Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МИКОФИЛЬНЫХ ГРИБОВ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ГРИБАМИ В КУЛЬТУРЕ

ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МИКОФИЛЬНЫХ ГРИБОВ И ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ГРИБАМИ В КУЛЬТУРЕ"

Биологический факультет _

; . " *

а * На правах рукописи

ЛЕРНЕР Лариса Ефимовна

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ШКОФИЛШЫХ гошв И ИХВЗАШЭДЕЙСТЖЕ С ГРИБАМИ В КУЛЬТУРЕ

(03,00*05 - ботаника)

А ВТОРЕ Ф Е Р А Т ~ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

ИЗДАТЕЛЬСТВО МОСКОВСКОЮ УНИВЕРСИТЕТА <-1977

Работа выполнена на кэфекре низших растений Биологического . Факультета Московского государственного университета имени .

И.К. Ломоносова.

Научные руководители: доктор биологических наук Т.П. Преобраке^ская кандидат биологических наук, ' t старший научный сотрудник H.H. Сидорова

Официальные сшонеяты: доктор биологических наук

Г.Г. Еарикова

кандидат биологически* няук K.M. Запромегова

Ведущее учреждение: ШШГ сельскохозяйственной мгафобиоло-гяи (Ленинград)

Завита диссертация состоится " ¥ * ütä&bfJ) 1977 Г.

часов на заседании Специализированного Биологического

Ученого'Совета В5в Московском государственном университете Автореферат разослан " 5" ЬкЛ^*^^ 1977 г. •

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке факультета. ОТзивы просим направлять по адресу: Москва 117234* МГУ, Биологический факультет, Ученый совет й 5.

Ученый секретарь

Дьяке .¡О.Т.

ВВЕДЕНИЕ

Ыикофильные грибы - обидная экологическая группа, включающая Далее 1500 ветов в пироко представленная в разлкчних раДо-'(¡агг земного дара, - все чате првылекгют шттзе исследователей. По мнению Барнетта { Вагае« , 1963), некоторые свойства си-стеын иикопаразит - греб-хозяин:'бнстрцй рост, возможность культивирования на искусственных питательных средах, легкость выращивания в строго контролируемых условиях делают ее удобной моделью для изучения основных прянсипов паразитизма.

Не менее значимым является выяснение роля мякофилов в экосистемах в связи с исследованиями стру кту рн о-фуп кциоиаь ьн ой ор- ■ ганизацид биоценозов и разработкой биологического метода борьбы, с фстопатогекнымя грибами (Доровская, 1969; йедоринчик, 1973; Ргиегуивка-СОпЗэк . , 1976;. Еа^атепЛга, , 1976;

'тишлг, Тг1Ъв > 1976). ,

Помимо перспектив использования микофшышх грибов в качестве естественных антагонистов фитопатогешшх грибов, несомненный интерес представляют шзкопараэпты гименоивдхетов, вызывающие. быструю деструкцию тканей хозяина я приводящие к бсяьшм потерям тис дикорастущих, так и культивируемых грибов {Мсо* , 1966; ЦЬг1геу, Тёгов , 1969; амвав , 1975),

• Наряду с этим мико£ильнне грибы привлекают внимание исследователей и как продуценты антибиотиков (Муромцев, 1967).

Несмотря на общепризнанное значение проблемы, детальное

I

изучение биология шнофильных грибов только начинается. Наименее'

изученными вопросами являются физиология микофшгов "и характер их

взаилоотноиекий с сигашпми грибами. В ряде работ приводятся _

данные, свидетельствующие о том, что среда механизмов воздейст-1-2МА

' ^вия некротрофшк микопаразитов на гриби-хозяева одно из ведущих мест.занимает образование ими биологически активных веществ. Исследования же последних лет показали, что способность к биосинтезу антибиотических веществ встречается среди всех групп микопаразитов, в том числе и бвотрофкых ( Втаавага. , 1972 'и да.). Однако эти работы не осгвешают такой важный вопрос, как роль антибиотиков во взаимоотношениях мякопаразита и хозяйка.'

В задачу настоящей работы входило:

- исследование зависимости между способностью микофшюв к синтезу антибиотиков и характером их взаимодействия с представ и-,,-телями различных систематических и(экологических групп грибов, — ■■■' ¡- изучение биологически активных вешеств; синтезируемых предотавителями рода лурошусвв.

Научная, норизяа и врактическая значим^ть результатов исследования. Проведенная работа позволила установить,.что образование биологически активных веществ являетек одним из необходимых условий успешного освоения грибных субстратов для изученной группы микофнлов: штаммы, синтезирующие антибиотические ве- ' шествз,. способны паразитировать на значительно большем количестве видов грибов по сравнению с теми штаммами, которое их не выделяют.

Установлено, что способность гиф шткопаразита вступать в непосредственный контакт с гидами различных грибов является-лишь дополнительной системой связи микопаразитов с грибаш-хо-ряевлмя.

Полученные результаты свидетельствуют о то»;, что исследо-Еепгше представители1 рола Нурошусвв способны параз::тгрошть ' ":тзч;гтель(!о большем круге грибов, нежели предполагалось ра-

Выявлено, что виды рода Нуроиусее я Tricbotbeci.ua говеиш link отличаются от Trichodeima virlde Гете, ex S.p. Gray

по характеру воздействия на грпбы. При парааптпрозании первых видов жизнеспособность пораженных грибов чаше всего со?гршлется, вторые же, как,правило, вызывают их гибель. Это свойство, * fi такте характер их взаимоотношений о ксследованными тест-гри- ■ , Cnj.-ji ка гироскопическом уровне дает основание считать цуроту-ces Z TrlCbOtb»«ium говеш биотройкыш микоааразитами контактного типа, a Triohoderoia Tiride '. -'некротрофаым ШКО-паразитом. Отсутствие специализированны* структур типа, гаусторий, ал пресс ори ев и буферных меток указывает на неспециализированный характер паразитизма всех изученных видов микофяльных грибов. > ■ , ■ '

Выделены сырцы антибиотиков яз культуртрех видов рода ну-pomycea ' . Установлено, что это нейтралыше соединения с широким спектром антибиотического действия, предетавляюш'.е собой либо одно, либо близкие по химической структуре Бэтества.

Исследованные виды рода цуротусев могут бить использованы' &ак продуценты антибиотиков, а получение данные о круге их хозяев представляют интерес в плане изучения грибов этого рода как естественных антагонистов некоторых фзтопатогенпых грибов.

Апробация работа. Основные положения диссертации доложенм , на конференций молодых ученых. Биологического факультета МГУ {Москва, I97G), на Всесоюзном симпозиуме "Изучение грибов в биогеоценозах" (Москва, 1077) и на оаседшсии кафедры низших растений ■ Биологического факультета И1У..

Тсуйпикгэдии. По теме диссертации опубликовано 4 статьз.

Структура и обьем работы, диссертация состоит, из введения,

обзора литературы, описания использованных методов, эксперлмел-i- &НЧ

талы:ой части, обоузсьеикя результатов, вмводсш и приложения. Работа наложена на-59 стран щах шштогитсного текста, нллгхтри-

■

рована СО рпсункаки, 3 графиками и 1$ табляпеда. Список литературы включает 171 работу отечестве;«!их я зарубежных-авторов,

. ил-шиша я ;ьт(ш исследования

Объектами исследования служили шогоспоровые атоымы 5 видов шкофильнкх грябов - Hypenjc«« rosellue ( A.et's. ex Рг.) Tul.* В. odoratue Arnold, H. aurentiue ( Pere. ex Fr.) Tul.,Tri-chothecium roeeum Link, Trichoderm» vlrld« Pera, «i S. P. Gray.

Культурн тлгкофилов, тест-грибов и бактерий получены из коллекции ка^едри низпих растений.

Способа ость к синтезу антибиотиков мвкофилыплш грибами изучалась на агарийкрованном сусле и жидких питательных средах (жидкое пивное сусло, среда Чапе'ка-Докеа, а также яодифишреван-ные среда на основе среды Чапека-Докса). Антибиотическая активность культуральиой жидкости определялась методами ддар^узки в агаре (Егоров,. 1565),

Для получения су if ого не оч идеи него биологически активного препарата гсультуральную жидкость экстрагировала ьталацетатом. Полученный экстракт концентрировался путем отгонки растворителя до сухого остатка. Полнота экстракции антибиотиков п спектр леП-стшя лолучеяшх препаратов определялись методом буисгсних дисков (Егоров, 1969). Для сравнения v. изучения cboüctj; выделенных антибиотически* веаеств испольэов&л гтетод сборной хроматографе на бумаге ( iehlda «t «1. . IS51) в 17 системах растворителей с бпопроявлегшем на газонах чузстштелыщх кифооргшмзмсо. Нол-кий характер выделенных антибиотиков установлен с шкдояьв "рГС-' хроматография" (Блинов, Хохлов, IE70). .

Характер взаимодействия между колониями шкопаразнтов к тест-грибов изучался ш годом ветречга;г гголонпЯ (Сейте г ов, 1951).

. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАН;^

I. Взаимодействие культур мякопаразитов 'п тест-грибов на питательных сре.т:ау

Предварительная оценка антийиотяческой активности пзучеп-ных штаммов 5 видов шкойлльных грибов выявила, что большинство из них выделяет биологически активные пешестБй, подавляпше рост * трек тест-грибо® — СХа4о*рог1да с1айоврог1о1<1»а ^ Гг. ) Л» Vri.ee, А1*«гоаг1» *впи1в К»аз «х Рг., Я*1пШ«10«рог1.ш» вогоЮп^апшп'

. Из проанализированных по данному признаку штаммов Зало отобрано 2 группы: одна представлена активными, другая - неактивными штаммами. У представителей каждой из этих,групп антибиотическая активность определялась по отношению ко всетлу набору тест-грибов, предназначавшемуся для изучения в совместной культуре с отобранными штампами.

■ По характеру взаимодействуя медду : колониями юпкопаразитов* . и тест-грибов на чашках Петри выделено четыре,характерных типа (табл. I):

Ч г *

I тип - тес т^ гриб развивается незначительно» шкопаразит ■ нарастает на него. г

■ 2 тип - рост тест-грийа прекращается при встрече с колонкеЯ микопаразита. Микопараэлт незначительно нарастает на его' колонии.

3 тип - остановка роста колонии микопаразита при встреч ес тест-грибом. Последний нарастает на колошдо микопаразита.

4 тип - рост колоний полностью прекращается при гх встрече.

* / ■

7 штаммов вдрспусвя , образующих антибиотические вс!е-

ства; пре обладал I тип взаимодействия. Огаыми, ке выделяю:^ ie . ан ти биотичес кие вещества, взаимоде Ествовали в большинстве случаев по 2 тепу. Тест-гркбы, обладающие караэитическимл свойствами, в ряде случаев подавляли рост неактивных штаммов мякогта-разктов (3-й тип).

Образование антибиотиков у изученных италзлов рода ну-

I

рошуеее тесно связано.с синтезом пигментов. Об этом свидетельствует то, что неокрашенные л слабо окрашенные атаглды не выделяли антибиотические веасстш и взаимодействовали с тест-грибами только по 2-4 ^кпу. Отмечен случай, когда при пассаке на питательной среде происходило вышепленке белого варианта ¡статна, что сопровождалось потерей способности образовывать биологически активные вещества я изменением типа взаимодействия.

Характер взаимодействия , Brichothecium toeewn с изученной группой теот-грибов не отличался от такового у видов Hypo-, my се а и зависел от способности штг-ммов Г. roseum вчделять биологически актяшше вешества.

Взаимодействие всех штаммов нурошусее к т. говеиш с Aga-ricus caepeeter ( I>., ) Fr. к Agaricwe arvensis s ch ae ff л n о исходило по I типу, вне зависимости от их способности oipa-зовевать антибиотики. Видимо, от к ос отель но низкая конкурентная способность изученных представителей \garicalee посволтет штаммам шкопаразитов, не выделяющим шть<5иот:гчесыге вешеттл, поселяться на них.

У штаммов irlchoderma viride прсоЗладпшакм типом взаимодействия с тест-грибаш б:-¡л I т;ш. Толы;о в редышх случаях ¡uTaiwaj с низкой степенью ант абиотической a:m:B:ioCT>i взаимодействовали с тест-гркбаш как по I, таи и по 2 типу. '

ч

Таблица I

Типы взаимодействия ме^ду колониями иикопаразитов и тест-грибов

Никопаразит группа . 1 Я Я Я * " Л * § »в Й '. 1 5 13 в» «♦ а я а ёа Н в! й1 Й- г* . Ь- || ай 18 §1 зи 2.6 РД Т!» из 1д II я|_я| -Й И р || Р Й II ая 1 1 в з| з Й ** й || Ой • • о Д

Нуроттсеа ГО§»11ие А ' Б т Г I 1-1-1.1 I I 4 2 .2 2 2 2.2 2 1 1 3- 4

Нуроиусве . оаогаИв А Б I I I . Т: I I Т I I I ч г 2 2 2 2 2 2 Т Т 3 -4

Нуротусвв аигапЗДив А £ Г Т I I III I ,1 1-4 1,2 -1,2 1,2. 1,2 1,2 .1,2 '1,2 I т ■ 1,3 . 4

Тг1сйо1Ь«с1шп говаш Л Б 1 Г I I 1,2 1,2 Т Т I 3 4 2 2 2 2 2 2 2 1 т 3 4

ТгАеЬМетов т!г14в - А I т Т т 1,2 Т 1,2 Т т т ч '

Примечание: & - экгивние итакмн, ^ - кешстелныз штаы„*и.'

о

В отдельный - 4 тяп - вкделлется взаимодействие нвЬпЮИю-врог!шп вогокЬп1а1ют хо всеми штатами ьшкопаразитов. Их взашлш? антагонизм обусловлен образованием антибиотиков обоими партнерами. '1 (1 # ■ .

Изучение -динамики роста тест-гриЗсв при взаимодействии с ' микопаразиташ показало, что в совместной культуре с активной группой штаммов скорость роста йзменялась еше до встречи с ми-копаразитом вследствие выделения последними антибиотических ве-' сеств в питательную среду. При взаимодействии с неактивной группой штаммов подавление скорости роста тест-грибов на расстоянии не происходило и только непосредственный контакт с колонией ш-копаразита препятствовал их дальнейшем/ росту.

Следовательно; характер взаимодействия между изученными видами ьшкопаразитов и тест-грибами связан со способностью миколе-разитов синтезировать антибиотики.

Во второй серии оштов для уточнения характера взаимодей-. ствел между микофшгада и тест-гркбаш представлялось целесообразным исключить влияние питательной среды. Для этого микопараг-зита выращивались в'стерильной воде ка живых и шртвых мицели-альных пленках тест-грибов, предварительно отмытых от питательной среды, а тшше на водных экстрактах из мицелиальных пленок. В контрольных вариантах шкофилы выращивались на стерильной венде, питательной среде (сусле) и живых пленках тест-грибов, продолжавших рост на питательной среде.

В контроле развитие микопаразитов видов рода Иууоюуоа и Тг1сЬо-11ие1ит го вент происходило .следующим образ 01Л, На пата' тельной среде они развивались быстро. Начало роста у итаммов, синтезирующих антибиотики, приходилось на 2-3 сутки после росе-

ва, Неактивная груша штаммов развивалась медленнее - начало роста отмечалось лишь на 4-5 сутки после посева. Еиззые пленки на питательной среде осваивали только наиболее активные продуценты антибиотиков. Исключение составляли зшше мицелиальные " пленки дат!«» сш^Ию и а. атт«1*1» , которые хорошо осваивались как активное, так и неактивной группой штадаов. Рос1? на стерильной воде практически отсутствовал. В опыте наиболее благоприятным вариантом для развития активной я неактивной групп штадаов оказались мертвое пленки тест-грибов. На вошшх экстрактах из мертвых пленок вследствие более ограшпевного запаса питательных вешеств развитие ыикопаразитов происходило так те, -как ■ в в контроле на питательной среде» лишь в первые сутки. По мере ястошешю субстрата роет грибов замедлялся. Йивые мицелл альшв пленки тест-грибов были довольво устойчивы к порагеняю мпкопа-разитами. Штаммы', выделяющие антибиотики, осваивали их на 3-7 суток позднее по сравнению с мертвыми пленками. Штомми из неактивной группы ыикопаразитов развивались на этом варианте субстрата еша медленнее начало роста приходилось на 10-15 сутки, а в кекотодах случаях они совсем не развивались.

Исследованные ютаьлн Тг1сь<х1«гв& т1хЗА» хорошо и в одинаковые сроки осваивали все варианты субстрата я в опыте, в в . контроле, за исключением стерильной волы.

Реизоляция тест-грибов после совместного роста со штаммами ВИДОВ НГР°"ТО*« в Тг1сЬо*Ь»о1лж го ввив выявила, что большинство из них сохранило жизнеспособность после 30-суточкого культивировали?. В результате совместного культивир ования штаммов тг1сЪо<1бг*л т1х1<1» с высокой степенью антибиотической активности с тест-грабаш отмечена потеря жизнеспособности боль»

шинства из ник» а штаммы о низкой степенью актибиотической активности по своему воздействию приближались к активной груше штаммов рола нур<якус*в»

Таким образом, из результатов опыта следует, что питательная среда способствуете устойчивости тест-грибов к воздействию

метюПараЗИТОВ ВИДОВ рОДа Нуротусео Я Тг1сЬо*Ьа«1ла ГО««щ

Кроме того, изученные микофилы могут использовать исследовании© тест-грибы в качестве единственного источника питания; а количество видов'грибов, удовлетворяю™* шгаевые потребности мико-Параэитов, зависит от способности последних выделять антибиотики.

Сопоставляя данные" первой в второй серии опытов по иэуче-шпо совместной культуры микопаразитов и тест-грибов, моано заточить, что способность к синтезу антибиотиков для исследованной группы мпкофилов является, одним из необходимых условий успешного освоения грибных субстратов.

2., Швдоскоппческ^ изучение хярактегцвзгогмо^ействид микопаразитов .и тест-грибов

, Изучение характера-взаимодействия между гифами микопаразитов и тест-грибов с помощью светового микроскопа показало, что все штаммы видов ■ Цурааусве И . Тт1сЬо«1«с1гав говеип , БЫДвЛЯ-шв биологически активные вещества, устанавливали контакты с большинством тест-грибов. Группа штаммов, не выделяющая антибиотические веиества» образовывала контакты с меньшим количеством тест-грибов. При взапдазейстоки некоторых из них с с1ж1»врог1«1

с1»Даврог1о1с1в« Л д1г«гпаг1& 1епи1» найлпиалось эна- . чительное количество контактов, вплоть до тяжей гиф паразита вдоль гифы хозяина, в то время как большинство штаммов, выде-

ляших антибиотики, устанавливало с ними значительно меньшее количество контактов. Однако предыдущие опыты показали, что -ыикопаразкты неактивной группы не осваивали мицелиалыше пленки этих тест-грибсв в отличие от штаммов, вдаеляюшх антибиотики. Это свидетельствует о том, что способность образовывать контакты не является ведущей во взаимоотношениях иикопаразитов с хозяином.

Изучение путей установления контактов у видов Втрсагсев и тт1сЪо«1«с1вм хч>>«тав с тесг-грибами показало, что данный процесс происходит по следующей схеме: гифа микопаразита изменяет направление роста в сторону гкфа хозяина при встрече с последней и затем продолжает расти вдоль гифа тест-гриба».тесно примыкая к ней. Надобная снизь осуществлялась как основными гифами микопаразитов, так'и боковыми ветвями. Другие типы контактов гиф - обвивания, образование гаусторий л неспециализирован-' пых внутренних гиф ни в одном случае не выявлены. Отмечен'следующий факт: ги$и микопаразитов контактировали только с вегетативными гифами хозяев. Контакта с репродуктивными структурами не наблюдались, ^рибы» образующие споры, сохраняли способность к спороношению. Не бшш обнаружены видимые морфологические изменения репродуктивных структур использованных тест-грибов. При взаимодействии активной группы штаммов микопаразитов с некоторыми тест-грибами отмечен ряд патологических изменений мицелия последних, Так, наиболее часто наблюдалось,усиленно© ветвление концов гиф хозяина, изменение морфологии клеток - многие из них приобретали неправ'иьную угловатую форму. У вы*о«*<ш1а ао1ап! кока, цри совместном росте с активными штаммами н. часто на-Злядались разрывы гиф, увеличение зернистости содержи-

ыого клеток. Дли выяснения рола антибиотиков в возникновения указанных изменений К. »о1*л1 выраииваяд в присутствии антибиотика, -внделеиногсг из культуральной жидкости одного из оташов В* юг«* А»» . Под влиянием антибиотика происходили сходные с вышеописанными изменения гиф и клеток.

Иэучейие характера взаимодействия тг1оь«4«г** т1г1Д* о тем жо набором тест-грибов показало» что все исподьзовавяыс штаммы образуют контакты о гифами других грибов по вышеописанной схеме. Помимо контактов данного типа часто происходило обвинение гиф паразита вокруг гиф хозяина и его репродуктивных структур. Отсутствие контактов «езду гифами отмечено ляль в двух случаях. При изучении места контакта между гяфой иккопаразжта я тест-гриба специализированные структуры типа буферных клеток иди аипрессориев не обнаружены.

Воздействие т. *1*1<и на испытанные тест-грибы даогошюно-во. Отмэчени взыевевяя морфологии и разрушения не только вегетативных структур, во и спор некоторых грибов. Подобные изменения часто наблюдались ев» до установления контактов между гифами ыдконараэита и хозяина* что, несомненно, является результатом действия антибиотиков. -

При взаимодействии т.т1г14вс тест-грибамядовольно ?асто наблюдалось образование внутренних неспецс£яческих гиф у последних. Однако это явление было отмечено и в контроле {чистая культура тест-гриба в аналогичных условиях). По морфологии внутренняя гифа самого грибгкхозяина может значительно отличаться от образу соей ее ги$н. Началом внутренней гифы ямяетсл септа родительской га^ы. По мере продвижения внутри родительской гифа внутренняя го$а может ветвиться и проходить в ряде случаев через не-

сколько клеток первой ко выхода в, округ ахяую сред?* Образующиеся в совместной культуре с микопаразитсм внутренние гифы гриба-хозяина морфологически не отличались от таковых б контроле. Однако в опытном варианте образование внутренних гиф приходилось на более ранние сроки по сравнению с контрольным. Наряду с вышеописанными в опытном варианте найлгщалось образование внутренних гиф иного типа: в разрушенные клетки хозяина внедрялись гифы т. и следовали далее.внутри них. ,

Таком образом, наблхихаеше ваш' внутренние гифы мошто

*

разделить на две категории: I) самого гриба-хозяина и 2) образуемые!. т^тМев мицелии хозяина. Одно из их существенных от- ■ личий заклшается в том, что в первом случае гифы берут начало от поперечной перегородки родительской гифы.

Образование собственных внутренних гиф - интрагифалышх -отмечено для некоторых, родов грибов Чокало 20), относящихся ко всем классам < Ба11эг , 1958; КЛИег, \adereoa , 1961; Во1щ] , 1975). Большинство авторов считает» что образование , внутренних гиф является.одной из форм регенерации в ответ на ■ повреждение родительской клетки различными факторами ( Ьочггу, гпвввш , 1966; сьап, БгврЬеп , 1967). На наш взгляд, образование внутренних гиф у тест-грибов в совместной культуре с т. *1гЫв связано с воздействием антибиотических веществ, выделяемых микопаразитом в питательную среду. Подобная стимуляция образования интрагифальных гиф у А1*егпжг1а цктсЫапд. Тапака.

под воздействием антибиотика полиоксина описана Ишизаки и др.

1

( 1еМьак1 , 1974, 1976). Образование внутренних гиф

можно считать одним из факторов устойчивости хозяина в ответ на поражение паразитом. . / ' , '

3. Характеристика антибиотических вешестр ви^ов

Нтвоатсея

Исходя из полученных результатов, представлялось целесообразным выделение биологически активных веществ, образуемых представителями рода нуроиусве , я изучение их свойств. Свой-

ч>

ства антибиотиков, синтезвруешх Trlchotheciwn тов«ип и Tri-chodex-ва riride , в литературе достаточно хорошо описаны.

Как показали результаты исследования, большинство изучении пгтамлов трех видов* Цурощус«в способна продуцировать внеклеточные антибиотические вещества в погруженной культуре на двух типах питательных сред. Исследованные ютаыш н. ro»ollue, Н. odoratue и д. auxantlua различались между собой, по степени биологической активности, которая зависит от состава среды. Но эта зависимость специфична для каждого штамма. Антибиотические вещества культуральных жидкостей штаммов Дтрощус*» сходны но спектру Действия и проявляли антибактериальную и. антнгрибную активность. Связь между активностью штаилов и их происхождением не прослеживалась.

Более детальное изучение влияния состава питательных сред

У -

па синтез антибиотиков тремя штаммами - 21/73' н. odor*tue, 72/72 в, awttntluc B 54/69 Н. roeellue выявило, что наиболее благоприятной средой для антибиотикообраз оваявя является пзв-ное сусло. В процессе биосинтеза антибиотиков активность культуральных жидкостей постепенно нарастала, достигая максимальной величины, как правило, на четвертые - шестые сутки после посева. На большинстве питательных сред антибиотическая актив-• ность оставалась на одном уровне или незначительно снижалась в течение длительного времени. Образование биомассы зависело от.

состава питательной среды* однако ее накопление не влияло на' антибиотическую активность культуральной жидкости.

Антибиотическая активность культу рал ьных жидкостей трех изученных штаммов í^ponyces не высока и составляла 6-24 ед. разведения для Badllus Bubtllie.

Изучение стабильности антибиотиков в культуральной жидкости к воздействию различных факторов показало, что они не разрушаются ва свету и термостабильны.

Выделенные экстракты антибиотиков обладали широким спектром действия, подавляя рост грамположятельныг бактерий, дрожжей и некоторых шцелиалькых грибов (табл. 2). Наиболее чувствительными оказались chaetonioa globo e-щи Кши», Alternarla te-nula и BelAintboeporium eorofctaiacmi 4 Минимальные концентрации антибиотиков, задерживавшие рост указанных грибов, составляли 150-250 мкг сырца на I мл, а рост Вве, eubtilie 1-4 ыкг/мл.

Хроматографическое исследование антибиотиков показало, что примененные системы растворителей можно разделить на три группы (табл. 3). В первой группе активное вещество оставалось на старте, во второй!-'перемешалось с фронтом растворителя или располагалось на некотором расстоянии ог него ' Rf 1,0-0,76). В третьей груше подвижность антибиотиков меньшая - значения rí не превышали 0,61-0,63.

Совпадение хроматографических спектров каждого из исследуемых антибиотиков при биоавтографии fi разных тест-обьектах свидетельствует об"их однородности. Кроме того, изученные препараты по подвижности в 6oj ьщинстве систем растворителей сходны между собой.

Табляпа 2

Спектр действия антибиотиков-сырцов, выделенных из культуральныг жидкостей видоврода нуращусвв

Диаметр подавления роста

Н. aurenti.ua Н.оаога*-ав Н.гояеПиа

Ва<з111иа еиЪМИв 28 29 ' 21 20 ■

. ЗДьрЬуХоеоссиа лиг«и« 37 17

ВасЬвг1сЫа со11 0 ■ 0 0

Те еи<1 отвода Г1иог«всвпв 0 0 0

БассЬахотусвв с«гву1в1ае 13 ■ ' ' *

15 0

С1айоарог1ш1 с!айоарог1о13вв 18 12 16

АЗЛ»гпаг1а t«Шlla 18 "17 ' +

Не }т1пгЬой рог1иш вогок1п1а1шт 23 26 17

ГвШсИНим «юп11 ^ 0

УивагАиш во1ао! 0 0 . 0

27х 18 •17"

Примечание: + диаиетр зоны подавления < 10 ми

О - отсутствие зоны подавления роста

24-'- зона отсутствия спороношния ' 1

Данные pH-хроматографии выявили нейтральный характер всех трех антибиотиков. При использовании водных систем растворителей (вода* насыщенная н-бутанолом и 3? dh^cI ) наблюдалось два пятна со значениями КС 0,00 и 0,84-0,95 при pH 2,3,4,5. При низких fH диаметр пятна у фронта растворителя увеличиваться и уменьшался на старте хроытограммы. При повторном хрома-тографировании элюатов пятен в тех же условиях вновь происходило разделение каждого злтата* на два пятна со сходными значениями Bf (0,00 и 0,82-0,92). Следовательно, в данном случае имело место не разделение на компоненты смеси веошств, а повышение растворимости антибиотиков в водных растворах при под-кяслеаии среды.

Изучение спектра поглощение подученных препаратов показало, что все три антибиотика имеют одинаковые тгси в областях 273,, 267 и 260 нм. (рис. I).

t *

Исследование плодовых тел гшденомицетов на присутствие

антибиотических веществ выявило, что в пораженных огрощгсев rosellus плодовых телах Armlllarlall« nellee (f.)Karst .присутствует антибиотик,^сходный по значению НГ с выделенным нами сырном из чистой культуры н. roe«iius . Следовательно, *

образование антибиотиков шкофилами. происходит и в естественных условиях их обитания.

Таким образом» изучение свойств аятибиотшсов-сырцов, выделенных из культур трех видов микопаразитов рода нурощухов , показало, что исследуемые штаныы обладавт невысокой степенью биологической активности. Продуцируемые ими антибиотики либо сами являются окрашенными соединениями, либо находятся в коми-

Тс-блица 3

Значения кг исследуемых препаратов (тест^объект -

Вас111иа ®иЬ*111в )

Система растворителей В. аигодЭДив Н, обогнав Н. гоевНив

I 0 0 » 0

2 0,95-0к97 0,90 , 0,93-0,94

з' 0,90-0,91 0,97 ■ 0,96

Ч 0,10-0к12 ' 0,50-0,72 0,92

5 ; 0,94 0,97-0,98 0,92 ,

6 0,95 .0,98 0,97

7 0,84 / 0,87-0,90 0,76-0,90

8 0,97 0,85-0,89 0,94-0,95

9 0,91-0,92 . 0,93-Ю,95 0,94-0,95

10 0,53-0,73 0,86-0,88 0,88-0,90

II 0 ■Ъ 0

12 0 о ■ , 0

13 0,89-0,91 0,94^0,^5 0,96

14 * 0,91-0,93 • 0,97-0,98 0,97

15 0,83-0,89 0,93-0,95 0,86

16 . 0,13-0,19 ; 0,61-0,62 0

17 0,92-0,96 ■ 0,92-0.93 :0,96-0,98

Примечание. I - легролейкый эфир, 2- бензол, 3 - хлороформ,

: 4 - четыреххлористый углерод, 5 - диэтиловый'эфпр, '

* 6 - этилацетат» 7 - амилацетат, 8 - апетон, 9 - н-бутаяол, 10 - метанол, II - вода, насыщенная н-бута-колом, 12 - 3^-ныВ хлористый аммоний, 13 - н-бута-нол, насыщенный водой + 2? пиперидин, 14 - н-бута-, нол - пиридин - веша (1:0,6:1), 15 - н-бутаяод-уксусная кислота - вода (2:1:1), 16 - гексан-сер-1 кый эфир-уксусная кислота (70:30:1 ),17- хлорофори-метанол-вола (65:25:4).Системы 1-7,9 насыщены водой.

лексе о пигментами. Будучи нейтральными соединениями, они хорошо растворяются во многих органических растворителях, малорастворимы в водных, но кислая реакция среда повышает их растворимости. Полученные данные свшет ельствуят о тем, что антибиотические вещества, выделенные из культуралышх жидкостей трех видов нтротпз-с«« , является лис о ишим веществом, либ^ очень близкими по химической структуре сиаднненияш.' Общность свойств выделенных антибиотиков дает основание предполагать и сходство их функций, что, вероятно, связано с близостью экологических ниш, занимаемых этими микооаразиташ.

X. При изучении характера взаимодействия пяти ¿шов шяо-фляькыг Грибов — вгропгевв гое«11ив, к. «<1о7а1а*, В. «игвлМп« ТгК&вОДееНш гоасиа, ТгХсЬойегш» т1г1<1в с грибаш различных систематических я экологических групп отмечена специфика в проявлении паразитических свойств. Полученные данные свидетельствуют о том, что круг возможных грибов-хозяев значительно шире, чем это отмечено в литературе.

2. Способность изученной группы грибов к шкопаразитаэму связана о образованием антибиотиков. Связь между гифами мико-саразита в хозяина типа контактов» вероятно» одна из дополнительных систем, обеспечивавших жизнеспособность паразитов.

3. По характеру воздействия Ка другие грибы - изученные ми-кофилы рода н^рошуслв в тпеьогьвегит дотт относятся к деструктивной группе бвотрофных микооаразитов.

' 4. Установлено» что виды рода нурЬвуй*»" образуют анти-' биотики как в культуре на жидких и твердых питательных средах,

так н в естественных, условиях обитания этих грибов,

5. Показано* что антибиотические вешвсгва,. образуем/е видами* Hypomycea , являются - нейтральными соединениями с широким спектром действия.

6. Антибиотические вещества трех видов рода нур°*Ус«в близки по своим свойствам и, возможно, представляют собой либо одно вешество, либо очень близкие по химической структуре соединения. Такое сходство, вероятно, связано о ^уп^ят1™" местообитанием и филогенетической близостью указанных видов.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации:

1. Лернер Л.Е., Сидорова И.И.,, Макарова И.О. Исследование антибиотической активности иикофильных грибов Dlploclaüun

alegans Bainer et Sartory и Dactylium dendrold«« Bull.ex Fr.

при глубинном культивирования. Микология и фитопатология,1976, том 10, » 3. ' 1

2. Сидорова И.И., Лернер Л.З. Роль биологически активных вешеств микофильннх грибов в иг взаимодействии с грибами-хозяевами и другими организмами в биоценозах. Тезясн докладов на Всесоюзном симпозиуме "Изучение грибов в биогеоценозах", 1977, Москва, "Наука". ■

. з, Сидорова И.И., Лернер Л.Е., Макарова М.О. Характеристи-. ка биологически активных■веществ иикофильвых грибов нурошусве го в* Пив (А.et S.ax Pr. )Tul., H.odoratue Arnold, H.our&atluB (Perв.ex Pr. )Tul. Микология и фитопатология, 1977, том П, * 4.

4. Лернер Л.Е., Сидорова И.И. Взаимодействие между некоторыми мнкопараэигама и другими грибами в совместной культуре. Бюллетень МОИП, 1977, том 82, № £.

Подл, к Жч.тм

Буи. гив. М Фм>. л. д. SS" УЧ.-ВЗД. Jt, 0,SJi

3»«»> iXOi. Т»р«ж 4.50

. - Иэд.»о Московского уваверсвтета. MtttN, K-9.

ya. Героев*. S/7.

Типографии Ksl-м МГУ. Места, Лсвгорн