Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические основы лабораторных признаков патоспермии при воспалении органов репродуктивной системы мужчин

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические основы лабораторных признаков патоспермии при воспалении органов репродуктивной системы мужчин"

На правах рукописи

ЛУЦКИЙ ДМИТРИЙ ЛЕОНИДОВИЧ

БИОХИМИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ЛАБОРАТОРНЫХ ПРИЗНАКОВ ПАТОСПЁРМИИ ПРИ ВОСПАЛЕНИИ ОРГАНОВ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ МУЖЧИН

03.00.04 - биохимия

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

АВТОРЕФЕРАТ

Москва - 2007

003065231

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации»

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Николаев Александр Аркадьевич

Официальные оппоненты:

Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Терентьев Александр Александрович

доктор медицинских наук, профессор Петрунин Дмитрий Дмитриевич

доктор медицинских наук, профессор Шевченко Ольга Павловна

Ведущая организация:

ФГУ «НИИ урологии Росздрава»

Защита диссертации состоится « -Ь » октября 2007 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д208.057.01 в ФГУ «НИИ физико-химической медицины Росздрава» по адресу: 119992, Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при ФГУ «НИИ ФХМ Росздрава» по адресу:

119992, Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а.

Автореферат разослан « 3/ »

2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

М. А. Мурина

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования

По данным Российского общества урологов ежегодно в России отмечаете'я прирост лиц с заболеваниями мочеполовых органов 1,2% [Лопаткин Н. А. и др., 2005]. Значительную долю составляют воспалительные заболевания органов мужской репродуктивной системы [Лоран О. Б. и др., 2006, Опалихин О. И. и др., 2007]. Если принять во внимание, что достаточно большое число больных с инфекционно-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов не учитывается, то становится очевидным, что реальный масштаб этих инфекций создает угрозу для репродуктивного здоровья нации [Алексанов А. Т. и др., 2005, Мартов А. Г. и др., 2006]. Тем более что, по данным НЦ АГиП РАМН [Тер-Аванесов Г. В. и др., 2005], воспалительные заболевания мочеполовых органов являются наиболее частой (22-60%-J причиной мужского бесплодия. Этот факт подтверждается и многими другими отечественными и зарубежными учеными [Камалов А. А., 2004, Евдокимов В. В., 2005; Clad A. et al., 2005, Motrich R. D. et al., 2005, Fraczek M. et al., 2007] .

В тоже время согласно данным исследований проведенных в НИИ урологии [Евдокийов В. В. идр, 2004] и данным, полученным рядом других ученых и исследовательских групп [Селезнева И. Ю., 2003, Филиппов О. С., 2004, Корякин М В., и др., 2006], отмечается тенденция к росту распространенности мужского бесплодия в России.

Все это происходит на фоне общемировой тенденции ухудшения качества спермы (в 1,7 раза за период 60 лет) [Быков В. Л., 2000], которая прослеживается, в Европе, в частности, и в настоящее время [Brown С. С., 2004, Holm М. et al., 2005, Harbottle S. et al., 2006], в том числе, и в отдельных регионах России [Тер-Аванесов Г. В. и др., 2006].

Экспериментальные исследования особенностей развития воспалительных процессов в органах мужской репродуктивной системы выполняются преимущественно на собаках, кроликах, крысах, морских свинках, мышах [Хейфец В. X. и Др., 2002], что весьма затрудняет экстраполяцию полученных результатов на человека.

Разработка новых диагностических тестов на основании исследования спермы человека при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов является актуальным и перспективным научным направлением, что отмечается многими исследователями [Липатова Н. А., 2004, Петрунин Д. Д. и др., 2003, Евдокимов В. В. и др., 2005; Komatsu S. et al., 2005, Krawetz S. A. et al., 2005, BjSrndahl L. et al., 2006, Вое-

Hansen G. В. et al., 2006], поскольку сперма человека имеет богатейший биохимический состав, по сложности сопоставимый с такой биологической жидкостью, как кровь [Николаев А. А., 2004; Owen D. Н. et al. 2005, Hellman J., 2006].

Даже если брать только белки с молекулярной массой 10-100 кДа, то еще в 1981 году в спермоплазме здоровых фер-тильных мужчин их было известно более 200 [Edwards J. J., 1981]. В тоже время весь этот огромный диагностический потенциал используется слабо из-за отсутствия данных о физиологической роли, которую играют биохимические компоненты эякулята при воспалении органов мужской репродуктивной системы [Терентьев А. А. и др., 2002, Аль-Шукри С. X. и др., 2003, Евдокимов В. В., 2004, MacDonald R. et al., 2006].

Таким образом, существует насущная потребность в экспериментальном и клинико-диагностическом изучении особенностей биохимических процессов, которые протекают в эякуляте при воспалении органов мочеполовой системы мужчин.

Цель исследования

Разработка новых диагностических и прогностических методов на основе изучения биохимических особенностей эякулята человека при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

Основные задачи исследования

1. Исследовать биохимические основы процесса разжижения коагулировавшего эякулята в норме и при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

2. Исследовать биохимические основы процесса агглютинации сперматозоидов при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

3. Разработать биохимический способ прогноза развития суб-фертильности при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основе исследования эякулята.

4. Разработать биохимический способ диагностики хронического простатита.

5. Разработать биохимический способ диагностики микст-инфекций при воспалении предстательной железы.

6. Разработать способ выявления Chlamydia trachomatis при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основе исследования эякулята.

7. Разработать способ экспериментального исследования биологической активности химических веществ на основе исследования эякулята человека.

Научная новизна

Впервые показана взаимосвязь динамики ряда цитокинов (интерлейкина-1Р, интерлейкина-6, интерлейкина-8) в спермо-плазме больных воспалительными заболеваниями дополнительных желез мужской рёпродуктивной системы (предстательная железа, семенные пузырьки) с риском развития у них субфертиль-ности.

Впервые экспериментально доказано, что интерлейкин-1Р индуцирует процесс агглютинации сперматозоидов. Впервые экспериментально показано что, агглютинация, индуцированная интерлейкином-ip, носит обратимый характер и установлено, что причиной этого является химическая неустойчивость молекулы интерлейкина-ip к действию протеолитических ферментов спермоплазмы человека.

Впервые экспериментально доказано, что для агглютинации сперматозоидов in vitro необходимо не менее 350000 молекул интерлейкина-ip на один сперматозоид.

Впервые экспериментально доказана возможность межмолекулярного взаимодействия между интерлейкином-lp и скафер-рином (негемовым ферропротеином, формирующим гликокадикс сперматозоидов), и показано^ что агглютинация под действием интерлейкина-1Р протекает опосредованно через взаимодействие со скаферрином.

Впервые экспериментально доказано, что полиамины (спермин и спермидин) спермоплазмы являются протекторами сперматозоидов человека от агглютинации индуцированной ин-терлейкином-ip.

Впервые предложена схема одного из вариантов биохимического механизма развития процесса агглютинации сперматозоидов при воспалении.

Впервые проведено экспериментальное изучение процесса разжижения коагулировавшего эякулята человека в норме и при воспалении органов мужской репродуктивной системы и установлены некоторые биохимические причины, приводящие к нарушению нормального протекания этого процесса.

Впервые предложена схема одного из вариантов биохимического механизма нарушения разжижения коагулировавшего эякулята человека при воспалении.

Практическое значение работа

Разработана специализированная компьютерная программа «NTeoh Balance 3.0» для оценки валидности существующих и оптимизации конструирования новых диагностических способов.

Разработан биохимический способ диагностики хронического простатита (патент на изобретение №2237899 от 10 октября 2004 года).

Разработан биохимический способ диагностики микст-инфекций при воспалении предстательной железы (патент на изобретение №2196991 от 20 января 2003 года).

Разработан способ выявления Chlamydia trachomatis при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основании исследования эякулята (патент на изобретение N'2242000 от 10 декабря 2004 года) .

Разработан биохимический способ прогноза развития субфертильности при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основании исследования уровня цитокинов (интерлейкин-lß, интерлейкин-6, интерлей-кин-8) в эякуляте

Разработан способ экспериментального исследования биологической активности химических веществ на основании исследования эякулята человека (патент на изобретение №2217750 от 27 ноября 2003 года).

Разработан электрофоретический способ количественного определения полиаминов в биологических жидкостях (патент на изобретение №2225981 от 20 марта 2004 года) с применением разработанной нами специализированной компьютерной программы «ПН5108» (Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2003612170 от 17 сентября 2003 года).

Основные положения, выносимые на защиту

- Уровень цитокинов (интерлейкин-lß, интерлейкин-6, интер-лейкин-8) в спермоплазме больных хроническим простатитом отражает вероятность развития у них субфертильности и определение уровня этих цитокинов может быть использовано для прогноза развития субфертильности.

- Интерлейкин-lß обладает способностью индуцировать агглютинацию сперматозоидов опосредованно через межмолекулярное взаимодействие с белком гликокаликса сперматозоидов - скаферрином. Полиамины спермоплазмы (спермин и спермидин) являются факторами протекции сперматозоидов от агглютинации, индуцированной интерлейкином-lß.

- Нарушение процесса разжижения коагулировавшего эякулята у мужчин с воспалительными заболеваниями органов репродуктивной системы обусловлено изменением соотношения между ферментами и ингибиторами спермоплазмы.

Апробация результатов

Результаты работы представлены и доложены на:

Ежегодных итоговых научных конференциях Астраханской государственной медицинской академии в 2000-2005 годах (г. Астрахань); /

Пленумах Правления Российского Общества урологов в 2000 и 2004 годах (г. Москва),

Ежегодных Всероссийских конференциях «Национальные Дни клинической лабораторной диагностики» в 2000-2004 годах (г. Москва);

Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита» в 2000 году (г. Курск);

Международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины» в 2000 году (г. Астрахань);

III-VIII Международных научно-практических конференциях «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» в 2000-2005 годах (г. Астрахань);

II-VII Международных научно-практических конференциях «Здоровье и Образование^XXI Век» в 2001-2006 годах (г. Москва);

Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в медицине» в 2001 году (г. Саратов);

IX Международной научной конференции «Белки - маркеры патологических состояний» в 2001 году (г. Астрахань);,

Международной научной конференции «Естествознание на рубеже столетий» в 2001 году (г. Дагомыс);

Всероссийской научно-практической конференции «Медицинские, экологические и социальные аспекты формирования здоровья населения» в 2001 году (г. Челябинск);

X Съезде урологов России в 2002 году (г. Саратов);

Международном форуме «Аналитика и аналитики» в 2003

году (г. Воронеж);

International conference «Biocatalysis: fundamentals & applications - 2000» m 2000 year (Russia, Moscow);

VIII International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» in 2004 year (India, Goa);

IX International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» m 2005 year (China, Dalyan);

X International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» in 2006 year (Thailand, Bangkok);

Annual International Scientific Conference IW SDC «New Technology In Integrative Medicine And Biology» in 2006-2007 years (Thailand, Bangkok-Pattaya).

Публикации

По теме диссертации опубликованы 89 печатных работ, из которых 8 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Объем л структура диссертации

Диссертация изложена на 258 страницах, содержит 45 таблиц и 26 рисунков. Она состоит из введения; обзора литературы, описание материалов и методов исследования, изложения фактического материала и обсуждения полученных результатов; заключения; выводов; практических рекомендаций; указателя использованной литературы.

Библиографический указатель включает 309 источников на русском и иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе был проведен статистический анализ 8325 спермограмм (исследование 2683 эякулятов было выполнено автором ЛИЧНО). ,

Исследования спермограммы проводили по стандартным методикам [Евдокимов В. В. и др., 2005, Михайличенко В. В., 2005] в соответствии с рекомендациями ВОЗ с расширенным морфологическим исследованием [Леонтьева О. А. и др., 2001, Петрищев В. С. и др., 2002, Корякин М. В. и др., 2006; Franken D. R. et al., 2006].

Проведено комплексное лабораторное и биохимическое исследование 658 образцов эякулятов мужчин с различной фер-» тильностью.

Проведено комплексное лабораторное и биохимическое исследование 526 образцов секретов предстательной железы, как практически здоровых мужчин, так и больных хроническими простатитами.

Для экспериментальных исследований были использованы нативные эякуляты 134 мужчин с различной фертильностью.

Хранение образцов биологического материала до исследования проводили при температуре -18°С.

Для инкубации использовали термостат электрический суховоздушный с максимальным отклонением температуры от средней в любой точке рабочей камеры ±0,4°С.

Для измерения pH использовали рН-метр с разрешающей способностью 1,00-13,00+0,01 pH и автоматической температурной компенсацией в интервале от 0° до 70°С (точность оп-

ределения температуры интегральным сенсором прибора 0-70°±0,1°С).

Определение дерулоплазмина проводили методом иммуно-ферментного анализа с применением коммерческой тест-системы.

Выделение и очистку спермоспецифического ингибитора трипсина проводили из экстрактов предстательной железы nef методу Николаева А. А. [Николаев А. А., 1994].

Идентификацию полученного препарата проводили методом иммуноэлектрофореза с препаратом спермоспецифического ингибитора трипсина и моноспецифической кроличьей ..антисывороткой против человеческого спермоспецифического ингибитора трипсина, которые были любезно предоставлены профессором, д. м-. н. Николаевым А. А.

Для получения антисыврротки против спермоспецифического ингибитора трипсина использовали иммунизацию кроликов (порода шиншил).

Определение спермоспецифического ингибитора трипсина проводили методом радиальной иммунодиффузии.

Выделение и очистку лактоферрина проводили из спер-моплазмы по методу Николаева А. А. [Николаев А. А., 1994].

Идентификацию полученного препарата проводили методом иммуноэлектрофореза с коммерческим препаратом лактоферрина.

Лактоферрин определяли методом иммуноферментного анализа с применением коммерческой тест-системы.

Препарат интерлейкина-lp для экспериментальных исследований был любезно предоставлен нам зав. лабораторией иммунофармакологии профессором, д. м. н. Симбирцевым А. С. (ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов, г. Санкт-Петербург).

Определение интерлейкина-ip, рецепторного антагониста интерлейкин.а-1, интерлейкина-6, интерлейкина-8 и фактора некроза опухоли-о проводили методом иммуноферментного анализа с применением коммерческих тест-систем.

Для исследования микропрепаратов в видимом свете использовался микроскоп (максимальное увеличение 2000х при масляно-иммерсионной системе). Документирование результатов микроскопических исследований, а также микроморфометриче-ские измерения проводили с помощью цифровой камеры-окуляра с полным многослойным просветлением и функцией улучшения частотно-контрастной характеристики изображения.

Для проведения статистического анализа, обработки результатов исследования и разработки программного обеспечения в работе были использованы портативные модели ПЭВМ, а также лицензионное программное обеспечение.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Процесс сперматогенеза отличает высокая активность пролиферации, достигающая у человека 70000-150000 клеток/мин. С одной стороны динамичность процесса сперматогенеза обеспечивает значительный репродуктивный потенциал у мужчин, но с другой стороны делает процесс сперматогенеза уязвимым для воздействия различных повреждающих факторов химического, физического и биологического происхождения [Евдокимов В. В., 2002, Потемкина Т. Е. и др., 2006, Тер-Аванесов Г. в. и др., 2006].

Нами был проведен анализ спермограмм, исследованных в лаборатории Центра планирования семьи и репродукции г. Астрахани, в лаборатории кафедры общей и биоорганической химии ГОУ ВПО «АГМА Росздрава» и в лаборатории ООО МФВФ «Техномед» за период с 1992 по 2006 годы. Всего за указанный период было исследовано 8325 спермограмм, из них 1892 -спермограммы фертильных мужчин, в остальных 6433 случаях -нарушения фертильности различной степени тяжести.

Существующая общемировая тенденция снижения основных параметров, характеризующих качество эякулята, к сожалению, затронула и Россию, в частности, Астраханскую область (рисунок 1) .

—о—К, млн/мл —^-П, % —о—М, %

Рисунок 1. Динамика основных показателей качества эякулята у фертильных мужчин (п=1892) Астраханской области. К - концентрация сперматозоидов в эякуляте (106мл-1); П - относительное содержание активноподвижных сперматозоидов в эякуляте (%); м - относительное содержание в эякуляте сперматозоидов, имеющих морфологические дефекты (%) .

Ухудшения коснулись концентрации сперматозоидов и их морфологических характеристик, в тоже время достоверного изменения двигательных характеристик сперматозоидов нами отмечено не было.

Возможно, что подобные особенности изменения сперматогенеза у жите'лей Астрахани и Астраханской области (по сравнению с жителями Москвы и Москозской области [Тер-Аванесоа Г. В. и др., 2006]) произошли из-за неблагоприятной экологической обстановки связанной с разработкой и эксплуатацией Астраханского газоконденсатного месторождения, тем более, что отдельные экспериментальные и клинические исследования свидетельствуют в пользу нашего предположения [Ушакова М. В., 2002, Выборнов С. В., 2006].

Однако, окончательные выводы о степени влияния химических полютантов, связанных с работой Астраханского газоперерабатывающего завода, на; репродуктивную функцию мужчин, делать преждевременно.

Анализ частоты встречаемостей различных форм патос-пермии у субфертильных мужчин показал преобладание сочетан-ных форм патологии (рисунок 2), что является одной из наиболее тяжелых форм патоспермии.

нарушений нет*

полизооспермия

тератозооспермия

астенозооспермин

олигозоослермия

азооспермия

о л иго а сте н оте р ато-зооспермин

Рисунок 2. Структура форм патоспермии у субфертильных мужчин (п=6433) Астраханской области.

* - нет патологически*; изменений со стороны концентрации, подвижности и морфологии сперматоэоидов, без учета других показателей спермограммы.

Неожиданно высокая распространенность полизооспер-мии, вероятно, является региональной особенностью Астраханской области.

Нарушения функционального состояния репродуктивной системы мужчин развиваются еще и благодаря воспалительным заболеваниям (в том числе из группы инфекций, передающихся половым путем), которые получили, к сожалению, в настоящее время широкое распространение во всех социальных слоях, что подтверждается и литературными данными [Мавров И. И., 2002, Тер-Аванесов Г. В., 2004, Тиктинсйий О. Л. и др., 2006].

Так, у 81,5% субфертильных мужчин в анамнезе отмечены воспалительные заболевания органов мошонки и/или дополнительных желез мужской репродуктивной системы Причем преобладающими оказались хронические воспалительные заболевания предстательной железы и семенных пузырьков.

Представляло интерес выявить наиболее характерные биохимические признаки этих состояний.

Для повышения эффективности диагностики хронического простатита мы использовали определение биохимических маркеров в секрете предстательной железы, а именно, церулоплаз-мина и органоспецифического белка - спермоспецифического ингибитора трипсина.

Исследование секрета предстательной железы было проведено у 174 субфертильных,*мужчин, из которых у 137 был верифицирован диагноз хронический простатит, а у 37 - исключен.

В группе субфертильных мужчин без хронического простатита уровень церулоплазмина в секрете предстательной железы составил в среднем 109,32±21,22 мкг/мл (минимальное значение - 69,9 мкг/мл, максимальное - 170,5 мкг/мл), а уровень спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы составил в среднем 1113,5±177,2 мкг/мл (минимальное значение - 790,0 мкг/мл, максимальное -2230,0 мкг/мл).

В группе субфертильных мужчин, страдающих хроническим простатитом средний уровень церулоплазмина в секрете предстательной железы составил 73,85±30,88 мкг/мл (минимальное значение - 5,3 мкг/мл, максимальное - 138,5 мкг/мл), а средний уровень спермоспецифического ингибитора трипсина в секрете предстательной железы составил 1731,6±344,9 мкг/мл (минимальное значение - 890,0 мкг/мл, максимальное - 2530,0 мкг/мл).

Прежде чем приступить к разработке собственно диагностического метода, нами была создана специализированная компьютерная программа «NTech Balance 3.0», которая позволила не только быстро и объективно проводить оценку диагно-

стических методов и визуализировать полученные результаты, ко к,на основе оригинальных алгоритмов оптимизировать поиск пороговых значений для повышения диагностической и/или прогностической значимости.

Диализ полученных данных с использованием специализированной программы «ЭДТесЬ Ва1апсе 3 • 0» позволил установить, что при хронических простатитах соотношение между уровнем спермоспецифического ингибитора трипсина и церуло-плазмина в секрете предстательной железы возрастает по сравнению с контролем к достигает 12 и более. Проведенные испытания показали, что предлагаемый способ диагностики имеет более высокие характеристики по сразнению с другими биохимическими способами диагностики и позволяет повысить специфичность на 29,7%, чувствительность на 8,8%, эффективность 13,2%, прогностическое значение положительного результата 8,3%, прогностическое значение отрицательного результата 29,7% (рисунок 3).

Спец. Чуа. Эфф. ПЗПР ПЗОР

□ Новый способ диагностики ■ Существующий способ диагностики

Рисунок 3. Сравнительная характеристика существующего биохимического способа диагностики хронического простатита [Тарасов Н. И. и др., 1998] и нового способа, разработанного нами (патент №2237399).

Спец. - специфичность; Чуа. — чувствительность; Эфф. — эффективность ; ПЗПР - прогностическое значение положительного результата; ПЗОР - прогностическое значение отрицательного результата.

Разработанный нами способ лег в основу изобретения «Способ иммунохимической диагностик« хронического простатита» (патент на изобретение Ш2237899 от 10 октября 2004 года) .

Среди этиологических факторов воспалительных заболеваний мужской репродуктивной системы высокую долю занимали микст-инфекции, когда при углубленном исследовании выявлялись два и более патогенов одновременно.

Чтобы повысить эффективность скрининга микст-инфекций, мы предприняли попытку оценить отличия биохимического ответа при моноинфекциях и микст-инфекциях.

Негемовый ферропротеин лактоферрин является нормальным секреторным продуктом предстательной железы и периурет-ральных желез, в тоже время лактоферрин справедливо относят к белкам острой фазы воспаления, так как он синтезируется лейкоцитами и является показателем их детрануляции при воспалительном ответе.

При воспалительных заболеваниях предстательной железы уровень лактоферрина в секрете простаты формируется из двух источников: секреция предстательной железы и деграну-ляция лейкоцитов. То есть, лактоферрин отражает как собственную белоксинтезирующую активность предстательной железы, так и выраженность воспалительного процесса, характеризующуюся дегрануляцией лейкоцитов.

Исследование секрета предстательной железы было проведено у 352 субфертильных мужчин (страдающих хроническим простатитом), из которых у 65 было верифицировано наличие микст-инфекции, а у 287 наличие микст-инфекции было исключено .

В группе субфертильных мужчин без микст-инфекции, страдающих хроническим простатитом (п=287), уровень лактоферрина в секрете предстательной железы составлял в среднем 104,9±3б, 5 мкг/мл (минимальное значение - 38,1 мкг/мл, максимальное - 192,0 мкг/мл).

В группе субфертильных мужчин с микст-инфекцией, страдающих хронически^ простатитом (п=65), средний уровень „- лактоферрина в секрете предстательной железы составлял 160,7±20,7 мкг/мл (минимальное значение - 78,9 мкг/мл, максимальное - 238,0 мкг/мл).

По полученным нами данным, при микст-инфекции уровень лактоферрина в секрете предстательной железы значительно повышен по сравнению с воспалительным процессом, вызванным каким-либо одним инфекционным агентом.

Анализ полученных данных, проведенный с использованием специализированной программы «NTech Balance 3.0», позволил установить что, концентрация лактоферрина в секрете предстательной железы 149,0 мкг/мл является оптимальным пороговым значением.

Проведенные испытания, результаты которых были оценены с применением специализированной программы «NTech Bal-

anee 3.0», показали, что предлагаемый способ диагностики имеет более высокие характеристики по сравнению с другими способами диагностики и позволяет повысить специфичность на 6,4%, чувствительность на 26,3%, эффективность 10,9%, прогностическое значение положительного результата 2,4%, прогностическое значение отрицательного результата 47,Э% (рисунок 4 Í .

Спец. Чуэ. Эфф. ПЗПР ПЗОР

□ Новый способ диагностики ■ Существующий способ диагностики

Рисунок 4. Сравнительная характеристика существующего способа диагностики микст-инфекций при воспалительных, заболеваниях дополнительных желез мужской репродуктивной системы [Квасов А. Б. и др., 1998] и нового способа, разработанного нами (патент №2196991).

Спец. - специфичность; Чув. - чувствительность; Эфф. - эффективность ; ПЗПР - прогностическое значение положительного результата; ПЗОР - прогностическое значение отрицательного результата.

Способ не зависит от непосредственного выявления возбудителя, так как основан на исследовании ответа организма хозяина на молекулярном уровне.

Разработанный нами способ лег в основу изобретения «Способ диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы» (патент на изобретение №219699*1 от 20 января 2003 года).

Известно, что Chlamydia trachomatis может приводить к нарушению функционального состояния сперматозоидов [Гор-пинченко И. И,, 2002, Назаров Т. Н. и др. 2006; Satta A. et al., 2006], однако выявление этого патогена затруднено из-за особенностей его жизненного цикла [Дмитриев Г, А., 2003, Савичева А. М. и др., 2004].

Мы сделали попытку улучшить выявление Chlamydia trachomatis. За основу был выбран способ иммунофлуоресцент-

ной диагностики как достаточно доступный.благодаря приемлемой точности и сравнительно низкой себестоимости. Поскольку решающее значение для качества иммунофлуоресцентного анализа имеют условия забора материала и последующей проббподготовки, мы выбрали в качестве биологического материала для исследования эякулят и экспериментально подобрали условия пробоподготовки.

Наиболее высокие результаты удалось получить при выполнении мазков из спермы после её центрифугирования в течение 15 минут при скорости 12000 об/мин [рисунок 5).

центрифугирование при менее 12000 об/мин не дает удовлетворительного осаждения, а при более 120 00 об/мин -приводим? к достоверному снижению интенсивности флуоресценции .

Спец. Чув. Эфф. ПЗПР ПЗОР

□ Новый способ диагностики ■ Существующий способ диагностики

Рисунок 5. Сравнительная характеристика обычного иммуноф-луоресцонткого способа выявления Chlamydia trachomatis при заболеваниях органов мужской репродуктивной системы и имму-нофлуоресцентного способа с разработанной нами новой схемой профподготовки (патент на изобретение №2242000 от 10 декабря 2004 года).

Спеял. - специфичность; Чув. - чувствительность; Эфф. - эффективность ; ПЗПР - прогностическое значение положительного результата,- ПЗОР - прогностическое значение отрицательного результата.

Центрифугирование в течение менее 15 минут дает недостаточно полное осаждение сперматозоидов, а свьспе - 15 минут уже не приводит к ощутимому преимуществу по сравнению с пятнадцатиминутным центрифугированием.

Проведенные испытания, результаты которых были оценены с применением специализированной программы «NTech Balance 3.0», показали, что разработанный нами способ диагностики имеет более высокие характеристики по сравнению с им-мунофлуоресцентным анализом без предложенной нами пробопод-готовки, и позволяет повысить специфичность на 0,6%, чувствительность на 12,3%, эффективность на 6,4%, прогностическое значение положительного результата на 0,7%, прогностическое значение отрицательного результата на 13,4% (рисунок 5) .

Разработанный нами способ лег в основу изобретения «Способ диагностики хламидиоза при воспалительных заболеваниях мужской репродуктивной системы» (патент на изобретение №2242000 от 10 декабря 2004 года).

Необходимо отметить-, что субфертильность как осложнение воспалительных заболеваний органов мужской репродуктивной системы развивается, естественно, не во всех случаях. Практический интерес представляет оценка вероятности развития субфертильности при воспалительных заболеваниях, для последующего формирования групп риска.

Учитывая, что развитие такого осложнения, как суб-фертильность, как правило, обусловлено индивидуальными qco-бенностями реактивности организма, мы на основе анализа ряда цитокинов (интерлейкина-ip, рецепторного антагониста ин-терлейкина-1, интерлейкина-6, интерлейкина-8 и фактора некроза опухоли-а) в спермоплазме мужчин с воспалительными заболеваниями дополнительных желез мужской репродуктивной системы (предстательная железа, семенные пузырьки) провели разработку способа прогноза развития субфертильности.

Исследование спермоплазмы было проведено у 174 мужчин, в том числе у 36 здоровых фертильных доноров (контрольная группа) и у 138 больных хроническими простатитами и простатовезикулитами с нормозооспермией (концентрация сперматозоидов 2,0 107мл"1 - 1,5-108 мл-1; количество активно подвижных сперматозоидов ¿40%, скорость сперматозоидов ¿2,0 мм-мин"1; морфологически нормальных форм сперматозоидов больше 65%).

Цитокины в спермоплазме у здоровых и больных мужчин выявлялись с разной частотой (рисунок 6).

Уровень цитокинов в спермоплазме положительных образцов у здоровых и у больных мужчин имел существенные отличия (р<0,01), за исключением фактора некроза опухоли-а, уровень которого не имел достоверных различий между группами (таблица 1).

к

здоровые ферти/тьньк больные хронически« Доноры простатитом с

нормозооспермией

□ Интерлейкин-1бетэ

0 Рецепторный антагонист интерлейкина-1 и Интерлейкин-6 ш Интерлейкин-8

□ Фактор некроза опухоли-альфа

Рисунок 6. Частота выявления цитокинов в спермопла

,, Таблица 1.

Уровень цитокинов в положительных образцах спермоплазмы (пг/мл).

Цитокины Здоровые фертильные доноры (п=36) Больные хроническими простатитами с нормозооспермией (п=138)

Средне^ значение Min-Мах Среднее значение Min-Kax

Интерлейкин-lß 8,03 +3,11 3,019,2 117,92 ±30,73 45,6181, 6

Рецепторный антагонист интерлейкина-1 108,57 ±27,20 59,6162, 0 713,78 ±149,S7 110,0985, 6

Интерлейкин-6 19, 0? ±16,02 4,2105,1 118,99 ±99,97 4,2-

Инт ерлейкин-8 584,45 ±94,35 416,6779,8 1177,72 +247,37 900,32549,4

Фактор некроза опухоли-а 7,22 ±2, 98 3,71-6,2 8, 44 ±3, 80 2,218, 5

Наблюдение за обследованными пациентами было продолжено. Через два года наблюдения у всех мужчин в контрольной группе показатели спермограммы оставались в пределах рефе-ренсных значений и характеризовались как нормозооспермия.

В группе больных хроническими простатитами и проста-товезикулитами ^ёрез два года у 23,2% больных были выявлены отклонения от нормативных значений спермограммы, то есть патоспермия, характерная для состояния субфертильности.

Проведенные исследования, результаты которых были оценены с применением специализированной программы «NTech Balance 3.0», показали, что оптимальным для прогноза развития субфертильности является определение трех цитокинов (интерлейкина-ip, интерлейкина-6, интерлейкина-8)

Концентрации интерлейкина-lp, интерлейкина-6 и интерлейкина-8 в спермоплазме имеют разный порядок, что неудобно для разработки приемлемого для практического использования способа прогноза развития субфертильности, поэтому мы логарифмировали полученные абсолютные значения концентрации цитокинов.

Оказалось, что представленный в виде десятичного логарифма (Lg) уровень интерлейкина-ip, принимал значения от 1, 658 до 2,259, интерлейкина-6 - от 0 до 2, 6466, а интер-лейкина-8 - от 2,9543 до 3,4064.

Далее мы суммировали полученные после логарифмирования значения по формуле:

ПС = Lg(Hn1/7) + 1_д(Ил6) + Lg(Hn8)

где: ПС - прогностический коэффициент, характеризующий риск развития субфертильности при воспалении органов репродуктивной системы; Ил1р - концентрация интерлейкина-ip в спермоплазме (пг/мл); Ил6 - концентрация интерлейкина-6 в спермоплазме (пг/мл); Ил8 - концентрация интерлейкина-8 в спермоплазме (пг/мл).

Если при воспалительных заболеваниях мужской репродуктивной системы сумма логарифмов концентраций в спермоплазме интерлейкина-ip, интерлейкина-6 и интерлейкина-8 превышает 7,1, то высок риск развития патоспермии и как следствие - субфертильности.

Разработанный нами прогностический способ имеет достаточно хорошие характеристики (рисунок 7) и может использоваться для формирования групп риска.

Спец. Чув, Эфф. ПЗПР ПЗОР

аНовьтм прогностический способ

Рисунок 7, Характеристика способа прогноза развития субфер-тильности при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы.

Спец. — специфичность; Чув. - чувствительность; Эфф. - эффективность ; ПЗПР - прогностическое значение положительного результата; ПЗОР - прогностическое значение отрицательного результата,

Анализ уровня цитокцнов в спермоплазме больных хроническими простатитами выявил интересную закономерность -при агглютинация сперматозоидов уровень интерлейкина-1Р был повышен в 2 раза (таблица 2},

Таблица 2.

Уровень питокинов при агглютинации сперматозоидов_

Цитокины Концентрация в спермоплазме, пг/мл

Эякуляты без агглютинации сперматозоидов, п=4 4 Эякуляты с агглютинацией сперматозоидов , п=41

Интерлейкин-1р 70,5±20,6 130,3±27,3*

Рецеяторный антагонист иытерлейкина-1 113,3+141,4 685,2±153,5**

Интерлейкин-6 109,2±95,5 100,9+95,7**

Иктерлейкин-8 1156,1±209,1 1230,б±342,0**

Фактор некроза олу-холи-а 7,2±А,3 8,6+4,2**

Примечание! различия между группами с явлением агглютинации сперматозоидов и без него * - р<0,01; ** - р>0г1.

Причем при концентрации в спермоплазме интерлейкина-1Р более 140 пг/мл - агглютинация сперматозоидов встречалась в 100% случаев. Мы предположили, что этот цитокин может быть связан с процессом агглютинации сперматозоидов.

Для дальнейшего экспериментального исследования механизмов агглютинации нами был разработан способ оценки биологической активности химических веществ, в котором в качестве тест-объекта используются сперматозоиды человека.

Данный способ послужил основой для изобретения «Способ выявления биологической активности химических веществ» (патент на изобретение №2217750 от 27 ноября 2003 года).

Для проверки гипотезы о возможном участии интерлей-кина-1Р в процессе агглютинации сперматозоидов нами были проведены экспериментальные исследования по представленной ниже схеме (рисунок 8).

Рисунок 8. Схема экспериментального исследования возможного участия интерлейкина-1Р в процессе агглютинации сперматозоидов .

В эксперименте были использованы, образцы эякулятов 14 фертилькых мужчин (доноры спермы 23-29 лет, средний возраст 25,2±1, 2 лет).

Результаты эксперимента подтвердили, что препарат кнтеряейкина-1р индуцирует агглютинацию сперматозоидов (рисунок 9) .

Рисунок 9. Микрофотографии спермы после одной минуты инкубации (З'Ю пиксел, разрешение 2(И8х1_53б, окуляр 10*, объ-ектиз 40") :

А - опыт, Б - контроль-1, В -контроль-2, Г - контроль-3 .

Мы предположили, что обратимый характер агглютинации сперматозоидов, возможно, был связан с химической неустойчивостью интерлейкина-1Р к действию мощной системы протео-Литических ферментов спермоплазмы.

Дальнейшие наблюдения показали, что через 60 минут агглютинаты сперматозоидов в опытной группе практически не выявляются (рисунок 10), То есть, агглютинация сперматозоидов , индуцированная интерлейкином-1р, носит обратимый характер.

Рисунок 10. Микрофотографии спермы после 60 минут инкубации (3-106 пиксел, разрешение 2048x1536, окуляр 10*, объектив 40х) :

А - опыт, Б - контроль-2.

Для проверки этого предположения мы провели дополнительный эксперимент [рисунок Щ.

Рисунок 11. Схема экспериментального исследования обратимого характера агглютинации сперматозоидов в присутствии препарата интерлейкина-1р.

Результаты проведенного опыта (рисунок 12) позволили установить, что причиной обратимого характера агглютинации, является химическая неустойчивость интерлейкина-1[} к действию лротеолитических ферментов спермы человека.

Рисунок 12. Микрофотографии спермы после 120 минут инкубации (3-106 пиксел, разрешение 204ЙХ1536, окуляр 10х, объектив 40*}; А — опыт, Б - контроль-2.

Экспериментально мы установили (таблица 31 , что минимальная концентрация интерлейкина-1[}, которая может вызывать агглютинацию сперматозоидов, равна 100 пг/мл.

Таблица 3,

Агглютинация сперматозоидов при различных концентрациях ин-терлейкина-1р_____________________

№ образца эякулята Конечная концентрация интерлейкина-1|3

1 мкг/мл 10 0 пг/мл 10 пг/мл

1 + - _

2 + + -

3 + - -

4 + - -

5 + - -

Примечание: «+» - агглютинация сперматозоидов обнаружена, «-» - агглютинация сперматозоидов не обнаружена.

После разведения концентрация, сперматозоидов, была 10 млн/мл, то есть для агглютинации одного миллиона, сперматозоидов требовалось 10 лг интерлейкинз-1Р, что составляет около 350000 молекул на один сперматозоид.

Мы предположили, что интерлейкин-1Р может взаимодействовать с поверхностными белками сперматозоидов.

Иммуноэлектрофоретический анализ позволил установить способность интерлейкина-1Р к межмолекулярному взаимодействию со скаферринрм (рисунок 13).

В целом 'механизм агглютинации сперматозоидов при воспалении схематично выглядит следующим образом: при воспалении усиливается продукция интерлейкина-1Р, который, взаимодействуя с поверхностным белком клеточной мембраны сперматозоидов (скаферрином), приводит к их агглютинации (рисунок 14).

Рисунок 13. Схема экспериментального исследования межмолекулярного взаимодействия интерлейкина-1р и скаферрина.

Рисунок 14. Схема механизма агглютинации сперматозоидов индуцированной интерлейкином-1Р при воспалении.

Как известно, в сперме высоко содержание полиаминов, которые выполняют разнообразные функции [Николаев А. А и др., 2006].

Мы предположили, что полиамины, благодаря особенностям своего химического строения, могут принимать участие в протекции сперматозоидов от агглютинации.

Для дальнейшего исследования было необходимо разработать чувствительный, эффективный и легко воспроизводимый метод для определения полиаминов в биологических жидкостях.

В общем виде изобретенный нами способ определения полиаминов имеет два основных этапа (рисунок 15).

На первом этапе проводится экстракция полиаминов из биологического материала с использованием н-бутанола и последующее их определение методом электрофореза в агаровом геле (патент на изобретение «Способ определения полиаминов в биологической жидкости» N"2225981 от 20 марта 2004 года).

На втором этапе проводится конвертация полученных на первом этапе графических данных (окрашенная электрофоре-грамма) в цифровой формат и количественная оценка содержания полиаминов путем математической обработки полученной информации, с использованием разработанной нами специализированной компьютерной программы (Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ «ПН5108» №2003612170 от 17 сентября 2003 года.).

Рисунок 15. Принципиальная схема разработанного нами нового способа количественного определения полиаминов в биологических жидкостях.

У здоровых фертипьных. ыузкчин. концентрация спермина а спермоплазме составляла в среднем 253,5+61,3 мг/мл, а концентрация спермидина - 188,0+73,4 мг/мл (рисунки 16 и 17).

Рисунок 16. Результаты электрофореза полиаминоа (окраска нингидрином) : А - смесь стандартных препаратов спермина и спермидина; Б - образец нативной спермоплазмы человека.

спермин

спермидин

Рисунок 17. График типичной ска нограммы полиаминов спермо-плазмы здорового фертильного мужчины (донор В,) (программа «ПН51графический фильтр «обяу уелие-1») ,

При хроническом простатите количество полиаминов з спермоплазме оказалось достоверно сниженным по сразнению с контролем.

Концентрация спермина составляла в среднем 52,4+17,6 мг/мл, а концентрация спермидина - 14,0+12,2 мг/мл.

При наличии в эякуляте явления агглютинации сперматозоидов концентрация полиаминов была еще более низкой (рисунок 18) .

Для исследования влияния полиаминов на процесс агглютинации сперматозоидов мы провели эксперимент, где в первом опыте добавляли гс сперме сначала препарат интерлейкина-а после инкубации полиамины, а во втором опыте, наоборот, сначала полиамины, а после инкубации - препарат интер-лейкина-1р (рисунок 19).

Сканограмма сперло-плазмы эякулята без агглютинации сперматозоидов {пациент п.)

Сгсанограмма свермо-плазмы эякулята с агглютинацией сперматозоидов (пациент Н.)

Рисунок 18. Типичные сканограммы полиаминов спермоплазмы больных хроническим простатитом (программа «ПН5108», графический фильтр «облучение-1»).

Инкубация 15 минут

ОПЫТ-1 ОПЫТ-2 КОНТРОЛЬ

Рисунок 19. Схема экспериментального исследования влияния полиаминов на процесс агглютинации сперматозоидов индуцированный интерлейкином-1р.

Как видно из полученных данных (таблица 4), повышение концентрации полиаминов не способно приводить к диссоциации уже агглютинировавших сперматозоидов.

В тоже время предварительное повышение уровня полиаминов предотвращает агглютинацию сперматозоидов, вызываемую добавлением человеческого интерлейкина-1р.

Таблица 4.

Результаты экспериментального исследования влияния полиаминов на процесс агглютинации сперматозоидов индуцированный интерлейкином-1|3._

Эксперимент Тест-объект Порядок внесения эффекторов Процесс агглютинации

№ Название

1 2

1 Опыт-1 Сперма доноров интерлей-КИН-1Р полиамины +

2 Опыт-2 полиамины интерлей-кин-1р -

3 Контроль интерлей-кин-1Р — +

Таким образом, случаи полного отсутствия или ограниченной агглютинации сперматозоидов у пациентов, страдающих хроническим простатитом, с повышенным уровнем интерлейкина-1Р в спермоплазме, вероятно, можно объяснить изначально более высоким уровнем полиаминов в сперме.

Тогда механизм протекторного действия полиаминов схематично выглядит так (рисунок 20)

Рисунок 20. Схема механизма протекторного действия полиаминов при агглютинации сперматозоидов индуцированной интер-лейкином-1р.

Усиление секреции полиаминов приводит к повышению их концентрации в сперме, что, вероятно, препятствует межмолекулярному взаимодействию интерлейкина-1Р со скаферрином, то есть предотвращает агглютинацию сперматозоидов (рисунок 20) .

Учитывая,' что при патоспермии обусловленной воспалением частым нарушением являлось изменение времени разжижения коагулировавшего эякулята, нами было проведено экспериментальное изучение некоторых аспектов этого процесса в норме и при патологии.

Для изучения разжижения коагулировавшего эякулята и особенностей протекания этого процесса в условиях воспаления было проведено экспериментальное исследование по представленной схеме (рисунок 21).

Рисунок 21. Схема изучения факторов разжижения коагулировавшего эякулята человека.

Сначала ионообменной хроматографией из семенных пузырьков выделяли белковые фракции с молекулярной массой 5060 кДа.

Затем обрабатывали их препаратом простатоспецифиче-ского антигена, после чего аффинной хроматографией освобождались от фермента и исследовали биологические функции образовавшихся полипептидов.

Биологическая активность образовавшихся полипептидов - изменение двигательных характеристик сперматозоидов -подтвердила, что выделенный белок является семеногелином (таблица 5).

Таблица 5.

Биологическая активность образовавшихся полипептидов (отмытые сперматозоиды) ._

Двигательные характеристики сперматозоидов До инкубации Через 20 минут инкубации

Контроль (отмытые сперматозоида в присутствии жидкости Гиние) Опыт (отмытые сперматозоиды в присутствии биологически активных полипептидов)

Всего подвижных, % 78,0 79,0 64,3

Активно подвижных, % 58,0 '£>8, 0 53,0

Слабо подвижных, % 20,0 21,0 11,3

Скорость, мм/мин 2,6 2,55 2,1

Дальнейшее исследование позволило нам впервые обнаружить свойство высокомолекулярных фракций полипептидов (18-22 кДа) ингибировать активность тиоловых протеиназ, но не сериновых протеиназ (таблица 6) .

Таблица 6.

Исследование ингибиторной активности фракций полипептидов.

Молекулярная масса фракций полипептидов Ингибиторная активность фракций полипептидов

Ингибирование химотрипсина, ИЕ Ингибирование папаина, ИЕ

5,0-16,0 кДа 0 0

16,0-18,0 кДа 0 0,1

18,0-20,0 кДа 0 4,7

20,0-22,0 кДа 0 0,3

22,0-24,0 кДа 0 0,1

На основании полученных данных процесс разжижения коагулировавшего эякулята в норме представляется следующим образом (рисунок 22).

норме.

Во время эякуляции продукт семенных пузырьков семе-ногелин смешивается с продуктами секреции предстательной железы и других вспомогательных желез мужской репродуктивной системы, в результате семеногелин коагулирует [Lil^a Н. et al., 1999, Herr J. С. et al., 2000] Затем происходит процесс разжижения, в котором ключевую роль, на наш взгляд, играет взаимодействие простатоспецифического антигена, который является типичной сериновой протеиназой [Malm J. et al., 2000] и его естественного ингибитора спермоспецифиче-ского ингибитора трипсина [Николаев А. А., 2004]. Соотношение между ними и их биологическая активность обеспечивают оптимальную скорость разжижения эякулята.

В процессе разжижения эякулята простатоспецифический антиген расщепляет семеногелин на ряд полипептидов, которые способны блокировать двигательную активность сперматозоидов, вероятно, за счет обратимого ингибирования денеиновой АТФазы хвоста сперматозоидов [White D. et al., 2001].

По нашим наблюдениям, подавляется, прежде всего, активность слабо подвижных сперматозоидов, то есть происходит

отбор более активных сперматозоидов и создания для них, за счет обездвиживания слабо подвижных, дополнительного энергетического резерва в спермоплазме.

Блокирование излишней двигательной активности может способствовать также предупреждению преждевременной капаци-тации Необходимо отметить, что биологическая роль, образующихся полипептидов, не ограничивается только блокированием подвижности сперматозоидов. Так, например, фракции полипептидов, которые мы назвали «тяжелыми» способны избирательно ингибировать протеиназы - папаин (тиоловая протеина-за), но не химотрипсин (сериновая протеиназа), что, возможно, способно регулировать процесс разжижения коагулировавшего эякулята по механизму отрицательной обратной связи. Не исключена и другая функциональная роль, поскольку активность ферментов спермоплазмы во многом определяет оплодотворяющую способность сперматозоидов.

При воспалении (рисунок 23) уровень спермоспецифиче-ского ингибитора трипсина возрастает, а уровень простатос-пецифического антигена, напротив, достоверно снижается. Кроме того, снижается ферментативная активность простатической кислой фосфатазы [Николаев А. А., 1994], которая также принимает участие в разжижении эякулята [Mandai A. et al., 2000].

Рисунок 23. Схема процесса коагуляции-разжижения эякулята при воспалении предстательной железы.

Таким образом, создаются условия для замедления процессу разжижения коагулировавшего семеногелина, так как на фоне снижения концентрации простатоспецифического антигена происходит еще и его ингибирование спермоспецифическим ингибитором трипсина, уровень которого при воспалении увеличивается. Все это в конечном итоге приводит к увеличению времени разжижения эякулята. Снижение скорости разжижения эякулята приводит к недостатку «тяжелых» фракций полипептидов, обладающих ингибиторной активностью, что, вероятно, может приводить к повреждению сперматозоидов в условиях избыточной ферментативной активности.

ВЫВОДЫ

1. В основе пролонгированного времени разжижения коагулировавшего эякулята при воспалительных заболеваниях предстательной железы лежит нарушение соотношения протеоли-тических ферментов (простатическая кислая фосфатаза и простатоспецифический антиген) и ингибитора протеиназ (спермоспецифический ингибитор трипсина).

2. Интерлейкин-lp может индуцировать агглютинацию сперматозоидов как т vitro, так и т vivo (при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов). Для агглютинации сперматозоидов т vitro необходимо не менее 350000 молекул интерлейкина-ip на один сперматозоид.

3. Агглютинация сперматозоидов под действием интерлейкина-1р опосредуется через межмолекулярное взаимодействие с белком гликокаликса сперматозоидов - скаферрином.

4. Полиамины спермоплазмы (спермин и спермидин) являются протекторами сперматозоидов от агглютинации индуцированной интерлейкином-1Р.

5. Воспалительные заболевания органов репродуктивной системы фертильных мужчин, протекающие с повышенным уровнем в спермоплазме интерлейкина-ip, интерлейкина-б и интерлей-кина-8, как правило, осложняются развитием субфертильно-сти.

6. Спермоспецифический ингибитор трипсина и церулоплазмин в секрете предстательной железы являются маркерами хронического простатита, причем уровень спермоспецифического ингибитора трипсина возрастает, а церулоплазмина, напротив, снижается.

7. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы значительно более высок при воспалении, вызванном микст-инфекцией, по сравнению с моноинфекцией.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение в секрете предстательной железы концентрации спермоспецифического ингибитора трипсина и церуло-плазмина позволяет при их соотношении 12 и более диагностировать хронический простатит (патент на изобретение №2237899 от 10 октября 2004 года).

2. Определение при простатитах в секрете предстательной железы уровня лактоферрина позволяет по его концентрации превышающей 149,0 мкг/мл диагностировать наличие микст-инфекции (патент на изобретение №2196991 от 20 января 2003 года).

3. Предварительное центрифугирование спермы в течение 15 минут при скорости 12000 оборотов в минуту, позволяет значительно повысить чувствительность, эффективность и прогностическое значение отрицательного результата при иммунофлуоресцентном выявлении Chlamydia trachomatis (патент на изобретение №2242000 от 10 декабря 2004 года) .

4. Определение в спермоплазме интерлейкина-lß, интерлейки-на-6, интерлейкина-8 при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы позволяет по сумме десятичных логарифмов их концентраций (пг/мл) равной или превышающей,'7,1 прогнозировать развитие па-тоспермии и субфертильности.

5. Применение специализированной компьютерной программы «NTech Balance 3.0» позволяет быстро и объективно проводить оценку всех основных характеристик методов диагностики, оптимизировать поиск пороговых значений, визуализировать полученные результаты оценки и представлять данные, как в графической форме, так и в форме таблиц.

6. Исполь зойание в качестве тест-объекта сперматозоидов человека позволяет быстро и эффективно проводить выявление биологической активности химических веществ (патент на изобретение №2217750 от 27 ноября 2003 года).

7 • Электрофорез в агаровом геле позволяет после конвертации графического материала (окрашенные электрофореграм-мы) в цифровой формат проводить количественное определение полиаминов в биологических жидкостях с применением специализированной компьютерной программы «ПН5108» (патент на изобретение №2225981 от 20 марта 2004 года; свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2003612170 от 17 сентября 2003 года).

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ

Разработанные способы диагностики внедрены в практическую работу: клинико-диагностической лаборатории Центра планирования семьи и репродукции (г. Астрахань), кафедры урологии, кафедры общей и биоорганической химии, кафедры фармацевтической химии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава», Астраханского областного кожно-венерологического диспансера, диагностической лаборатории ООО МФВФ «Техномед» (г. Астрахань), ООО НПЛ «Новые технологии» (г. Астрахань), ООО МФ «Здоровье плюс» (г. Астрахань), ЧМК «Мужская консультация» (г. Астрахань), ООО МЦ «ЭОС» (г. Астрахань).

СПИСОК ПАТЕНТОВ НА ИЗОБРЕТЕНИЯ И СВИДЕТЕЛЬСТВ ОБ ОФИЦИАЛЬНОЙ РЕГИСТРАЦИИ ПРОГРАММ ДЛЯ ЭВМ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Полунин А. И., Мирошников В. М. Способ диагностики микст-инфекций при воспалительных заболеваниях уретры и предстательной железы. -Патент на изобретение №2196991 от 20 января 2003 г.

2. Луцкий Д. Л., Ефимов Т. В., Николаев А. А., Плосконос М. В. Программа для ЭВМ «ПН5108». - Свидетельство об официальной регистрации^ программы для ЭВМ №2003612170, от 17 сентября 2003 г.

3. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Способ выявления биологической активности химических веществ. - Патент на изобретение №2217750, от 27 ноября 2003 г.

4. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Николаев А. А., Бойко А. В., Питательная среда для выделения клебсиелл. - Патент на изобретение №2218396 от 10 декабря 2003 г.

5 Луцкий Д. Л., Ефимов Т. В., Николаев А. А., Плосконос м. В. Способ определения полиаминов в спермоплазме. -Патент на изобретение №2225981 от 20 марта 2004 г.

6. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Бойко О. В., Выборное С.

B., Бойко В. И. Способ определения бактерицидной активности спермы. - Патент на изобретение №2229713, от 27 мая 2004 г.

7. Луцкий Д. Л., Мирошников В. М., Николаев А. А., Полунин А. И. Способ иммунохимической диагностики хронического простатита. - Патент на изобретение №2237899, от 10 октября 2004 г.

8. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Полунин А. И , Выборное

C. В. Способ диагностики хламидиоза при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы. -Патент на изобретение №2242000, от 10 декабря 2004 г.

9. Луцкий Д. Л., Николаев А А., Бойко О. В., Способ определения патогенности микроорганизмов. - Патент на изобретение №2259559, от 27 августа 2005 г.

10. Луцкий Д. Л., Выборнов С. В., Бойко О. В., Николаев А. А. Способ определения эффективности лекарственных средств и физиотерапевтических воздействий при лечении воспалительных заболеваний уретры и предстательной железы. - Патент на изобретение №2261439, от 27 сентября 2005 г.

11. Луцкий Д Л., Бойко О. В., Николаев А. А., Бойко А. И., Плосконос М. В., Гудинская Н. И. Питательная двухфазная среда для выделения трихомонад. - Патент на изобретение №2272834, от 27 марта 2006 г.

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Гончарова Л. А., Ушакова М В. Влияние на фертильность хронической интоксикации сероводородсодержащим газом // Проблемы репродукции. -2000. - Т. 6, № 4. - С. 19-23.

2. Луцкий Д. Л., Давыдова М. В. Активность дельта-5-3-бета-гидроксистероиддегидрогеназы семенников крыс как показатель сперматогенной функции при воздействии неблагоприятных экологических факторов / / Мат. науч. конф. молодых ученых научно-исследовательских учреждений и высших медицинских учебных заведений Поволжья и Северного Кавказа. - Нижний Новгород, 2000. - С. 21-22

3. Луцкий Д. Л., Давыдова М. В. Использование микроэлемента селена в качестве пищевой добавки для восстановления фертильности эякулята после длительного контакта с природным газом Астраханского месторождения // Мат. Западно-Сибирский терапевтич. форума «Актуальные вопросы диагностики, лечения, профилактики наиболее распространенных заболеваний внутренних органов». - Тюмень, 2000 - С. 24-25

4. Луцкий Д. Л , Николаев А. А., Николаева Н. Н Иммунохи-мический контроль химиотерапии рака предстательной железы // Урология. - 2000. - № 3. - С. 41-43.

5. Луцкий Д. Л , Мирошников В. М., Николаев А. А., Мельман

B. М. Возможности диагностики рака предстательной железы // Труды АГМА Т. 18 (ХЫ1) . - Астрахань, 2000. - С. 246-251.

6. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Полунин А. И , Мирошников В М. Источники и динамика лактоферрина спермоплазмы при воспалительных заболеваниях репродуктивной системы // Андрология и генитальная хирургия. - 2000. - № 1. -

C. 36-37.

7. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А. А. Возможности лабораторной диагностики хронического простатита // Клиническая лабораторная диагностика. -2000. - № 10. - С. 41-42.

8 Луцкий Д. Л., Николаев А А , Мирошников В. М., Полунин

A. И. Значение комплексного исследования эякулята при хроническом простатите // Мат. всеросс. науч.-практич. конф. «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». - Курск, 2000. - С. 84-85.

9. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Способ оценки воздействия неблагоприятных экологических факторов на репродуктивную функцию мужчин // Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 10. - С. 42-43.

10. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Полунин А. И., Мирошников

B. М. Исследования белкового состава секрета простаты в диагностике хронического" простатита // Мат. всеросс. науч.-практич. конф. «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». - Курск, 2000. - С. 102-103.

11. Lutsky D. L., Nikolaev A. A. The correction of functional spermatozoa activity using the PSA // Mat. International conference «Biocatalysis: fundamentals & applications - 2000». - ..Moscow, 2000. - P. 119-120.

12. Луцкий Д. Л., Ушакова ^М. В., Николаев А. А. Влияние природного газа на сперматогенез // Мат. междунар. конф. «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины». - Астрахань, 2000. - С. 166-167.

13. Луцкий Д. Л., Ушакова М. В., Николаев А. А. Влияние цинка на фертильность спермы // Мат. III всеросс. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2000. - С. 117-119.

14. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Корреляция биохимических и физико-химических свойств спермы и морфо-функциональных характеристик сперматозоидов // Международный научный сборник «Молекулярные исследования мужской субфертиль-ности» / Под ред. А. А. Николаева. - Астрахань, 2000. -

C. 41-58.

15. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Николаев А. А., Мирошников В. М. Биохимическое исследование секрета простаты в диагностике нарушений репродуктивной функции при хроническом простатите // Международный научный сборник «Молекулярные исследования мужской субфертильности» / Под ред. А. А. Николаева. - Астрахань, 2000. - С. 116-126.

16. Луцкий Д. Л., Ушакова М. В., Николаев А. А., Гончарова Л. А. Влияние природного газа Астраханского месторождения на гормональный метаболизм семенников крыс // Труды АГМА Т. 20 (ХЦУ) . - Астрахань, 2001. - С. 59-62.

17. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Исследование межмолекулярных и молекулярно-клеточных взаимодействий в эякулированной сперме // Цитология. - 2001. - Т. 43, №4. - С, 361-362.

18 Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Луцкая Н. Б , Николаева Н Н. Состояние репродуктивной функции у больных терапевтического профиля // Мат. II междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2001. - С. 137-138.

19. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А А. Возможности лабораторной диагностики хронического неспецифического простатита // Мат. всеросс. науч.-практич. конф. «Новые технологии в медицине». - Саратов, 2001. - С. 214-215.

20. Луцкий Д Д., Гайнуллина Л. X. Биохимия разжижения коагулировавшей спермы // Мат. II междунар. науч. конф. «Белки - маркеры патологических состояний». - Астрахань, 2001. - С. 129-130.

21. Луцкий Д Л., Мирошников В М., Полунин А. И. Диагностическое значение белков секрета предстательной железы // Мат. II междунар. науч. конф. «Белки - маркеры патологических состояний». Астрахань, 2001. - С 137-138.

22. Луцкий Д. Л., Выборнов С. В., Ложкина Л. В. Особенности белкового состава эякулята при полизооспермии / / Мат. II междунар науч. конф. «Белки - маркеры патологических состояний». - Астрахань, 2001. - С. 115-116.

23. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Евдокимов В. В., Ушакова М. В., Ложкина Л. В., Выборнов С. В. Экологические аспекты андрологии: итоги и перспективы // Мат. IV междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2001. - С. 78-80.

24. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Ложкина Л. В. Определение альфа-амилазы при субфертильности у мужчин // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - № 10. - С. 4748.

25. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Выборнов С. В., Ложкина Л. В. Анализ спермограмм субфертильных мужчин с поли-зооспермией // Мат. I всеросс. конгресса «Актуальные вопросы оперативной гинекологии и репродукции человека». - Краснодар, 2001. - С. 147-14 9.

26. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Ложкина Л. В., Выборнов С. В. Характеристика белков спермоплазмы при полизоо-

спермин // Мат. I всеросс. конгресса «Актуальные вопросы оперативной гинекологии и репродукции человека». -Краснодар, 2001. - С. 131-134.

27. Луцкий Д Л., Николаев А. А Диагностическое значение исследования секрета предстательной железы у больных старше 50 лет // Научный вестник Тюменской медицинской академии. - 2001. - № 2. - С. 77-78.

28. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Николаев А. А., Мирошников В. М. Возможности скрининга микст-инфекции при иммуно-химическом исследовании секрета предстательной железы // Научный вестник Тюменской медицинской академии. -2001. - № 2. - С.78-79.

29. Луцкий Д. Л., Выборное С. В., Николаев А. А. Возможности топической диагностики нарушения метаболизма тестостерона у субфертильных больных хроническими простатитами // Мат. междунар конф. «Естествознание на рубеже столетий». - Дагомыс, 2001. - С. 24-25.

30 Луцкий Д. Л , Полунин А. И., Мирошников В. М , Николаев А. А. Хронический неспецифический простатит и уретрит: современные вопросы диагностики и лечения: Монография. - Астрахань, 2001. - 194 с.

31. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А. А. Клинико-диагностическое значение иммунохимических маркеров при хронических уретритах // Труды АГМА Т.22(ХЬУ1) - Астрахань, 2001. - С. 106-110.

32. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Биологические функции полипептидов спермоплазмы человека // Труда АГМА Т.22(Х1ЛП). - Астрахань, 2001. - С. 97-102.

33. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А. А., Думченко В. В. Использование препарата цинка в лечении мужской субфертильности // Микроэлементы в медицине - 2001. - № 2(4). - С. 44-46.

34. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Ушакова М. В. Селен протектор сперматогенеза при хронической интоксикации природным газом // Проблемы репродукции. - 2001. - Т. 7, № 5. - С. 23-26.

35. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А. А., Думченко В. В. Заболевания репродуктивной системы у мужчин Астраханского региона // Сборник науч. трудов «Проблемы охраны здоровья и окружающей среды». -Астрахань, 2002. - С. 167-169.

36. Луцкий Д. Л., Выборнов С. В., Николаев А. А., Бондарен-ко С. К. Анализ причин патоспермии у мужчин в Астраханской области // Сборник науч. трудов «Проблемы охраны здоровья и окружающей среды». Астрахань, 2002. - С. 169-171.

37. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Ушакова М. В. Влияние на фертильность хронической интоксикации природным газом Астраханского месторождения // Сборник науч. трудов «Проблемы охраны здоровья и окружающей среды». - Астрахань, 2002. - С. 175-178.

38. Луцкий Д Л., Николаев А. А. Нарушение гликозилирования белков при раке предстательной железы // Мат. X Съезда урологов России. - Москва, 2002 - С 463-464.

39. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Симбирцев А. С., Евдокимов В. В , Мирошников В М., Выборнов С. В. Механизмы агглютинации сперматозоидов при хроническом простатите // Мат. X Съезда урологов России. - Москва, 2002. - С. 297-298.

40. Луцкий Д. Л , Полунин А И., Мирошников В. М , Николаев А. А. Селен и цинк в коррекции мужской субфертильности: Учебное пособие. - Астрахань, 2002. - 42 с

41. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Николаев А. А., Полунин А. И. Микробиологическое исследование эякулята: Методическое пособие - Астрахань, 2002. - 27 с.

42. Луцкий Д. Л., Выборнов С. В., Николаев А. А., Евдокимов В В. Влияние некоторых антибиотиков на сперматогенез // Мат. V междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. - С. 82-83.

43. Луцкий Д. Л., Зульбалаева Д. Ф , Николаев А. А., Гай-нуллина Л. X. Уровни спермоплазменной кислой фосфатазы (КФ 3.1.3.2.) в биологических жидкостях мужчин и женщин // Мат V междунар конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. - С. 91-93.

44. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М , Николаев

A. А. Исследование спермоплазмы при хроническом неспецифическом простатите и уретрите // Андрология и гени-тальная хирургия. - 2002. - № 3. - С. 32-33

45. Луцкий Д. Л., Плосконос М. В., Николаев А. А., Бойко О.

B., Ефимов Т. В. Уровень полиаминов спермоплазмы в норме и при субфертильности у мужчин // Мат. V междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. - С. 110111.

46. Луцкий Д Л., Николаев А. А., Симбирцев А. С., Кубаева А. С. Возможный механизм агглютинации сперматозоидов при воспалении // Мат. V междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. - С. 112-113

47. Луцкий Д. Л., Сухова И. В., Николаев А. А. Биохимические особенности спермоплазмы при хронических воспали-

тельных заболеваниях мужской репродуктивной системы // Мат. V междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия». - Астрахань, 2002. - С. 115-116.

48. Лудкий Д. Л., Николаев А. А., Полунин А. И., Мирошников

B. М., Думченко В В. Спермоспецифический ингибитор трипсина при хроническом простатите // Мат. III междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2002. - С. 181-182.

49. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Николаев А. А., Выборнов С. В. Клинические аспекты антибиотической терапии в андрологии // Мат. III междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2002. - С 115-116

50. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Плосконос М. В. Значение ау-томикрофлоры в развитии мужского бесплодия // Мат. III всеросс. конгресса «Науки о человеке». - Томск, 2002. -

C. 158-159.

51. Луцкий Д Л., Гайнуллина Л. X., Кубаева А. С., Выборнов С. В. Межмолекулярные взаимодействия лактоферрина и некоторых лекарственных веществ // Труды АГМА Т.24(XLVIII). - Астрахань, 2002. - С. 55-59.

52. Луцкий Д. Л , Николаев А. А., Махмудова А. М., Ложкина Л. В. Уровень ингибитору тиоловых протеиназ при различных формах субфертильности у мужчин // Труды АГМА Т.24(XLVIII). - Астрахань, 2002. - С. 74-76.

53. Луцкий Д Л., Плосконос М. В., Николаев А А., Ефимов Т. В Полиамины спермоплазмы у субфертильных и фертиль-ных мужчин // Труды АГМА Т.24(XLVIII). - Астрахань, 2002. - С. 82-85.

54. Луцкий Д. Л., Мирошников В. М., Николаев А. А., Полунин А. И. Лактоферрин в диагностике хронических неспецифических простатитов и уретритов // Труды АГМА Т.24(XLVIII). -Астрахань, 2002. - С. 85-88.

55. Луцкий Д. Л., Плосконос М. В , Николаев М. В. Способ определения полиаминов в спермоплазме // Мат междунар. форума «Аналитика и аналитики». - Воронеж, 2003. -С. 394-395.

56. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Выборнов С. В., Николаев А. А. Анализ условно-патогенной микрофлоры эякулята при хронических простатитах у субфертильных мужчин // Труды АГМА Т.28(LII). - Астрахань, 2003. - С. 142-147.

57. Луцкий Д. Л., Алексашина Л. И., Бойко О. В., Димидюк О. Н. Анализ антибиотикограмм у субфертильных мужчин с хроническими воспалительными заболеваниями репродуктивной системы // Труды АГМА T.28(LII) - Астрахань, 2003. - С. 156-161.

58. Луцкий Д. Л., Гайнуллина Л. X., Ефимова А. В., Махмудова А. М. Комплексное исследование эякулята при беспло-

дии у собак // Труды АГМА T.28(LII). - Астрахань, 2003. - С. 150-152.

59. Луцкий Д. Л., Плосконос М. В., Полунин А. И., Бойко О В. Факторы антимикробной резистентности репродуктивного тракта мужчин // Труды АГМА T.28(LII). - Астрахань, 2003. - С. 164-167.

60. Луцкий Д. Л., Полунин А. И., Мирошников В. М., Николаев А. А. Диагностическое значение показателей ПСА в секрете предстательной железы у больных хроническим неспецифическим простатитом // Труды АГМА Т. 29(1.1X1). - Астрахань, 2003. - С. 184-187.

61. Луцкий Д. Л., Махмудова А. М., Николаев А. А Уровень спермоплазменного ингибитора тиоловых протеиназ при субфертильности у мужчин / / Мат. IV междунар. науч. -практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2003. - С. 414-415.

62. Луцкий Д. Л., Выборное С. В., Николаев А А., Ложкина Л. В. Динамика активности сперматогенеза у мужчин Астраханской области // Мат, VI междунар. конф «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». Астрахань, 2003. - С. 93-95.

63. Луцкий Д. Л., Сухова И В., Николаев А. А., Махмудова

A. М. Влияние радиочастотных электромагнитных полей на репродуктивную функцию* мужчин // Мат. VI междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». - Астрахань, 2003. - С. 99-100.

64. Луцкий Д. Л., Мирошников В. М., Николаев А. А. Факторы разжижения коагулировавшего эякулята человека // Успехи современного естествознания. - 2003 - № 9. - С. 10-14.

65 Луцкий Д. Л , Николаев А А., Полунин А И , Мирошников

B. М. Определение лактоферрина при уретритах и уретро-простатитах / Урология. - 2003. - № 4. - С. 33-36.

66. Луцкий Д. Л., Бойко О. В , Николаев А. А., Плосконос М. В., Гудинская Н. И., Стахеева В. В. Этиологические и диагностические аспекты бактерионосительства // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 1. - С. 40-41.

67. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Сухова И. В. Эффекты КВЧ-облучения спермы человека // Успехи современного естествознания. - 2004. - № 3. - С. 22-23. _

68. Луцкий Д Л., Николаев А А., Сухова И. В. Протеомика скаферрина при воздействии электромагнитного излучения миллиметрового диапазона // Mat. VIII International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century». - India, Goa, 2004. - P. 214-215.

69 Луцкий Д. Л., Выборное С. В., Зульбалаева Д. Ф., Николаев А. А., Махмудова А. М. Нарушение гликозилирования

лактоферрина при урогенитальных микоплазмозах // Фундаментальные исследования. - 2004. - № 2. - С. 173-174. 70 Луцкий Д. Л., Махмудова А. М., Николаев А. А., Выборнов С. В. Особенности протеома спермы при хроническом уро-генитальном трихомонозе // Фундаментальные исследования. - 2004. № 2. - С. 174-175.

71. Луцкий Д. Л., Николаев А А., Полунин А. И., Думченко В. В., Николаев А. А. 'Использование биохимических методов для диагностики хронического простатита / / Фундаментальные исследования. - 2004. - № 5. - С. 125-126.

72. Луцкий Д. Л., Бойко О. В., Николаев А. А. Влияние урогенитальных инфекций, вызванных U. Urealyticum и М. hominis, на гликозилирование скаферрина // Мат. VII междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». - Астрахань, 2004. - С. 62-63.

73. Луцкий Д. Л., Гайнуллина Л. X., Николаев А. А. Биохимический метод оценки жизнеспособности сперматозоидов // Мат. VII междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря» - Астрахань, 2004. - С. 62-63.

74. Луцкий Д. Л., Луцкая А. М., Николаев А. А., Ефимов Т. В., Плосконос М. В. Использование программы для ЭВМ «ПН5108» при количественной оценке электрофореза белков // Мат. VII междунар. конф. «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». - Астрахань, 2004. - С. 63-65.

75. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Сухова И. В. Влияние миллиметрового электромагнитного излучения низкой интенсивности на резистентность мембран сперматозоидов // Успехи современного естествознания. - 2004. - И' 8. - С. 56-58.

76. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Бойко О. В., Выборнов С.

B. Чувствительность к лактоферрину микрофлоры эякулята при хроническом простатите // Урология. - 2004. - № 5.

- С. 37-39.

77. Луцкий Д Л., Николаев А. А., Махмудова А. М., Николаев А. А Патохимические основы нарушения вязкости эякулята // Клиническая лабораторная диагностика - 2004. - № 9.

- С. 86-87.

78. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Махмудова А. М. Метод оценки межмолекулярных взаимодействий в системе белок-ксенобиотик // Мат. V междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2004 - С. 272-273.

79. Луцкий Д. Л , Николаев А. А., Зульбалаева Д. Ф., Выборнов

C. В , Луцкая А. М. Применение низкоинтенсивного микроволнового излучения в репродуктивных технологиях // Mat. IX International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century». - China, Dalyan, 2005 - P. 201-202.

80. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Луцкая А. М., Николаев А. А., Думченко В. В. Иммунохимическая идентификация инги-бина-В спермоплазмы человека // Фундаментальные исследования. - 2005. - № 2. - С. 29-30.

81. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Взаимодействие стволовых клеток со сперматозоидами человека // Успехи современного естествознания - 2005. - № 8. - С 84-85.

82. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Луцкая А. М. Количественная оценка межмолекулярных взаимодействий в системе «белок-антибиотик» // Мат. VIII междунар. конф. «Эколо-го-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». -Астрахань, 2005. - С. 186-187.

83. Луцкий Д Л , Тюрина А. А., Николаев А. А., Луцкая А М., Гончарова Л. А. Региональные особенности этиологических факторов заболеваний, передающихся половым путем в Нижнем Поволжье // Мат. VI междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век». - Москва, 2005.

- С 478-479.

84. Луцкий Д. Л., Луцкая А. М., Николаев А. А. Морфологические изменения сперматозоидов при трихомониазе // Успехи современного естествознания. - 2005. - № 12. - С. 83-84.

85. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Терентьев А А. Протек-тивное действие препарата FPP на сперматозоиды человека // Успехи современного,'естествознания. - 2005. № 12.

- С. 45-46.

86. Луцкий Д. Л., Сорокин Ф Е., Луцкая Н. Б. Сравнительный анализ микрометодов определения белков в биологических жидкостях // Успехи современного естествознания. -2006. - № 6. - С. 79-80.

87. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Кузнецова М. Г. Функциональная активность дериватов спермоспецифического ингибитора трипсина // Mat. X International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century». - Thailand, Bangkok, 2006. - P. 249-251.

88. Луцкий Д. Л., Николаев А. А., Кузнецова М. Г. Пептид семенной плазмы вызывающий активацию акрозина // Mat International Scientific Conference IW SDC'06 «New Technology In Integrative Medicine And Biology». Thailand, Bangkok-Pattaya, 2006. - P. 51-52.

89. Луцкий Д. Л., Оспанова М. У., Луцкая А. М. Методы исследования транспортной функции белков // Мат. VII междунар. науч.-практич. конф. «Здоровье и Образование XXI Век» - Москва, 2006. - С. 309-310.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Луцкий, Дмитрий Леонидович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭЯКУЛЯТА И ЕГО КОМПОНЕНТОВ В ДИАГНОСТИКЕ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ МУЖЧИН (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И БИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ ЭЯКУЛЯТА ПРИ ВОСПАЛЕНИЙ, И ИХ ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

1.2. КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ ЭЯКУЛЯТА ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

И ЕГО ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. ХАРАКТЕРИСТИКА РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ У СУБФЕРТИЛЬНЫХ МУЖЧИН

АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ

3.1.1. СОСТОЯНИЕ СПЕРМАТОГЕНЕЗА

У ЖИТЕЛЕЙ АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ

3.1.2. РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ЗАБОЛЕВАНИЙ ОРГАНОВ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

У СУБФЕРТИЛЬНЫХ МУЖЧИН

3.2. НОВЫЕ СПОСОБЫ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ И ИХ ОСЛОЖНЕНИЙ У МУЖЧИН

3.2.1. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ИММУНОХИМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПРОСТАТИТА

3.2.2. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ИММУНОХИМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ МИКСТ-ИНФЕКЦИЙ

3.2.3. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ВЫЯВЛЕНИЯ CHLAMYDIA TRACHOMATIS ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

МУЖСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

3.2.4. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПРОГНОЗА РАЗВИТИЯ СУБФЕРТИЛЬНОСТИ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

МУЖСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ

3.3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

БИОХИМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ЭЯКУЛЯТЕ

ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.1.ИЗМЕНЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ

СВОЙСТВ ЭЯКУЛЯТА ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.2. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ВЫЯВЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

ХИМИЧЕСКИХ ВЕЩЕСТВ

3.3.3.МЕХАНИЗМ АГГЛЮТИНАЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ

ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.4. РОЛЬ ПОЛИАМИНОВ В МЕХАНИЗМЕ АГГЛЮТИНАЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ

ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.4.1. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИАМИНОВ

3.3.4.2. РАЗРАБОТКА СПОСОБА КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИАМИНОВ

3.3.4.3. УРОВЕНЬ ПОЛИАМИНОВ В СПЕРМОПЛАЗМЕ

В НОРМЕ И ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.4.4. ПОЛИАМИНЫ - ПРОТЕКТОРЫ СПЕРМАТОЗОИДОВ ОТ АГГЛЮТИНАЦИИ

ПРИ ВОСПАЛЕНИИ

3.3.5. ФАКТОРЫ РАЗЖИЖЕНИЯ

КОАГУЛИРОВАВШЕГО ЭЯКУЛЯТА ЧЕЛОВЕКА

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические основы лабораторных признаков патоспермии при воспалении органов репродуктивной системы мужчин"

Актуальность исследования

По данным Российского общества урологов ежегодно в России отмечается прирост лиц с заболеваниями мочеполовых органов 1,2% [110]. Значительную долю составляют воспалительные заболевания органов мужской репродуктивной системы [21, 4 6, 61, 111]. Если принять во внимание, что достаточно большое число больных с инфекцион-но-воспалительными заболеваниями мочеполовых органов не учитывается, то становится очевидным, что реальный масштаб этих инфекций создает угрозу для репродуктивного здоровья нации [2] . Тем более что, по данным НЦ АГиП РАМН [20], воспалительные заболевания мочеполовых органов являются наиболее частой (22-60%) причиной мужского бесплодия. Этот факт подтверждается и многими другими отечественными и зарубежными учеными [21, 67, 70, 72, 77, 135, 190, 223, 238, 241, 261-263, 270, 293].

В тоже время согласно данным исследований проведенных в НИИ урологии [110] и данным, полученным рядом других ученых и исследовательских групп [94, 156, 165, 169, 177, 179], отмечается тенденция к росту распространенности мужского бесплодия в России.

Все это происходит на фоне общемировой тенденции ухудшения качества спермы (в 1,7 раза за период 50-60 лет с 1938 года) [37, 198], которая прослеживается, в Европе, в частности, и в настоящее время [1, 20, 199, 274, 309], в том числе, и в отдельных регионах России [165-168].

Экспериментальные исследования особенностей развития воспалительных процессов в органах мужской репродуктивной системы выполняются преимущественно на собаках, кроликах, крысах, морских свинках, мышах [181] , что весьма затрудняет экстраполяцию полученных результатов на человека.

Разработка новых диагностических тестов на основании исследования спермы человека при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов является актуальным и перспективным направлением исследований, что отмечается многими исследователями [4, 18-20, 59, 102, 107, 143, 201, 202, 256, 305], поскольку сперма человека имеет богатейший биохимический состав, по сложности сопоставимый с такой биологической жидкостью, как кровь [4 951, 108, 131-133, 272].

Даже если брать только белки с молекулярной массой 10-100 кДа, то еще в 1981 году в спермоплазме здоровых фертильных мужчин их было известно более 200 [217]. В тоже время весь этот огромный диагностический потенциал используется слабо из-за отсутствия данных о физиологической роли, которую играют биохимические компоненты эякулята при воспалении органов мужской репродуктивной системы [4, 60, 89, 132, 189, 260] .

Таким образом, существует насущная потребность в экспериментальном и клинико-диагностическом изучение особенностей биохимических процессов, которые протекают в эякуляте при воспалении органов мочеполовой системы мужчин.

Цель исследования

Разработка новых диагностических и прогностических методов на основе изучения биохимических особенностей эякулята человека при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

Основные задачи исследования

1. Исследовать биохимические основы процесса разжижения коагулировавшего эякулята в норме и при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

2. Исследовать биохимические основы процесса агглютинации сперматозоидов при воспалении органов мужской репродуктивной системы.

3. Разработать биохимический способ прогноза развития субфертильности при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основе исследования эякулята.

4. Разработать биохимический способ диагностики хронического простатита.

5. Разработать биохимический способ диагностики микст-инфекций при воспалении предстательной железы.

6. Разработать способ выявления Chlamydia trachomatis при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основе исследования эякулята .

7. Разработать способ экспериментального исследования биологической активности химических веществ на основе исследования эякулята человека.

Научная новизна.

Впервые показана взаимосвязь динамики ряда цитоки-нов (интерлейкина-ip, интерлейкина-б, интерлейкина-8) в спермоплазме больных воспалительными заболеваниями дополнительных желез мужской репродуктивной системы (предстательная железа, семенные пузырьки) с риском развития у них субфертильности.

Впервые экспериментально доказано, что интерлейкин-1Р индуцирует процесс агглютинации сперматозоидов. Впервые экспериментально показано что, агглютинация, индуцированная интерлейкином-ip, носит обратимый характер и установлено, что причиной этого является химическая неустойчивость молекулы интерлейкина-ip к действию протеолитических ферментов спермоплазмы человека.

Впервые экспериментально доказано, что для агглютинации сперматозоидов in vitro необходимо не менее 350000 молекул интерлейкина-ip на один сперматозоид.

Впервые экспериментально доказана возможность межмолекулярного взаимодействия между интерлейкином-ip и скаферрином (негемовым ферропротеином, формирующим гли-кокаликс сперматозоидов) , и показано, что агглютинация под действием интерлейкина-ip протекает опосредованно через взаимодействие со скаферрином.

Впервые экспериментально доказано, что полиамины (спермин и спермидин) спермоплазмы являются протекторами сперматозоидов человека от агглютинации индуцированной интерлейкином-1|3.

Впервые предложена схема одного из вариантов биохимического механизма развития процесса агглютинации сперматозоидов при воспалении.

Впервые проведено экспериментальное изучение процесса разжижения коагулировавшего эякулята человека в норме и при воспалении органов мужской репродуктивной системы и установлены некоторые биохимические причины, приводящие к нарушению нормального протекания этого процесса.

Впервые предложена схема одного из вариантов биохимического механизма нарушения разжижения коагулировавшего эякулята человека при воспалении.

Практическое значение работы

Разработана специализированная компьютерная программа «NTech Balance 3.0» для оценки валидности существующих и оптимизации конструирования новых диагностических способов.

Разработан биохимический способ диагностики хронического простатита (патент на изобретение №22378 99 от 10 октября 2004 года).

Разработан биохимический способ диагностики микст-инфекций при воспалении предстательной железы (патент на изобретение №2196991 от 20 января 2003 года).

Разработан способ выявления Chlamydia trachomatis при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основании исследования эякулята (патент на изобретение №2242000 от 10 декабря 2004 года) .

Разработан биохимический способ прогноза развития субфертильности при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы на основании исследования уровня цитокинов (интерлейкин-1|3, интерлейкин-6, интерлейкин-8) в эякуляте.

Разработан способ экспериментального исследования биологической активности химических веществ на основании исследования эякулята человека (патент на изобретение №2217750 от 27 ноября 2003 года).

Разработан электрофоретический способ количественного определения полиаминов в биологических жидкостях (патент на изобретение №2225981 от 20 марта 2004 года) с применением разработанной нами специализированной компьютерной программы «ПН5108» (Свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2003612170 от 17 сентября 2003 года).

Внедрение результатов работы в практику

Разработанные способы диагностики внедрены в практическую работу: клинико-диагностической лаборатории Центра планирования семьи и репродукции (г. Астрахань), кафедры урологии, кафедры общей и биоорганической химии, кафедры фармацевтической химии ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава», Астраханского областного кожно-венерологического диспансера, диагностической лаборатории ООО МФВФ «Техно-мед» (г. Астрахань), ООО НПЛ «Новые технологии» (г. Астрахань), ООО МФ «Здоровье плюс» (г. Астрахань), ЧМК

Мужская консультация» (г. Астрахань), ООО МЦ «ЭОС» (г Астрахань).

Основные положения, выносимые на. защиту

- Уровень цитокинов (интерлейкин-1р, интерлейкин-6, ин-терлейкин-8) в спермоплазме больных хроническим простатитом отражает вероятность развития у них субфер-тильности и определение уровня этих цитокинов может быть использовано для прогноза развития субфертильно-сти.

- Интерлейкин-1Р обладает способностью индуцировать агглютинацию сперматозоидов опосредованно через межмолекулярное. взаимодействие с белком гликокаликса сперматозоидов - скаферрином. Полиамины спермоплазмы (спермин и спермидин) являются факторами протекции-сперматозоидов от агглютинации, индуцированной интер-лейкином-1Р.

- Нарушение процесса разжижения коагулировавшего эякулята у мужчин с воспалительными заболеваниями органов репродуктивной системы обусловлено изменением соотношения между ферментами и ингибиторами спермоплазмы.

Апробация результатов

Результаты работы представлены и доложены на: Ежегодных итоговых научных конференциях Астраханской государственной медицинской академии в 2000-2005 годах (г. Астрахань);

Пленумах Правления Российского Общества урологов в 2000 и 2004 годах (г. Москва);

Ежегодной Всероссийской конференции «Национальные Дни клинической лабораторной диагностики» в 2000-2004 годах (г. Москва);

Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита» в 2000 году (г. Курск);

Международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины» в 2000 году (г. Астрахань);

Ш-УШ Международных научно-практических конференциях «Эколого-биологические проблемы Волжского региона и Северного Прикаспия» в 2000-2005 годах (г. Астрахань ) ;

11-У11 Международных научно-практических конференциях «Здоровье и Образование XXI Век» в 2001-2006 годах (г. Москва);

Всероссийской научно-практической конференции «Новые технологии в медицине» в 2001 году (г. Саратов);

II Международной научной конференции «Белки - маркеры патологических состояний» в 2001 году (г. Астрахань ) ;,

Международной научной конференции «Естествознание на рубеже столетий» в 2001 году (г. Дагомыс);

Всероссийской научно-практической конференции «Медицинские, экологические и социальные аспекты формирования здоровья населения» в 2001 году (г. Челябинск);

X Съезде урологов России в 2002 году (г. Саратов);

Международном форуме «Аналитика и аналитики» в 2003 году (г. Воронеж);

International conference «Biocatalysis: fundamentals & applications - 2000» in 2000 year (Russia, Moscow) ;

VIII International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» in 2004 year (India, Goa);

IX International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» in 2005 year (China, Dalуan);

X International Scientific Conference «Family Health In The XXI Century» in 2006 year (Thailand, Bangkok);

Annual International Scientific Conference IW SDC'06 «New Technology In Integrative Medicine And Biology» in 2006-2007 years (Thailand, Bangkok-Pattaya).

Автор приносит благодарность за помощь и поддержку зав. клинико-диагностической лаборатории Астраханского Центра планирования семьи и репродукции Ложкиной Л. В., зав. кафедрой урологии и нефрологии профессору д.м.н. Мирошникову В. М., всем сотрудникам кафедры фармацевтической химии и кафедры общей и биоорганической химии Астраханской государственной медицинской академии, зав. лабораторией иммунофармакологии ГНЦ НИИ особо чистых биопрепаратов профессору д.м.н. Симбирцеву А. С. (г. Санкт-Петербург) , главному научному сотруднику НИИ урологии профессору д.м.н. Евдокимову В. В. (г. Москва).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Луцкий, Дмитрий Леонидович

- 212 -ВЫВОДЫ

1. В основе пролонгированного времени разжижения коагулировавшего эякулята при воспалительных заболеваниях предстательной железы лежит нарушение соотношения протеолитических ферментов (простатическая кислая фосфатаза и простатоспедифический антиген) и ингибитора протеиназ (спермоспецифический ингибитор трипсина) .

2. Интерлейкин-1(3 может индуцировать агглютинацию сперматозоидов как in vitro, так и in vivo (при воспалительных заболеваниях репродуктивных органов). Для агглютинации сперматозоидов in vitro необходимо не менее 350000 молекул интерлейкина-ip на один сперматозоид .

3. Агглютинация сперматозоидов под действием интерлей-кина-1(3 опосредуется через межмолекулярное взаимодействие с белком гликокаликса сперматозоидов - ска-феррином.

4. Полиамины спермоплазмы (спермин и спермидин) являются протекторами сперматозоидов от агглютинации индуцированной интерлейкином-ip.

5. Воспалительные заболевания органов репродуктивной системы фертильных мужчин, протекающие с повышенным уровнем в спермоплазме интерлейкина-1(3, интерлейки-на-б и интерлейкина-8, как правило, осложняются развитием субфертильности.

- 213

6. Спермоспецифический ингибитор трипсина и церулоплаз-мин в секрете предстательной железы являются маркерами хронического простатита, причем уровень спер-моспецифического ингибитора трипсина возрастает, а церулоплазмина, напротив, снижается.

7. Уровень лактоферрина в секрете предстательной железы значительно более высок при воспалении, вызванном микст-инфекцией, по сравнению с моноинфекцией.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение в секрете предстательной железы концентрации спермоспецифического ингибитора трипсина и церулоплазмина позволяет при их соотношении 12 и более диагностировать хронический простатит (патент на изобретение №2237899 от 10 октября 2004 года).

2. Определение при простатитах в секрете предстательной железы уровня лактоферрина позволяет по его концентрации превышающей 149,0 мкг/мл диагностировать наличие микст-инфекции (патент на изобретение №2196991 от 20 января 2003 года).

3. Предварительное центрифугирование спермы в течение 15 минут при скорости 12000 оборотов в минуту, позволяет значительно повысить чувствительность, эффективность и прогностическое значение отрицательного результата при иммунофлуоресцент-ном выявлении Chlamydia trachomatis (патент на изобретение №2242000 от 10 декабря 2004 года).

4. Определение в спермоплазме интерлейкина-lß, ин-терлейкина-6, интерлейкина-8 при воспалительных заболеваниях органов мужской репродуктивной системы позволяет по сумме десятичных логарифмов их концентраций (пг/мл) равной или превышающей 7,1 прогнозировать развитие патоспермии и субфер-тильности.

- 215

5. Применение специализированной компьютерной программы «NTech Balance 3.0» позволяет быстро и объективно проводить оценку всех основных характеристик методов диагностики, оптимизировать поиск пороговых значений, визуализировать полученные результаты оценки и представлять данные, как в графической форме, так и в форме таблиц.

6. Использование в качестве тест-объекта сперматозоидов человека позволяет быстро и эффективно проводить выявление биологической активности химических веществ (патент на изобретение №2217750 от 27 ноября 2003 года).

7. Электрофорез в агаровом геле позволяет после, конвертации графического материала (окрашенные электрофореграммы) в цифровой формат проводить количественное определение полиаминов в биологических жидкостях с применением специализированной компьютерной программы «ПН5108» (патент на изобретение №2225981 от 20 марта 2004 года; свидетельство об официальной регистрации программы для ЭВМ №2003612170 от 17 сентября 2003 года).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Луцкий, Дмитрий Леонидович, Санкт-Петербург

1. Айламазян Э. К., Устинкина Т. И., Баласанян И. Г. Эпидемиология бесплодия в семье // Акуш. и гинекол. 1990. - № 9. - С. 3-4.

2. Алексанов А. Т., Макаров Ф. Ю. Нарушение репродуктивного здоровья и зректильная дисфункция, обусловленные инфекциями, передающимися половым путем // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 252-253.

3. Аль-Шукри С. X., Бобков Ю. А., Воробьева О. А. и др. К оценке изменений структуры сперматозоидов у больных хроническим простатитом // Пробл. репродукции. 2001. - № 1. - С. 52-54.

4. Аль-Шукри С. X., Петрищев Н. Н., Горбачев А. Г. и др. Клиническое значение определения И-белков в эякуляте у больных хроническим простатитом // Урология. 2001. - № 2. - С. 40-42.

5. Аль-Шукри С. X., Бобков Ю. А., Галкина О. Б. и др. Информативность иммунологического анализа крови и эякулята в диагностике хронического простатита // Урология. 2002. - № 2. - С. 24-27.

6. Аль-Шукри С. X., Бобков Ю. А., Горбачев А. Г. Защитные свойства слизи в эякуляте при хроническом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. -М., 2002. С. 232-233.

7. Анализы. Полный справочник / Под ред. Ю. Ю. Елисеева. М.: Эксмо, 2006. - 768 с.

8. Аполихин О. И., Сивков А. В., Ощепков В. Н. и др. Проблема хронического неинфекционного простатита с позиций доказательной медицины // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 5-26.

9. Арнольди Э. К. Хронический простатит: Проблемы, опыт, перспективы. Ростов н/Д.: Феникс, 1999. -320 с.

10. Атлас морфологических форм сперматозоидов / Н. П. Гончаров, А. Д. Добрачева, М. В. Корякин и др. -М. : Медицинское информационное агентство, 2006. -96 с.

11. Балаховский И. С. Лабораторные исследования, основанные на связывании с лигандами // Клинич. лаб. диагност. 2000. - № 1. - С. 25-32.

12. Баткаев Э. А., Липова Е. В. Урогенитальный хламиди-оз. М.: РМАПО, 2004. - 60 с.

13. Башмакова М. А., Савичева А. М. Лабораторная диагностика генитальных инфекций // Пробл. репродукции. 2000. - № 1. - С. 20-24.

14. Белозеров М. Н. Значение урогенитальной инфекции в этиологии хронического простатита // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 241-242.

15. Бесплодие в супружестве / Под ред. И. Ф. Юнды. -Киев, 1990. 275 с.

16. Бесплодный брак / Под ред. Р. Дж. Пепперелла, Б. Хадсона, К. Вуда: Пер. с англ. М., 1986. - 320 с.

17. Бесплодный брак. Современные подходы диагностике и лечению / Под ред. В. И. Кулакова. М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 616 с.

18. Билич Г. Л., Божедомов В. А. Репродуктивная функция и сексуальность человека. СПб.: Деан, 1999. - 369 с.

19. Бобков Ю. А., Горбачев А. Г., Белоусов В. Я. Сравнительная оценка основных лабораторных показателей диагностики и активности хронического простатита // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. -С. 243-244.

20. Божедомов В. А. Мужское иммунологическое бесплодие (этиология, патогенез, диагностика, лечение): Авто-реф. . д-ра мед. наук. М., 2001.

21. Бойко О. В. Биохимические критерии бактерионосительства: Автореф. . д-ра мед. наук. М., 2006.

22. Бойцова А. Г., Порин А. А., Ластовка О. Н. и др. Оценка эффективности серодиагностики хламидийной инфекции с помощью ИФА // Вест, дерматол. и вене-рол. 2002. - № 1. - С. 43-45.

23. Болотовская М. Н., Курило Л. Ф., Маршицкая М. И. и др. Содержание а2-микроглобулина фертильности в семенной плазме мужчин с нарушением репродуктивной функции // Пробл. репродукции. 2000. - № 4. - С. 54-57.

24. Брагина Е. Е., Дмитриев Г. А., Кисина В. И. Структурно-функциональные особенности хламидий ±п vivo // Вестн. дерматол. 1995. - № б. - С. 18-21.

25. Брагина Е. Е., Абдумаликов Р. А., Курило JI. Ф., Ши-лейко JI. В. Электронно-микроскопическое изучение сперматозоидов человека и его роль в диагностике мужского бесплодия // Пробл. репродукции. 2000. -№ б. - С. 62-71.

26. Бренер JI. А., Мищенко A. JI., Сегал А. С., Островская А. И. Диагностика гемоспермии // Лаб. дело. -1988. № 2. - С. 47-51.

27. Брохман С. Е., Серегин С. П. Морфологические изменения ядер эпителиальных клеток при хламидийных уретритах у мужчин и методы оптимизации светоопти-ческого исследования мазков-отпечатков // Клинич. лаб. диагност. 1998. - № 11. - С. 10-11.

28. Бурназян Р. А., Оганесян М. Н., Бурштейн Г. Е. Биохимические показатели спермы при хронических воспалительных заболеваниях придаточных половых желез // Урол. и нефрол. 1992. - № 4-6. - С. 27-30.

29. Бухарин О. В., Кузьмин М. Д. , Иванов Ю. Б. Роль микробного фактора в патогенезе мужского бесплодия // Жур. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -2000. № 2. - С. 106-111.

30. Бухарин О. В., Иванов Ю. Б., Кузьмин М. Д. Характеристика изменений микробиоценоза у больных хроническим неспецифическим уретритом // Жур. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. - № 4. - С. 8 6-89.- 221

31. Быков В. Л. Простасомы и их значение в репродукции человека // Пробл. репродукции. 2002. - № 2. - С. 48-58.

32. Выборнов С. В. Биохимические показатели репродуктивного здоровья мужчин, работающих на Астраханском газоперерабатывающем заводе: Автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 200 6.

33. Галькович К. Р., Сосин Д. Ю. Иммунохимическое определение концентрации органоспецифических белков эякулята в дифференциальной диагностике хронических воспалительных заболеваний мужской репродуктивной системы // Урол. и нефрол. 1997. - № 5. - С. 4042.

34. Галькович К. Р., Сосин Д. Ю. Иммунохимическое определение иммуноглобулинов в эякуляте для диагностики хронических воспалительных заболеваний мужской репродуктивной системы // Клинич. лаб. диагност. -2000. № 1. - С. 33-35.

35. Гасанова Т. А. Хламидийная инфекция и репродуктивная функция // Вест, дерматол. и венерол. 2001. -№ 1. - С. 11-16.

36. Гасанова Т. А. Лабораторная диагностика инфекций, передающихся половым путем, при хронических воспалительных заболеваниях репродуктивной системы // Жур. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. -№ 3. - С. 60-65.

37. Герасимов А. М. Полумисков Д. М. Зависимость подвижности сперматозоидов от биохимических показателей эякулята // Пробл. репродукции. 2003. - № 4. - С. 79-81.

38. Говалло В. И. Иммунология репродукции. М. : Медицина, 1987. - 304 с.

39. Гомелла JI. Г., Фрайд Д. Д. Простатит и другие заболевания предстательной железы. М.: Медицина, 1995. - 180 с.

40. Горленко В. Н., Кудряшов С. И., Лежнин С. И. и др. Хронический простатит вопросы диагностики и лечения // Мат. X Российского съезда урологов. - М., 2002. - С. 260-261.

41. Горпинченко И. И. Хронический простатит хламидийной этиологии // Мат. X Российского съезда урологов. -М., 2002. С. 261-262.

42. Горюнов В. Г., Кузьмин Г. Е., Скитомиди В. Л. Воспаление придаточных половых желез и мужское бесплодие / Диагностика и лечение бесплодного брака. -М., 1988. С. 214-218.

43. Горюнов В. Г., Жиборев Б. Н., Евдокимов В. В. Причины и признаки мужского бесплодия. Рязань, 1993. - 84 с.

44. Горюнов В. Г., Кузьмин Г. Е., Евдокимов В. В. и др. Контроль за функциональной активностью предстательной железы // Урол. и нефр. 1994. - № 2. - С. 3132.

45. Гуськов А. Р., Горлина Н. К., Симонова А. В. Хронический бактериальный простатит как проявление вторичного иммунодефицитного состояния // Жур. микро-биол., эпидемиол. и иммунобиол. 1998. - № 3. - С. 47-51.- 223

46. Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 33-39.

47. Деревянко И. И., Нефедова Л. А., Камалов А. А. Этиологическая структура простатитов // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 270-271.

48. Дерябин Д. Г., Борисов С. Д., Михайленко С. В. Смешанная урогенитальная инфекция у мужчин // Жур. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2000. - № 2. - С. 103-106.

49. Дмитриев Г. А. Инфекционный процесс урогенитального тракта и его морфо-функциональные проявления: Авто-реф. дис. . д-ра биол. наук. М., 1989.

50. Дмитриев Г. А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. М.: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. - 336 с.

51. Евдокимов В. В., Раков С. С., Липатова Н. А. и др. Комплексное лабораторное исследование эякулятов при заболеваниях мужской репродуктивной системы // Клинич. лаб. диагностика. 1995. - № 6. - С. 114116.

52. Евдокимов В. В. Системное исследование эякулята при заболеваниях мужских репродуктивных органов: Авто-реф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1999.- 224

53. Емельянова И. В. ИППП и предстательная железа // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 50-51.

54. Еремин В. Ф., Барабанов JI. Г., Гасич Е. JT. и др. Серологическая и молекулярно-биологическая диагностика инфекций, передающихся половым путем // Вест, дерматол. и венерол. 2002. - № 2. - С. 22-30.

55. Есенеев С. М. Метод лабораторной диагностики хронического простатита // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 22 6227 .

56. Есипов А. С., Михайличенко В. В. Стадийность серологической реакции у пациентов с генитальной хлами-дийной инфекцией // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 175176.

57. Жукова Г. И. Сравнительная характеристика методов обнаружения урогенитального хламидиоза // Мат. 7-го Российского съезда дерматологов и венерологов. -Казань, 1996. Ч. 3. - С. 166-167.

58. Зиганшин О. Р. Состояние местного иммунитета репродуктивного тракта мужчин при воспалительных заболеваниях половой системы // Жур. микробиол., эпидеми-ол. и иммунобиол. 2001. - № 1. - С. 36-40.

59. Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля: Пер. с нем. М., 1987. - 450 с.

60. Имшенецкая J1. П. Роль гормональных изменений в патогенезе половых расстройств и бесплодия при хроническом неспецифическом простатите: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. Киев, 198 6.

61. Исраилов С. Р. Влияние некоторых лекарственных препаратов in vitro на морфофункциональное состояние сперматозоидов // Врачебное дело. 1989. - № 8. -С. 52-54.

62. Каган С. А. Стерильность у мужчин. J1., 1974. -185 с.

63. Калашникова Е. А. Антигены сперматозоидов и анти-спермальные антитела ассоциированные с бесплодием // Пробл. репродукции. 2004. - № 4. - С. 55-60.

64. Калинина С. Н., Тиктинский О. J1., Михайличенко В. В. Роль заболеваний, передающихся половым путем, в бесплодном браке // Урол. и нефрол. 1997. - № 1. - С. 37-39.

65. Калинина С. Н., Тиктинский О. JI., Савичева А. М., Кунин В. Б. Секреторное мужское бесплодие, обусловленное хламидийным простатитом // Пробл. репродукции. 2000. - № 1. - С. 39-40.- 226

66. Калинина С. Н., Тиктинский О. Л., Александров В. П. Лечение мужского бесплодия, вызванного урогениталь-ной скрытой инфекцией // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 22-23.

67. Камалов А. А. Современные взгляды на проблему хронического простатита // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». -Курск, 2000. С. 66-71.

68. Камалов А. А., Ковалев В. А., Ефремов Е. А. Хронический простатит и половая функция // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 71-74.

69. Кашкин К. П. Цитокины иммунной системы: основные свойства и иммунобиологическая активность // Кли-нич. лаб. диагност. 1998. - № 11. - С. 21-32.

70. Квасов А. В., Жданов А. В., Письменская И. В. и др. Применение меченого биотином ДНК-зонда для выявления возбудителей хронических урогенитальных инфекций // Клинич. лаб. диагност. 1998. - № 11. - С. 12-15.

71. Кетлинский С. А., Симбирцев А. С., Воробьев А. А. Эндогенные иммуномодуляторы. Санкт-Петербург, 1992. - 256 с.

72. Кетлинский С. А., Калинина Н. М. Цитокины мононук-леарных фагоцитов в регуляции воспаления и иммунитета // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 30-44.- 227

73. Ким В. К., Коган М. И., Ефанова Е. А. Интерлейкины семенной плазмы перед стартом программы ЭКО и переноса эмбрионов // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 24-25.

74. Клочков В. В., Шмырин А. Г., Журавлев Д. В. и др. Мужское бесплодие при хроническом простатите // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 54-55.

75. Коган М. И., Карпов С. В., Ширанов А. Б. Есть ли роль условно-патогенной флоры в развитии хронического простатита // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 60-61.

76. Коган М. И., Шангичев А. В., Микашинович 3. И. и др. Состояние общей протеолитической активности эякулята при хроническом простатите (III категория) // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 61-62.

77. Коган М. И., Шангичев А. В., Микашинович 3. И. и др. Состояние активности супероксиддисмутазы и ка-талазы эякулята при хроническом простатите (III категория) // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 64-65.- 228

78. Козляткин А. Ю. Метаболические предпосылки мужской инфертильности: Автореф. . канд. мед. наук. -Уфа, 2000.

79. Колкова Н. И., Мартынова В. Р. К вопросам диагностики хламидийных инфекций // Клинич. лаб. диагност. 1998. - № 2. - С. 19-22.

80. Колюбина Ю. В., Кубанова А. А., Капитанов А. Б., Гнедой С. Н. Диагностика урогенитальной хламидийной инфекции методом полимеразной цепной реакции // Пробл. репродукции. 1998. - № 1. - С. 44-45.

81. Конопля А. И., Серегин С. П., Котов А. В. и др. Иммунные расстройства у больных с сочетанием доброкачественной гиперплазии предстательной железы и хронического простатита // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 128-129.

82. Корякин М. В., Акопян А. С. Структурный анализ причин мужского бесплодия // Молекулярные исследования мужской субфертильности / Под ред. проф. А. А. Николаева. Астрахань: АГМА, 2000. - 170 с.

83. Кубанова А. А., Абудуев Н. К., Курило Л. Ф. и др. Влияние урогенитального хламидиоза и уреа-микоплазмоза на состояние сперматогенеза у мужчин // Вест, дерматол. и венерол. 2000. - № б. - С. 7-12.- 229

84. Кудрявцев Ю. В., Чумаков А. М., Логвинов Л. А. Клеточные кооперации в предстательной железе при хроническом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 288-289.

85. Кузьменко В. В., Кузьменко А. В. Диагностика и лечение хронического простатита // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита».- Курск, 2000. С. 81-82.

86. Кузьмин М. Д., Иванов Ю. Б., Михайлова Е. А., Бухарин О. В. Роль персистирующей микрофлоры в формировании патоспермии // Урол. и нефрол. 1998. - № 2.- С. 46-48.

87. Кузьмин М. Д. Роль условно-патогенной бактериальной микрофлоры в патогенезе мужского бесплодия: Авто-реф. . д-ра мед. наук. Оренбург, 2002.

88. Кузьмин М. Д., Окшин А. М. Характеристика микроэкологических изменений репродуктивного тракта мужчин при хроническом простатите, осложненном бесплодием // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 242-243.

89. Кузьмин М. Д., Окшин А. М. Оценка эффективности трансуретральной гипертермии в комплексном лечении простатита, осложненного бесплодием // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 251-252.

90. Кулаков В. И., Назаренко Т. А., Дуринян Э. Р., Пер-минова С. Г. Современные подходы к диагностике и лечению бесплодного брака // Мат. 3-й Всероссийской- 230 конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 26-27.

91. ЮЗ.Кунин М. А. Бесплодие в браке (вопросы сперматологии). М.: Медицина, 1973. - 232 с.

92. Леонтьева О. А., Воробьева О. А. Сравнительный анализ морфологии сперматозоидов человека: нативный эякулят прогрессивно подвижная фракция // Пробл. репродукции. - 1999. - № 3. - С. 29-36.

93. Линева О. И., Карнаух В. И. Скрининг-метод оценки влияния ксенобиотиков на репродуктивную функцию // Гигиена и санитария. 1991. - № 3. - С. 79-81.

94. Липатова Н. А., Раков С. С., Морозова В. Т. Белковые маркеры спермоплазмы в лабораторной диагностике бесплодия при воспалительных и невоспалительных заболеваниях мужской репродуктивной системы // Кли-нич. лаб. диагност. 1997. - № 5. - С. 40-41.

95. Липатова Н. А., Раков С. С., Морозова В. Т., Евдокимов В. В. Белковые маркеры спермоплазмы в лабораторной диагностике бесплодия при заболеваниях мужской репродуктивной системы // Клинич. лаб. диагностика. 1998. - № 2. - С. 15-16.

96. Липатова Н. А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клинич. лаб. диагностика. 1998. - № 5. - С. 11-15.

97. Липатова Н. А., Раков С. С., Морозова В. Т. Исследование белков спермоплазмы у больных с воспалительными заболеваниями мужской репродуктивной системы // Клинич. лаб. диагност. 1998. - № 9. - С. 40-41.- 231

98. Лопаткин Н. А., Мартов А. Г. Состояние и перспективы развития урологической помощи в Российской Федерации // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 5-26.

99. Ш.Лоран О. Б., Сегал А. С. Хронический простатит // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. -С. 209-222.

100. ИЗ.Лямин Б. А. Диагностика и лечение хронического простатита // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 85-90.

101. Мавров И. И. Половые болезни. М.: АСТ-ПРЕСС КНИГА, 2002. - 752 с.

102. Мазо Е. Б., Карабак В. И., Попов С. В. Результаты микробиологических исследований у больных хроническим простатитом // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 231232.

103. Международная система единиц при оценке результатов лабораторных анализов: Практ. рук. / Под ред. И. Б. Манухина, А. М. Попковой, Н. Е. Гальцовой. М. : ВЕДИ, 2004. - 80 с.

104. Микроскопическая техника / Под ред. Д. С. Саркисова, Ю. JI. Перова. М. : Медицина, 1996. -680 с.

105. Миллер Г. Г. Микстинфектология. Основные понятия, направления исследований, клиническое и общебиологическое значение // Клинич. лаб. диагност. 2002. - № 6. - С. 25-32.

106. Мирошников В. М., Полунин А. И. Субфертильность при хроническом неспецифическом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 301302.

107. Михайличенко В. В., Есипов А. С. Клиническая значимость повышенной вязкости эякулята человека // Пробл. репродукции. 2000. - № 4. - С. 48-53.

108. Михайличенко В. В., Есипов А. С. Постэякуляторные изменения вязкости спермы человека // Пробл. репродукции. 2001. - № 3. - С. 45-51.

109. Михайличенко В. В., Есипов А. С. Параметры спермо-граммы при микоплазменной (М. hominis, U. urealyti-сит) и хламидийной генитальных инфекциях // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». -М., 2006. С. 31-33.- 233

110. Молочков В. А., Ильин И. И. Хронический уретроген-ный простатит. М.: Медицина, 1998. - 304 с.

111. Момыналиев К. Т., Говорун В. М. Перспективы применения методов ДНК-диагностики в лабораторной службе // Клинич. лаб. диагност. 2000. - № 4. - С. 2531.

112. Моррелл Дж. М., Холмз П. В. Приготовление человеческих сперматозоидов в программах ВРТ // Пробл. репродукции. 2002. - № 1. - С. 24-29.

113. Мунгалов А. Н. Подвижность сперматозоидов при хроническом простатите // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». -Курск, 2000. С. 101-102.

114. Мягков Ю. А., Аплетаев В. В. Современные подходы в диагностике и лечении хронического простатита // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 215-217.

115. Назаров Т. Н., Кореньков Д. Г., Корнюшко В. Г., По-знюр О. А. Особенности изменений эякулята у мужчин с урогенитальным хламидиозом // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. -С. 25-26.

116. Неймарк А. И., Фидиркин А. В., Алиев Р. Т. Изменение уровня энзимов спермы у мужчин с бесплодием // Урол. и нефрол. 1998. - № 2. - С. 44-45.

117. Николаев А. А., Карасев В. С. Выделение и свойства специфического ингибитора трипсина из семенной плазмы человека // Биохимия. 1990. - Т. 55 , Вып. 6. - С. 1065-1071.- 234

118. Николаев А. А. Биохимическое и иммунохимическое изучение белков семенной плазмы человека: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1994.

119. Николов Н., Папазов Бр. Бесплодие в семье. София, 1971. - 336 с.

120. Пальцев М. А., Иванов А. А. Межклеточные взаимодействия. М.: Медицина, 1995. - 224 с.

121. Пенжоян Г. А., Маркова J1. М., Гришанов Н. В. Значение этиологических факторов нарушения репродуктивной системы мужчин в лечении мужского бесплодия // Пробл. репродукции. 2000. - № 6. - С. 60-61.

122. Пенжоян Г. А., Маркова J1. М., Гришанов Н. В., Есаян А. А. Диагностика и лечение урогенитальной инфекции в восстановлении мужской фертильности // Пробл. репродукции. 2001. - № 5. - С. 30-31.

123. Петрищев В. С., Щелочков А. М. Оценка морфологии сперматозоидов согласно строгим критериям // Пробл. репродукции. 2002. - № 3. - С. 87-91.

124. Петров С. Б., Бабкин П. А., Харитонов Н. Н. Микробиологическая диагностика бактериальных простатитов // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 119-120.

125. Пилинг Р. В., Брунэм Р. С. Методы молекулярной биологии для лабораторной идентификации Chlamydia trachomatis // ЗППП. 1996. - № 1. - С. 5-10.

126. Полунин А. И. Клинико-диагностическое значение исследований секрета предстательной железы при хронических неспецифических простатитах и уретритах. -Автореф. . канд. мед. наук. М., 2001.

127. Полунин А. И., Мирошников В. М. Значение биохимического исследования секрета предстательной железы при хроническом неспецифическом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2 002. - С. 312-313.

128. Поляк М. С. Теория и практика определения чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам диск-диффузионным методом // Клинич. лаб. диагност. 2003. - № 1. - С. 25-32.

129. Раковская И. В., Горина JI. Г. Лабораторная диагностика микоплазмозов человека // Клинич. лаб. диагност. 2000. - № 8. - С. 50-53.14 9. Руководство по лабораторным методам диагностики /

130. Под ред. А. А. Кишкуна. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2 007. -800 с.

131. Руководство ВОЗ по стандартизированному обследованию и диагностике бесплодия супружеских пар. М. : Медицина, 1997. - 91 с.

132. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. М.: МедПресс, 2001. - 144 с.

133. Савицкая К. И., Трапезникова М. Ф., Нестерова М. В. и др. Хронический бактериальный простатит: мониторинг возбудителей и их резистентность к антибиотикам // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 317-318.

134. Савичева А. М., Соколовский Е. В., Домейка М. Краткое руководство по микроскопической диагностике инфекций, передаваемых половым путем. СПб.: Издательство Фолиант, 2004. - 128 с.

135. Светлова JI. Н., Васильев Ю. В. Микробиоценоз уроге-нитального тракта у инфертильных мужчин с патозоос-пермией // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 46-47.

136. Сексология и андрология / Под ред. А. Ф. Возианова, И. И. Горпинченко. Киев: Абрис, 1997. - 880 с.15 6. Селезнева И. Ю. Бесплодный брак: Эпидемиологическое- 237

137. Семенов А. В., Сотникова Н. Ю., Мартенова А. А., Стрельников А. И. Иммунологические аспекты астено-зооспермии при хроническом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 320321.

138. Серегин С. П., Тарасов Н. И. Патогенетически обоснованная терапия хронического простатита // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 129-133.

139. Сидорович С. Ю. Культура клеток как инструмент для определения хламидийной инфекции // Вестн. дерма-тол. и венерол. 2001. - № б. - С. 20-25.

140. Скрипкин Ю. К., Кубанова А. А., Дмитриев Г. А. и др. Современные подходы к диагностике хламидиоза // Вест, дерматол. 1996. - № 4. - С. 22-24.

141. Сяткин С. П., Березов Т. Т. Микрометод флюорометри-ческого определения содержания полиаминов и путрес-цина в тканях животных тонкослойной хроматографией на пластинках Силуфол иУ-254. // Вопр. мед. химии. 1981. - № б. - С. 848-850.

142. Тарасов Н. И., Серегин С. П., Волчегорский И. А. О роли определения церулоплазмина в лабораторной ди- 238 агностике хронического простатита // Клинич. лаб. диагност. 1998. - № 1. - С. 19-21.

143. Татаринов Ю. С., Посисеева JI. В., Петрунин Д. Д. Специфический альфа2-микроглобулин (гликоделин) репродуктивной системы человека. Иваново: МИК, 1998. - 128 с.

144. Тер-Аванесов Г. В. Андрологические аспекты бесплодного брака: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 2002 .

145. Тер-Аванесов Г. В. Проблемы репродуктивного здоровья мужчин: Практическое руководство. М.: НЦ АГиП РАМН, 2004. - 111 с.

146. Тер-Аванесов Г. В., Анкирская А. С. Урогенитальные инфекции и фертильность мужчин // Мат. 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2005. - С. 53-54.

147. Тер-Аванесов Г. В., Кулаков В. И., Назаренко Т. А. Экологические факторы и фертильность // Мат. 3-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье». М., 2006. - С. 41-42.

148. Ткачук В. Н. Хронический простатит. М.: Медицина, 2006. - 112 с.

149. Хальзов М. Р., Хальзов Р. Б. Состояние местного иммунитета у больных хроническим простатитом // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». Курск, 2000. - С. 154-157.

150. Хейфец В. X., Забежинский М. А., Хролович А. Б., Хавинсон В. X. Экспериментальные модели хронического простатита // Урология. 1999. - № 5. - С. 4 852 .

151. Цветненко Е. 3. Полиамины спермин и спермидин в мозге и печени крыс при действии гипероксии // Бюлл. эксп. биол. и мед. 197 8. - № 1. - С. 28-30.

152. Цуркану Р. В., Пунга В. В., Гудумак В. С. и др. Возрастные изменения биохимических параметров секрета предстательной железы // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 333-334.

153. Чудинов А. А., Чудинова JI. А., Коробов В. П. Метод определения низкомолекулярных олигоаминов в различном биологическом материале // Вопр. мед. химии. -1984. № 4. - С. 126-129.

154. Шустер П. И. Половые расстройства и бесплодие при хроническом простатите // Мат. Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспектыдиагностики и лечения хронического простатита». -Курск, 2000. С. 164-165.

155. Шустер П. И. Половые расстройства и бесплодие при хроническом простатите // Мат. X Российского съезда урологов. М., 2002. - С. 341-342.

156. Юнда И. Ф. Простатиты. Киев, 1987. - 280 с.

157. Юнда И. Ф. Болезни мужских половых органов. Киев, 1989. - 365 с.

158. Яговдик Н. 3., Хилькевич Н. Д. Ассоциированная уреаплазменная и трихомонадная инфекция у мужчин, больных гонореей // Вестн. дерматол. 1992. - № 11. - С. 47-51.

159. Agarwal A., Said Т. М. Role of sperm chromatin abnormalities and DNA damage in male infertility // Hum. Reprod. 2003. - Update 9. - Vol. 331-345.

160. Agarwal A., Saleh R. A. Role of oxidants in male infertility: rationale, significance, and treatment // Urol. Clin. North. Am. 2004. - Vol. 29. - P. 817-827.

161. Aitken R. J., West K., Buckingham D. Leukocytic infiltration into the human ejaculate and its association with semen quality, oxidative stress, and sperm function // J. Androl. 1994. - Vol. 15. -P. 343-352.

162. Arata de Bellabarba G., Tortolero I., Villarroel V. et al. Nonsperm cells in human semen and their relationship with semen parameters // Arch. Androl. -2000. Vol. 45. - P. 131-136.

163. Asotra S., Mladenov P. V., Burke R. D., Improved method for benzoyl chloride derivatization of poly- 242 amines for high-performance liquid chromatography // J. Chromatog. 1987. - Vol. 408. - P. 227-233.

164. Autiero M., Sansone G., Abrescia P. Relative ratios of lactoferrin, albumin, and acid phosphatase seminal levels as sperm quality markers in fertile and infertile men // J. Androl. 1991. - Vol. 12. - P. 191-200.

165. Bancroft J. Male infertility // Brit. Med. J. -1985. Vol. 290. - P. 1417-1422.

166. Bang A. K., Carlsen E., Holm M. et al. A stady of finger lengths, semen quality and sex hormones in 3 60 young men the Danish population // Hum. Reprod. 2005. - Vol. 20, № 11. - P. 3109-3113.

167. Belles-Isles M., Chapeau C., White D., Gagnon C. Isolation and characterization of dynein ATPase from bull spermatozoa // Biochem. J. 1986. - Vol. 240. - P. 863.

168. Bjorndahl L., Kirkman-Brown J., Hart G. et al. Development of a novel home sperm test // Hum. Re-prod. 2006. - Vol. 21, № 1. - P. 145-149.

169. Boe-Hansen G. B., Fedder J., Ersb0ll A. K., Christensen P. The sperm chromatin structure assay as a diagnostic tool in the human fertility clinic // Hum. Reprod. 2006. - Vol. 21, № 6. - P. 15761582 .

170. Brillard-Bourdet M., Rehault S., Juliano L. et al. Amidolytic activity of prostatic acid phosphatase on human semenogelins and semenogelin-derived synthetic substrates // Eur. J. Biochem. 2002. -Vol. 269. - P. 390-395.- 243

171. Cavallo M. G., Rozzilli P., Thorpe R. Cytokines and autoimmunity // Clin. Exp. Immunol. 1994. - Vol. 96, № 1. - P. 1-7.

172. Christensson A., Laurell C. B., Lilja H. Enzymatic activity of prostate-specific antigen and its reactions with extracellular serine proteinase inhibitors // Eur. J. Biochem. 1990. - Vol. 194. - P. 755-763.

173. Cohen P., Graves H. C., Peehl D. M. et al. Prostate-specific antigen (PSA) is an insulin-like growth factor binding protein-3 protease found in seminal plasma // J. Clin. Endocrinol. Metab. -1992. Vol. 75. - P. 1046-1053.

174. Coombs G. S., Bergstrom R. C., Pellequer J. L. et al. Substrate specificity of prostate-specific antigen (PSA) // Chem. Biol. 1998. - Vol. 5. - P. 475-488.

175. Corradi G., Bucsek M., Panovics J. et al. Detection of Chlamydia trachomatis in the prostate by in-situ hybridization and by transmission electron microscopy // Int. J. Androl. 1996. - Vol. 19. - P. 109-112.

176. Danison F. C., Grant V. E., Calder A. A., Kelly R. W. Seminal plasma components stimulate interleukin-8 and interleukin-10 release // Mol. Hum. Reprod. -2005. Vol. 5, № 3. - P. 220-226.

177. D'Cruz 0. J., Pereira H. A., Haas G. G. Sperm immobilizing activity of a synthetic bioactive peptide 20-44 of 37-kDa cationic antimicrobial protein- 244

178. CAP37) of human neutrophils // J. Androl. 1995.- Vol. 16, № 5. P. 432-440.

179. Denmeade S. R., Lou W., Lilja H. et al. Specific and efficient peptide substrates for assaying the proteolytic activity of prostate-specific antigen // Cancer. Res. 1997. - Vol. 57. - P. 4924-4930.

180. Denmeade S. R., Khan S. R., Lilja H. et al. Activation of latent protease function of pro-hK2, but not pro-PSA, involves autoprocessing // Prostate. -2001. Vol. 48. - P. 122-126.

181. Deperthes D., Frenette G., Brilliard-Bourdet M. et al. Potential involvement of kallikrein hK2 in the hydrolysis of the human seminal vesicle proteins after ejaculation // J. Androl. 1996. - Vol. 17.- P. 659-665.

182. Depuydt C. E., De-Potter C. R., Zalata A. et al. Levels of hepatocyte growth factor/scatter factor (HGF/SF) in seminal plasma of patients with an-drological diseases // J. Androl. 1998. - Vol. 19. - P. 175-182.

183. Diekman A. B., Westbrook-Case V. A., Naaby-Hansen S. et al. Biochemical characterization of sperm agglutination antigen-1, a human sperm surface anti- 245 gen implicated in gamete interactions // Biol. Re-prod. 1997. - Vol. 57, № 5. - P. 1136-1144.

184. Edwards J. J., Tollaksen S. L., Anderson N. G. Proteins of human semen. Two-dimensional mapping of human seminal fluid // Clin. Chem. 1981. -Vol.27. - P. 1335-1340.

185. Elgamal A. A., Van-de-Voorde W., Van-Poppel H. et al. Immunohistochemical localization of prostate-specific markers within the accessory male sex glands of Cowper, Littre, and Morgagni // Urology.- 1994. Vol. 44, № 1. - P. 84-90.

186. Fedder J., Askjaer S. A., Hjort T. Nonspermatozoal cells in semen: relationship to other semen parameters and fertility status of the couple // Arch. Androl. 1993. - Vol. 31. - P. 95-103.

187. Fedder J., Ellermann-Ericsen S. Effect of cytokines on sperm motility and ionophore-stimulated "acrosome reaction // Arch. Androl. 1995. - Vol. 35. - P. 173-185.

188. Fedder J. Nonsperm cells in human semen: with special reference to seminal leukocytes and their possible influence on fertility // Arch. Androl. -1996. Vol. 36. - P. 41-65.

189. Ford W. C. Regulation of sperm function by reactive oxygen species // Hum. Reprod. 2004. - Update 10.- P. 387-399.

190. Fraczek M., Kurpisz M. Inflammatory mediators exert toxic effects of oxidative stress on human spermatozoa // J. Androl. 2007. - Vol. 28. - P. 225229.- 246

191. Freund M., Link H., Schmidt R. E., Welte K. Cytokines in hemopoesis, oncology and immunology. -Berlin: Springer-Verlag, 1994. 711 pp.

192. Frenette G. , Tremblay R. R., Dube J. Y. Zinc binding to major human seminal coagulum proteins // Arch. Androl. 1989. - Vol. 23. - P. 155-163.

193. Gil T., Castilla J. A., Hortas M. L. et al. Increase of large granular lymphocytes in human ejaculate containing antisperm antibodies // Hum. Reprod. 1998. - Vol. 13, № 2. - P. 296-301.

194. Hsieh M. C., Cooperman B. S. The preparation and catalytic properties of recombinant human prostate-specific antigen (rPSA) // Biochim. Biophys. Acta. 2000. - Vol. 1481. - P. 75-87.

195. Huleihel M., Lunenfeld E., Horowitz S. et al. Expression of IL-12, IL-10, PGE2, sIL-2R and sIL-6R in seminal plasma of fertile and infertile men // Andrologia. 1999. - Vol. 31. - P. 283-288.

196. Isbey S. F., Alcorn T. M., Davis R. H. et al. Characterisation of Neisseria gonorrhoeae in semen during urethral infection in men // Genitourin. Med. -1997. Vol. 73, № 5. - P. 378-382.- 247

197. Iwamoto T., Gagnon C. Human seminal plasma protein blocks the motility of human spermatozoa // J. Urol. 1988. - Vol. 140, № 5. - P. 1045-1048.

198. Jequier A. Male infertility. Oxford: Blackwell Science Ltd., 2000. - 375 pp.

199. Kaskar K., Franken D. R., van-der-Horst G. et al. The relationship between morphology, motility and zona pellucida binding potential of human spermatozoa // Andrologia. -1994. Vol. 26. - P. 1-4.

200. Kavanagh J. P. Zinc binding properties of human prostatic tissue, prostatic secretion, and seminal fluid // J. Reprod. Fert. 1983. - Vol. 68. - P. 359-363.

201. Kavanagh J. P. Sodium, potassium, calcium, magnesium, zinc, citrate and chloride content of human prostatic and seminal fluid // J. Reprod. Fert. -1985. Vol. 75. - P. 35-41.

202. Kavanagh J. P. Isocitric and citric acid in human prostatic and seminal fluid: implications for prostatic metabolism and secretion // Prostate. -1994. Vol. 24. - P. 139-142.

203. Keck C., Gerber-Schafer C., Clad A. et al. Seminal tract infections: impact on male fertility and treatment options // Hum. Reprod. Update. 1998. -Vol. 4. - P. 891-903.

204. Kovalski N. N., de-Lamirande E., Gagnon C. Reactive oxygen species generated by human neutrophils inhibit sperm motility: protective effect of seminal plasma and scavengers // Fertil. Steril. 1992. -Vol. 58. - P. 809-816.

205. Leib Z., Bartoov B., Eltes F. , Servadio C. Reduced semen quality caused by chronic abacterial prostatitis: an enigma or reality? // Fertil. Steril. -1994. Vol. 61. - P. 1009-1116.

206. Levek-Motola N., Soffer Y., Shochat L. et al. Flow cytometry of human semen: a preliminary study of a non-invasive method for the detection of spermato-genetic defects // Hum. Reprod. 2005. - Vol. 20, № 12 . - P. 3469-3475.

207. Lilja H. A kallikrein-like serine protease in prostatic fluid cleaves the predominant seminal vesicle protein // J. Clin. Invest. 1985. - Vol. 76. - P. 1899-1903.

208. Lilja H., Oldbring J., Rannevik G., Laurell C. B. Seminal vesicle-secreted proteins and their reactions during gelation and liquefaction of human semen // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 80. - P. 281-285.

209. Lilja H. Structure and function of prostatic- and seminal vesicle-secreted proteins involved in the gelation and liquefaction of human semen // Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 1988. - Vol. 191. -P. 13-20.- 249

210. Lilja H., Abrahamsson P. A., Lundwall A. Semenogelin, the predominant protein in human semen // J. Biol. Chem. 1989. - Vol. 264. - P. 1894- 1900.

211. Luckas M. J., Buckett W. M., Aird I. A. et al. Seminal plasma immunoglobulin concentrations in autoimmune male subfertility // J. Reprod. Immunol. 1998. - Vol. 37, № 2. - P. 171-180.

212. Lundwall A, Lilja H. Molecular cloning of human prostate specific antigen cDNA // FEBS Lett. -1987. Vol. 214. - P. 317-322.

213. Malm J., Hellman J., Laurell C. B., Lilja H. Isolation and characterization of the major gel proteins in human semen, semenogelin I and semenogelin II // Eur. J. Biochem. 1996. - Vol. 238. - P. 48-53.

214. Malm J., Hellman J., Hogg P., Lilja H. Enzymatic action of prostate-specific antigen (PSA or hK3) : substrate specificity and regulation by Zn(2+), a tight-binding inhibitor // Prostate. 2000. - Vol. 45. - P. 132-139.- 250

215. Mandal A., Bhattacharyya A. K. Phosphate, zinc, calcium, citric acid, and acid phosphatase in human ejaculates as related to coagulation/liquefaction // Arch. Androl. 1987. - Vol. 19. - P. 275-283.

216. Mandal A., Bhattacharyya A. K. Differences in osmolality, pH, buffering capacity, superoxide dismu-tase and maintenance of sperm motility in human ejaculates according to the degree of coagulation // Int. J. Androl. 1988. - Vol. 11. - P. 45-51.

217. Mankveld R., Kruger T. F. Sperm morphology and male urogenital infections // Andrologia. 1998. - Vol. 30. - P. 49-53.

218. Martins R. P., Krawetz S. A. RNA in human sperm // As. J. Androl. 2005. - Vol. 7, № 2. - P. 115-120.

219. Matalliotakis I., Goumenou A., Fragouli Y. et al. Soluble IL-6 receptor levels in the seminal plasma of infertile patients with accessory gland infection // Arch. Androl. 2000. - Vol. 44. - P. 237242.

220. Mazzilli F., Rossi T., Dondero F. Spermiophages in human semen in normal subjects and in patients with selected diseases // Acta. Eur. Fertil. 1992. -Vol. 23, № 3. - P. 147-150.

221. Merino G., Carranze-Lira S., Murrieta S. et al. Bacterial infection and semen characteristics in infertile men // Arch. Androl. 1995. - Vol. 35 -P. 43-47.

222. Monga M., Roberts J. A. Spermagglutination by bacteria, receptor-specific interactions // J. Androl. 1994. - Vol. 15. - P. 151-156.

223. Niemela P., Lovgren J., Karp M. et al. Sensitive and Specific Enzymatic Assay for the Determination of Precursor Forms of Prostate-specific Antigen after an Activation Step // Clin. Chem. 2002. -Vol.48. - P. 1257-1264.

224. Owen D. H., Katz D. F. A review of the physical and chemical properties of human semen and the formulation of a semen simulant // J. Androl. 2005. -Vol. 26. - P. 459-469.

225. Pasqualotto F. F., Sharma R. K., Kobayashi H. et al. Oxidative stress in normospermic men undergoing infertility evaluation // J. Androl. 2001. - Vol. 22. - P. 316-322.

226. Paul S., Harbottle S., Stewart J. A. Recruitment of sperm donors: the Newcastle-upon-Tyne experience 1994-2003 // Hum. Reprod. 2006. - Vol. 21, № 1. -P. 150-158.- 253

227. Peter A., Lilja H., Lundwall A., Malm J. Semenoge-lin I and semenogelin II, the major gel-forming proteins in human semen, are substrates for transglutaminase // Eur. J. Biochem. 1998. - Vol. 252. - P. 216-221.

228. Peter J., Unverzagt C., Hoesel W. Analysis of Free Prostate-specific Antigen (PSA) after Chemical Release from the Complex with cxi-Antichymotrypsin (PSA-ACT) // Clin. Chem. 2000. - Vol. 46. - P. 474-482.

229. Reese J. H., McNeal J. E., Goldenberg S. L. et al. Distribution of lactoferrin in the normal and inflamed human prostate: an immunohistochemical study // Prostate. 1992. - Vol. 20. - P. 73-85.- 254

230. Rehault S., Monget P., Mazerbourg S. et al. Insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) as potential physiological substrates for human kal-likreins hK2 and hK3 // Eur. J. Biochem. 2001. -Vol. 268. - P. 2960-2968.

231. Robert M., Gagnon C. Purification and characterization of the active precursor of a human sperm motility inhibitor secreted by the seminal vesicles: identity with semenogelin // Biol. Reprod. 1996. - Vol. 55. - P. 813- 821.

232. Robert M., Gagnon C. Semenogelin I: a coagulum forming, multifunctional seminal vesicle protein // Cell Mol. Life Sci. 1999. - Vol. 55. - P. 944960.

233. Satta A., Stivala A., Garozzo A. et al. Experimental Chlamydia trachomatis infection causes apop-tosis in human sperm // Hum. Reprod. 2006. - Vol. 21, № 1. - P. 134-137.

234. Schaller J., Akiyama K., Tsuda R. et al. Isolation, characterization and amino-acid sequence of semino-protein, a glycoprotein from human seminal plasma // Eur. J. Biochem. 1987. - Vol. 170. - P. 111120.

235. Schlag G., Redl H. Pathophysiology of shock, sepsis, and organ failure. Berlin: Springer-Verlag,1993. 1165 pp.

236. Sergerie M., Laforest G., Bujan L. et al. Sperm DNA fragmentation: threshold value in male fertility // Hum. Reprod. 2005. - Vol. 20, № 12. - P. 34463451.

237. Setchell B. P. Sperm counts in semen of farm animals 1932-1995 // Int. J. Androl. 1997. - Vol. 20. - P. 209-214.

238. Shimonovitz S., Barak V., Zacut D. et al. High concentration of soluble interleukin-2 receptors in ejaculate with low sperm motility // Hum. Reprod.1994. Vol. 9, № 4. - P. 653-655.

239. Sikka S. C., Champion H. C., Bivalacqua T. J. et al. Role of genitourinary inflammation in infertility: synergistic effect of lipopolysaccharide and interferon-gamma on human spermatozoa // Int. J. Androl. 2001. - Vol. 24. - P. 136-141.

240. Sirigu P., Turno F., Usai E., Perra M. T. Histo-chemical study of the human bulbourethral (Cow- 256 per's) glands // Andrologia. 1993. - Vol. 25. -P. 293-299.

241. S0rensen M. B., Bergdahl A. I., Ernst E. et al. Zinc, magnesium, calcium in human seminal fluid: relations to other semen parameters and fertility // Mol. Hum. Reprod. 1999. - Vol. 5, № 4. - P. 331-337.

242. S0rensen M. B., Stoltenberg M., Danscher G., Ernst E. Chelation of intracellular zinc affects human sperm cell motility // Mol. Hum. Reprod. 1999. -Vol. 5, № 4. - P. 338-341.

243. Sullivan H., Quinlivan W. L. G. Immunoglobulins in the semen of men with azoospermia, oligospermia, or self-agglutination of spermatozoa // Fert. Steril.- 1980. Vol. 34, № 5. - P. 465-468.

244. Sutkowski D. M., Goode R. L., Baniel J. et al. Growth regulation of prostatic stromal cells by prostate-specific antigen // J. Natl. Cancer. Inst.- 1999. -Vol. 91. P. 1663-1669.

245. Thomson A. M. Cytokines handbook. London: Acad. Press, 2002. - 425 pp.

246. Tomlinson M. J., Barrat C. L. R., Cooke I. D. Prospective study of leukocytes and leukocyte subpopulations in semen suggests they are not a cause of male infertility // Fertil. Steril. 1993. - Vol. 60. - P. 1069-1076.

247. Vihinen M. Modeling of prostate specific antigen and human glandular kallikrein structures // Bio-chem. Biophys. Res. Commun. 1994. - Vol. 204. -P. 1251-1256.- 257

248. Weidner W., Floren E., Zimmermann 0. et al. Chlamydial antibodies in semen: search for «silent» chlamydial infections in asymptomatic andrological patients // Infection. 1996. - Vol. 24, № 4. - P. 309-313.

249. Wolff H., Anderson D. J. Immunohistologic characterization and quantitation of leukocyte subpopulations in human semen // Fertil. Steril. 1988. -Vol. 49. - P. 497-504.

250. Wolff H. The biologic significance of white blood cells in semen // Fertil. Steril. 1995. - Vol. 63. - P. 1143-1157.

251. Yoshii T., Kuji N., Komatsu S. et al. Fine resolution of sperm nucleoproteins by two-dimensional electrophoresis // Mol. Hum. Reprod. 2005. - Vol. 11, № 9. - P. 677-681.

252. Zalata A. A., Hafez T., Van-Hoecke M. J., Comhaire F. Evaluation of beta-endorphin and interleukin-6 in seminal plasma of patients with certain andrological diseases // Hum. Reprod. 1995. - Vol. 10, № 12. - P. 3161-3165.

253. Zalata A. A., Christophe A. B., Depuydt C. E. White blood cells cause oxidative damage to the fatty acid composition of phospholipids of human spermatozoa // Int. J. Androl. 1998. - Vol. 21. - P. 154-162.

254. Zhang W. M., Leinonen J., Kalkkinen N. et al. Purification and characterization of different molecular forms of prostate-specific antigen in humanseminal fluid // Clin. Chem. 1995. - Vol. 41. -P. 1567-1573.

255. Zinaman M. J., Brown C. C., Selevan S. G., Clegg E. D. Semen quality and human fertility: a prospective study with healthy couples // J. Androl. 2000. -Vol. 21. - P. 145-153.