Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимический состав и токсикологические параметры мицелиальных отходов производства авермектинов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Биохимический состав и токсикологические параметры мицелиальных отходов производства авермектинов"

На правах рукописи

Чонжилсурэнгийн Буянтогтох

БИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ОТХОДОВ ПРОИЗВОДСТВА АВЕРМЕКТИНОВ

03.00.23 - Биотехнология 03.00.04-Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

цА/

Москва 2004

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина».

Научные руководители: доктор биологических наук

Ведущая организация: Всероссийской научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко (ВИЭВ).

Защита состоится « 7 » декабря 2004 г. в .У. часов на заседании диссертационного совета Д 220.042.01 в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23. Тел.: (095) 377-93-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАВМиБ.

Мирзаев Миканль Нурбагандовнч;

доктор химических наук, профессор Зайцев Сергей Юрьевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Тихонов Игорь Владимирович;

доктор биологических наук, профессор Клопов Михаил Иванович

1 v по

Автореферат разослан «. .т..»

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Брылина В.Е.

ч&^о

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Как известно, среди различных лекарственных средств, применяемых в последнее время в борьбе с паразитозами животных, ведущее место занимают препараты авермектинового ряда. При этом наблюдается постоянный рост спектра препаратов, выпускаемых как на основе химически модифицированных, так и на основе натуральных авермектинов (СатрЬе11 Еаз1егЬгоок М., 1985; Мосин В.А., Дриняев В.А., Мирзаев М.Н., 1994; Мирзаев М.Н., Девришов Д.А., Савченков С.Н., 1995). Преимущества этих препаратов связаны с тем, что они действуют на широкий круг паразитов и более экологически чистые, чем известные химические аналоги.

В то же время нельзя не отметить, что существующие технологии получения авермектинсодержащих препаратов обладают определенными недостатками, например, до конца не решен вопрос утилизации отходов и соответствующего снижения вредного воздействия на окружающую среду. Значительные количества мицелия продуцента авермектинов (более 100 кг/м3 культуральной жидкости) после экстракции целевого продукта выбрасывается в окружающую среду.

При этом хорошо известно, что мицелий стрептомицетов содержит массу таких биологически ценных компонентов, как аминокислоты, липиды, витамины, микроэлементы и др., представляющих интерес для практического применения. Мицелиальные отходы производства антибиотиков предлагается использовать для получения веществ, обладающих адьювантными свойствами (Ракова Т.Н. 1989), в качестве компонента питательной среды для продуцента тетрациклина (Пономарева Л.В., Яковлев В.И., Цветкова Н.П. и др. 1999), при получении клея (Кадималиев Д.А., Ревин В.В., Ватолин А.К. и др. 2002) и др.

Таким образом, перспективным направлением дальнейшего

усовершенствования и оптимизации различных технологий получения целевых

продуктов микробиосинтеза с помощью стрептомицетов в целом и

РОС "ЛЛЬНА<Г

' Зург

авермектинсодержащих препаратов в частности представляется изучение возможности выделения биологически активных веществ (БАВ) из отработанного мицелия и соответствующего снижения отрицательного воздействия на окружающую среду.

IIель и задачи работы. Цель работы - на основе изучения биохимического состава и параметров безвредности биомассы Б^ерютусея ауегтШШ-5б, определить направления утилизации миделиалъных отходов производства авермектинов с одновременным получением хозяйственно ценных продуктов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- изучение влияния основных технологических параметров культивирования на развитие 5. тегтШИз в глубинных условиях;

- изучение биохимического состава (белки, углеводы, липиды) мицелия 5. сп>егтШН.г,

- выявление основных токсикологических параметров биомассы микроорганизма;

- изучение действия биомассы и липидов продуцента авермектинов на физиолого-биохимические показатели организма животных;

Научная новизна. Впервые изучены биохимический состав и параметры безвредное™ мицелиальных отходов производства авермектинов. Установлено, что биомасса микроорганизма, остающаяся после экстракции целевого продукта, практически безвредна при скармливании для лабораторных животных, содержит биологически активные вещества и оказывает положительное действие на факторы естественной резистентности животных. Показано, что липиды биомассы продуцента авермектинов обладают высокой антиокислительной активностью и представляют собой перспективное сырье для получения биопрепаратов.

Практическая ценность работы. Для снижения отрицательного воздействия на окружающую среду при получении авермектинов путем микробиосинтеза с помощью Streptomyces avermitilis-56 предложена схема утилизации мицелиальных отходов продуцента с одновременным получением биологически активных хозяйственно ценных продуктов.

Положения, выносимые яа защиту:

Результаты изучения биохимического состава и параметров безвредности биомассы S. avermitilis-56.

Данные по усовершенствованию технологии биосинтеза авермектинов путем утилизации мицелиальных отходов производства авермектинов.

Данные по выделению, очистке и изучению биологически активных свойств липидов продуцента авермектинов.

Результаты изучения действия липидов и биомассы S.avermitilis на физиолого-биохимические параметры организма животных.

Апробапия. Результаты работы изложены на методической и научной конференции, посвященной 85 - летию МГАВМиБ им.К.И.Скрябина, г. Москва, май 2004 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Объем и структура диссептании. Диссертационная работа изложена на 111 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, литературный обзор, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения и список использованной литературы.

П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы. Работа выполнена в Научно-исследовательской лаборатории инфекционной патолопга и биотехнологии и на кафедре органической и биологической химии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина в период 2002-2004 г включительно.

Объектами исследований служили микроорганизм Streptomyces avermitilis-56, подопытные животные - белые беспородные мыши, кролики.

Для изучения токсичности отработанной биомассы, а также установления влияния биомассы на гематологические, биохимические и иммунобиологические показатели организма животных использовали современные методы токсикологии, иммунологии и биохимии. Контроль биосинтеза биологически активных компонентов культурой S. avermitilis, их экстракция из мицелия и химическая очистка осуществлялись с использованием известных методов исследований (Folch J. е.а. 1957, Lowry О.Н. е.а. 1951, Trevelyan W.E. е.а. 1952), ТСХ, ВЭЖХ и спектрофотометрия.

2. Результаты исследований

2.1. Особенности технологии культивирования Streptomyces avermitilis-56 при получении биологически активных веществ

При культивировании микроорганизма в глубинных условиях в жидкую среду вносили 36-часовый вегетативный посевной материал в количестве 3-5 % от объема среды и колбы помещали на качалку при вращении 200-220 об/мин и температуре 27-28°С на 5-7 суток. В процессе роста микроорганизма контролировали pH культуральной жидкости, чистоту культуры микроскопированием, биомассу по сухому весу. Как видно из данных, представленных на рис.1, кинетика роста биомассы S.avermitüis выражается характерной сигмоидной кривой. Динамика изменения pH является характерным признаком для данной культуры (рис.1). В начальной стадии роста наблюдается подкисление среда, а с момента начала экспоненциального

роста рН куль тур альной жидкости начинает постепенно возрастать и к окончанию процесса культивирования составляет 7,5.

12 24 48 72 96 120

Время, ч

-ш- Биомасса, гр Углеводы в КЖ, г/л рН КЖ

Рис.1. Динамика накопления биомассы, утилизации углеводов и изменения рН в процессе развития Б.ауегтШШ

Характер развития продуцента авермектинов зависит также от плотности посева. Показано, что количество инокулята оказывает существенное влияние на длительность лаг-фазы и характер накопления биомассы. Из полученных данных следует, что оптимальное количество инокулята находится в пределах 3-6 % от количества исходной, т.е. засеваемой питательной среды.

12 24 36 48 60 72 84 96 108 Время, ч

■ Экономический коэффициент —А— Валовый выход АТР -•— Удельная скорость роста

Рис.2. Эффективность утилизации углеводов и скорость накопления биомассы по фазам развитии S.avermitilis

Данные (рис.2) о выходе АТФ и значении экономического коэффициента потребления источника энергии дают достаточно объективную информацию о метаболизме культивируемого организма и они согласуются с выше приведенными результатами о динамике физиолого-биохимических показателей микроорганизма.

Таким образом, развитие продуцента авсрмектинов в периодической культуре, являющейся основой технологии биосинтеза авермектинов, и образование биологически активных веществ, происходит по классической 8-образной кривой. Наибольшая биосинтетическая активность наблюдается к 6080 часам развития.

После завершения процесса выращивания В.амегтШШ культуральную жидкость отфильтровывали, а биомассу досушивали механическим отжимом и использовали для изучения ее биохимического состава и параметров безвредности на лабораторных животных.

2.2. Изучение биохимического состава мицелия 5. сп>егтШИч-56

Для предварительного удаления из мицелия авермектинового комплекса отфильтрованную биомассу промывали подкисленной соляной кислотой водой и экстрагировали такими органическими растворителями, как этиловый или изопропиловый спирт, ацетон.

Из данных опытов по определению содержания основных компонентов мицелия (белки, углеводы, липиды) следует, что соотношение указанных компонентов и их общее количество находится в характерных для микроорганизмов пределах (табл.1).

В наших исследованиях для сравнительного анализа микроорганизм культивировали на минеральной среде Чапека и на ГКС. Накопление биомассы на органической среде в тех же условиях значительно выше, а удельное содержание белка, углеводов и липидов на обеих средах имеет практически

одинаковое значение. Содержание общего белка, углеводов и липидов составляет 46,3-51,2 %, 23,8-32,7 % и 6,8-14,5 % соответственно.

Таблица 1

Биохимический состав мицелия Б.ауетйНИз

Варианты Абсолютная Содержание Содержание Общие Общие

опыта сухая биомасса общего экстрагируе- углеводы, липиды,

(АСБ), белка мого белка, % от АСБ % от АСБ

на 96 ч. роста, (К х 6,25), % от АСБ

г/л % от АСБ

Среда 3,9 46,3 7,56 23,8 9,4

Чапека 3,5 51,2 9,02 30,4 6,8

4,1 48,9 8,77 30,2 7,6

ГКС 16,3 49,6 10,72 32,7 10,8

12,1 48,8 8,49 31,0 14,5

15,7 50,3 11,55 26,4 13,9

По фазам развития продуцента авермектинов общий биохимический состав мицелия также не претерпевает существенных изменений. Наблюдается некоторое возрастание количества липидов к концу культивирования, а содержание белковых соединений выше в начале развития.

В начале культивирования, когда микроорганизм находится на стадии адаптации к конкретным условиям среды и происходит подготовка клеток к делению, удельное содержание белков достоверно выше, чем на стационарной фазе. Так, в одном их опытов количество «экстрагируемого» белка определяемого по методу Лоури в лаг-фазе составляет примерно 35 %, а на 96-й час роста та же величина находится в пределах 10-13 % от сухого веса мицелия.

Относительно данных по некоторому возрастанию количества липидов в биомассе к концу ферментации, надо отметить, что эти данные согласуются с известной литературной информацией свидетельствующей о некотором возрастании жировых веществ в клетках микроорганизмов. Известно также, что с возрастом культуры в клетках происходит изменение соотношения насыщенных и ненасыщенных жирных кислот липидов. Что касается соотношения различных классов липидов в клетках микроорганизмов, в том числе стрептомицетов, можно отметить то, что эта величина достаточно

нестабильная и зависит от вида микроорганизма, условий культивирования и др факторов.

Рис.3. Состав липидов биомассы S.avermitiliy. 1- moho- и диглицериды (1,2 %); 2-триглицериды (2,24 %); 3-стерины свободные (3,5 %); эфиры стеринов (28,9 %); 5-НЭЖК (64,1 %)

Как видно из данных, приведенных на рис.3, в мицелии S. avermitilis moho и диглицериды обнаружены в незначительных количествах, содержание стеринов и НЭЖК относительно высокое и составляет 28.9 % и 64,15 % соответственно.

При изучении биохимического состава мицелия продуцента авермектинов нами получены также данные, представляющие определенный интерес в плане оценке ферментативной активности микроорганизма.

35-37 45-50

Температура, "С

Рис.4. Липазная активность S.avermitihs

Как видно из представленных данных, липазная активность микроорганизма достаточная высокая и находится в пределах 0,02-0,07 ммоль/мин.мл.

13. Изучение биологически активных свойств липидов мицелия 8#ери>тусез агегтШШ-56

Как отмечалось выше, липиды стреотомицеггов привлекают внимание исследователей в связи с их высокой биологической активностью. Учитывая это, а также то, что в мицелии продуцента авермекгонов содержится значительное количество липидов, нами проведены исследования по выявлению отдельных стерт воздействия их на организм лабораторных животных. В работе была использована петролейноэфрфная фракция (ПЭФ) липидов и это связано со следующим. Во-первых, петролейный эфир хорошо экстрагирует липиды из биомассы, но плохо экстрагирует авермекгины, во-вторых, в литературе имеется информация о биологически полезных свойствах именно пегролейно-эфирной фракции стрептомицетов (РаковаТЛ, 1989).

Изучаемые образцы ПЭФ получали экстракцией биомассы продуцента авермектинов 20-кратным объемом эфира в течение 24 часов при температуре 37°С и периодическом перемешивании. Полученный экстракт отфильтровывали на вакуумной фильтровальной установке ПВФ-47/3 Владисарт-Сарториус, растворитель удаляли путем выпаривания на репортом испарителе и определенные количества липидов (0,5 мг/кг, 1,0 мгУкг и 10 мгУкг) вводили подопьпным мышам. Действие ПЭФ на организм животных оценивали по таким показателям сыворотки крови, как бактерицидная активность и содержание лизоцима. Эта показатели сыворотки крови являются важнейшими и информативными когда изучают, то или иное воздействие на организм. Имея определенные оптимальные значения в конкретных условиях среды, указанные показатели могут варьировал» в широких пределах при действии внешних факторов среды, особенно, экстремальных.

Активность лиэопима в сыворотсе отражает уровень обмена веществ в организме животных, в частности естественной резистентности, в силу чего

отмечаются динамические изменения содержания фермента в процессе адаптации организма к среде обитания. Содержание лиэоцима существенно изменяется в зависимости от вида микро- и махроорганизма, а также формы антигенного препарата и метода его аппликац ии.

Бактерицидная активность биологической жидкости является отображением интегральных протвомикробных процессов, вызванных гуморальными факторами естественной резиетенгаосга

Таблица2

Влияние объединенных липидных фракций В.ачегтШШ на показатели естественной резистетносш мышей (М±т)_

Варианты опыта До опыта Срок исследования

на 14-й день на 21-й день

Содержание лизоцима, мкг/мл

Контроль 408,00±31,00 414,00135,11 409,00±29,50

Опыт 1 мг/кг 411,00±31,60 503,27±44,15 548,00±47,13

Опыт 5 мг/кг 402,±27,66 544,76±30,00 511,11±28,32

ОпытЮ мг/к 406+32,10 431,44±39,20 496,76±43,80

Бактерицидная активность сыворотки крови мышей, %

Контроль 3,29±1,12 3,98±0,75 3,72±0,23

Опыт 1 мг/кг 2,41±033 9,13±1,12 18,42±1,98

Опыт 5мг/кг 3,37±0,45 10,54±1,11 13,15±1,43

Опыт 10мг/кг 3,80±0,56 9,90±0,60 5,9+0,43

Поэтому информация о бактерицидной активности сыворотки крови является одним из важнейших показателей состояния гомеостаза организма животных в конкретных условиях среды.

Как свидетельствуют данные табл. 2, липиды в дозе 1-5 иг/кг достоверно повышают уровень лизоцима в крови мышей.

Стимулирующее действие отмечается при концентрации липидов в пределах 1-5 мг/кг массы тела. Эти данные согласуются с ранее опубликованными результатами других авторов, которые свидетельствуют о ростстимулирующем и иммуномодулирующем действии ПЭФ на организм животных. Следует подчеркнуть также то, что степень действия ПЭФ липидов зависит от их концентрации (табл. 3).

Таблица 3

Действие ПЭФ биомассы Б.ауегтШШ на показатели естественной резистентности лабораторных мышей

Концентрация ПЭФ, мг/кг Содержание лизоцима, мкг/мл Бактерицидная активность, %

на 14-й день на 28-Й день на 14-й день на 28-й день

Контроль 0,25 0,5 1,0 5,0 10,0 410±25,3 467127,2 580±29,8 605,56+31,1 499,9139,8 350,613 430120,0 428140,5 490121,8 660,1112,3 492,5140,7 311,1143,5 3,1510,45 43±0,20 31,714,4 32,211,9 28,7+3,4 3,6510,7 4,12+0,35 8ДЮ.19 39,215,4 44,511,3 21,614,2 3,16+0,5

Анализируя изложенные данные в плане объяснения механизма столь высокой биологической активности изучаемых липидов нельзя не обратиться к известной научной информации об ауторегуляторных и антиоксидантных свойствах липидов ( Б.Н. Тарусов, В.А. Веселовский, 1978; А.И. Журавлев, 1982; М.Н. Мирзаев, Н.В. Седых, 1987). Считается, что липиды, обладая антиокислительной активностью, обеспечивают структурно-функциональную целостность биологических мембран в постоянно изменяющихся условиях внешней среды. В наших исследованиях прямыми опытами на модели с окисленной олеиновой кислотой методом хемютоминесценции показана высокая антиокислительная активность ПЭФ. Так, интенсивность хемилюминесценции через 3-5 часов после начала реакции, т.е. после добавления исследуемой фракции липидов продуцента авермектинов в реакционную кювету с олеиновой кислотой, являющейся моделью, составляет 47,8 имп/сек, а в контроле - 89-90 имп/сек.

Такая высокая антиоксидантная активность липидов без сомнений обеспечивает выше изложенные эффекты по действию ПЭФ на факторы естественной резистентности подопытных животных и подтверждает имеющуюся в научной литературе информацию о биологически активных свойствах липидов стрептомицетов.

24. Изучение биологически активных свойств мицелия ЯЬерЮтусех мегтШШ-56

Результаты, полученные при изучении состава мицелия продуцента авермектинов, показали, что в нем содержатся традиционно известные биохимические компоненты. Эта компоненты (белки, липиды, углеводы) пракгачески безвредны дня теплокровных, но дня полной уверенности и получения конкретной информации необходимо соответствующее исследование их. Кроме того, в мицелии могут содержаться небольшие количества неизвестных и токсичных веществ. Поэтому нами были проведены исследования по установлению безвредности мицелия 5. амегт Ш1и для животных.

24.1. Токсикологические параметры мицелия

Параметры токсичности мицелия продуцента авермектинов оценивали на белых беспородных мышах. Для изучения острой токсичности биомассу скармливали мышам массой 20-30 г по следующей схеме: 4 опытные группы (по 6 гол. в каждой) получали биомассу в дозе 20 мг/гол, 100 мг/гол, 200 мг/гол и 500 мг/гол, животным контрольной группы (6 гол.) биомассу микроорганизма не скармливали. При этом мицелий смешивали с тестом, изготовленным из пшеничной муки, таким образом, чтобы получить определенное соотношение мицелия и муки.

Из полученных результатов следует, что после скармливания белым мышам мицелия продуцента авермектинов в дозах 20-500 мг/гол (или 1,0-25,0 г/кг) никаких признаков интоксикации животных не наблюдалось. Введение более высоких доз биомассы одноразово физически не представляется возможным.

При изучении хронической токсичности в группе из 10 животных каждая мышь получала биомассу микроорганизма в дозе 100 мг ежедневно в течение 30 дней.

По внешним признакам и по массе тела опытные и контрольные животные не отличались. Эта данные свидетельствуют о том, что биомасса продуцента авермектинов при длительном скармливании не вызывает интоксикации животных и не обладает кумулятивными свойствами

2.5. Действие мицелия на развитие и биохимические показатели животных

Препарат не оказывает отрицательного воздействия на метаболизм (углеводный, жировой и белковый обмен) животных в целом Подтверждением сказанному служат данные табл. 4 и рис.7 и 8.

Таблица 4

Действие биомассы Б.тегтШШ на рост белых мышей

Изучаемые параметры Контрольна ж цгуцца Опытна» группа

Л» опыта 7 сут. 14 сут 21 сут. Др опыта 7суг 14 сут 21 сут

Масса жквотаых, г 30,23± 7,32 31,34* 11,75 32,3± 11,64 32,65± 8.82 24,98* 4,06 26,46* 4,16 28,56± 3,95 27,56* 6,75

Прцюсгмассы, г 1.1*0,4 2,1*0,6 2,4*0,75 1,48*0,4 3,58*0,8 5,73*2,1

Относительный прирост, % - 4,14*1,5 6,5*1,85 9,8*2,29 - 5,59*1,5 12,54*2,8 20,76*7,6

Как видно из представленных данных, прирост биомассы, который может быть оценен как интегральный показатель развития животных, в контроле намного ниже, чем в опыте (р < 0,05). Это свидетельствует о том, что мицелий продуцента авермектинов обладает положительным действием на накопление биомассы лабораторных мышей. Если бы присутствовало токсическое воздействие наблюдалось бы нарушение обменных процессов и как следствие этого - угнетение развития в целом. Следует отметить, что важнейшим показателем состояния организма является белковый обмен.

Гипопротеинемия свидетельствует либо о белковом голодании, либо о значительных потерях белка организмом, либо об угнетении биосинтеза белков. Причиной этого может быть нарушение обмена веществ животных в результате

развития различных хронических заболеваний, наличия в организме воспалительных процессов, интоксикаций

до опыта 7 сут. 14 сут. 21 сут.

□ Контрольная группа ■ Опытная группа

Рис.7. Содержание белка в сыворотке крови белых мышей при кормлении биомассой З.ауегттШ

Гиперпротеинемия сравнительно редкое явление и наблюдается при миеломах и кратковременно при тяжелых формах диарей, рвоте, диабете и др.

Что касается биохимических показателей сыворотки крови животных можно отметить, что содержание белка и липидов одинаковое в крови ПОДОПЫIных и контрольных животных (рис.7, 8)

до опыта 7 сут. 14 сут. 21 сут.

□ Контрольная группа ■ Опытная группа

Рис.8. Содержание липидов в сыворотке крови белых мышей при кормлении биомассой ^.ауегтийп

Анализируя приведенные данные, можно отметить, что все изученные показатели находятся в пределах физиологических норм клинически здоровых животных.

2.6. Действие мицелия продуцента авермектинов на факторы естественной резистентности животных

Естественная устойчивость организма к различным экстремальным факторам среды обеспечивается во многом и такими показателями, как концентрация лизоцима в сыворотке и ее бактерицидная активность. Поэтому при изучении безвредности биомассы 5. амегтШШ представлялось необходимым изучение указанных параметров в плане возможного действия на них мицелия.

Данные иммунологических исследований (содержание в сыворотке крови лизоцима и бактерицидная активность сыворотки крови) приведены в табл. 5 и они подтверждают отсутствие токсического действия мицелия на организм животных.

Представленные данные показывают, что бактерицидная активность сыворотки крови животных, которым скармливали мицелий Б.тегтШШ, достоверно выше, чем у контрольных (р<0,05), что в определенной мере согласуется с ранее опубликованной информацией о иммуностимулирующей активности липидов биомассы продуцента авермектинов (Шерстнев В.В.,2002).

Таблица 5

Влияние мицелия Б.ауегтШШ на показатели естественной резистентности

мышей (М±ш)

Группа животных До опыта Срок исследования

на 14-й день на 21-й день

Лизоцим сыворотки крови мышей, мкг/мл

Контрольная(препарат не вводили) 419,00±22,00 423,00±25,11 413,00к32,00

Опыт 100 мг 416,00+28,00 517,56±39,31 512,14±42,30

Опыт 200 мг 419,38±27,66 544,76±30,00 511,11128,32

Бактерицидная активность сыворотки крови мышей, %

Контрольная(препарат не вводили) 3,02±1,12 3,15±0,45 4,12±0,35

Опыт 100 мг 2,41±0,33 9,13±1,12 8,92±1,98

Опыт 200 мг 3,37±0,45 10,54±1,11 13,15±1,43

2.7. Действие мицелия продуцента авермектинов на гематологические показатели

При оценке действия тех или иных факторов на метаболизм организма животных объективным показателем может служить состояние форменных элементов крови, т.е. эритроцитов и лейкоцитов.

Как известно, обладая значительной площадью поверхности эритроциты способны захватывать и переносить значительные количества кислорода и углекислого газа. Это фактически является основой обеспечивающей нормальную жизнедеятельность всех органов и тканей в постоянно изменяющихся условиях среды. Помимо этого эритроциты также принимают участие в транспорте аминокислот, адсорбции токсинов. Отклонения в концентрации эритроцитов ведет к нарушению жизненно важных функций организма.

Лейкоциты выполняют - фагоцитирование бактерий и инородных тел, участвуют в процессах свертывания крови и других реакциях обмена веществ, поэтому информация о лейкоцитах крови также является одним из основных в гематологических исследованиях.

Результаты гематологических исследований, проведенных на лабораторных животных, представлены в табл. 6. Полученные данные свидетельствуют о том, что при скармливании подопытным животным проэкстрагированного мицелия продуцента авермектинов в количестве более 10 г/кг массы существенного отклонения от нормы в составе крови не наблюдается.

Как видно из данных, изложенных в табл. 6, содержание основных компонентов крови, а именно, гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов подвержено некоторым колебаниям. Однако эти колебания носят естественный характер, т.е. не выходят за известные физиологические нормы, а отличия между контролем и опытом не достоверны.

Таблица 6

Гематологические показатели крови кроликов, которым скармливали мицелий продуцента авермектинов_

Контролируемые Параметры Время анализа, сутки исходные данные Контроль

7 14 21

Гемоглобин, г/л 101±9,8 111110,7 104112,5 106117,0 10419,4

Эритроциты, 10®/мл 4,0510,33 3,810,39 4,510,44 4,1910,60 —

Лейкоциты, 106/мл 7,П±0,62 6,510,80 6,910,57 7,0Ю,83 7,1911,33

Нейтрофилы, % сегментоядерные 14,311,22 19,213,1 19,913,2 15,411,5 17,9012,1

Эозинофилы,% 1,510,20 1,310,3 1,110,12 1,810,36 1,98Ю,91

Лимфоциты,% 88,217,35 78,516,1 79,918,6 78,2314,7 77,6014,8

Моноциты,% 1,4Ю,4 1,510,60 1,810,60 2,910,8 2,910,57

Приведенные выше данные, полученные при гематологических исследованиях крови животных, которым скармливали мицелий продуцента авермектинов, согласуются с данными, касающимися биохимических показателей крови изучаемых животных.

Препарат не оказывает существенного воздействия как на метаболизм животных в целом, так и на такие его параметры, как углеводный, жировой и белковый обмен. При выборочном убое животных патологоанатомических изменений в паренхиматозных органах не выявлено.

ВЫВОДЫ

1. Впервые проведены исследования по выявлению биохимического состава и параметров безвредности мицелия продуцента авермектинов, показано, что он не содержит в своем составе токсических компонентов и не оказывает патологического действия на организм лабораторных животных, т.е. кроликов и белых мышей.

2. Технологический процесс получения авермектинов может быть усовершенствован введением дополнительных этапов экстракции липидов из отработанного мицелия и использования мицелия в качестве добавки к кормам

3. Биохимический состав мицелия продуцента авермектинов зависит от условий культивирования, а содержание таких основных компонентов, как белок, углеводы, липиды в сухой биомассе варьирует в определенных пределах - 46-51 %, 24-33 %, 7-15 % соответственно.

4. Липиды продуцента авермектинов обладают высокой антиоксидантной активностью и представляют собой перспективное сырье для применения в качестве ингредиентов лекарственных средств

5. Установлено, что как биомасса в целом, так и липцдная фракция мицелия продуцента авермектинов, оказывают ростстимулирующее действие на организм лабораторных животных.

6. Впервые показано положительное действие мицелия продуцента авермектинов на показатели естественной резистентности лабораторных животных. Содержание лизоцима и бактерицидная активность сыворотки крови мышей, которым скармливали мицелий, достоверно выше по сравнению с контролем.

7. Отработанный мицелий, остающийся как отходы при биосинтезе авермектинов по существующей в настоящее время технологии, может быть использован для вторичной переработки с получением биологически активной липидной фракции и резким снижением вредного воздействия на окружающую среду.

Сведения о практическом использования результатов исследований

Липиды продуцента авермектинов, получаемые как побочный продукт и обладающие антиокислительной активностью, могут быть использованы в качестве сырья для получения препаратов ветеринарного назначения.

Биомасса продуцента авермектинов, остающаяся после извлечения

целевого продукта, может быть рекомендована в качестве богатой белком

кормовой добавки.

Рекомендации по использованию научных выводов

Полученные нами результаты по установлению биохимического состава и безвредности мицелия S.averndtilis рекомендуются для использования при усовершенствовании технологического регламента получения авермектинов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Буянтогтох Ч., Мирзаев М.Н., Зайцев С.Ю., Манджиев О.Х. Мицелий продуцента авермектинов как источник биологически активных веществ для ветеринарии // ХП Международный Московский конгресс по болезням мелких домашних животных материалы: Тез.докл. - М. - 2000. - С. 180.

2. Мирзаев М.Н., Буянтогтох Ч., Манджиев О.Х., Гусейнов Н.Г. Авермектиний продуцентын мицелийг биологийн идэвхит бодис гарган авахад ашиглах нь // Шинэ бугээл, пшлдэг технологи. Улаанбаатар хот. - 2003. - С.86-88.

3. Мирзаев М.Н., Шерстнев В.В., Манджиев О.Х., Буянтогтох Ч. Липиды Streptomyces avermitilis: возможность применения в ветеринарной медицине // Биотехнология. - 2004. - №3. - С.75-77.

4. Чойжилсурэн Б., Мирзаев М.Н. Некоторые показатели безвредности мицелия продуцента авермектинов // Ветеринарная медицина. - М.: МГАВМиБ им. К.И.Скрябина. - 2003. - №3. - С.21-22.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 01.11.04 Тираж 100 экз. Усл. п. л. 1,31 Печать авторефератов (095) 730-47-74,778-45-60

РНБ Русский фонд

2006-4 4890

\

09 НОЯ Ш

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чойжилсурэнгийн Буянтогтох

ВВЕДЕНИЕ • I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общая характеристика микроорганизмов рода БКерШтусех 8

2. Практически значимые биологически активные вещества, 9-20 продуцируемые стрептомицетами.

3. Биотехнологические процессы получения авермектинов и 21 -24 готовых лекарственных средств на их основе

4. Влияние препаратов авермектинового ряда на организм 24-29 животных

5. Эффективность и формы препаратов на основе метаболитов 29 Б^ерЮтусеБ ауегтШШ

5.1. Препараты, содержащие в качестве действующего вещества 29-32 ивермектин

Ф 5.2. Препараты, содержащие в качестве действующего вещества 32-36 натуральные авермектины

6. Проблема утилизации отходов и охраны окружающей среды при 37-49 получении БАВ на основе микробиосинтеза

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы 50

2. Результаты исследований

2.1. Особенности технологии культивирования 5".ауегтШИз-56 55-61 при получении биологически активных веществ

2.2. Изучение биохимического состава мицелия З.ауегтШШ 61

2.3. Изучение биологически активных свойств липидов мицелия 66-71 Б.юегтШШ-Зб

2.4. Изучение биологически активных свойств мицелия

S.avermitilis

2.4.1. Токсикологические параметры мицелия 72

2.5. Действие мицелия на развитие и биохимические показатели 73-77 животных

2.6. Действие мицелия на иммунобиологические показатели 77-81 организма животных

2.7. Действие мицелия продуцента авермектинов на 82-85 гематологические показатели

III. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 82

IV. ВЫВОДЫ

V. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ 91 РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

VI. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ 91 ВЫВОДОВ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимический состав и токсикологические параметры мицелиальных отходов производства авермектинов"

Актуальность проблемы. Как известно, в последнее время широкое применение в ветеринарной практике нашли противопаразитарные препараты, содержащие в качестве действующего начала авермектины, продуцируемые Streptomyces avermitilis. Преимущества этих препаратов связаны с тем, что они обладают широким спектром действия и более экологически чистые, чем известные химические аналоги. В зарубежных странах наиболее широко известен препарат Ивомек, разработанный учеными фирмы MSD (W.C. Campbell, V.W. Benz, 1984; W.C. Campbell, M. Easterbrook, 1985; J.C.J.W. Knox, K.S. Marbury and others, 1989) и содержащий в качестве активного начала комплекс химически модифицированных авермектинов В]а и Bib- ивермектин.

Ивермектин используется в качестве действующего начала и в большинстве других зарубежных противопаразитарных препаратах (Ивомек плюс, Баймек, Пандекс, Ивомек пурон и др.).

Научно-исследовательские работы по разработке технологии биосинтеза авермектинов и получению соответствующих лекарственных средств в России были начаты в конце 80-х годов учеными НПО «Биотехнология», МГП «Бифидум». В итоге этих работ были созданы препараты Аверсект-1, Аверсект-2, Ниацид и др., содержащие в своем составе натуральные авермектины и по своим лечебно-профилактическим характеристикам не уступающие известным аналогам [ 62, 63, 103, 104 ].

В то же время нельзя не отметить, что существующие технологии получения авермектинсодержащих препаратов в определенной степени носят незавершенный характер в плане того, что до конца не решен вопрос утилизации отходов и соответствующего снижения вредного воздействия на окружающую среду. Значительные количества мицелия продуцента о авермектинов (более 100 кг/м культуральной жидкости) после экстракции целевого продукта выбрасывается в окружающую среду.

При этом хорошо известно, что мицелий стрептомицетов содержит значительное количество таких биологически ценных компонентов, как аминокислоты, липиды, витамины, микроэлементы и др. (Кузнецов В.Д., Ефимова и др. 1975, Журавлев А.И. 1982, Ракова Т.Н., Рецкий,1998 и др.).

Таким образом, перспективным направлением дальнейшего усовершенствования и оптимизации различных технологий получения целевых продуктов микробиосинтеза с помощью стрептомицетов в целом и авермектинсодержащих препаратов в частности представляется изучение возможности выделения биологически активных веществ (БАВ) из отработанного мицелия и соответствующего снижения отрицательного воздействия на окружающую среду.

Поэтому исследования по выявлению биохимического состава биомассы продуцента авермектинов, разработке технологических процессов выделения и очистки БАВ, содержащихся в мицелии продуцента, а также созданию новых лекарственных препаратов на их основе, является актуальной проблемой ветеринарной медицины, биохимии и биотехнологии. Такие исследования имеют значительное народно-хозяйственное, социальное и экологическое значение.

Цель и задачи работы. Целью работы является на основе изучения биохимического состава и параметров безвредности биомассы Б.ауегтШШ, определить направления утилизации мицелиальных отходов производства авермектинов с одновременным получением хозяйственно ценных продуктов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- изучение влияния основных технологических параметров культивирования на развитие ауегтШШ-56 в глубинных условиях;

- изучение биохимического состава (белки, углеводы, липиды) мицелия амегтШШ-56\

- моделирование технологического процесса биосинтеза авермектинов и получение проэкстрагированной биомассы микроорганизма;

- выявление основных токсикологических параметров биомассы микроорганизма;

- изучение действия биомассы и липидов продуцента авермектинов на физиолого-биохимические показатели организма животных;

- разработка рекомендаций по усовершенствованию технологического регламента получения авермектинов путем утилизации мицелиальных отходов продуцента и соответствующего уменьшения вредного воздействия на окружающую среду.

Научная новизна. Впервые изучены биохимический состав и параметры безвредности мицелиальных отходов производства авермектинов. Установлено, что биомасса микроорганизма, остающаяся после экстракции целевого продукта, практически безвредна при скармливании для теплокровных, содержит биологически активные вещества и оказывает положительное действие на факторы естественной резистентности животных. Показано, что липиды биомассы продуцента авермектинов обладают высокой антиокислительной активностью и представляют собой перспективное сырье для получения биопрепаратов.

Практическая ценность работы. Для снижения отрицательного воздействия на окружающую среду при получении авермектинов путем микробиосинтеза с помощью S. avermitilis предложена схема утилизации мицелиальных отходов продуцента с одновременным получением биологически активных хозяйственно ценных продуктов.

Положения, выносимые на защиту:

Результаты изучения биохимического состава и параметров безвредности биомассы S. avermitilis-56.

Данные по усовершенствованию технологии биосинтеза авермектинов путем утилизации мицелиальных отходов производства авермектинов.

Данные по выделению, очистке и изучению биологически активных свойств липидов продуцента авермектинов

Результаты изучения действия липидов и биомассы S.avermitilis на физиолого-биохимические параметры организма животных.

Апробация.

Результаты работы изложены на методической и научной конференции, посвященной 85 - летию МГАВМиБ им. К.И.Скрябина, г. Москва, май 2004 г.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 111 страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, литературный обзор, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, сведения о практическом использовании результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы, включающий 191 источников, в том числе 37 иностранных. Материалы диссертации иллюстрированы 16 рисунками и 11 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Чойжилсурэнгийн Буянтогтох

IV. выводы

1. Впервые проведены исследования по выявлению биохимического состава и параметров безвредности мицелия продуцента авермектинов, в показано, что он не содержит в своем составе токсических компонентов и не оказывает патологического действия на организм лабораторных животных, т.е. кроликов и белых мышей.

2. Технологический процесс получения авермектинов может быть усовершенствован введением дополнительных этапов экстракции липидов из отработанного мицелия и использования мицелия в качестве добавки к кормам

3. Биохимический состав мицелия продуцента авермектинов зависит от условий культивирования, а содержание таких основных компонентов, как белок, углеводы, липиды в сухой биомассе варьирует в определенных пределах - 46-51 %, 24-33 %, 7-15 % соответственно.

4. Липиды продуцента авермектинов обладают высокой антиоксидантной активностью и представляют собой перспективное сырье для применения в качестве ингредиентов лекарственных средств

5. Установлено, что как биомасса в целом, так и липидная фракция мицелия продуцента авермектинов, оказывают ростстимулирующее действие на организм лабораторных животных.

6. Впервые показано положительное действие мицелия продуцента авермектинов на показатели естественной резистентности лабораторных

• животных. Содержание лизоцима и бактерицидная активность сыворотки крови мышей, которым скармливали мицелий, достоверно выше по сравнению с контролем.

7. Отработанный мицелий, остающийся как отходы при биосинтезе авермектинов по существующей в настоящее время технологии, может быть использован для вторичной переработки с получением биологически активной липидной фракции и резким снижением вредного воздействия на окружающую среду.

V. Сведения о практическом использовании результатов исследований

Липиды продуцента авермектинов, получаемые как побочный продукт и обладающие антиокислительной активностью, могут быть использованы в качестве сырья для получения препаратов ветеринарного назначения.

Биомасса продуцента авермектинов, остающаяся после извлечения целевого продукта, может быть рекомендована в качестве богатой белком кормовой добавки или компонента питательных сред для культивирования микроорганизмов.

VI. Рекомендации по использованию научных выводов

Экспериментальные данные, полученные нами при изучении биохимического состава и безвредности мицелия продуцента авермектинов, могут быть рекомендованы для использования при дальнейшей оптимизации и усовершенствовании технологического регламента биосинтеза, выделения и химической очистки целевого продукта.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чойжилсурэнгийн Буянтогтох, Москва

1. Агрохимические методы исследования почв. -М.: Наука. -1975.

2. Айзина А.Ф. Хроматографическое изучение биологически активных фракций актиномицетов и грибов: Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Кишинев. -1974. -23 с.

3. Акильжанов P.P. Эффективность Ивомека при буностомозе и эймериозе овец // Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. Иваново. -1991. - С. 6-8.ф 4. Антибиотики и антибиоз в сельском хозяйстве. Пер. с англ. -М.:1. Колос.-1981.-360 с.

4. Антипов A.A. Сравнительная эффективность некоторых антгельминтиков при метастронгилезе свиней // Материалы научн. конф. «Легочные и желудочно-кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними». М.: -1993. -С. 8.

5. Апалькин В.А. Организация лечебной и профилактической работы в скотоводстве Алтайского края при паразитозах // Паразиты и паразитарные болезни в Зап.Сиб. / Материалы докл. Научн. Конф. -Новосибирск. -1996. -С. 5-6.

6. Апалькин В.А. Макроциклические лактоны при паразитозах крупного рогатого скота // Проблемы адаптации с.-х. животных в

7. Сибири /Под ред. П. Н. Смирнова. Новосибирск. -1995. -С. 241243.

8. Апухтин Г.И., Царенко А.Ф., Петряков Ю.Н. О лечебной и профилактической эффективности кормогризина // Ветеринария. -1971.-№10.-С. 88.

9. Артемов Б.Т., Ракова Т.Н., Ефанова Л.И. Использование адъювантов в системе специфической профилактики болезней молодняка свиней // Тез. докл. Всесоюз. конф. «Профилактика болезней молодняка вживотноводческих комплексах». -Воронеж. -1981. -С. 90-91.

10. Артемов Б.Т., Ракова Т.Н., Ефанова Л.И., Кузьмин A.B., Жмуров Н.Г., Ляпина Т.Е. Новые перспективы использования культуры Str.griseus в животноводстве // Тез. докл. 7-ого съезда Всесоюзн. микр. об-ва. -Алма-Ата. -1985. -С. 8.

11. Архипов И.А. Определение терапевтической эффективности антгельминтиков // Бюл. ВИГИС. М. -1991. -Вып. 55. -С. 3-6.

12. Архипов И.А. Пролонгированное действие Ивомека против микроонхоцерк крупного рогатого скота. // Бюл. ВИГИС. М. -1987.-Вып. 47.-С. 15-19.

13. Архипов И.А. Эффективность Ивомека при нематодозах крупного рогатого скота // Тр. ВИГИС. М. -1992. -Т. 31. -С. 3-9.

14. Архипов И.А. Эффективность накожного применения Ивомека против нематод и эктопаразитов крупного рогатого скота // Тр. ВИГИС. -М. -1992. -Т. 31. -С. 10-15.

15. Архипов И.А., Аксенова И.Н., Земсков В.А. Эффективность дуотина против эндо- и эктопаразитов крупного рогатого скота //Ветеринария. -М. -1995. -№ 2. -С. 38-39.

16. Архипов И.А., Мальцев K.JL, Дурдусов С.Д., Лазарев Г.М. Оценка противопаразитарной эффективности дектомакса //Ветеринария. -1997. -№2.-С. 35-36.

17. Асеев И.В., Широков А.Г. Аминокислотный состав кормогризина, витамина и актиномицетов продуцентов этих препаратов // Тез. докл. науч. конф. по применению микробных метаболитов в животноводстве. -Кишинев. -1963. -С. 69-71.

18. Асонов Н.Р. Микробиология. 4-е изд. -М.: Колос. -2001. -352 с.

19. Ахрем JI.A., Титов Ю.А. Стероиды и микроорганизмы. -М. -1970. -526 с.

20. Багамаев В.М., Водянов A.A. Эффективность Цидектина при саркоптозах животных //Актуальные проблемы медицинской и ветеринарной паразитологии.- Витебск, 1993.- С. 103-104.

21. Баджинян С.А. Роль липидов в процессах взаймодействия мембранных структур с эндогенным физиологически активными веществами: Автореф. дисс. докт. биол. наук. М. -1985. — 40 с.

22. Баев A.A. Биотехнология. -М.: Наука. -1984. -353 с.

23. Беляков В.Д., Каминский Г.Д. Управляемые инфекции и самоциркуляция паразитарных систем // ЖМЗИ.—1986.- № II. -С. 8.

24. Бережная П.П., Степурин Г.Ф., Степурина З.К. и др. Эффективность скармливания витамина В)2 и кормогризина молодняку свиней // Использование микроорганизмов в народном хозяйстве. -Кишинев. -1965.-С. 39-44.

25. Бережная П.П., Степурин Г.Ф., Степурина З.К. Эффективное применение кормового гризина при откормке свиней // Науч. тр. / Кишиневский с.-х. ин-т. -1964. -Т. 35. -С. 169-172.

26. Березкина C.B. Лекарственные формы ветеринарных антгельминтиков: Автореф. дисс. докт. вет. наук. М. -1992. -С. 40.

27. Березкина C.B. Опыт применения ивомека при паразитарных болезнях овец // Тр. ВИГИС. -М. -1992. -Т. 31. -С. 22-30.

28. Биоантиокислители и регуляция окислительных процессов в клетке. -М.: Изд-во МГУ. -1972. -98 с.

29. Биосинтез и метаболизм липидов у микроорганизмов // Тез. докл. II-й Всесоюз. конф. -М. -1982. -267 с.

30. Биохимические методы исследования в клинике / Под.ред. A.A. Покровского. -М.: Медицина. -1969. -652 с.

31. Богуш A.A., Урбанович H.A., Лукьянчик С.А. Саркоптоз свиней и оценка качества мяса // Ветеринария. -1992. № 2. -С. 32.

32. Божко В.И., Шевченко А.К. О механизме действия кормогризина на организм поросят сосунов // Использование микроорганизмов в народном хозяйстве. -Кишинев. -1966. -С. 51-52.

33. Бородина P.A. некоторые физиолого-биохимические особенности актиномицетов и грибов при развитии на средах с углеводородами // Физиология микроорганизмов. -Ташкент. -1970. -С. 145-147.

34. Бурлакова Е.Б., Архипова Г.В., Голощапов А.Н., Молочника Е.М., Хохлов А.П. Мембранные липиды как переносчики информации // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. -М. -1982.-С. 74-83.

35. Бурцева С.А. Ковальчук Л.П. Антиоксидантные свойства биологически активных липидов актиномицетов // Тез. Всесоюз. совещ. «Биоантиоксидант». Черноголовка. -1983. -С. 190.

36. Бурцева С.А. Микробные биоантиоксиданты липидной природы: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М. -1986. - 14 с.

37. Бурцева С.А. Ракова Т.Н. Итоги и перспективы применении некоторых микробных препаратов в условиях специализированных хозяйств // Тез. докл. респуб. конф. «Задачи молодых ученых

38. Молдавии по повышению эффективности науки в условиях специализации и концентрации сельского хозяйства.» -Кишинев. -1978.-35 с.

39. Василевская И.А. Актиномицеты продуценты биологически активных веществ. -Киев. -1979. -35 с.

40. Волков Ф. А., Тарасов В. В., Шевченко С. В., Апалькин В. А. Эффективность пурона при паразитозах телят // Профилактика паразитарных болезней животных ивермектином. Новосибирск. -1991.-С. 22-26.

41. Волков Ф.А. Эффективность препаратов авермектина и милбемицина при нематодозах животных / Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии // Материалы докл. научн. конф. -М. -1995. -С. 36-37.

42. Волков Ф.А., Апалькин В. А. Корешков M. Н. Ивермектин в ветеринарии (Ивомек, Эквалан и другие препараты). -Новосибирск. -1995.-С. 53.

43. Волков Ф.А., Апалькин В. А., Козяков В. С. Эффективность ивомека при паразитозах телят // Профилактика паразитарных болезней животных ивермектином. Новосибирск. - 1991. - С. 8-14.

44. Волков Ф.А., Димов С.К., Апалькин В.А. Эффективность применения ивомека при паразитарных болезнях крупного рогатого скота // Ветеринария. -1994. № 4. -С. 32-34.

45. Волков Ф.А., Ефремова Е.А., Шкиль С.П., Тарасов В.В., Шевченко C.B. Гельминтологическая оценка пастбищ при разных схем применения ивомека овцематками // Профилактика паразитарных болезней животных ивермектином. Новосибирск. — 1991. — С. 4248.

46. Волков Ф.А., Козяков В. С. Эффективность ивомека придиктиокаулезе телят. // Эпизоотология, диагностика и профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных. □ Новосибирск. 1992. - С. 90-94.

47. Волкова Г.Н., Белякова А.Н. Эффективность универма // Ветеринарная газета. -1996. № 11. -С. 38.

48. Гаврилова O.A. Гризин при откорме цыплят и утят // Птицеводство. -1962. -№ 12. -С. 17-18.

49. Гаврилова O.A. Изучение эффективности кормогризина в птицеводстве // Антибиотики в животноводстве и ветеринарии. -М. -1963.-С. 58-64.

50. Гаврилова O.A. Повышение продуктивности животных при использовании отечественных препаратов микробиологического синтеза (кормогризин, витамин, кормарин): Автореферат канд. дисс. -Горки.-1971.-35 с.

51. Гаджиев И.М. Влияние антгельминтиков ивермектина, альбендазола и фенотиазина на эмбриогенез и генетические структуры животных: Автореферат канд. дисс. -М. -1985. -С. 22.

52. Гаджиев И.М. Параметры острой токсичности ивермектина // Бюлл. Всес. института гельминтологии. -1984. Вып. 37. - С. 47.

53. Гвоздяк Р.И., Матышевская М.С., Григорьев Е.Ф., Литвинчук O.A.

54. Микробный полисахарид ксантан. Киев: Наукова Думка. -1989.

55. Гиляров М.С. Зоологические методы компостирования органических отходов // Вестник АН СССР. -1982. -№ 9. -С. 80-83.

56. Головкина Л.П. Эффективность фармацина против личинок овечьего овода / Материалы научн. конф., посвящ. 50-летию Краснодарской НИВС. -1996. ч. I. -С. 190.

57. Грибанов Г.А. Структура и биологическое значение фосфолипидов // Успехи современной биологии. -1975. -Т. 80. -Вып. 3(6). -С. 382398.

58. Даугалиева Э.Х., Абрамов В.Е. Эффективность ивомека при энхоцефалезе овец // Бюл. ВИГИС. М. -1994. -Вып. 38. -С. 5-7.

59. Деревягин В.А., Деревягина Р.Н., Кравченко М.Е., Русакова И.В. Переработка органического сырья // Химизация сельского хозяйства. -1989. -№ 7. -С. 25.

60. Донец В.А. Изучение биосинтеза липидов у некоторых сапрофитных микобактерий: Автореферат канд. дисс. -Саратов. -1971.-23 с.

61. Дриняев В.А., Стерлина Т.С. Авермектины: естественная изменчивость штамма продуцента Streptomyces avermitilis ВКМ Ас 1301 // Биотехнология. -1994. - № 4. -С. 17-20.

62. Дриняев В.А., Стерлина Т.С., Березкина Н.Е. Авермектины: селекция штамма продуцента Streptomyces avermitilis ВКМ Ас 1301. Получение естественного мутанта // Биотехнология. -1994. -№2.-С. 16-18.

63. Дурдусов С. Д. Гельминты, эпизоотология и профилактика основных гельминтозов мясного крупного рогатого скота в Калмыкии //Автореферат канд. дисс.-М. -1994. -26 с.

64. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. -М.: Высшая школа. -1986. с.

65. Емцев В.Т., Мишустин E.H. Микробиология. -4-е изд. -М.: Колос. -1993.-383 с.

66. Ерболатов К. M. Профилактика стронгилятозов жвачных животных в Уральской области // Проблемы профилактики паразитозов животных в Казахстане. Алма-Ата, 1988. -С. 24-33.

67. Ерхан Д.К. Эпизоотология стронгилоидоза крупного рогатого скота в Молдавии и меры борьбы // Возбудители и переносчики паразитов и меры борьбы с ними, Алма-Ата, 1988.- С.73.

68. Жариков Г.А., Фартуков C.B., Туманский И.М. и др. Утилизация отходов предприятий микробиологической промышленности методом вермикомпостирования // Биотехнология. -1993. -№ 1. -С. 21-23.

69. Журавлев А.И. Биоантиокислители в животном организме // Биоантиокислители. -М. -1982. -ч. 3. -С. 47-51.

70. Залашко М.В. Биосинтез липидов дрожжами. -M. -1971. -216 с.

71. Зотова B.C. Прменение кормовых антибиотиков при выращивании кроликов // Химизация животноводства. -Минск. -1965. -С. 99-102.

72. Иванов И.А., Калашников В.И., Григорьев A.B. Утилизация некоторых отходов производства антибиотиков в бетоне и железобетонных конструкциях // Химико-фармацевтический журнал.—1983.-№6.-С. 1031-1033.

73. Иммунология /Воронин Е.С., Петров A.M., Серых М.М., Девришов Д.А.; под ред. Воронина Е.С. -М., Колос-Пресс, 2002.

74. Калашников В.И., Карпухин В.Ф., Крымский М.В. и др. Утилизация модифицированных отходов производства антибиотиков для получения строительных материалов // Антибиотики и химиотерапия. 1988. -Т. 33. -№ 5. -С. 339-342.

75. Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств. -М.: Агромиздат. -1990. 271 с.

76. Карпухин В.Ф., Крымский М.В., Иванов И.А. и др. Утилизация мицелиальных отходов производства антибиотиков в технологии обжиговых строительных материалов // Антибиотики. —1981. -№ 1. -С. 32-36.

77. Карпухин В.Ф., Крымский М.В., Линькова О.С. Разработка и утилизация мицелиальных отходов // Успехи в области изучения и производства антибиотиков. М. -1982. -Вып. XI. -С. 85-91.

78. Кирбабаев Э.Б., Метелица А.К., Стринадкин П.С., Аксенова И.Н. Акарицид системного действия // Тезисы доклада V Всесоюзн. акарологич. совещ. Фрунзе. -1985. - С. 140-150.

79. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии / И.П. Кондрахин, Н.В. Курилов и др.; -М.: Агромизздат. -1985. -286 с.

80. Ковальчук Л.П. Биологически активные вещества Act. griseus 15, Act. aureoverticillatus 1306, Act. aurigineus 2377: Автореферат канд. дисс.-Саратов. -1994. -24 с.

81. Ковальчук Л.П., Бурцева С.А., Ядовина В.Н. Биологическое действие липидных фракций актиномицетов // Прикладная микробиология и биохимия. -1972. -Т. 14. № 3. -С. 383- 387.

82. Ковальчук JI.П., Гаркавенко А.И., Духовная A.M. Динамика накопления витаминов в Act. griseus 15, Act. aurigineus 2377 11 Биологические активные вещвества микроорганизмов. -Кишинев. -1968. -С. 23-27.

83. Ковальчук Л.П., Гаркавенко А.И., Савченко Л.Ф., Разумовский П.И. Состав суммарных липидов некоторых актиномицетов в зависимости от питательной среды // Изв. АН МССР. Сер. биол. и хим. наук. -1971. № 3. -С. 43-48.

84. Ковальчук Л.П., Донец А.Т., Бурцева С.А. Липиды актиномицетов. -Кишинев: Штиинца. -1979. -103 с.

85. Козлов Ю.П. Свободнорадикальное окисление липидов в биомембранах в норме и при патологии // Биоантиокислители. -М. -1975.-С. 5-14.

86. Колесников В. И., Башкатов Г. А., Оробец В. А. Эпизоотический процесс при стронгилятозах овец в условиях Ставропольского края, меры борьбы и профилактики. Ставрополь. -1990. - С. 12-13.

87. Колесников В.И., Оробец В.А. Эффективность аверсекта при гельминтозах овец // Легочные и желудочно-кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними / Материалы докл. научн., конф. -М. -1993. С. 39-40.

88. Корешков Н.М. Эффективность препаратов макроциклических лактонов при нематодозах животных // Актуальные проблемы ветеринарии / Материалы межд. конф. Барнаул, 1995. -С. 129.

89. Коронелли Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов. -М.: Изд-во МГУ. -1984. -156 с.

90. Котельников Г.А. Диагностика гельминтозов животных. -М. -1974. -С. 240-241.

91. Красильников Н.А. Лучистые грибки. Высшие формы. -М.: Наука.1970.-535 с.

92. Красильников H.A. определитель бактерий и актиномицетов. -М.: Изд-во Ан СССР. -1949. -830 с.

93. Кузнецов А.Ф. Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови у свиней в промышленных комплексах // Научн. тр. / Лениградский вет. ин-т. -1975. -Вып. 45. -С. 91-96.

94. Лемехов П.А. Эффективность ивомека при диктиокаулезе крупного рогатого скота в производственных условиях // Бюлл. ВИГИС. М. -1987. -Вып. 48. -С. 53-54.

95. Липиды в организме животных и человека. -М.: Наука. -1974. -144 с.

96. Липиды: Структура, биосинтез, превращения и функция. -М.: Наука.-1987.-182 с.

97. Липицкий С.С. Производственное испытание ивомека // Вет. наука. -Минск.-1990.-Вып. 28. -С. 136-138.

98. Мамаев Н.Х., Голин П.И. Омарова М.В. Ивомек при гиподерматозе // Ветеринария. -1988. № 12. - С. 44-45.

99. Мамыкова О.И. Оценка иммунобиологического статуса животных после дегельминтизации и пути его коррекции: Автореф. дисс. канд. вет. наук. М., 1994.

100. Мирзаев М.Н., Девришов Д.А., Савченков С.Н. Эффективность и безвредность Ниацида // Ветеринария, 1997, № 9.-С. 26-27.

101. Мирзаев М.Н., Савченков С.Н., Девришов Д.А., Воронин Е.С. Новый антипаразитарный препарат ниацид // Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. -М. -1996.

102. Мирзаев М.Н., Савченков С.Н., Шерстнев В.В., Девришов Д.А., Тихонов И.В. Спектрофотометрический экспресс-метод определения авермектинов: Тез. тр. МГАВМиБ им.К.И.Скрябина.1. М. -2001. -С. 365.

103. Митасов А.Н. Изыскание эффективных препаратов в борьбе с саркоптозами с.-х. животных: Автореф. дисс. канд. вет. наук. -М. 1994.

104. Мудрецова-Висс и др. Микробиология, санитария и гигиена. М.2001.-С. 53-57.

105. Никулин Т.Г., Шевцов A.A. Осложнения у животных при противопаразитарных обработках. -М. -1984.

106. Новик Т.С., Головкина Л.П. Токсикологическая характеристика аверсектиновой мази // Сб. научн. трудов МГАВМиБ им. К.И. Скрябина «Вопросы физико-математ. биологии в ветеринарии». -М. -1997. -С. 90-98.

107. Новицкая Г.В. Методическое руководство по тонкослойной хроматографии фосфолипидов. -М.: Наука. -1972. -63 с.

108. Определитель актиномицетов. Роды Streptomyces, Streptoverticilium, Chainia / Гаузье Г.Ф., Преображенская Т.П., Свешникова М.А. и др. -М.: Наука.-1983.-248 с.

109. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.2: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли, С. Уильямса. -М.: Мир.-1997.-368 с.

110. З.Орлов И.А., Березовская А.И., Соколовская А.Е. и др. Замена кукурузного экстракта мицелием при ферментации пенициллина // Антибиотики. 1970. -№ 12. -С. 1067.

111. Павлов С.Д., Окунев A.M. Сравнительная оценка препаратов системного действия при гиподерматозе крупного рогатого скота // Сибирский вестник с.-х. науки. 1990. - № б - С.66-69.115.Патент RU № 0215637.

112. Перелыгин В.М., Разношик B.B. Гигиена почвы и санитарная очистка населенных мест. -М.: Медицина. -1987.

113. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М.: Мир.-1978.-С. 93-94.

114. Петрова И.С. Протеолитические ферменты актиномицетов. -М.: Наука. -1976. -60 с.

115. Петрухин М.А. Разработка мероприятий по борьбе с нематодозами свиней // Гельминтозы и меры борьбы с ними. -Новосибирск. -1990. -Вып. 3.-С. 16-21.

116. Пивняк И.Г. Микробиологический синтез антибиотиков и каротинов для использования в животноводстве: : Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Дубровицы. -1977. -29 с.

117. Поздняков А. Словарь-справочник по ветеринарии // Ветеринарная газета. 1999. - № 5-6. - С.15-16

118. Поминальник Г.А. Накопление и сбраживание мицелия в водоёмах // Проблемы утилизации мицелиальных масс при микробиологическом синтезе лекарственных сред: Тез. докл. Всесоюзн. симпозиума. -М. -1981.-С. 17.

119. Пономарева JI.B., Янкевич М.И., Яковлев В.И. и др. Использование мицелиальных отходов производства медицинских препаратов // Антибиотики и химиотерапия. -1990. -Т. 35. -№ 2. -С. 43-45.

120. Прасолов А.И., Ракова Т.Н., Ковальчук Л.П., Бурцева С.А. О механизме стимулирующего действия кормогризина на воспроизводительную систему животных // Диагностика и терапия незаразных болезней сельскохозяйственных животных. -Воронеж. -1986.-С. 94-101.

121. Применение кормогризина в животноводстве. -М.: Межэкспорт. -1984. -35 с.

122. Разумовский П.Н., Атаманюк Д.И., Златоуст М.А., Якимова Г.И. Действие биологически активных веществ на микроорганизмы. -Кишинев: Штиинца. -1975. -159 с.

123. Разумовский П.Н., Ковальчук Л.П. Упрошенный метод получения стероидных фракций из мицелия актиномицетов // Изв. АН МССР. Сер. биол. и хим. наук. -1972. № 1. -С. 80-82.

124. Разумовский П.Н., Семанин Г.С., Айзина А.Ф., Холмецкая В.Г. Сравнительное изучение влияния препаратов ПЭФАГ и некоторых гормонов на минеральный и стероидный обмен у животных // Изв. АН МССР. Сер. биол. и хим. наук. -1968. № 5. -С. 45-53.

125. Ракова Т.Н. Данные по вопросу применения петролейно-эфирной фракции из мицелия Act. griseus 15 в свиноводстве // Вопросы технологии, племенного дела и физиологии животных при промышленном ведении животноводства в ЦЧЗ. -Воронеж. -1974. -С. 110-116.

126. Ракова Т.Н. О механизме анаболического действия препарата ПЭФАГ // Действие биологически активных веществ на макроорганизмы. -Кишинев. -1975. -С. 40-50.

127. Ракова Т.Н. Экспериментальное обоснование и практический аспект нового напраления использования культур стрептомицетов в ветеринарии: Автореф. дисс. докт. вет. наук. -Воронеж. -1989. —46 с.

128. Ремез В.И. Эффективность подкожного введения ивомека при лечении саркоптоидозов овец и свиней // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных и паразитарных: болезней с.-х. животных. -Ставрополь. -1984. -С. 23-25.

129. Рубан E.JI. Микробные липиды и липазы. -М.: Наука. -1977.

130. Савченков С.Н., Мирзаев М.Н., Девришов Д.А. Некоторыеособенности технологии получения авермектинов //Биотехнология.1997.-№3. -С. 6-8.

131. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов. -М.: Россельхозакадемия. 2000.-Т. 1.-375 с.

132. Сафиуллин Р.Т. Антгельминтная и экономическая эффективность ивомека при кишечных нематодозах свиней // Научно-технический бюл. СО ВАСХНИЛ. -1986. -Вып. 18-19. -С. 57-60.

133. Сафиуллин Р.Т. Эффективность и экономичность ивомека при смешанных инвазиях свиней // Вол. ВИГИС. М. -1986. - Вып. 46. -С. 37-42.

134. Сафиуллин Р.Т. Эффективность цидектина, ивомека и пиперазина при кишечных нематодозах свиней // Матер, докл. научн. конф. «Легочные и кишечные нематодозы человека и животных и меры борьбы с ними» М. -1993. -С. 76-77.

135. Семенов С.М. Лабораторные среды для актиномицетов и грибов. Справочник. -М.: Агромиздат. -1990. -240 с.

136. Сивков Г.С., Яковлева В.В., Чашкова И.А., Белецкая Н.И. и др. Влияние ивомека и фармацина на показатели иммунного ответа у животных // Ветеринария. -1998. № 5. - С. 29-31.

137. Сидорова Т.К. В новой экономике через здоровье животных // Ветеринарная газета. -М. -1995. -№ 15.

138. Симецкий М.А., Удавлиев Д.И., Филиппов В.В. и др. Сравнительная характеристика ивомека и аверсекта (АС-1) // Ветеринария. -М. -1994. -№1. с. 42.

139. Скосырских JI.H. Ивомек при демодекозе крупного рогатого скота // Ветеринария. 1987. - № 12. - С. 46-47.

140. Смирнов А.Г. Взаимоотношения различных видов гельминтов и их влияние на органы хозяина (на примере аскариды, власоглава и эзофагостомы свиньи): Автореф. дисс. канд. вет. наук. -М. 1967. -25 с.

141. Тараканов О.В., Калашников В.И., Крымский М.В. и др. О влиянии углеводов на возможность утилизации отходов производства антибиотиков в строительной индустрии // Антибиотики и химиотерапия. -1989. Т. 34. - № 8. - С. 606-609.

142. ТУ 9296-001-00482080-93. Мицелий гентамицина сухой для пушного звероводства. -Введ. 06.06.94.

143. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. -М.: Медицина. -2000. -432 с.

144. Чернова Н.М. Зоологические характеристики компостов, -М.: Наука. -1976.

145. Шерстнёв В.В., Мирзаев М.Н., Печникова Г.Н., Жарова Т.П., Девришов Д.А. Биологически активные метаболиты Streptomyces avermitilis / Материалы метод, и науч. конф. // Сб. науч. трудов МГАВМиБ им. К.И. Скрябина. -М. -2001. -С. 138.

146. Якубова А.Р., Лагунов В.М., Файнгольд и др. Использование мицелиальных отходов в качестве добавки при производстве гранулированных активных углей // Антибиотики и химиотерапия. -1995. -Т.35. -№ 5. -С. 35-37.

147. Якубовский М.В., Ананчиков М.А. Профилактика демодекоза крупного рогатого скота // Ветеринария. -1989. № 9. - С. 44-46.

148. Anderson N. Sequential development of resistance to thiabendazole and levamisole in nematodes of sheep // Intern. J. Parasitol. -1988. -VI 8.-No 2. -P. 243-249.

149. Asquith R.L., Kulwich R Safety and therapeutic activity of ivermectin as an equine anthelmintic // J. Equ. Vet. Sci. -1981. -No 1. -P. 18-20.

150. Asquith R.L., Lane T. J., Plue R.E. The bioavailability of ivermectin in horses when administered in a liqiud formulation by nasogastric' intubation versus in an oral paste // J. Equ. Vet. Sci. -1985. -V. 7. -P. 28-30.

151. Basn A.K., Ahmed M.J., Nawathe D.R., Srivastans G.C. Efficacy of ivomek pour on gastrointestinal nematodae parasites of cattle // Bull. Anim. Health, and Prod. Afr. -1992. -V. 40. -P. 205-207.

152. Basuade C.D. Clinical sings and biochemical change in calves caused by injectin of ivermectin // Veter. Q. -1989. -V. 11. -No 1. -P. 29-39.

153. Bater A. K. Efficacy of oral milbemycin against naturally acguired heartworm infection in dogs // Abstr. 6 th Symp. Am. Heartworm Soc. -1989.-P. 29.

154. Bauchop Т., Elsden S.R. // J. Gen. Microbiol.-1960.-V. 23.- P. 457.

155. Bennet D.G. Clinical pharmacology of ivermectin // J. Am. Veter. Med. Assu. -1986. -V. 189. -No 1. -P. 100-104.

156. Benz G. W. and Ernst G. V. Anthelmintic activities of the B\a fraction of avermectin against gastrointestinal nematode infections in calves. // Am.

157. J. Vet. Res., 1979.- V. 40. P.- 1187-1188.

158. Bordsteede F.H.M. The effect of the use of the morantel sustained release bolus system on calves grazing a highly contaminated pasture in the Netherlands. // Veter. Parasitol. 1983. - V. 12. - No 3-4. - P. 251-260.

159. Bradley R.E. Dose titration and efficacy of milbemicin for prophylactis against Dirofilaris immitis infection in dogs // Abstr. 6 th Symp. Am. Heartworm Soc.- 1989.- P.- 26.

160. Button C., Barton R., Honey P., Rickford P. Avermectin toxicity in calves and on evalution of picrotoxin as an antidote // Austral. Vet. J. -1988.-V. 65.-P. 157-158.

161. Campbell W.C. Ivermectin and abamectin. New York, Berlin, Heidelberg, London, Paris, Tokyo. -1989. -363 p.

162. Campbell W.C. Ivermectin, an antiparasitic agent // Med. Res. Rev. -1993.-V. 13.-No 1.-P. 61-79.

163. Campbell W.C., Blair G.W.,Seward R.L. Ivermectin vs. heartworm: The present status. Proc. Heartworm Symp. Orlando, Fla. -1983. P. 146149.

164. Campbell W.C., Fisher M.H., Starley E.G. Albers-Schonber G., Jacob T.A. Ivermectin: A potent new antiparasitic agent // Science. -1983. -No 221.-P. 923-928.

165. Conder G.A., Thompson D.P., Jonnson S. Determination of Ivermectin Side Resistance for Moxidectin //Proc. 67-te Meeting of the Am.- Soc. Paras.-1992,- Ab. 124.-P.-74.

166. Collir J., Livingston D / Conversoin of wastwater treatment plant residual sludges into earthworm castings for use as a fertile topsoil. Santa Cruz, California.-1981.-P. 28.

167. De Channel G.C., Casey R., Dixon F.F., Besier R.B., Mitchell R.K. Effect of avermectin B1 and benzimidazole anthelmintict on worm eggoutput treated cattle // Austr. Vet. J. —1988. -No 65. -P. 85-86.

168. Folch J., Lees M, Sloane Stanley S. // J.Biol.Chem. -1951. -V. 191. -P. 833-841, - 1957. -V. 226. -P. 497-509.

169. Graff O. Bodenzoologische Untersuchungen mit besonderer berucksichtigung der terrikolen Oligohaeten. -1963. -bd.61. S. 72-77.

170. Goedinakers A. Ecological perspectives of chaunging agricultural land use in the European Community // Agr. Ecosystem Environm. -1989. -V.27. -№ 1-4. -P. 99-106.

171. Hausiill in Poleh / Zareba Janusr // Umweltscutr. -1991. -№ 10. -P. 2425.

172. Ivermectin. Annotad bibliography. Supplement. Merck et Co, USA,1990.-P.-714.

173. Kutzer E. The elimination of sarcoptic mange in wild and domestic swine with ivermectin (ivomec) // Prakt. Tierarzt. 1989.-№ 70 (10).- P. 45-46.

174. Lowry O.H, Rosebrough N.J, Farr A.L, Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem. -1951. -193. -No l.-P. 265-275.

175. Lyons E.T, Drudge J.H, S.C.Tolliver. Controlled test of anthelmintic activity of a macrocyclic lactone (compound F28249-alpha) in lambs //Am. J. Vet.Res.- 1989.- V.50,- P. 975-977.

176. Martin R.J, Wardhaugh K.G, van Gerwen A.C.M, Whitby W.A. Reproductive development and Survival of Lucilia cuprina Wiedemann when fed sheep dung containing ivermectin // Vet. Parasitol. 1993. -V.48. - P.- 193-204.

177. Pulliam J.D, Seward R.L, Henry R.T. Investigating ivermectin toxicity in Collies // Vet. Med. -1985. -V. 80. -P 33-40.

178. Scott P.G, Burrows R.O, Hotson I.K, Cox J.L. Avermectin-B 1, as an anti-parasitic agent for cattle //11-th Conf. W.Ass. Adf. Vet: Paras.1985.-P. 83.

179. Shiramizu K., Abu M., Haida D., Fukuda V. Anthelmintic effect of milbemycin D against Ancylostoma caninum and Toxocara, canis // Jap. Vet. Bull. -1988. No 58. - P. 873.

180. Shoop W.L. Resistance to avermectin and milbemicins // Vet. Rec. -1992.-No 130.-P. 563.

181. Stewart T.B., Southern L.L., Leon D., Guerrero J., Fox M.C. Economic benefit of deworming parasitired pigs-7 / Mtg. Amer. Soc. Anim. Sci.-1989.-No2.-P. 67.

182. Tahir M.S., Hobroyd R.G., Copeman D.B. // Proc. 6-th Int. Conf. Paras.1986.-P. 65.

183. Taylor S.M., Mallon T., Corrol B. Efficacy of a levamisole bolus in Ostertagia and cooperia infections // Am. Rech. Veter. 1988. - V. 19. -No 2. - P. 483-489.

184. Trevelyan W.E., Harrison J.S. Studies on yeast metabolism: fractionation and microdetermination of cell carbohydrates // Biochem. J. -1952. -V. 50. -No 3. -P. 298-303.

185. Wescott R.B., Farrell C.J., Gallina A.M., Foreyt W.J., Efficacy of avermectin Bla for treatment of experimentally induced nematode infections in cattle // Am. J. Vet. Res. -I980.-No 41. P. 1326-1328.

186. Witting L.A. Progress in the chemistry of fats and other lipids. -1970. -V. 9. -P. 4.