в лесной зоне Западной Сибири // Проблемы изучения растительного покрова Сибири: Материалы III Международной конференции, посвященной 120-летию Гербария им. П.Н. Крылова Томского государственного университета Томск, 16-18 ноября 2005 года.-Томск: Изд-во Том. гос. ун-та., 2005.-С. 143-144.

9. Окладникова H.H., Харина Т.Г. Особенности семенной продуктивности Scutellaria baicalensis Georgi при интродукции на юге Томской области // Флора и растительность Алтая. - 2005. - Т.10 - С. 138-139.

10. Окладникова H.H., Лещук Р.И., Харина Т.Г. Динамика накопления аскорбиновой кислоты, Сахаров и дубильных веществ в шлемнике байкальском Scutellaria baicalensis Georgi) II Вестник Поморского университета. Серия естественных и точных наук - 2006. — № 4. - С. 27-32.

П.Окладникова H.H. Влияние света различного спектрального состава на накопление флавоноидов шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) // Природно-ресурсный потенциал Сибири. Интернет-конференция Российской Академии Естествознания, ноябрь, 2006. - Электронный ресурс: на сайте www.rae.ruhttp://academtour.nef/zk/openzip.php?url=arj%2F2006%Fl 1% 0kladnikova.zip&ftle=2006.1 l.-Okladnikova.pdf (режим доступа: свободный).

Тираж 100. Заказ 85. Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники. 634050, г. Томск, пр. Ленина, 40.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Окладникова, Наталия Николаевна

ВВЕДЕНИЕ.

1 ШЛЕМНИК БАЙКАЛЬСКИЙ КАК ИСТОЧНИК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

1.1 Ареал и экология Scutellaria baicalensis Georgi.

1.2 Биологически активные вещества Scutellaria baicalensis Georgi.

1.3 Фармакологические и клинические исследования препаратов Scutellaria baicalensis Georgi.

1.4 Исследование способов культивирования Scutellaria baicalensis Georgi.

2 ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Ботаническая характеристика шлемника байкальского {Scutellaria baicalensis Georgi).

2.2 Физико-географическая характеристика района интродукционных исследований.

2.3 Методы исследования.

2.3.1 Методы интродукционных исследований и in vitro.

2.3.2 Аналитические методы.

2.3.3 Методы обработки данных.

3 МОРФОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ Scutellaria baicalensis Georgi ПРИ ИНТРОДУКЦИИ.

3.1 Ритм роста и сезонного развития разновозрастных особей Scutellaria baicalensis Georgi.

3.2 Морфологические особенности Scutellaria baicalensis Georgi.

3.3 Особенности семенного размножения Scutellaria, baicalensis Georgi

4 КУЛЬТУРА ТКАНИ ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО.

4.1 Введение Scutellaria baicalensis Georgi в культуру in vitro.

4.2 Особенности каллусной культуры Scutellaria baicalensis Georgi.

5 БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА Scutellaria baicalensis Georgi ПРИ ИНТРОДУКЦИИ И В КУЛЬТУРЕ IN VITRO.

5.1 Исследование содержания аскорбиновой кислоты в интактных растениях Scutellaria baicalensis Georgi и в каллусной культуре.

5.2 Динамика накопления Сахаров в интродуцированных растениях шлемника байкальского.

5.3 Исследование динамики накопления дубильных веществ Scutellaria baicalensis Georgi при интродукции.

5.4 Особенности накопления флавоноидов шлемника байкальского при интродукции и в каллусной культуре.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологически активные вещества шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi) при интродукции в условиях in vitro"

Актуальность проблемы. В настоящее время растительное сырьё служит источником более трети всех лекарственных средств (Завражнов, 1993). Шлемник байкальский {Scutellaria baicalensis Georgi) семейства яснотковых (Lamiaceae Lindl.) - одно из древнейших растений традиционной медицины Китая, Монголии, Японии, Кореи, Дальнего Востока (Базарон и Асеева, 1984; Минаева, 1991; Корр, а. о., 2003). Ареал данного вида сокращается, а в Приморье, Читинской области и Республике Саха (Якутия) шлемник байкальский включен в региональные Красные книги. В связи с тем, что лекарственным сырьем S. baicalensis являются корни, происходит уменьшение численности данного вида. Надземная часть шлемника байкальского изучена недостаточно, несмотря на то, что именно в ней происходят первичные этапы синтеза биологически активных веществ (БАВ) и их предшественников.

Существует несколько путей получения ценного и дефицитного лекарственного сырья: интродукция и создание искусственных плантаций; метод культуры тканей и клеток лекарственных растений. Промышленные культуры, по сравнению с ресурсными заготовками гарантируют компактность размещения площадей, получение лекарственного растительного сырья стандартного качества, значительное увеличение биомассы растений в сочетании с высокой концентрацией БАВ. Технология in vitro позволяет получать экологически чистое сырьё круглый год, независимо от климатических условий и трудностей сбора сырья, увеличивать выход БАВ, регулируя их накопление в культуре. Учитывая особенности данных путей получения БАВ, представляет интерес исследование фитохимических особенностей S. baicalensis при интродукции и в культуре in vitro.

Целью настоящей работы было исследование морфобиологических особенностей и динамики накопления биологически активных веществ

S. baicalensis при интродукции и в культуре in vitro. Для достижения поставленной цели были выдвинуты следующие задачи:

1. Исследовать ритм роста и развития разновозрастных растений S. baicalensis',

2. Определить степень изменчивости и взаимосвязи морфологических признаков при исследовании надземной части шлемника байкальского в условиях интродукции;

3. Изучить некоторые особенности репродуктивной биологии S. baicalensis при интродукции: длительность цветения соцветия и цветка, фертильность пыльцы; семенную продуктивность (СП) и качество эремов, как показателей степени адаптации семенного размножения данного вида к конкретным условиям;

4. Получить каллусную культуру шлемника байкальского, исследовать динамику роста каллусной культуры S. baicalensis на модифицированных питательных средах;

5. Выявить сезонную динамику накопления БАВ S. baicalensis (аскорбиновой кислоты, углеводов, флавоноидов и дубильных веществ) по морфологическим группам сырья;

6. Изучить динамику накопления аскорбиновой кислоты и флавоноидов в каллусной культуре S. baicalensis.

Защищаемые положения.

1. Обоснование возможности возделывания и перспективности S. baicalensis как ценного лекарственного растения в результате изучения ритмологических, морфологических, репродуктивных особенностей вида в условиях интродукции.

2. Накопление биологически активных веществ в надземной части шлемника байкальского является основой рационального использования лекарственного сырья данного вида.

3. Каллусная культура S. baicalensis - продуцент биологически активных веществ. Физиологически активные вещества (фитогормоны и гуминовые кислоты) значительно влияют на рост каллусной культуры шлемника байкальского и накопление в ней флавоноидов и аскорбиновой кислоты.

Научная новизна. Впервые изучены адаптационные возможности S. baicalensis при интродукции на юге Томской области и выявлены ритмологические, антэкологические и морфобиологические особенности данного вида в новых условиях произрастания. Проведено комплексное исследование динамики накопления аскорбиновой кислоты, Сахаров, флавоноидов и дубильных веществ, которое позволит расширить их физиологической роли. Впервые изучена динамика накопления аскорбиновой кислоты и влияние фитогормонов на её содержание в каллусной культуре шлемника байкальского.

Практическая значимость. Результаты настоящей работы могут быть использованы при разработке ресурсосберегающих методов сбора лекарственного сырья S. baicalensis в естественных местообитаниях и технологии возделывания его на юге Томской области. На основе анализа морфологических признаков и показателей семенной продуктивности были отобраны особи для создания высокопродуктивной агропопуляции. Результаты фитохимического исследования S. baicalensis свидетельствуют о возможности комплексного и рационального использования как надземной, так и подземной части растения для нужд фармацевтической промышленности. Каллусная культура шлемника байкальского является продуцентом аскорбиновой кислоты и флавоноидов, а также может быть основой для получения суспензионной культуры данного вида.

На экспериментальном участке Сибирского ботанического сада Томского л госуниверситета создана плантация S. baicalensis, площадью 150 м. Результаты исследований используются при чтении курсов: «Биотехнология лекарственных растений», «Фитохимия», «Избранные главы биохимии».

Личный вклад соискателя. Автором проведена экспериментальная работа и интерпретация результатов. Постановка задач, решение методических проблем осуществлялось совместно с профессором, доктором биологических наук Р.А. Карначук, старшим научным сотрудником СибБС ТГУ кандидатом биологических наук Т.Г. Хариной.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены: на молодежной конференции «Исследования молодых ботаников Сибири» (Новосибирск, 2001); Международном совещании «Проблемы охраны растительного мира Сибири» (Новосибирск, 2001); XI Съезде русского ботанического общества «Ботанические исследования в Азиатской России» (Новосибирск, 2003); VI Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004); III Молодежном научном семинаре «Биоразнообразие природных и антропогенных экосистем» (Екатеринбург, 2004); VI Международном симпозиуме «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования» (Пущино-на-Оке, 2005), XII Международном симпозиуме «Нетрадиционное растениеводство. Эниология. Экология» (Алушта, Украина, 2005); Международной конференции, посвященной 60-летию Главного ботанического сада им. Н.В. Цицина РАН «Ботанические сады как центры сохранения биоразнообразия и рационального использования растительных ресурсов» (Москва, 2005); III Международной конференции, посвященной 120-летию Гербария им. П.Н. Крылова Томского государственного университета (Томск, 2005) V Международной научно-практической конференции «Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии» (Барнаул, 2006), VII Открытой окружной конференции молодых ученых «Наука и инновации XXI века» (Сургут, 2006), Заочной электронной конференции Российской Академии Естествознания (Москва, 2006 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, 1 статья в ведущем научном журнале из перечня ВАК.

Структура диссертации и её объем. Диссертационная работа изложена на 175 страницах, содержит 30 рисунков, 11 таблиц и 9 приложений. Работа состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 332 источников, из них 206 отечественных и 126 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Ботаника", Окладникова, Наталия Николаевна

выводы

1.В условиях юга Томской области шлемник байкальский проходит все стадии развития. Обнаружено явление снятия апикального доминирования генеративного побега. Выявлена ритмологическая, временная поливариантность агропопуции шлемника байкальского.

2. Для разновозрастных особей шлемника байкальского выявлены признаки обладающие разными уровнями изменчивости. Низкий уровень изменчивости характерен для высоты растений и числа листовых узлов; высокий уровень изменчивости - для числа побегов второго и третьего порядка. Установлена корреляционная зависимость между высотой генеративных побегов и числом листовых узлов; высотой генеративных побегов и числом побегов второго порядка; числом побегов третьего порядка и шириной листа среднего яруса;

3.Для интродуцированных растений Scutellaria baicalensis Georgi установлена акропетальная последовательность распускания цветков в пределах флоральной единицы и базипетальная для паракладиев синфлоресценции. Показан высокий процент фертильности пыльцы, который снижается с возрастом растений. С возрастом увеличиваются все показатели семенной продуктивности, что связано с увеличением числа генеративных побегов на особь и числа цветков на генеративном побеге. Эремы шлемника байкальского обладают высокой лабораторной и низкой полевой всхожестью. Стратификация увеличивает всхожесть на 20 % относительно контроля.

4.Интенсивный синтез и накопление биологически активных веществ (аскорбиновой кислоты, Сахаров, дубильных веществ, флавоноидов) в надземной массе Scutellaria baicalensis Georgi приурочен к фазе бутонизации, а в подземной - к фазе цветения. Выявлено, что содержание биологически активных веществ существенно изменяется в ходе сезонного развития.

5.Использование двулетних растений шлемника байкальского, культивируемых через рассаду, как наиболее перспективных, обусловлено их ритмологическими и морфобиологическими особенностями, высоким содержанием биологически активных веществ.

6.Получена каллусная культура шлемника байкальского из листовых эксплантов на модифицированных питательных средах. Наибольший прирост биомассы отмечен на 20 сутки субкультивирования.

7.Максимальное накопление биологически активных веществ в каллусной культуре шлемника байкальского отмечено на 25-30 сутки субкультивирования. Этому предшествует фаза интенсивного роста. Максимальное содержание аскорбиновой кислоты, флавоноидов и высокие темпы роста каллусной культуры Scutellaria baicalensis Georgi обнаружены на среде MS, содержащей 1 мг/л ИУК и 0,2 мг/л кинетина.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Окладникова, Наталия Николаевна, Томск

1. Аврорин Н.А. Переселение растений на Полярный Север. Эколого-географический анализ. -М.-Л.: Наука, 1956. 285 с.

2. Агроклиматические ресурсы Томской области / отв. ред. М.И. Черникова. -Л.: Гидрометеоиздат, 1975. 147 с.

3. Ажунова Т.А., Николаев С.М., Бакуридзе А.Д. Полисахаридный комплекс Aloe arborescens Mill как средство дополнительной терапии сахарного диабета // Растительные ресурсы.-2004. Т. 40,№ 1.- С. 76-81.

4. Александрова Н.М., Головкин Б.Н. Переселение деревьев и кустарников на Крайний Север. Эколого-морфологический анализ. Л: Наука, 1978. - С.72-80.

5. Андреева В.Ю., Калинкина Г.И. Исследование химического состава надземной массы части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. II Химия растительного сырья. 2000. - № 2. - С. 79-85.

6. Аратанян Л. А. Цитогенетические эффекты фитогормонов. Ереван: Изд-во Армянской ССР, 1989.-С. 105-110.

7. Артюшенко З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений. Плод.- Л.: Наука. 1986. - С.57.

8. Асеева Т.А., Блинова К.Ф., Яковлев Г.П. Лекарственные растения в тибетской медицине / Отв. ред. И.Ф. Сацыперова. Новосибирск: Наука, 1985. -С. 18-39.

9. П.Атанасов А. Биотехнология в растениеводстве. Новосибирск: ИЦИГ СО РАН, 1993.-242 с.

10. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений / Под ред. П.С. Чикова. М.: ГУГК. - 1976. - 340 с.

11. Базарон Э.Г., Асеева Т.А. «Вайдурья-Онбо» Трактат индотибетской медицины. 1984. - С. 116.

12. Базилевская Н.А., Мауринь A.M. Интродукция растений. Теории и практические приемы: учебное пособие. Рига: Изд-во ЛГУ им. П. Стучки. -91с.

13. Байкова Е.В. Структурные особенности соцветий в роде Salvia (Lamiaceae) II Растительные ресурсы. 2004. - Т. 40, Вып. 4. - С. 1-18.

14. Банаева Ю.А. Некоторые биологические особенности семян Scutellaria baicalensis (Lamiaceae) II Ботанический журнал. 1998. - Т.83, №6. - С.50-55.

15. Банаева Ю.А. Шлемник байкальский (Scutellaria baicalensis) экология, биология, интродукция: Автореф. дис .канд. биол. наук Новосибирск, 1994. -12с.

16. Банаева Ю.А., Пшеничкин А.Я. Элементный состав Scutellaria baicalensis И Сибирский экологический журнал. 1999. - N. 3. - С. 271-275.

17. Бандюкова В.А., Аванесов Э.Г. О строении метоксилированных флавоноидов // Химия природных соединений, 1970,№3 С.259-265.

18. Бейдеман И.Н. Методика изучения фенологии растений и растительных сообществ. Новосибирск: Наука. - 1974. - С.138.

19. Березнеговская JI.H. Выращивание лекарственных растений в Томске // Вопросы фармакогнозии. Т. 12, №5. - С.305.

20. Биоморфология и продуктивность степных растений Забайкалья / отв. ред. А.А.Горшкова. Новосибирск: Наука, 1979. - 116 с.

21. Борисова И.В. Ритмы сезонного развития степных растений и зональныхтипов степной растительности // Биология и экология целинных районов Казахстана: Труды БИН СССР, сер. 3, вып. 17. 1965. - С.64-99.

22. Ботанико-фармакогностический словарь: Справочник / под ред. К.Ф. Блиновой, Г.П. Яковлева М.: Высшая школа, 1990. - 272 с.

23. Бохински Р. Современные воззрения в биохимии. М.: Мир, 1987. -543 с.

24. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе: Учеб. пособие. М.: ФБК-Пресс, 1999. - 160 с.

25. Буторина JI. К. Календарь фенофаз лекарственных растений в центральном Приморье в условиях питомника // Ритмы сезонного развития растений в Приморье. Владивосток, 1980.-С. 145-153.

26. Бухаров В.Г. Высочин В.И. Химия и фармакологическое изучение действующих начал шлемника байкальского // 2-ое совещания по исследованию лекарственных растений Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1961. -С.22-23.

27. Бухашева Т.Г., Танхаева JI.M. Введение в культуру шлемника байкальского в условиях Бурятской АССР // Тез. докл. Всесоюз. конф. «Проблема освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока». Новосибирск, 1983. С 12-13.

28. Бухашеева Т.Г., Асеева Т.А. Шлемник байкальский в Восточном Забайкалье // Флора и растительность Алтая. 2002 - Т. 7, № 1. - С. 81-86.

29. Вайнагий И.В. О методике изучения семенной продуктивности // Бот. журнал. 1974.-Т.59, №6.- С.826-831.

30. Васфилова Е.С., Багаутдинова Р.И. Продуктивность подземных частей Echinacea purpurea и накопление в ней фруктосодержащих углеводов при интродукции в Средний Урал. // Растительные ресурсы.-2005.-Т. 41, № 1.-е. 107116.

31. Вершинин Н.В., Яблоков Д.Д. Фармакология и клиника сибирских растений с седативным и гипотензивным действием // Новые лечебныерастения Сибири их препараты: Сб. научно-иссл. работ. Вып. 2. - Томск: Изд-во Том.гос.ун-та, 1946-С. 10-16.

32. Воробьев Ю.А., Фисенко С.М. Введение в культуру шлемника байкальского в условиях юга Приморского края // Растения в муссонном климате: Материалы международной конференции посвященной 50-летию Ботанического сада ДВО РАН. Владивосток, 1998. - С. 162-164.

33. Воронова A.M., Толокнова Е.А. Шлемник байкальский как гипотензивное средство // Новые лечебные растения Сибири их препараты: Сб. научно-исследовательских работ. Вып. 2. - Томск: Изд-во Том.гос.ун-та, 1946 -С. 41-45.

34. Ворошилов В. Н. Ритм развития у растений. М.: Изд-во АН СССР, 1960.- 135 с.

35. ВФС У 42-1-92 Министерство Здравоохранения Украины Временная фармакопейная статья на корни и корневища шлемника байкальского Rizomata et radices Scutellariae baicalensis от 26 июля 1992 года.

36. Вылцан Н.Ф. Определитель растений Томской области. Томск: Ид-во Том. гос. ун-та, 1994 -С180-185.

37. Высочина Г.И. Биохимические аспекты проблем экологии интродукции и систематики: биохимические подходы к познанию разнообразия растительного мира // Сибирский экологический журн. 1999. - № 3. - С.207-211.

38. Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения М.: Высшая школа, 1983 .-340с.

39. Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990.-332 с.

40. Георгиевский В.П., Рыбаченко А.И., Казаков А.П. Физико-химические и аналитические характеристики флавоноидных соединений. Ростов: Изд-во Ростов, ун-та, 1988. - 144 с.

41. Головацкая И.Ф., Карначук Р.А. Свет и растение: Учеб. пособие.

42. Томск: Изд-во Том. ун-та, 1999. 100 с.

43. Головкин Б.Н. Переселение травянистых многолетников на Полярный Север. Эколого-морфологический анализ. -J1.: Наука, 1973.-266 с.

44. Голубев В. Н. Эколого-биологические особенности травянистых растений и растительных сообществ. М.: Наука, 1965. - 286 с.

45. Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Литвиненко В.И. и др. Шлемник байкальский: фитохимия и фармакологические свойства. Томск: Изд-во Том. ун-та. -1994.-222 с.

46. Гольдберг Е.Д., Зуева Е.П. Препараты из растений в комплексной терапии злокачественных новообразований. Томск: Изд-во Том. ун-та, 2000. -130 с.

47. Гонтарь Э.М. Годин В.Н. Морфологическое разнообразие и продуктивность Erysimum cheiranthoides L. при выращивании в Центральном Сибирском ботаническом саду (Новосибирск) // Растительные ресурсы. 2004. - Т.40, Вып. 2.-С. 52-61.

48. Горин А.Г., Максютина Н.П., Колесников Д.Г. Состав полисахарида подорожника большого // Химия и обмен углеводов. М.: Наука, 1965. -С.128-130.

49. Горовая А.И., Орлов Д.С., Щербенко О.В. Гуминовые вещества. Киев: Наук, думка, 1995. - 304 с.

50. Горшкова А.А. Биология степных пастбищных растений Забайкалья. -М.: Наука, 1966.-245 с.

51. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа / МЗ СССР. 11-е изд-е доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

52. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырьё / МЗ СССР. 11-е изд-е доп. -М.: Медицина, 1990.-400 с.

53. Государственный реестр лекарственных средств, разрешённых для применения в медицинской практике. М.: Медицина, 1982. 96 с.

54. Гребинский С.О. Витамин С и окислительные ферменты у высокогорных растений // Биохимия. 1941. - Т.6, Вып. 3. - С. 253-260.

55. Губанов И.А., Киселёва К.В., Новиков B.C. Дикорастущие полезные растения. -М.: Изд-во МГУ, 1993. С. 192-193.

56. Гуминовые вещества в биосфере / Под ред. Д.С. Орлова. М.: Наука, 1993.-238 с.

57. Гусева А.В. Введение в культуру трансформированных корней шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis) и содержание в них флавоноидов: Автореф дис . канд. биол. наук. Томск, 2000. - 15 с.

58. Девис М., Остин Дж., Патридж Д. Витамин С: химия и биохимия. -М.: Мир, 1999.-168 с.

59. Достанова Р.Х., Клышев J1.K. Изменение содержания флавоноидов и их участие в регуляции роста у растений при засолении // Фенольные соединения и их физиологические свойства.- Алма-Ата: Наука-1973-С. 52-56.

60. Дощинская Н.В. К биологии семян шлемника байкальского // Новые лекарственные растения Сибири их лекарственные препараты и применение. -Томск.-1958.-С. 15-20.

61. Дулепова Б.И. Сезонное развитие и флюктуации степных сообществ даурской лесостепи: Дисс. уч. степ, д.б.н. Чита, 1986.-438 с.

62. Дулепова Б.И. Эндемичные лекарственные растения даурских степей и их сырьевые ресурсы // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине: Тез. докладов. Улан-Удэ. - 1987. - С.60-61.

63. Думенова Е.М. Влияние шлемника байкальского на моторную хронак-сию // Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты и применение: Сб. научно-иссл. работ.-Вып. 5.-Томск: Изд-во Зап.-Сиб. отделения АН СССР, 1959,- С.89-92.

64. Думенова Е.М. К вопросу о гипотензивном действии шлемника и чистеца байкальских // Новые лечебные растения Сибири их препараты: Сб. научно-иссл. работ. Вып. 2. - Томск: Изд-во Том. гос. ун-та, 1946а - С. 32-37.

65. Думенова Е.М. К вопросу о седативном действии чистеца, шлемника байкальских и пустырника при остром отравлении стрихнином // Новые лечебные растения Сибири, их препараты: Сб. научно-иссл. работ. Вып. 2. -Томск: Изд-во Том.гос.ун-та, 19466 - С. 28-31.

66. Дьяконова Л.Н., Калашников В.А., Кочеткова З.А. Химическое исследование корней шлемника байкальского // Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты и применение.-Вып. 4-Томск: Изд-во Зап.-Сиб. отделения АН СССР,1953. С.39-42.

67. Ермаков А.И. Методы биохимического исследования растений. Л.: Колос, 1972.-456 с.

68. Ибрагимов Ф.И., Ибрагимова B.C. Основные лекарственные средства китайской медицины.-М.: Медгиз, 1960.-С.412.

69. Ивашенко А.А. Культура лекарственных растений в Западной Сибири // Растительные ресурсы Сибири, Урала и Дальнего Востока- Новосибирск: Наук, 1965.- 147-151

70. Исследование шлемника байкальского вводимого в культуру / В.Г. Воловик, Т.П. Попова, А.И. Рыбаченко и др. // Тез. Всесоюз. конф. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1989.-Т. 2.-С. 36-37.

71. Калинкина Г.И., Сальникова Е.Н., Тихонов В.Н. Методы фармакогности-ческого анализа лекарственного растительного сырья (химический анализ). Учебное пособие./ под. ред. С.Е. Дмитрука Томск, 2002. - С. 27-31.

72. Канивец Н.П., Волкова Н.В., Василенок Л.И. и др. // Докл. АН УССР,

73. Карташова Н.Н., Цитленок С.И. Гистохимические исследования цветка некоторых растений в онтогенезе в связи с процессом нектарообразования // Вопросы антэкологии: Мат-лы к симп. по антэкологии, 26-30 мая 1969, Пермь. -Л.: Наука, 1969.-23-24 С.

74. Кине Ж.-М., Сакс Р., Бернье Ж. Физиология цветения. Т.З Развитие цветков / Пер. Л.В. Ковалевой, Н.П. Матвеевой, В.З. Подольным. М.: Агропромиздат, 1991. - С. 18-116

75. Ключихина Л.И. В вопросу об охране редких видов растений Госзаповедника «Даурский» // Исследования флоры и растительности Забайкалья. -Улан-Удэ: Изд-во Бурятского Гос. ун-та, 1998. С.89-90.

76. Ковалев В.Н., Попова В.Н., Кисличенко B.C. и др. Практикум по фармакогнозии. Харьков: Изд-во НФаУ «Золотые страницы» «МТК-Книга», 2004. -191-197

77. Колонкова С.В., Запрометов М.Н. О взаимосвязи активности фенилала-нин-аммоний-лиазы и образовании полифенолов в проростках кукурузы // В кн.: Фенольные соединения и их физиологические свойства-Алма-Ата: Наука, 1973.-С. 22-25.

78. Колосович Н.П. Биология цветения и опыления шлемника байкальского в условиях Лесостепи Украины // Вшник Полтавського державного сшьськогосподарського шституту. 2000, № 2. - С. 16-18.

79. Колотилова А.И., Глушанков Е.П. Витамины (химия, биозимия и физиологическая роль). Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1976. - СЛ 55-175.

80. Красная книга республики Саха (Якутия). Т.1: Редкие и находящиеся под угрозой исчезновения виды растений и грибов / Мин-во охраны природы PC (Я), Департамент биологических ресурсов. Якутск: НИПК «Сахаполи-графиздат», 2000. - С. 208.

81. Красная книга Читинской области и Агинского Бурятского автономного округа (растения) / Редколл.: А.П. Островский и др. Чита: Стиль, 2002. -280 с.

82. Кретович В.Л. Биохимия растений: учебник для биол. факультетов ун-тов.-М.: Высшая школа, 1986. 503с.

83. Кузнецов К.А., Славнина Т.П. Почвы Сибирского ботанического сада // Бюл. Сиб. бот. сада. Томск, 1971. - Вып. 8. - С. 99-126.

84. Кузнецова Т. В. О комплементарных подходах в морфологии соцветий // Ботанический журнал. 1992. - Т.77, № 12. - С.7-24.

85. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функции. М.: Наука, 1973.264 с.

86. Куперман Ф.М. Морфофизиология растений. Морфофизиологический анализ этапов органогенеза различных жизненных форм покрытосеменных растений: Учебное пособие. М.: Высшая школа, 1984. - 240 с.

87. Курганская С.А. Полезные травы и редкие цветы на садовом учатке. -М.: Наука, 1995.-С.113-115.

88. Куренцова Г.Э. Растительность Приморского края. Владивосток, 1968. -150 с.

89. ЮО.Куренцова Г.Э. Растительность Приханкайской равнины и окружающих предгорий. -М.-Л.:Изд-во АН СССР, 1962. С.63-64.

90. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 288 с.

91. Левина Р.Е. Морфология и экология плодов. Л., 1987. - С.64.

92. Левина Р.Е. Репродуктивная биология семенных растений. М.: Наука, 1980.-С.21-60.

93. Лекарственное растительное сырьё. Изд-е официальное. М.: Изд-во стандартов, 1980.-269с.

94. Лекарственные растения в научной и народной медицине / Б.Г. Волынский, К.И. Бендер, С.Л. Фредман и др. 2-е изд. перераб. и доп. - Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 1967 - С.41-42.

95. Лекарственные растения Сибири / Положий А.В., Гольдберг Е.Д., Гуреева И.И. и др. Томск: Изд-во ТГУ, 1995. - 325 с.

96. Литвиненко В.И. Попова Т.П. и др. Флавоноиды шлемников Сибири и Дальнего Востока // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Весоюз. научн. конф. Томск, 1986. - С. 91-92.

97. Литвиненко В.И. Этапы развития химии природных фенольных соединений // VI Симпозиум по фенольным соединениям: Тезисы докладов «», 2004 Москва, с. 9-10.

98. Магомедмирзаев М.М. Введение в количественную морфогенетику. -М.: Наука, 1990.-232 с.

99. Ю.Макаров А.А. Лекарственные растения Якутии. Якутск, 1979. - С. 178-180.

100. Методика исследований при интродукции лекарственных растений // Лекарственное растениеводство / под ред. Н.И. Майсурадзе, В.П. Киселева, О.А Черкасова и др. ЦБНТИ, 1984. - Вып. 3. - 32 с.

101. Методические указания по семеноведению интродуцентов / Отв. ред. Н.В. Цицин. М.: Наука, 1980. - 64 с.

102. ПЗ.Методы биохимического исследования растений / под ред. А.И. Ермакова. 3-е изд. перераб. и доп. - Л.: Агропромиздат, 1987. - 430 с.

103. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. Новосибирск: Наука. Сиб. отделение, 1991.-С. 212-213.

104. Минаева В.Г. Флавоноиды в онтогенезе и их практическое использование. Новосибирск: Наука. Сиб. отделение, 1978. - 252 с.

105. Пб.Некрасов В.И. Актуальные вопросы развития теории акклиматизации растений. М.: Наука, 1980. - 102 с.

106. Николаева М.Г., Лянгузова И.В., Поздова Л.М. Биология семян. СПб: Изд-во НИИ Химии СПбГУ, 2002. - 232 с.

107. Николаева М.Г., Разумова М.В., Гладкова В.Н. Справочник по проращиванию семян. Л.: Наука, 1985. - 348 с.

108. Нокс Р.Б. Биология пыльцы / пер. с англ. и предисл. С.А. Резниковой. -М.: Агропромиздат, 1985. 83 с.

109. Носов A.M. Функции вторичных метаболитов растении in vivo и in vitro II Физиология растений. 1994. - Т.41, № 6. - С. 873-878.

110. Перечень объектов растительного и животного мира, занесенных в Красную книгу Приморского края: официальное издание. Владивосток: Апостроф, 2002. - С. 9.

111. Пешкова Г.А. Растительность Сибири: Предбайкалье и Забайкалье. -Новосибирск. Наука, 1985. -145 с.

112. Пешкова Г.А. Степная флора Байкальской Сибири. М.: Наука, 1972. -207 с.

113. Пименова М.Е. Инструкция по сбору и сушке корней с корневищами шлемника байкальского // Правила сбора и сушки лекарственных растений: (Сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. - С. 297-299.

114. Повдыш М.Н. Разнообразие иридоидов в семействе Lamiaceae и их биологическая активность // Растительные ресурсы. 2006. - Т. 42, Вып. 2. - С. 131-149.

115. Поддубная-Арнольди В.А. Характеристика семейств покрытосеменных по цитоэмбриологическим признакам. -М.: Наука, 1982.-322 с.

116. Поддубная-Арнольди В.А. Общая эмбриология покрытосеменных растений. М.: Наука. - 1964. -481 с.

117. Положий А.В. О разработке научных основ рационального использования и охраны сырьевых растений в Сибири // Охрана растительного мира Сибири. Новосибирск: Наука Сиб. отд-ние, 1981. - С. 176-182.

118. Положий А.В. Систематика цветковых растений: Учебник для биологических факультетов вузов. Томск: Изд-во Том. гос. ун-та, 2001. - С. 240-250.

119. Пономарев А.П. Изучение цветения и опыления растений // Полевая геоботаника. M.-JL: Наука, 1960. - С.9-19.

120. Попова Т.П. Химическое и хемсистематическое изучение видов шлемника: Автореф дис .канд. фарм. наук. Харьков, 1984.-20 с.

121. Попова Т.П., Воловик В.Г., Литвиненко В.И. Флавоноиды шлемника байкальского // 5-ый Всесоюзный симпозиум по фенольным соединениям: Секция химии: Тезисы докладов, Таллин, 1987. С.73-74.

122. Попова Т.П., Литвиненко В.И., Ковалев И.П. Флавоны корней Scutellaria baicalensis II Химия природных соединений. 1973. - № 6. -С 91-92.

123. Поповская Е.М. К вопросу об образовании и передвижении аскорбиновой кислоты // Биохимия. 1950. - Т. 15, № 13. - С. 249-255.

124. Порада А.А. Перспективы введения в культуру шлемника байкальского на Украине // 1-ая Республиканская конференция по медицинской ботанике: Тезисы докладов. Киев. - 1984. - С.78-79.

125. Пшеничкина Ю.А., Банаева Ю.А. Семенная продуктивность шлемника байкальского // Тез. докл. 2-ая Респуб. конф по мед. ботанике. Киев, 1988. -С.155.

126. Работнов Т.А. Методы изучения семенного размножения травянистых растений в сообществах. // Полевая геоботаника. М.; Л.: Наука. - 1960. -Т. 2. - С.78-95.

127. Разина Т.Г. Шлемник байкальский как корректор цитостатической химиотерапии опухолей (экспериментальное исследование): Автореф. дис. . канд. биол. наук.-Томск, 1988.-18с.

128. Растительные лекарственные средства / Н.П. Максютина, Н.Ф.Комисаренко, А.П. Прокопенко и др. Киев: Здоров'я, 1985. - 280 с.

129. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения их химический состав, использование; Семейства Hippuridaceae Lobeliaceae / отв. ред. П.Д. Соколов. - СПб: Наука, 1991. -С.86-87.

130. Ревердатто В.В. Лекарственные растения семейства губоцветных и их действующие начала// Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты и применение. Вып. 4.-Томск: Изд-во Зап.-Сиб. отделения АН СССР, 1953.-С.21.

131. Ревердатто В.В. Некоторые итоги поисков новых лекарственных растений во флоре Сибири во время Великой отечественной войны // Новые лекарственные растения Сибири и их лечебные препараты. Томск, 1946-Вып. 2. - С. 3-9.

132. Регистр лекарственных средств России: Энциклопедия лекарств / гл. ред. Ю.Ф. Крылов. М.: РЛС-2000, 1999. - С.277.

133. Репродуктивная биология покрытосеменных растений. Генетический словарь / С.И. Малецкий, Е.В. Левитес, С.О. Батурин, С.С. Юданова -Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 2004. 106 с.

134. Ресурсы лекарственных растений Бурятии / Т.А. Асеева, З.В. Тармаева, О.В. Логина и др. // Растительные ресурсы Забайкалья и их использование. Сб. науч. трудов АН СССР Сиб.отд-е Бур. фил-л, ин-т биологии. Улан-Удэ, 1987. -С.41-61.

135. Родионова Н.Н., Лещук Р.И., Харина Т.Г. Особенности накопления флавоноидов в шлемнике байкальском // Тезисы докладов: VI Симпозиума по фенольным соединениям, Москва, апрель 2004. М., 2004. - С. 77.

136. Саратиков А.С Влияние шлемника байкальского на изолированные органы // Новые лекарственные растения Сибири, их лечебные препараты: Сб. научно-иссл. работ. Вып. 2. - Томск: Изд-во Том.гос.ун-та, 1946 - С.38-40.

137. Свиридонов Г.М К вопросу комплексного использования сырья лекарственных растений Сибири // Растительные ресурсы Южной Сибири, их рациональное использование. Томск: Изд-во ТГУ, 1982. - С.8-11.

138. Сергиевская Л.П. Танацетовые степи Забайкалья // Известия Томского отделения Всесоюзного ботанического общества. Новосибирск, 1959. - Т.4. -С.41-49.

139. Сергиевская Л.П., Блинова К.Ф., Пименова Р.Е. О ресурсах шлемника байкальского Scutellaria baicalensis в Восточном Забайкалье // Вопросы фармакогнозии. 1968. -Т.2, Вып. 5. - С. 61-68.

140. Серебряков И.Г. Морфология вегетативных органов растений. М.: Наука, 1952.-391 с.

141. Серебряков И.Г. Сравнительный анализ некоторых признаков ритма сезонного развития различных ботанико-географических зон СССР // Бюлл. МОИП. Отд. биологии. 1964. - Т. 49, Вып. 5. - С. 62-75.

142. Серебряков И.Г. Экологическая морфология растений: жизненные формы покрытосеменных и хвойных: учебное пособие М.: Высшая школа, 1969-378 с.

143. Скибицкая М.И., Евтух В.П. Интродукция шлемника байкальского в условиях львовского ботанического сада // Растения в муссонном климате: Материалы международной конференции посвященной 50-летию Ботанического сада ДВО РАН. Владивосток, 1998. - С.234-235.

144. Словарь ботанических терминов / Под. ред И.А. Дудки. Киев: Наукова Думка, 1984.-С.98

145. Соболева Р.А. Фармакогностические исследования Сибирских видов Scutellaria II Новые лечебные растения Сибири их препараты: Сб. научно-иссл. работ. Вып. 2. - Томск: Изд-во Том.гос.ун-та, 1946 - С. 17-27.

146. Соколова B.C. Сацыперова И.Ф. О лекарственных растениях их препаратах и о введении в культуру // Вопросы фармакогнозии. 1961. - Т. 12. -С.351-358.

147. Справочник по ботанической микротехнике. Основы и методы / Барыкина Р.П., Веселова Т.Д., Девятов А.Г. и др. М.: Изд-во МГУ, 2004. - 312 с.

148. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири. Иркутск, 1987.-400 с.

149. Точнова Т.В., Бубенчикова В.Н. Спектрофотометрический метод количественного определения суммы флавоноидов в цветках липы // Ресурсо-ведческое и фитохимическое изучение лекарственной флоры СССР: Научн. труды. М.: 1991. - Т.29. - С. 150-154.

150. Трофимова Н.А. Шлемник байкальский в изолированной культуре тканей // Растительные ресурсы Южной Сибири их рациональное использование и охрана. Томск: Изд-во Том. ун-та. - С. 80-82.

151. Трофимова Н.А., Бенсон Н.А. Перспективы использования тканей шлемника байкальского в фармации // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. Томск, 1984. - Т.1. - С. 152-155.

152. Тюрина Е.В. Интродукция зонтичных в Сибири. Новосибирск: Наука, 1978.-240 с.

153. Тюрина Е.В. Популяционные аспекты изучения исходного материала для интродукции // Ускорение интродукции растений в Сибири: задачи и методы: Сб. научн. трудов. Новосибирск: Наука: Сиб отд-ние, 1989. - С. 3446.

154. Усов Л. А. Материалы к механизму гипотензивного действия шлемника байкальского // Сб. научн. работ молодых учёных Том. мед. ин-та. Томск, 1958.-С.12-15.

155. Уткин Л. А. Народные лекарственные растения Сибири // Тр. науч.-иссл. хим.-фарм. ин-та. 1931, №4, вып.24. - 135с.

156. Фегри К., Ван дер Пэйл Л. Основы экологии опыления. М.: Мир, 1982.-378.

157. Федоров А.А, Артюшенко З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений. Цветок. Л.: Наука, Ленинградское отд-е, 1975. - С.352

158. Федоров А.А., Артюшенко З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений. Соцветие. -М. Наука, 1979. С.45-49.

159. Федоров А.А., Кирпичников Э.М., Артюшенко З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений. Лист. М. - Л.: Наука, 1956.-304 с.

160. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока. Хабаровск: Хабаровское книжное изд-во, 1987. - С. 325-327.

161. Хайдав Ц., Меньшикова Т.А. Лекарственные растения в монгольской медицине. Улан-Батор, 1978. - 191 с.

162. Харина Т.Г., Гусева А.В., Окладникова Н.Н. Некоторые особенности выращивания Scutellaria baicalensis в лесной зоне Западной Сибири // Исследования молодых ботаников Сибири: Тезисы докладов молодежной конференции. Новосибирск, 2001. - С. 85-86.

163. Харина Т.Г., Родионова Н.Н., Лещук Р.И. Значение онтогенетических исследований для целей интродукции на примере Scutellaria baicalensis. -Тезисы докладов XI Съезда русского ботанического общества: Т.З, Новосибирск, 2003.- С. 274-275.

164. Хныкина Л.А. Фармакологические и биологические свойства шлемника байкальского. Автореф. дис. канд. фармац. наук. Томск. 1963. - 13 с.

165. Хромосомные числа цветковых растений. Л.: Наука, 1969. - 371 с.

166. Чайлахян М.Х. Основные закономерности онтогенеза высших растений.- М.: Изд-во АН СССР, 1958.- 79 с.198Лемесова И.И. Флавоноиды видов рода Scutellaria L.II Растительные ресурсы. 1993. - Т. 29, № 2. - С. 89-90.

167. Чемесова И.И., Чижикова Д.В. Определение содержания дубильных веществ в корневищах Comarum palustre L. и настойки из него спектрофото-метрическим методом // Растительные ресурсы. 2004. - Вып. 3. - С. 122-129.

168. Чупахина Г.Н. Система аскорбиновой кислоты растений. Калининград, 1997.- 119 с.

169. Шамина З.Б., Бутенко Р.Г., Тарасов В.А. Цитологическое изучениекультуры ткани табака // Генетика. 1966. - № 1. - С.70-76.

170. Экстракция флавоноидов и их спектрофотометрическое определение / П.Е. Кривенчук, В.А. Куркин, С.Д. Литвинов, О.В. Никифоров // Синтез и свойства биологически активных соединений: Межвузовский сборник. -Куйбышев, 1984.-С.125-129.

171. Юзепчук С.В. Род шлемник Scutellaria L. // Флора СССР. - М., Л.: Наука. - 1954. - Т.20. - С.72-225.

172. Юрова Г.Г. Свободная и связанная аскорбиновая кислота в сортах основных плодово-ягодных культур Алтая: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Томск, 1964.-23 с.

173. Яременко К.В., Удинцев С.И., Амосова Е.И. Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока как источники противоопухолевых средств // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине: Тезисы докл. науч. конф. Улан-Удэ, 1987.— с.157-158.

174. А comparison of human immunodeficiency virus type-1 protease inhibition activities by the aqueous and methanol extracts of Chinese medicinal herbs / T.L. Lam, M.L. Lam, Т.К. Au а. о.// Life Sciences. 2000. - Vol. 67, N. 23. -P. 2889-2896.

175. Alexander M.P. Differential staining of aborted and nonaborted pollen // Stain Technology. 1969. - Vol.44, №3. - p. 117-122.

176. Ancient traditional Chinese medicine in burn treatment: a historical review / J. Kopp, G.Y. Wang, R.E. Horch a. o. // Burns. 2003. - Vol. 29. - P. 473^78.

177. Antibacterial constituents from Scutellariae Radix against Streptococcus mutans OMZ176 / Y.H. Moon, Y.H. Lee, B.S. Min a. o. // Korean Journal of

178. Pharmacognosy. 1997. - Vol. 28, N. 3. - P. 99-103.

179. Anticancer activity of Scutellaria baicalensis and its potential mechanism / F. Ye, L. Xui, J. Yi, а. о.// Journal of Alternative and Complementary Medicine. -2002. Vol. 8, N. 5. - P. 567-572.

180. Antifimgal activity in vitro of Scutellaria baicalensis upon the cutaneous and ungual pathogenic fungi / D. Yang, D. Michel, F. Bevalot a. o. // Annales Pharmaceutiques Francaises. 1995. - Vol. 53, N. 3. - P. 138-141.

181. Anti-hepatitis В virus effects of wogonin isolated from Scutellaria baicalensis / R.-L. Huang, C.-C. Chen, H.-L. Huang a. o. // Planta Medica. 2000. - Vol. 66, N. 8.-P. 694-698.

182. Anti-HIV activity of medicinal herbs: usage and potential development / J.A. Wu, A.S. Attele, L. Zhang а. о.// American Journal of Chinese Medicine. -2001.-Vol. 29, N. l.-P. 69-81.

183. Antioxidant activity of flavones from Scutellaria baicalensis in lecithin liposomes / J. Gabrielska, J. Oszmianski, R. Zylka a. o. // Zeitschrift fur Naturfor-schung Section С Journal of Biosciences. - 1997. - Vol. 52, N. 11-12. - P. 817823.

184. Antiviral Chinese medicinal herbs against respiratory syncytial virus / S.-C. Ma, J. Du, P.P.-H. But a. o. // Journal of Ethnopharmacology. 2002. - Vol. 79, N. 2.-P. 205-211.

185. Application of genetic algorithm to self-organizing fuzzy controller in fed-batch culture of Scutellaria baicalensis G. plant cell / J.-W. Choi, J.M. Cho, J.G. Lee a. o. // Korean Journal of Chemical Engineering. 1998. - Vol. 15, N. 4. - P. 404410.

186. Arrigoni O., De Tullio M.C. Ascorbic acid: much more than just an antioxidant // Biochimica et Biophysica Acta. 2002. - Vol. 1569. - P. 1-9.

187. Attractive and defensive functions of the ultraviolet pigments of a flower Hypericum calycinum / M. Gronquist, A. Bezzerides, A. Attygalle a. o. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - Vol. 98, № 24. - P. 13745-13750.

188. Baicalein induces a dual growth arrest by modulating multiple cell cycle regulatory molecules / S.-L. Hsu, Y.-C. Hsieh, W.-C. Hsieh a. o. // European Journal ofPharmacology.-2001.-Vol. 425.N.3.-P. 165-171.

189. Baicalein: An in vitro antigenotoxic compound from Scutellaria baicalensis / B.-H. Lee, S.-J. Lee, T.-H. Kang a. o. // Planta Medica. 2000. - Vol. 66, N.l - P. 70-71.

190. Banergee S., Hawksby C., Miller S. Effect of Helicobacter pylori and its eradication on gastric juice ascorbic acid // Gut. 1994. - Vol. 35. - P.317-322.

191. Biological properties of baicalein in cardiovascular system / Y. Huang, S.-Y. Tsang, X. Yao а. о.// Current Drug Targets Cardiovascular and Haematological Disorders. - 2005. - Vol. 5, N. 2. - P. 177-184.

192. Biosynthesis and Metabolism of Vitamin С in Suspension Cultures of Scutellaria baicalensis / Y.-O. Ahn, S.-Y. К won, H.-S. Lee, а. о. I I Journal of Biochemistry and Molecular Biology 1999. - Vol. 32, N. 5. - P. 451-455.

193. Brown D.E., Murphy A.S., Rasotte A.M. Flavonoids act as negative regulators of auxin transport in Vivo Arabidopsis // Plant Physiology. 2001. - Vol.126, №6.-P. 524-535.

194. Butenko I.G., Gladtchenko S.V., Galushko S.V. Anti-inflammatory properties and inhibition of leukotriene C4 biosynthesis in vitro by flavonoid baicalein from Scutellaria baicalensis Georgi roots // Agents Actions 1993.-Vol.39, Spec.No. - P. 49-51.

195. Chang W.-H., Chen C.-H., Lu F.-J. Different effects of baicalein, baicalin and wogonin on mitochondrial function, glutathione content and cell cycle progression in human hepatoma cell lines // Planta Medica. 2002. - Vol. 68, N. 2. -P. 128-132.

196. Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Scutellaria barbata / J. Yu, J. Lei, H. Yu a. o. // Phytochemistry. 2004 - Vol. 65. -P. 881-884.

197. Chinese herbal remedy Wogonin inhibits monocyte chemotactic protein-1 gene expression in human endothelial cells // Y.-L. Chang, J.-J. Shen, B.-S. Wung a. o.//Molecular Pharmacology.-2001.- Vol. 60, N. 3.-P. 507-513.

198. Content of Auxin-, inhibitor- and Gibberellin-like substances in humic acids / E. Casenave de Sanfilippo, J.A. Arguello, G. Abdala, G.A. Orioli // Biologia Plantarum. 1990. - Vol. 32. - P. 346-351.

199. Cryopreservation of Scutellaria baicalensis Cells by Two-step Cooling Method / W.-T. Seo, S.-W. Kim, J.-R. Liu a. o. // Journal of Microbiology and Biotechnology. 1996a. - Vol. 6, N. 3. - P. 209-212.

200. Cytoprotective effect of Scutellaria baicalensis in CA1 hippocampal neurons of rats after global cerebral ischemia / Y.O. Kim, K. Leem, J. Park a. o. // Journal of Ethnopharmacology. 2001. - Vol. 77, N. 2-3. - P. 183-188.

201. Cytotoxic activities of flavonoids from two Scutellaria plants in Chinese medicine / M. Sonoda, T. Nishiyama, a. o. Matsukawa Y. // Journal of Ethnopharmacology. 2004. - Vol. 91. - P. 65-68.

202. Dumville J.C., Fiy S.C. Uronic acid-containing oligosaccharins: Their biosynthesis, degradation and signalling roles in non-diseased plant tissues // Plant Physiol. Biochem. 2000. - Vol. 38. - P. 125-140.

203. Effects of baicalin on the gene expression of surfactant protein A (SP-A) in lung adenocarcinoma cell line H441 // K.-T. Cheng, Y.-C. Huang, Y.-S. Lin a. o. // Planta Medica. 2003. - Vol. 69, N. 4. - P. 300-304.

204. Effects of Chinise and western antimicrobial agents on selected oral bacteria / T.F. Tsao, M.G. Newman, Y.Y. Kwok, A.K. Norikoshi // J. Dent. Res. 1982-Vol. 61.-P.1103-1106.

205. Effects of emodin and baicalein on rats with severe acute pancreatitis / X.-P. Zhang, Z.-F. Li, X.-G. Liu a. o.// World Journal Gastroenterology. 2005. -Vol. 11,N. 14.-2095-2100.

206. Experimental study on anti-pyretic effect of Gegen Qin Lian decoction and its compounds / L.-Z. Yu, J.-Y. Wu, J.-B. Luo а. о.// Zhongguo Zhongyao Zazhi. -2004b. Vol. 29, N. 7. - P. 665-666.

207. Flavones from Scutellaria baicalensis attenuate apoptosis and protein oxidation in neuronal cell lines / J. Choi, C.C. Conrad, C.A. Malakowsky a. o.// Biochimica et Biophysica Acta General Subjects. - 2002. - Vol. 1571, N. 3. - P. 201-210.

208. Flavonoid baicalin inhibits HIV-1 infection at the level of viral entry / B.-Q. Li, T. Fu, Y. Dongyan, a. o. // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2000a. - Vol. 276, N. 2. - P. 534-538.

209. Flavonoids and phenylethanoids from hairy root cultures of Scutellaria baicalensis / Y. Zhou, M. Hirotani, T. Yoshikawa a. o. // Phytochemistry. 1997.1. Vol. 44, N. l.-P. 83-87.

210. Four flavonoids from Scutellaria baicalensis / Zhang Y.-Y., Guo Y.-Z., Onda M., a. o. // Phytochemistry. 1994. - Vol. 35. - P. 511-514.

211. Free radical scavenging and antioxidant activities of flavonoids extracted from the radix of Scutellaria baicalensis / Z. Gao, K. Huang, X. Yang a. o. // Biochimica et Biophysica Acta. 1999. - Vol.1472, N. 3. -P. 643-650.

212. Fugh-Berman A., Cott J.M. Dietary Supplements and Natural Products as Psychotherapeutic Agents // Psychosomatic Medicine, 1999. Vol. 61. - P. 712-728.

213. Gao S.L., Chen B.J., Zhu D.N. In vitro production and identification of autotetraploids of Scutellaria baicalensis // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. -2002. Vol. 70, N 3. - P. 289-293.

214. Gao Z., Huang K., Xu H. Protective effects of flavonoids in the roots of Scutellaria baicalensis against hydrogen peroxide-induced oxidative stress in HS-SY5Y cells // Pharmacological Research. 2001. - Vol. 43, N. 2. - P. 173-178.

215. Goenadi D.H., Sudharama I.M. Shoot initiation by humic acids of selected tropical crops grown in tissue culture // Plant Cell Reports. 1995. - Vol. 15. -P. 59-62.

216. Hepatoprotective Effect of Baicalin, a Major Flavone from Scutellaria radix, on Acetaminophen-Induced Liver Injury in Mice / S.I. Jang, H.J. Kim, K.M. Hwang a. o. // Immunopharmacology and Immunotoxicology. 2003. - Vol. 25, N. 4. - P. 585-594.

217. Hirotani M., Nagashima S., Yoshikawa T. Baicalin and baicalein productions of cultured Scutellaria baicalensis cells // Natural Medicines. 1998. - Vol. 52, N.5.-P. 440-443.

218. Histochemical investigation of ^-glucuronidase in culture cells and regenerated plants of Scutellaria baicalensis II T. Matsuda, K. Hatano, T. Harioka a. o. // Plant Cell Reports. 2000. - Vol. 19. - P. 390-394.

219. Ho-Dzun H., Knupffer H., Hammer K. Additional notes to the checklist of Korean cultivated plants (5). Consolidated summary and indexes // Genetic

220. Resources and Crop Evolution. 1997. - Vol. 44. - P. 349-391.

221. Houghton P.J., Boxu Z., Xisheng Z. A clinical evaluation of the Chinese herbal mixture 'Aden-I' for treating respiratory infections // Phytotherapy Research. -1993. Vol. 7, N. 5. - P. 384-386.

222. Huang T.-C., Hsiao A., Wu M.-J. Notes on the Flora of Taiwan (35) — Scutellaria taipeiensis Т. C. Huang, A. Hsiao et M. J. Wu sp. nov. (Lamiaceae) // Taiwania. 2003. - Vol. 48, N. 2. - P. 129-137.

223. Induction of apoptosis in prostate cancer cell lines by a flavonoid, baicalin // F.L. Chan, H.L. Choi, Z.Y. Chen a. o. // Cancer Letters. 2000. - Vol. 160, N. 2. -P. 219-228.

224. Inhibition of HIV infection by Baicalin A flavonoid compound purified from Chinese herbal medicine / B.-Q. Li, T. Fu, Y.-D. Yan, a. o. // Cellular and Molecular Biology Research. - 1993. - Vol. 39, N. 2. - P. 119-124.

225. Inhibition of human T cell leukemia virus by the plant flavonoid baicalin (7-glucuronic acid, 5,6-dihydroxyflavone) / N.W. Baylor, T. Fu, Y.-D. Yan a. o. // Journal of Infectious Diseases. 1992. - Vol. 165, N 3. - P. 433-437.

226. Involvement of nuclear factor-кВ in the inhibition of interleukin-12 production from mouse macrophages by baicalein, a flavonoid in Scutellaria baicalensis // B.Y. Kang, S.W. Chung, S.H. Kim a. o. // Planta Medica. 2003. - Vol. 69, N. 8. -P. 687-691.

227. Karynski M., Grzesiowski P., Krotkiewski M. Antibacterial and antifungal activity of purified baicalin // International Review of Allergology and Clinical Immunology. -2004. Vol. 10, N. 4. - P. 124-127.

228. Knaggs A.R. The biosynthesis of shikimate metabolites // Natural Product Reports. 2001.-Vol. 18.-119-136.

229. Kubo M., Odeni T, Namba K. Studies on Scutellaria Radix. Part II; The antibacterial substance //Planta Medica. -1981. -Vol.43, N. 2. P. 194-201.

230. Kummalue T. Molecular Mechanism of Herbs in Human Lung Cancer Cells III. Med. Assoc. Thai.-2005.-Vol. 88, N. 11.-P. 1725-1734.

231. Levvy G.A. Baicalinase, a plant p-Glucuronidase // Biochemical Journal. -1954.-Vol. 58.-P. 462-469.

232. Li H., Murch S. J., Saxena P. K. Thidiazuron-induced de novo shoot organogenesis on seedlings, etiolated hypocotyls and stem segments of Huang-qin Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2000. - Vol. 62. - P. 169-173.

233. Li H.-B., Jiang Y., Chen F. Separation methods used for Scutellaria baicalensis active components // Journal of Chromatography B. 2004. - Vol. 812. - P. 277-290.

234. Ц S., Su S.X., Huang R.L. A report of fertilizer-spreading experiment of Scutellaria baicalensis II Zhongguo zhongyao zazhi. 1993b. - Vol. 18, N. 3. - P. 142-145.

235. Marsh G.A. Glucuronide metabolism in plants. The isolation of flavone glucuronide from plants // Biochemical Journal. 1955. - Vol. 59, N.l. - P. 58-62.

236. Martin J, Dusek J. The Baikal scullcap {Scutellaria baicalensis) a potential source of new drug // Ceska Slov. Farm. - 2002. - Vol. 51, N. 6. - P.277-283.

237. Mayer A.M. Poljakoff-Mayber A. The germination of seeds (4-th edition). -Oxford, N.-Y.: Pergamon Press, 1989. 270 p.

238. Mode of action of the anti-influenza virus activity of plant flavonoid, 5,7,4'-trihydroxy-8-methoxyflavone, from the roots of Scutellaria baicalensis / T. Nagai, R. Moriguchi, Y. Suzuki a. o. // Antiviral Research. 1995. - Vol. 26, N. 1. - P.ll-25.

239. Munne-Bosch S., Alegre L. Interplay between ascorbic acid and lipophilic antioxidant defenses in chloroplasts of water-stressed Arabidopsis plants // FEBS Letters. 2002. - Vol. 524. - P. 145-148.

240. Murch S.J., Rupasinghe V., Goodenowe D. A metabolomic analysis of medicinal diversity in Huang-qin (Scutellaria baicalensis) genotypes: discovery ofnovel compounds // Plant Cell Reports. 2004. - Vol. 23. - P. 419-125.

241. Nishikawa K., Ishimaru K. Flavonoids in root cultures of Scutellaria baicalensis //Journal of Plant Physiology. 1997. - Vol. 151, N. 5. -P. 633-636.

242. Nishioka Т., Kawabata J., Aoyama Y. Baicalein, an a-glucosidase inhibitor from Scutellaria baicalensis II Journal of Natural Products. 1998. - Vol. 61, N. 11. -P. 1413-1415.

243. Optimized system for biomass production, chemical characterization and evaluation of chemo-preventive properties of Scutellaria baicalensis / S.M.A. Zobayed, S.J. Murch, H.P.V. Rupasinghe а. о.// Plant Science. 2004. - Vol. 167.-P. 439-146.

244. Paton A The global taxonomic investigation of Scutellaria (Labiatae) // Kew Bulletin. 1992. - Vol. 45, N. 3. - P. 400-450.

245. Perez F.J., Villegas D., Mejia N. Ascorbic acid and flavonoid-peroxidase reaction as a detoxifying system of Н2Ог in grapevine leaves Phytochemistry. -2002.-Vol. 60.-P. 573-580.

246. Phytochemical and biological analysis of Skullcap (Scutellaria lateriflora L.): A medicinal plant with anxiolytic properties / R. Awad, J. T. Arnason, V. Trudeau a. o. // Phytomedicine. 2003. - Vol. 10. - P. 640-649.

247. Protection against aflatoxin-Bl-induced liver mutagenesis by Scutellaria baicalensis / J.G. der Boer, B. Quiney, P.B. Walter a. o. // Mutation Research, 2005. -Vol. 578.-P. 15-22.

248. Robinson I. Die Farbungesreaktion der herbe Stigmatochomic als morfobio-logische. BlitenTersuchugs metode, 1924. 2-6 Bd.

249. Runkova L.V., Lis E.K., Tomaszewski M., Antoszewski R. function ofphenolic substansces in the degradation system of indol 3-acetic scid in strawberries // Phisiology of plants. - 1972., Vol.14, N. 1. - P.71 81.

250. Ryu S.H., Ahn B.Z., Pack M.Y. The cytotoxic principle of Scutellaria radix against I cell // Planta Medica. 1985. - Vol. 51. - P. 355-462.

251. Scutellariae radix. X. Inhibitory effects of various flavonoids on histamine release from rat peritoneal mast cells in vitro / M. Kubo, H. Matsuda, Y. Kimura a. o. // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1984. - Vol. 32, N. 12. - P. 5051-5054.

252. Seo W.-T., Park Y.-H., Choe T.-B. An optimization of flavonoid production from the suspension culture of Scutellaria baicalensis cells // Journal of Microbiology and Biotechnology. 1996b. - Vol. 6, N. 5. - P. 347-351.

253. Shang Y.-Z., Cao K. Protective effects of total flavonoids from stems and leaves of Scutellaria baicalensis George on cerebral hypoxia in mice // Chinese Journal of Clinical Rehabilitation. 2004. - Vol. 8, N. 19. - P. 3908-3909.

254. Shao Z.-H., Van den Hoek T.L., Qin Y. Baicalein attenuates oxidant stress in cardiomyocytes // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol 2002. - Vol. 282. - P. 9991006.

255. Shin S.-W., Lee H.K. Production of baicalin by cell culture of Scutellaria baicalensis II Korean Journal of Pharmacognosy. 1995. - Vol. 26, N. 2. - P. 159163.

256. Simmonds M.S.J. Flavonoid-insect interactions: recent advances in our knowledge // Phytochemistry. 2003. - Vol. 64. - P. 21-30.

257. Simon J.A., Hudes E.S. Relationships of ascorbic acid to blood lead levels // The J. of the Am. Med. Association. 1999, Vol. 281, N. 24. - P. 317-322.

258. Smirnoff N. Ascorbic acid: metabolism and functions of a multi-facetted molecule // Current Opinion in Plant Biology. 2000. - Vol. 3. - 229-235.

259. Stickell F., Patsenker E., Schuppan D. Herbal hepatotoxicity // Journal of Hepatology. -2005. Vol. 43. - P. 901-910.

260. Studies on Scutellariae radix. IX. New component inhibiting lipid peroxidation in rat liver / Y. Kimura, H. Okuda, Z. Taira а. о.// Planta Medica. 1984. - Vol. 50.-P. 290-295.

261. Studies on Scutellariae radix. XII. Anti-thrombic actions of various flavon-oids from Scutellariae radix / M. Kubo, H. Matsuda, T. Tani, a. o.// Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1985. - Vol. 33, N. 6. - P. 2411-2415.

262. Studies on the antilipid peroxidation of nine sorts of Chinese herbal medicines with the function of protecting liver / H. Jiang, X. Huang, Y. Yang, a. o. // Zhong. yao. cai. 1997. - Vol. 20, N. 12. - P. 624-626.

263. Study on yield and quality of Scutellaria baicalensis from different habitats / J. Yu, J. Chen, X.Y. Xiao a. o. // Zhongguo zhongyao zazhi. 2005. - Vol. 30, N. 7. -P. 491-494.

264. Survey of crude drugs effective in eliminating superoxides in blood plasma of mice / F. Yoshizaki, T. Komatsu, K. Inoue а. о.// International Journal of Pharmacognosy. 1996. - Vol. 34, N. 4. - P. 277-282.

265. Tabata К., Takaoka Т., Esaka M. Gene expression of ascorbic acid-related enzymes in tobacco // Phytochemistry. 2002. - Vol. 61. - P. 631-635.

266. Tan K.H., Tantiwiramanond D. Effect of humic acids on nodulation and drymatter production of soybean, peanut, and clover // Soil Science Society of America Journal. 1983. - Vol. 47. - P. 1121-1124.

267. The flavonoid baicalin exhibits anti-inflammatory activity by binding to chemokines / B.-Q. Li, T. Fu, W.-H. Gong a. o.// Immunopharmacology. 2000b. -Vol.49, N.3.-P. 295-306.

268. The influence of humic acids derived from earthworm-processed organic wastes on plant growth / Atiyeh R.M., Lee S., Edwards C.A. a. o. // Bioresource Technology. 2002. - Vol. 84. - P. 7-14.

269. Therapeutic potential of wogonin: A naturally occurring flavonoid / M.C. Tai, S.Y. Tsang, L.Y.F. Chang a. o. // CNS Drug Reviews. 2005. - Vol. 11, N. 2. -P. 141-150.

270. Thompson P.A. Germination of species of Labiatae in response to gibberel-lins // Physiology Plantarum. 1969. - Vol. 22, N. 3. - P. 575-586.

271. Topical anti-inflammatory activity of some Asian medicinal plants used in dermatological disorders / M.J. Cuellar, R.M. Giner, M.C. Recio а. о.// Fitoterapia, 2001.- Vol. 72.- P. 221-229.

272. Van Loon I.M. The golden root: Clinical applications of Scutellaria baicalensis flavonoids as modulators of the inflammatory response // Alternative Medicine Review. 1997. - Vol. 2, N. 6. - P. 472-480.

273. WilIiams C.A., Grayer R.J. Anthocyanins and other flavonoids // Nat. Prod. Rep. 2004. - Vol. 21. - P. 539-573.

274. Williams P.A. Ecology of the endangered herb Scutellaria novae-zelandiae II New Zealand Journal of Ecology. 1992.- Vol. 16, N. 2.-P. 127-135.

275. Winkel-Shirley B. Update on flavonoid biosynthesis: Flavonoid Biosynthesis. A colorful model for genetics, biochemistry, cell biology, and biotechnology // Plant Physiology. 2001. - Vol. 126. - P. 485-493.

276. Wolucka B.A., Davey M.W., Boerjan W. A High-Performance Liquid Chromatography Radio Method for Determination of L-Ascorbic Acid and Guanosine 5-Diphosphate-L-Galactose, Key Metabolites of the Plant Vitamin С

277. Pathway // Analytical Biochemistry. 2001. - Vol. 294. - P. 161-168.

278. Woodward A.W., Bartel B. Auxin: Regulation, Action, and Interaction // Annals of Botany. 2005. - Vol. 95. - 707-735.

279. Xie D.-Y., Dixon R.A. Proanthocyanidin biosynthesis still more questions than answers? // Phytochemistry. - 2005. - Vol. 66. - P. 2127-2144.

280. Yamomoto H. Scutellaria baicalensis: In Vitro Culture and the Production of Flavonoids // Biotechnology in Agriculture and Forestry: Medical fnd Aromatic Plants III. 1991 - Vol. 15.-P.398-418.

281. Zhang H., Huang J. Preliminary study of traditional Chinese medicine treatment of minimal brain dysfunction: analysis of 100 cases // Chinese journal of modern developments in traditional medicine. 1990. - Vol. 10, N. 5. - P. 278-279.

282. Zhang X.-P., Tian H., Cheng Q.-H. The current situation in pharmacological study on baicalin // Chinese Pharmacological Bulletin. 2003. - Vol. 19, N. 11. - P. 1212-1215.