Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Бактериальные сообщества некоторых компонентов экосистемы дельты Волги и Северного Каспия
ВАК РФ 03.00.18, Гидробиология

Автореферат диссертации по теме "Бактериальные сообщества некоторых компонентов экосистемы дельты Волги и Северного Каспия"

п

На правах рукописи

0034475 18

Лисицкая Ирина Анатольевна

БАКТЕРИАЛЬНЫЕ СООБЩЕСТВА НЕКОТОРЫХ КОМПОНЕНТОВ ЭКОСИСТЕМЫ ДЕЛЬТЫ ВОЛГИ И СЕВЕРНОГО КАСПИЯ

Специальность: 03.00.18 - Гидробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

О 2 ОКГ 2008

Астрахань 2008

003447518

Работа выполнена в Федеральном государственном унитарном предприятии «Каспийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства»

(ФГУП «КаспНИРХ»)

Научный доктор биологических наук руководитель: Ларцева Любовь Владимировна

Официальные доктор биологических наук, профессор оппоненты: Зинченко Татьяна Дмитриевна

кандидат биологических наук, доцент Бычкова Лариса Ивановна

Ведущая

организация: ГУ «Астраханский государственный природный биосферный заповедник»

Защита состоится «21» октября 2008г. в 14.00 час, на заседании диссертационного совета Д 307.001.05 при Астраханском государственном техническом университете по адресу. 414025, г. Астрахань, ул. Татищева, 16, ГК ауд. 309

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке АГТУ Автореферат разослан «^»¿£¿¿/¿¿^¿>2008г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук,

доцент

Мелякина Э. И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Антропогенное загрязнение является существенным экологическим фактором, лимитирующим жизнедеятельность биологических систем на разных уровнях их организации в водной среде. Изучение особенностей функционирования водных организмов, обитающих в хронически загрязненной среде и их патологии, - одна из актуальных проблем гндроэкосистем. Наиболее пристальное внимание ученых вызывают условно-патогенные микроорганизмы вследствие их широкого распространения и важной роли в различных гидробиоценозах. В то же время информация о состоянии здоровья водных животных очень важна для оценки санитарно-гидробиологической ситуации в акваториях, подвергнутых техногенному воздействию.

Морские бактерии как эпибионты составляют часть нормального бактериоцено-за различных гидробионтов, на который в значительной степени влияет эвтрофиро-вание Каспийского моря и где всегда присутствуют потенциально патогенные виды бактерий (Салманов, 1999, Сокольский, Умербаева, 2001; Катунин с соавт., 2004; 2005). Любое нарушение экологической обстановки, в частности, загрязнение водной среды нефтяными углеводородами, сопровождается изменениями, которые охватывают как свободноживущих, так и паразитических животных (в том числе микроорганизмов), обусловливая жесткий отбор видов, идущий по пути приспособления к экстремальным условиям гидроэкосистемы. Трансформирование среды обитания представителей ихтиофауны сказывается не только на видовом составе и численности их микрофлоры, но также инициирует ослабление защитных механизмов самих гидробионтов, что делает последних более доступными для патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, способствует возникновению и тяжелому протеканию инфекций. Многие возбудители болезней гидробионтов, считавшиеся ранее относительно безопасными, становятся причиной их гибели и как следствие, значительных экономических ущербов (Карасева, 2002; Головина с соавт., 2003; Вялова, 2006; ОБикос1а, 2002; КоЬюЬаис!, 2004).

Цель данной работы - выявить особенности распределения бактериальных сообществ некоторых компонентов экосистемы дельты Волги и Северного Каспия и оценить воздействие на них антропогенных факторов, в том числе интенсивного поиска углеводородного сырья в Северном Каспии.

Для выполнения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить видовой состав бактериальных сообществ, выделенных из внутренних органов и тканей бычковых рыб-стенобионтов, осетровых-эвриобионтов и среды их обитания.

2. Определить роль отдельных экологических факторов в развитии бактериальных сообществ морской и пресноводной биот. температурного фактора, определяющего сезонную динамику; галотолерантность микрофлоры.

3. Изучить в экспериментальных условиях изменение патогенных свойств отдельных видов бактерий при загрязнении их среды обитания различными концентрациями сырой нефти

4. Оценить факторы патогенности выделенной микрофлоры и ее антибио-тикорезистентность

5. Определить методом биопробы на рыбе и белых мышах степень пато-генности некоторых штаммов микроорганизмов, выделенных из исследованных нами объектов.

Научная новизна. Впервые в Волго-Каспийском регионе проведены систематические исследования по качественному составу условно-патогенной микрофлоры, обсеменяющей бычковых и осетровых рыб, а также среду их обитания в условиях многофакторного антропогенного пресса. Проведен сравнительный анализ бактериальных сообществ морской и речной биот. Показано их пространственное распределение в море в зависимости от ряда факторов природного и антропогенного происхождения. Впервые выявлены и определены различия проявления факторов перси-стенции и/или патогенности выделенной микрофлоры и антибиотикорезистентности в зависимости от ее экотипической принадлежности. Определено влияние разных концентраций нефти на морфологию и патогенные свойства доминирующих видов микроорганизмов. Проведенные исследования позволяют объективно оценивать и прогнозировать санитарно-экологическую и эпизоотическую ситуацию в водоеме.

Теоретическое и практическое значение данной работы заключается в раскрытии роли фенотипических особенностей бактериальных сообществ, обуславливающих политропность, смену нозоареала и стадии переадаптации микрофлоры морских и речных биот. Результаты проведенных санитарно-микробиологических исследований являются составной частью производственного экологического мониторинга морской среды при проведении нефтеразведочных работ на шельфе Северного Каспия. Материалы, изложенные в диссертационной работе, нашли применение в учебном процессе по многим прикладным дисциплинам: «Общая экология», «Экологическая эпидемиология», «Санитарная гидробиология», «Ихтиопатология» в Астраханском государственном техническом университете, «Экологическая экспертиза», «Экология микроорганизмов» в Астраханском государственном университете. Результаты работы также могут быть использованы в аквакультуре для сани-тарно-микробиологической оценки осетровых-производителей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На структуру бактериальных сообществ осетровых, бычковых рыб и воды дельты Волги и Северного Каспия доминирующее влияние оказывают температура воды и антропогенный прессинг.

2. Сезонная динамика выделенной условно-патогенной микрофлоры обусловлена температурным и гидрохимическим режимами, сложившимися на акватории дельты Волги и Северного Каспия, а также антропогенным прессом.

3. Степень патогенности бактерий, выделенных из пресноводной и морской биот, их множественная антибиотикорезистентность и гапотолерантность являются факторами выживания микроорганизмов в меняющихся условиях среды обитания.

4. Нефтяное загрязнение оказывает стимулирующее воздействие на рост, развитие и патогенные свойства некоторых микроорганизмов, степень угнетения или возрастания их патогенных свойств зависит от степени превышения ПДК по нефтеуглеводородам.

5. Результаты проведенных биопроб свидетельствуют о мощном патогенном потенциале условно-патогенных бактерий, циркулирующих в гидроэкосистеме Волго-Каспия.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы были представлены и получили положительную оценку на заседаниях Астраханского отделения Всероссийского общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (2002, 2003, 2004); на совместном заседании научно-консультативного совета по болезням рыб ФГУ «Межведомственная ихтиологическая комиссия» и Секции патологии рыб и охраны гидробионтов Отделения ветеринарной медицины Россельхозака-демии (Москва, 2007), на международной конференции «Современные проблемы океанологии шельфовых морей России» (Мурманск, 2002), международной научно-практической конференции «Аквакультура начала XXI века: истоки, состояние, стратегия развитш» (п Рыбное, 2002); международной конференции молодых ученых «Проблемы аквакультуры и функционирования и водных экосистем» (Киев, 2002); Proceedings of the Second Bilateral Conference between Russia and United States (Shepherdstown, West Virginia, 2003); I международной научно-практической конференции молодых ученых «Комплексные исследования биологических ресурсов южных морей и рек» (Астрахань, 2004); III международной научно-практической конференции «Человек и животные» (Астрахань, 2005), международной научной конференции «Современные проблемы и адаптации и биоразнообразия» (Махачкала, 2006); международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию Астраханского Государственного университета «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (Астрахань, 2007); второй научно-практической конференции студентов, аспирантов, преподавателей и научных сотрудников, посвященной 10-летию кафедры экологии и безопасности жизнедеятельности Астраханского Государственного Университета (Астрахань, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ.

Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно в полевых условиях собран и обработан материал, проведены бактериологические исследования и биопробы, выполнена видовая идентификация выделенных микроорганизмов, осуществлен анализ и статистическая обработка полученных данных.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страницах, включает 13 рисунков, 8 таблиц и 3 приложения. Состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 169 наименований, из них 60 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

Литературный обзор состоит из 3-х разделов, в которых рассмотрены вопросы физико-географической и гидробиологической характеристик Северного Каспия и дельты Волги, эколого-токсикологической обстановки этих районов, распространения условно-патогенной микрофлоры в различных промысловых рыбах морского и речного комплекса, а также среде их обитания Приведены данные о распределении микроорганизмов в природе, их толерантность к абиотическим и биотическим факторам среды. Описана биологическая характеристика бычка-песочника и осетра с учетом экологических и природно-социальных условий региона.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в лаборатории научной диагностики рыб ФГУП «Касп-НИРХ» в период с 2001 по 2005 гг. Объектами исследования являлись бактериальные сообщества бычка-песочника (Neogobis ßuvialis Pallas, 1814), русского осетра (Acipenser gueldenstaedtii Brandt, 1833) в морской и речной период его жизни, мне-миопсиса (Mnemiopsis leidyi), а также пробы морской и речной воды. Сбор материала осуществляли весной и осенью в Северном Каспии (в том числе по мнемиопсису на дагестанском побережье в районе г. Махачкала) и на Главном банке дельты р. Волги во время промысла. У рыб исследовали жабры, кишечник, печень и кровь. У осетра в реке дополнительно обследовали гонады. Объем проанализированного материала представлен в таблице 1.

Таблица 1- Объем проанализированного материала

Исследуемый объект Район исследования Количество проб, шг Количество выделенных бактериальных культур, штамм

Бычки Северный Каспий 4268 4354

Осетр Северный Каспий 310 402

Вода Северный Каспий 90 208

Осетр Дельта Волги (ВКК) 310 406

Вода Дельта Волги (ВКК) 70 90

Мнемиопсис Дагестанское побережье Каспия 50 90

Итого 5098 5550

Сбор материала осуществлен согласно принятым в ихтиопатологии методикам. Пробы отбирали с соблюдением правил асептики на накопительные среды и доставляли для дальнейшей работы в лабораторию. В лабораторных условиях для видовой идентификации качественного состава выделенной микрофлоры использовали как общепринятые традиционные, так и усовершенствованные, модифицированные методы. Пи этом использовали основные принципы и этапы бактериологического исследования согласно Лабораторному практикуму по болезням рыб (1983), Сборнику инструкций по борьбе с болезнями рыб (1999) и Практикуму по микробиологии (2005).

У всех выделенных штаммов определяли галотолерантность, т.е. способность расти в МПБ (мясопептонном бульоне) с 3,0; 7,0; и 10,0% хлоридом натрия; анализировали факторы патогенности: протеолитическую, лецитиназную, гемолитическую активности, а у аэромонад - ДНКазную активность по МУ № 13-4-2/1116. Все изолированные микроорганизмы проверяли на чувствительность к антибиотикам с использованием метода диффузии в агар дисков с бензилпенициллином, ампициллином, стрептомицином, левомицетином, тетрациклином и фурадонином.

В итоге вся микрофлора, изолированная из органов рыб и воды, проведена по 38-40 микробиологическим тестам и идентифицирована до вида с помощью определителя Берджи (1997), монографии Ю. П. Пивоварова и В. В. Королика (2000)

Для изучения влияния различных концентраций (0,05; 0,25; 0,5 и 10,0 мг/л) сырой каспийской нефти на ростовую реакцию и адаптационные возможности условно-патогенной микрофлоры были проведены экспериментальные работы с использованием штаммов бактерий, выделенных из морской и речной биот: Citrobacter freundii, Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa, обладающие протеолитической, гемолитической, лецитиназной и ДНКазной (только A hydrophila) активностями. На

третьи сутки после посева проводили повторное тестирование всех испытуемых штаммов на наличие и изменение маркеров патогенности.

С целью определения вирулентности выделенной микрофлоры была проведена серия биопроб на представителях каспийской ихтиофауны (по 15 экз. бычков, воблы, кефали, годовиков осетра) в Дагестанском отделении КаспНИРХа («Турали-2»), Проведение биопробы и наблюдение за экспериментально зараженными рыбами осуществлен согласно лабораторному практикуму по болезням рыб (Мусселиус и др., 1983; Сборник инструкций по болезням рыб, 1999).Эксперименты на белых нелинейных мышах были поставлены на базе Астраханской областной ветеринарной лаборатории. Испытывали вирулентность бактерий (по два штамма) следующих видов: A.hydrophila, Ps. aeruginosa, C.freundii, Pr mirabilis, V fischen.

Математическая обработка полученных данных проведена с помощью биометрических методов (Лакин, 1990) и методом вариационной статистики на компьютере по программе MS Exsel

Глава 3. Структура бактериальных сообществ воды и рыбы дельты Волги и Северного Каспия

3.1 Эколого-биологическая характеристика выделенных микроорганизмов

В разделе приведены характеристики выделенных микроорганизмов, их встречаемость в различных биотопах, распространенность в природе, а также данные об эпизоотической, санитарной и эпидемиологической их значимости. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что бактериоценозы каспийских бычков, осетровых в морской и речной периоды их жизни, а также среды их обитания были многообразны и состояли из 83 видов микроорганизмов, относящихся к 25 родам: Acinetobacter, Aeromonas, Alcaligenes, Bacillus, Candida, Edwardsieila, Enterobacter, Escherichia, Hafnia, Flavobacterium, Photobacterium, Plesiomonas, Proteus, Providencia, Pseudomonas, Klebsiella, Micrococcus, Morganella, Moraxella, Lusibacterium, Serratia, Salmonella, Shigella, Vibrio, Yersinia

3.2 Бактериальные сообщества осетровых-эврибионтов и бычковых-стенобионтов, а также среды их обитания

Анализ полученных материалов выявил существенные различия в бактерио-ценозах морских и речных биотопов, обусловленные неодинаковым образом жизни гидробионтов, комплексом абиотических и биотических факторов в дельте Волги и Северном Каспии.

Семейство Enterobacteriaceae

От анализируемых объектов нами выделено 1392 штамма, представленные 24 видами из 13 родов этого семейства (табл. 2).

В речной период жизни у осетров энтеробактерии превалировали среди грам-негативных бактерий, составляя 25,5±0,3% штаммов от всей выделенной микрофлоры. При этом в рыбе субдоминировали бактерии группы p. Proteus и р. Citrobacter (15,0±1,7% и 6,4±1,3% проб, Р<0,05). Среди выделенных цитробактеров доминировал С. freundu (5,4±1Д%), в группе протея превалирующее положение занимал P.mirabilis (10,б±0,8%). Процентное соотношение выделенных энтеробактерий

внутри семейства также указывает на доминирование в микробном пейзаже осетров рр.Citrobacter и Proteus (табл. 2).

Таблица 2 - Удельный вес энтеробактерий, выделенных из воды и рыбы (в структуре семейства),

%

Микрофлора Процент выделенных штаммов, %

бычки осетры (море) вода морская осетры (река) вода речная

р Citrobacter 52,2±0,8 59,3±0,8 52,9±0,8 25,0±0,6 35,7±0,7

р Edwardsiella 12,3±0,4 6,3±0,2 6,0±0,2 3,9±0,1 0,8±0,01

р Enterobacter 15,7±0,5 15,6±0,5 17,6±0,6 1,9±0,01 0,8±0,01

р Escherichia - - - 2,9±0Д 0,8±0,01

р Hafnia 1,1±0,1 - 1,1±0,1 0,9±0,02 0,8±0,01

р Klebsiella - - - 0,9±0,02 0,8±0,01

р Morganella - - - 3,9±0,1 0,8±0,01

p.Proteus 17,1±0,6 12,5±0,4 17,6±0,6 51,0±0,7 28,6±0,6

р Providencia - - - 3,9±0,1 0,8±0,01

p.Serratia - - - 0,9±0,02 0,8±0,01

p.Salmonella - - - 3,9±0Д 7,1±0,3

p.Shigella 2,5±0,2 6,3±0,2 4,8±0,1 0,9±0,02 21,4±0,5

p Yersinia - - - 0,9±0,02 0,8±0,01

В море у бычков и осетров удельный вес энтеробактерий был ниже в 3,1 раза, по сравнению с осетровыми в речной период их жизни. Это обусловлено самоочищающей способностью моря, а также более слабым техногенным и хозфекальным прессингом на морскую гидроэкосистему, в отличие от речной. Субдоминантами среди этого семейства, инфицировавших морские объекты, были представители р. Citrobacter (осетры - 4,2±0,8%, бычки - 4,2±0,8% штаммов от всей выделенной микрофлоры), в частности, С freundii - 2,8±0,6% у осетров, 2,4±0,5% - у бычков. Бактерии р. Proteus в морской биоте, в среднем, составили 1,1±0,1% штаммов. Обращает на себя внимание редкая встречаемость в речной воде и рыбе (а в море их полное отсутствие) индикаторно-значимых Е. coli - 1,3±0,2% и 0,7±0,3% и Salmonella sp. - 1,2±0,5% и 1,3±0,2% проб соответственно, что свидетельствует о продолжающемся антропогенном прессинге на водную экосистему, когда условно-патогенная микрофлора превалирует над индикаторной.

Анализ полученных данных по гидромикрофлоре также выявил некоторое снижение удельного веса энтеробактерий в морской воде (в 1,3 раза), по сравнению с речной. Субдоминантами среди них в морской и речной воде, как и в рыбе, являлись цитробактеры Доминирующим видом среди «водных» цитробактеров, как и в рыбе, был С. freundii: море - 2,9±0,6; река - 5,2±1,0% штаммов от всей выделенной микрофлоры. Протеи в воде зарегистрированы реже, чем цитробактеры: в морской - в 4,8; речной - в 1,3 раза (табл. 2).

В прибрежной и мелководной зонах Северного Каспия (как в западной, так и восточной частях), наиболее подверженной речным стокам (волжскому и уральскому), выявлены энтеробактерий, близкие по своему количественному и качественному составу к речному микробному пейзажу (табл. 2). На приглубых станциях западной части Северного Каспия удельный вес энтеробактерий был относительно низким, а их видовой состав менее разнообразным. В восточной части обследован-

ной акватории на больших глубинах энтеробактерии зарегистрированы не были. Это обусловлено уменьшением антропогенного пресса речных стоков и изменением химического состава морской воды.

Основными биотопами всех энтеробактерии, обсеменявших как осетров, так и бычков, были желудочно-кишечный тракт (34,1±0,3% проб), жабры (29,2±0,8%) и гонады осетра (25,2±0,8%). Из этих органов изолировали в комплексе несколько видов этого семейства (цитробактеры, эдвардсиеляы, энтеробактеры, протеи), а также представителей других семейств (вибрионы, аэромонады, псевдомонады, флавобак-терии), т.е. для многих бактериальных сообществ была характерна политропность. Удельный вес энтеробактерий, выделенных из морских объектов, был близким (табл. 2).

Полученные данные свидетельствуют о ярко выраженных персистентных свойствах и высокой пластичности этой многообразной группы бактерий. Следовательно, энтеробактерии Moiyr быть показателями санитарного состояния Волго-Каспия. Среди них в современный период наиболее объективными индикаторными микроорганизмами могут быть бактерии рр. Citrobacter и Proteus.

Семейство Vibrionaceae

Состав семейства Vibrionaceae в изученных нами микробиоценозах был представлен 20 видами из 5 родов (табл. 3). Всего выделено 1356 штаммов этого семейства. В море доминантами являлись бактерии р. Vibrio (осетры - 14,4±4,3; бычки -12,0±4,1; вода - 12,0±4,1%), а в реке - р. Aeromonas (осетры - 3,5±0,8; вода -5,2±0,7% штаммов от всей выделенной микрофлоры).

Бактерии р. Vibrio в большинстве своем являются галофилами и этот фактор определил их разнообразие (10 видов) в микробном пейзаже морских рыб и среде их обитания. Субдоминантой был V. fischeri (в бычках - б,8±1,4; в осетре - 7,0±2,1; в воде 7,0±2,1 % штаммов). В «речном» микробиоценозе представители р. Vibrio выделены единичными изолятами, составляя в рыбе 0,3±0,01, а в воде - 1,3±0,2%, т.е. их удельный вес был почти в 10 раз меньше, чем у аэромонад, это свидетельствует о том, что вибрионы являются специфической микрофлорой морской воды и населяющих ее гидробионтов. Встречаемость галофильных вибрионов в реке обусловлена их стадиями переадаптации в воде и организме рыб, совершающих нерестовые миграции (осетровые), а также нагонными ветрами с моря, способствующими некоторому перемешиванию северокаспийских и волжских вод. Бактерии рр. Lucibacte-rium и Photobacterium зарегистрированы нами только в экосистеме Каспия.

Таблица 3 - Удельный вес вибрионов, аэромонад и др , выделенных из воды и рыбы (в структуре семейства), %__

Микрофлора Процент выделенных штаммов

бычки осетры (море) вода морская осетры (река) вода речная

p.Vibno 52,0±0,8 57,4±0,8 47,7±0,6 5,6±0,1 12,5±0,3

p.Aeromonas 26,8±0,4 22,8±0,3 29,5±0,4 83,3±0,8 62,5±0,7

p.Lucibacterium 3,1±0,1 2,0±0,1 1,4±0,1 - -

p.Photobacterium 7,4±0,2 5,9±0,2 10,0±0,3 - -

p Plesiomonas Ю,7±0,5 11,9±0,3 11,4±0,3 11,1 24,5±0,3

В бактериоценозе обследованной морской экосистемы доля микроорганизмов семейства Vibrionaceae превышала таковую в речной в 5,6 раза Частота встречаемости галофильных вибрионов, лусибактерий и фотобактерий увеличивалась по мере удаления всех обследованных станций от прибрежной зоны (в западной, центральной и восточной частях Северного Каспия), на которой происходило распреснение морской воды за счет речных стоков.

Аэромонадный комплекс в море был представлен 5-ю, в реке - 6-ю видами. Представителей р. Aeromonas чаще регистрировали в речных обследованных объектах (табл. 3). Как в море, так и в реке доминировал один вид - А hydrophila: бычки и морская вода по 3,3±0,3%, морские осетры - 3,5±1,3% штаммов; речные осетры -1,2±0,1%, речная вода - 2,6±0,5% штаммов от всей выделенной микрофлоры. При этом, на границе Северного и Среднего Каспия, а также в районе научно-производственной базы «Турали-2» (дагестанское побережье) наличие аэромонад-ного комплекса в микробиоценозе обследованных объектов в конце лета - начале осени обусловлено частой встречаемостью этих бактерий в микробном пейзаже все-ленца из Черного моря мнемиопсиса (Mnemiopsis leidyi).

Бактерии р. Plesiomonas в анализируемом материале были представлены одним типовым видом PI. shigelloides В структуре всего бактериоценоза они зарегистрированы в морских осетрах и бычках ббльшим числом штаммов, чем у осетров в реке (3,0±1,4 и 2,5±0,2% против 0,5±0,2% штаммов, соответственно). В водной среде различий по этим микроорганизмам не отмечено, их удельный вес был практически на одном уровне в пробах морской и речной воды (2,5±1,3 и 2,6±0,5%, соответственно). Внутри семейства массовая доля плезиомонад была на одном уровне во всех обследованных объектах (табл. 3). Их частая встречаемость в речной воде обусловлена саморегуляцией микроорганизмов внутри популяции, необходимой для сохранения своего вида. Распределение плезиомонад по районам исследований было таким же, как у энтеробактерий.

Основными биотопами бактерий семейства Vibrionaceae были жабры (35,1±0,5%), кишечник (24,8%±0,3%) печень (29,7±0,5%) исследованных рыб и гонады осетра (23,0±0,4%). Инфицирование гонад у осетра и печени у всех обследованных рыб свидетельствовало об их напряженном санитарном состоянии и ослабленной резистентности организма, что может негативно отразиться на использовании осетровых в аквакультуре

Следует отметить, что вибрионы и аэромонады чаще остальных бактерий семейства Vibrionaceae регистрировались при кишечных инфекциях людей Астраханской области (Бойко, 1998) Это дает основание считать их показателями санитарно-эпизоотического и эпидемиологического благополучия экосистемы Волго-Каспийского бассейна. В качестве тест-объектов могут быть А hydrophila и V. fischen.

Грамнегативные неферментирующие бактерии в обследованном микробном пейзаже гидробионтов и среде их обитания представлены 30 видами следующих родов: Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Flavobacterium, Alcaligenes. Всего было выделено 1510 штаммов вышеназванных родов бактерий. Псевдомонады, являясь доминантами в качественном составе всей выделенной микрофлоры морской биоты, в речной экосистеме были зарегистрированы незначительно. Их рост в реке ингиби-ровали более ферментативно-активные бактерии (энтеробактерии и грампозитивная

флора). Удельный вес псевдомонад в структуре этой группы указывает на их доминирование и близкую корреляцию в микробном фоне морских объектов (табл 4). В реке они были зарегистрированы в 2-3 раза реже, по сравнению с морским материалом.

Таблица 4 -Удельный вес грамнегативных неферчентиругащих бактерий, выделенных из воды и рыбы (в структуре этой группы), %___

Микрофлора Процент выделенных штаммов

бычки осетры (море) вода морская осетры (река) вода речная

р Pseudomonas 48,0±0,7 43,0±0,6 48,0±0,7 20,5±0,4 Н,7±0,3

р Acmetobacter 16,1±0,3 18,0±0,3 16,1±0,3 54,7±0,8 61,8±0,8

p.Moraxetla 16,9±0,4 14,5±0,3 17,9±0,4 4,3±0,2 5,9±0,2

р Flavobacterium 16,0±0,2 22,5±0,4 14,3 ±0,2 6,0±0,2 20,6±0,4

р Alcaligenes 3,0±0,1 2,0±0,1 3,7±0,1 14,5±0,3 -

В море видовой состав псевдомонад был более многообразным (10 видов), с доминированием Pseudomonas sp., Ps fluorescens и Ps. alcaligenes (7,8±2,4; 6,6± 1,8; 6,5±1,3% штаммов от всей выделенной микрофлоры, соответственно) В пробах морской воды и бычках также были обнаружены единичные штаммы Ps aeruginosa (синегнойная палочка), являющейся патогеном для человека и животных. В реке р. Pseudomonas представлен 5-ю видами у осетровых и 3-мя - в воде, при этом субдо-минировали Pseudomonas sp. и Ps fluorescens

По районам исследований выявлены различия в частоте встречаемости псевдомонад, удельный вес которых увеличивался по мере удаления станций сбора материала от реки и мелководной прибрежной зоны Северного Каспия к центральной его части, где их развитие ингибировали доминанты речного микробного пейзажа -энтеробактерии, аэромонады и грампозитивная флора. Это свидетельствует об ослаблении антропогенного пресса, обусловленного речным стоком, на приглубую часть Северного Каспия, а также о высокой экологической валентности бактерий этого рода. В восточной части Северного Каспия псевдомонадный комплекс был более разнообразным по сравнению с западной. Это определено разными значениями гидрохимического режима в западной и восточной частях Северного Каспия (pH среды, биологическое потребление кислорода и тд.), а также генотипическими и фенотипическими особенностями этих микроорганизмов В районе дагестанского побережья высокая встречаемость бактерий рр. Pseudomonas и Aeromonas была обусловлена их присутствием в микробиоценозе мнемиопсиса Mnemiopsis leidyi.

Основными биотопами псевдомонад в организме рыб были жабры (28,7±0,3% проб), желудочно-кишечный тракт (31,4±0,4%) и печень (15,0±0,2%). Высокая обсе-мененность различных рыб Волго-Каспия этими бактериями была отмечена нами и ранее. Контаминация жаберного аппарата обследованных гидробионтов обусловлена почти одинаковым удельным весом псевдомонад в воде и рыбе (табл. 4). Их локализация в печени рыб свидетельствовала об значительной политропности, что дает возможность рассматривать бактерии р. Pseudomonas в качестве одного из индикаторов в санитарной гидробиологии.

Ацинетобактеры и моракселлы сем. Nesseriaceae в анализируемом материале представлены 4-мя и 5-ю видами, соответственно Доминантами среди них были

ацинетобактеры, в «морском» микробном пейзаже - АапегоЬаМег яр, А каето1уПст, в «речном» - А сакоасеПсш. Эти микробы были постоянными составляющими микробиоценоза Волго-Каспийского бассейна, их достаточно часто изолировали от разных промысловых рыб, а также от нового вселенца Каспийского моря - мнемиопсиса.

В «морском» микробном фоне удельный вес ацинетобактеров и моракселл составил- осетровые - 20,7±2,8; бычки - 20,9±3,5, вода - 20, 9±4,2% штаммов, в речном - осетровые - 16,9±2,9; вода - 26,0±2,4% штаммов от всей выделенной микрофлоры. Установлено, что в структуре группы выделенных неферментирующих бактерий ацинетобактеры преобладали только в объектах речной биоты, их удельный вес в реке превышал таковой в море в 3-4 раза (табл. 4). Моракселлы в проанализированном материале не отличались видовым разнообразием, их чаще регистрировали в организме бычков, морских осетров и морской воде. В реке процент этих бактерий был ниже в 3,4 раза, чем в море (табл. 4). Это обусловлено саморегуляцией изолированных микроорганизмов в зависимости от условий их обитания. Существенных различий в распределении ацинетобактеров и моракселл по районам исследований в микробных фонах рыб и воды не выявлено, эти грамнегативные кокки были выявлены на всех обследованных станциях.

Ацинетобактеры и моракселлы были обнаружены в жабрах (18,2±0,6%), печени (3,6±0,2%), гонадах (у осетра) (17,9±0,5%) и кишечнике (19,5±0,5%) проанализированных рыб, что свидетельствовало о структурно-функциональных нарушениях и защитных реакциях их организма.

Псевдомонады и ацинетобактеры относятся к углеводородокисляющим микроорганизмам, они способны использовать различные составляющие нефти и нефтепродукты в качестве одного из основных источников углерода и энергии. Поэтому в случае загрязнения моря нефтяными углеводородами может произойти усиление бактериального прессинга на акваторию за счет увеличения биомассы этих бактерий.

Флавобактерии были разнообразны по видовому составу, как в морских (10 видов), так и в речных объектах (7 видов). В море доминантой являлся /<7 адиаЫе, в реке - Р1амоЪас1ег1ит яр. Удельный вес флавобактерий в микробиоценозе морских осетров составил 14,5±0,4; бычках - 10,1±2,4; воды - 9,4±3,1% штаммов от всей выделенной микрофлоры, что, в среднем в 2,4 раза больше процентного содержания этих бактерий в микробном профиле осетровых в речной период их жизни и среды их обитания. В реке пониженная обсемененность флавобактериями осетра и воды в местах промысла связана с их элиминацией ферментативно активными энтеробакте-риями и аэромонадами. Ранее, на фоне доминирования энтеробактерий в микробном пейзаже всех промысловых рыб дельты Волги, флавобактерии регистрировали в 3-4 раза реже, чем в настоящий период. Их с одинаковым постоянством изолировали во всех районах исследований. В море эти бактерии в 1,5-2 раза чаще регистрировались в центральной и восточной частях Северного Каспия.

Флавобактерии обсеменяли жабры (21,8±0,6%), печень (15,0+0,2%), гонады (осетровых) (15,0±0,2%) и кишечник (31,8±1,2%) проанализированных рыб В связи с тем, что флавобактерии никогда не регистрировали как патогены рыб, они, играют роль транзитной микрофлоры, и их присутствие в воде и рыбе обусловлено сезонной вегетацией и миграционными путями гидробионтов.

Алкалигенесы в исследованных объектах были представлены 2-мя видами: А1-caligenes sp., Al faecalis. Их удельный вес был незначителен. В то же время они были отмечены во всех проанализированных органах и тканях гидробионтов, в том числе единичными штаммами в крови у бычковых рыб, что свидетельствует о наличии бактериемии в их организме. Алкалигенесы регистрировались как в дельте р. Волги с резким подъемом развития у осетров, так и на акватории западной и центральной частей Северного Каспия (табл. 4)

Грампозитивная флора в анализируемом материале представлена бациллами, кокками, дрожжами, основными биотопами которых были дыхательный аппарат и желудочно-кишечный тракт анализированных рыб. Всего выделено 1202 штамма, относящиеся к следующим родам: Bacillus, Candida, Micrococcus. При поднятии уровня Каспийского моря происходило подтопление береговой зоны, и за счет этого происходила трансформация почвенной флоры в водную экосистему. Поэтому в исследованных морских гидробионтах и среде их обитания встречаемость грампози-тивных бактерий была почти в 10,0 раз ниже, чем у осетров в речной период их жизни. Это обусловлено разной самоочищающей способностью морской и речной воды, ее химическим составом, температурным режимом, а также неодинаковым образом жизни бычков и осетров.

В морских биотопах субдоминантами были бациллы, а в речной экосистеме среди грампозитивной флоры доминировали дрожжи (табл 5). По районам исследований высеваемость грампозитивных микроорганизмов была мозаичной. В реке и мелководной зоне восточной части Северного Каспия из воды и рыбы микрококки выделялись в 1,8 раза больше по сравнению с другой грампозитивной флорой. На приглубых станциях западной части Северного Каспия, наоборот, бациллы и дрожжи в 1,5 раза больше контаминировали обследованные объекты. Это определено разными биохимическими свойствами грампозитивных бактериальных сообществ, а также их генетической гетерогенностью, обеспечивающей их приспособленность к меняющимся условиям среды обитания.

Таблица 5-Удельный вес грампозитивной флоры, выделенной из воды и рыбы (в структуре группы)__

Грампозитивная флора Процент выделенных штаммов, %

бычки осетры (море) вода морская осетры (река) вода речная

р Bacillus 67,8±0,8 61,5±0,9 70,0±0,9 17,1±0,4 3,0±0,1

р Micrococcus 17,1±0,1 15,4±0,3 10,0±0,2 27,4±0,5 23,5±0,3

р Candida 15,1±0,3 23,1±0,4 20,0±0,3 55,5+0,7 73,5±0,8

Таким образом, фактические материалы, иллюстрирующие динамику гетерогенности микробного пейзажа изучаемых биотопов, демонстрируют довольно сложные и многообразные взаимоотношения между различными группами микроорганизмов, определяющиеся их адаптационными возможностями в системе «паразит-хозяин» Известно, что бычки ведут более локальный образ жизни, в то время, как осетровые совершают длительные миграции.в поисках пищи, а в нерестовый период заходят в реки и даже могут оставаться там зимовать (Распопов, 2001). За счет этого в микробном пейзаже русского осетра происходит смена одного комплекса микрофлоры другим, особенно в тех биотопах, которые наиболее тесно связаны со средой обитания - это жабры и желудочно-кишечный тракт гидробионтов. Выживание микрофлоры, обсеменяющей внутренние органы и ткани рыб, обусловлено ее пер-

систентными свойствами, а также физиологическим статусом проанализированных особей

Следовательно, вся условно-патогенная микрофлора, выделенная нами из исследованных объектов, может быть использована в качестве индикатора для объективной оценки экологического и санитарно-эпидемиологического состояния гидроэкосистемы Северного Каспия и дельты Волги в настоящий период и во время промышленной добычи нефтеуглеводородного сырья.

ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ВОДЫ И РЫБЫ ДЕЛЬТЫ ВОЛГИ И СЕВЕРНОГО КАСПИЯ

4.1 Влияние температурного фактора на развитие микроорганизмов в разные периоды года

Известно, что температурный фактор активизирует или подавляет рост микрофлоры, обуславливая ее сезонную динамику, с периодическим доминированием сменяющих друг друга популяций бактерий. Сезонная сукцессия типична для большинства водоемов и является одним из важных показателей устойчивости микробного сообщества, а также степени его приспособленности к условиям обитания (Черкасский, 1994; Литвин, 1999). В связи с вышеизложенным нами весной и осенью детально были проанализированы доминирующие группы условно патогенных бактерий семейств Enterobacteriaceae, Vibrionaceae и Pseudomonadaceae.

Энтеробактерии были зарегистрированы весной и осенью в морской экосистеме, в основном, в прибрежной зоне, как результат влияния речного стока, который является основным носителем хозбытовых и фекальных вод. Встречаемость бактерий этой группы в морских биотопах была в прямой корреляционной зависимости (R2=0,9984) от термического режима на обследованной акватории на все этапах проведенных исследований. За период наших исследований группа энтеробактерий, выделенная из осетровых, превалировала над водными штаммами этого семейства в 1,5-2 раза, что связано с их фенотипическими особенностями. В весенний период бактерии кишечной группы обсеменяли рыбу и воду на уровне 9,8 и 5,6% штаммов от всей выделенной микрофлоры (соответственно), а в осенний - в 16,7 и 10,0% случаев. При этом цитробактеры составляли весной 4,8; осенью - 9,5%; протеи весной - 3,7; осенью - 6,8% проб от всей выделенной микрофлоры. В реке весной отмечена повышенная контаминация энтеробактериями рыбы по сравнению с водой, в среднем в 1,8 раза, что определено ослабленным физиологическим статусом осетров после зимнего периода. Рост численности энтеробактерий в объектах речной биоты от весны к осени в 1,8 раза обусловлен температурным режимом воды и региональными особенностями дельты Волги. Симптоматично, что пик инфекций у людей, вызванных этими микроорганизмами, приходился на конец лета и раннюю осень. Индикаторные бактерии - Е. coli и Salmonella sp. в настоящее время выделяются намного реже из окружающей среды, чем цитробактеры и протеи, что свидетельствует о продолжающемся антропогенном воздействии на обследованный водоем.

Аэромонады, вибрионы, плезиомонады по мере подъема развития энтеробактерий снижали свою численность от весны к осени в экосистеме дельты Волги в рыбе

- в 1,5; в воде - в 1,6 раза. Полученные данные свидетельствуют о саморегуляции и конкуренции этих микроорганизмов с энтеробактериями, которым они уступают в своем развитии В реке среди этого семейства доминировали аэромонады, составляя весной 5,7; осенью - 4,8% проб от всей выделенной микрофлоры. В тоже время, на акватории Северного Каспия сезонные изменения солености воды характеризуются опреснением водоема от апреля к июню с последующим постепенным ее увеличением к сентябрю. Особенности формирования режима солености в Северном Каспии, наряду с термическими условиями, обусловили интенсивное развитие бактерий семейства УЛпопасеае в объектах морской биоты и увеличение их удельного веса от весны к осени почти в 2 раза, что было обусловлено эвтрофикой водоема, температурным режимом и их приуроченностью к солоноватым водам морской экосистемы В комплексе все это определяет плавное увеличение численности галофильных бактерий семейства УЛпопасеае от весны к ранней осени в 1,5-2 раза (в воде и рыбе) и некоторый их спад при понижении температуры поздней осенью, что свидетельствует о постоянной саморегуляции исследованных микробиоценозов, находившихся в корреляционной зависимости друг от друга (112=0,9873).

Псевдомонады. В речной и морской экосистемах для этих микроорганизмов был характерен только весенний максимум развития. Отмечено преобладание и более разнообразный состав «морских псевдомонад» над «речными» (в 2,5 раза), что еще раз подтверждает приуроченность этих бактерий к морской биоте. Осенью был зарегистрирован спад развития псевдомонад как в реке, так и в море (почти в 2 раза), который был обусловлен повышением температуры, и, следовательно, развитием мезофильных ферментативно-активных энтеробактерий и грампозитивной флоры, у которых при этом также наблюдался осенний максимум развития, особенно в реке, т е. происходила сезонная элиминация или замена одной популяции бактерий на другую. Увеличение удельного веса вышеперечисленных бактерий в обследованных морских биотопах в начале осени связано с дополнительным биологическим загрязнением от каспийского мнемиопсиса, для которого в этот же период было характерно массовое развитие.

Сравнение полученных данных по морским биотопам с результатами по речным биотопам показало, что все объекты были обсеменены в основном микроорганизмами, типичными для того или иного сезона года. В гидробиологическом аспекте сезонная гетерогенность и цикличность бактериальных сообществ необходима им для саморегуляции своей численности Наличие синегнойной палочки, вибриофло-ры и энтеробактерий в микробном пейзаже гидроэкосистемы определяет ухудшение санитарных показателей, т.е. санитарно-микробиологическое состояние Северного Каспия и дельты Волги следует признать напряженным, что имеет практическую значимость для санитарной гидробиологии.

4.2 Влияние солености воды на развитие выделенных микроорганизмов и их галотолерантность

Соленость северокаспийских вод, наряду с температурой воды, является важнейшей физико-химической характеристикой, определяющей формирование различных комплексов микробных сообществ, которая связана с интенсивностью процессов самоочищения, в том числе разложением нефти. Сезонные изменения солености Северного Каспия характеризовались опреснением водоема от апреля к июню

15

(максимум опреснения) и последующим ее увеличением от июня к сентябрю (Кату-нин и др., 2003). В связи с этим, результаты наших исследований показали, что большая часть выделенной микрофлоры обладала галотолерантностью в той или иной степени. Максимальные значения были зарегистрированы в 3,0% и 7,0% растворе с хлоридом натрия у штаммов, выделенных от бычков, морских осетров и морской воды (80,0%, 78,6% и 95,0% проб, соответственно). Морские микроорганизмы были галотолерантнее, чем выделенные в речной экосистеме, в среднем в 1,3 раза. Причем жизнеспособность рыбных штаммов была несколько выше, чем у водных: в реке - в 1,7 раза; в море - в 1,2 раза, что было статистически достоверно (Р<0,05). Галотолерантность бактерий речной биоты обусловлена частичной миграцией морских популяций в речную экосистему с проходными рыбами, в частности, осетровыми, что было предположено ранее. Обращает на себя внимание значительная устойчивость к солевым растворам грамположительной флоры (бацилл, микрококков). Так, в 3,0% растворе соли жизнеспособными оставалось 78,2% штаммов. С увеличением концентрации соли до 10,0% выживаемость этих микроорганизмов снижалась в среднем в 1,5 раза Следовательно, у этой группы микроорганизмов, нежелательной в гигиеническом плане, достаточно много шансов оставаться жизнеспособными вплоть до готовой продукции, особенно икорной, где используются низкие концентрации соли. Галофильные вибрионы, фотобактерии, некоторые виды аэромонад и псевдомонад увеличивали свою численность от весны к осени в морской экосистеме. В реке выявлена такая же закономерность. При этом рыбные штаммы этих микроорганизмов были галотолерантнее в 2,5 раза, чем гидромикрофлора. Морская микрофлора способна адаптироваться в рыбе, совершающей нерестовые миграции, а также попадать в речную экосистему с нагонными морянными ветрами, частично перемешивающих морскую и речную воду. Таким образом, галотолерантность выделенной микрофлоры может быль индикатором популяционной структуры исследованных бактериальных сообществ.

4.3 Влияние различных концентраций нефти на биологические свойства условно-патогенных бактерий

Одним из негативных факторов воздействия на водную среду и биологические ресурсы является широкомасштабное освоение нефтяных месторождений в морях, имеющих важное рыбохозяйственное значение, каковым является Северный Каспий. Нефтяные углеводороды в силу своей биологической активности относятся к наиболее опасным загрязняющим веществам, длительное воздействие которых может нарушать сложившееся равновесие экосистем. Усиливающееся антропогенное воздействие на дельту р. Волги и Северный Каспий, которое проявляется в загрязнении нефтепродуктами, хлорорганическими пестицидами, фенолами и тяжелыми металлами, нередко приводит к исчезновению видов из флоры и фауны водоемов, появлению чужеродных растений и животных, а также микроорганизмов с новыми адаптационными возможностями (Салманов, 1999, Катунин и др., 2005). В связи с этим нами была проведена экспериментальная работа по изучению влияния различных концентраций каспийской сырой нефти (0,05; 0,25, 0,50 и 10,0 мг/л) на факторы патогенности микрофлоры, выделенной от каспийских гидробионтов. В результате было установлено, что все используемые концентрации не оказывали ингибирую-щего действия на рост испытуемых штаммов: С freundii, A.hydrophila,

16

Ps aeruginosa. Однако при этом были выявлены существенные различия между контролем и испытуемыми штаммами в факторах патогенности, ростовой реакции бактерий и усиленного образования пигмента (табл. 6).

Таблица 6 - Изменение патогенных свойств бактерий под влиянием различных концентраций нефти____

Используемые концентрации нефти, мг/л С freundu | Ps aeruginosa | A hydrophila

Зоны деполимеризации на средах, мм

протеаза лецитиназа гемолизин протеаза лецитиназа гемолизин протеаза лецитиназа гемолизин ДНКаза

контроль 0,5 1,5 - 2,0 1,5 2,0 1,0 2,0 3,0 1,0

0,05 3,0 - 1 0 6,5 1,0 2,5 8,0 3,0 5,0 3,0

0,25 7,0 - 3,5 29,0 1,5 5,0 8,8 3,3 5,0 2,5

0,5 3,3 - 4,0 14,5 15,0 15,0 4,0 8,3 7,5 -

10,0 - - 5,5 7,3 18,0 15,0 4,0 15,0 7,5 -

С /~геипс1й- у анализируемого штамма частично повысились некоторые факторы патогенности, и значительно увеличилась подвижность (по типу роения протеев).

А УгуйгорЬйа -при экспериментальном превышении ПДК в 2 раза маркеры патогенности этого штамма увеличивались, в 5 и 10 раз - повышалась лецитиназа и гемолизин, это свидетельствует о высоком патогенном потенциале данного микроорганизма для гидробионтов и человека.

.Ра аегигтова —все испытуемые концентрации нефти у этого штамма в максимальных значениях активизировали лецитиназную активность и усиливали его пигментацию.

Таким образом, при превышении ПДК (0,05 мг/л) экстрагируемых нефтяных углеводородов (Перечень рыбохозяйственных нормативов..., 1999) в 5, 10 и 20 раз в естественном водоеме может образоваться популяция микроорганизмов с полит-ропностью, стадиями переадаптации и мощным патогенным потенциалом, который они могут негативно проявить не только на различные гидробионты, но и на теплокровных животных, что уже имело место в случае заболевания тюленя в 2000г. на Каспии.

4.4 Факторы патогенности выделенной микрофлоры (протеаза, лецитиназа, гемолизин и ДНКаза аэромонад)

Общим принципом организации и жизнедеятельности любых живых организмов, в том числе бактерий, является их способность адаптироваться к изменяющимся абиотическим и биотическим факторам, что обеспечивает устойчивость биосистемы (Козинец и др., 2001; Извекова, 2004; Бузолева и др., 2006). По И. В. Домарад-скому (1997) - комплекс абиотических и биотических факторов обуславливает неизбежность изменчивости ряда важнейших свойств микроорганизмов — вирулентности, ферментативной активности и т.д Следовательно, изучение у бактерий их патогенных свойств, играющих роль адаптивных факторов, - неотъемлемая часть микробиологического анализа в санитарной гидробиологии.

Результаты наших исследований показали, что микрофлора бычков обладала комплексом факторов патогенности (гемолитическая, лецитиназная и протеолитиче-

екая активность), создающих предпосылки для формирования резидентного бактерионосительства. Симптоматично, что в печени и крови рыб, регистрировали преимущественно бактерии, активно продуцировавшие протеазу, лецитиназу и гемолизин. В здоровом организме, защитные механизмы которого препятствуют диссимиляции бактерий, способны закрепиться и выжить в основном микроорганизмы с выраженными патогенными свойствами.

Вся изолированная гидромикрофлора (в реке и море) обладала более высокими значениями протеолитической и лецитиназной активности (в 1,5 и 1,3 раза, соответственно), чем выделенная от рыб. С помощью ферментов протеиназ и лецитиназ бактерии преодолевают тканевые барьеры, расщепляют белковые молекулы и при интенсивном размножении в рыбе определяют ее автолиз, порчу и различные патологические процессы.

Гемолитическая активность — способность микроорганизмов разрушать эритроциты теплокровных животных и человека, является свидетельством эпидемиологической опасности выделенных бактерий. Микроорганизмы, выделенные из воды и рыбы, обладали гемолизином на одном уровне, соответственно в 22,3±0,5 и 21,5±0,3% случаев, в отличие от протеазы и лецитиназы, чаще выявленных у водных штаммов. Следовательно, независимо от биотопа, микрофлора, циркулирующая в экосистеме Северного Каспия и дельты Волги, имеет определенную эпидемиологическую значимость.

ДНКазная активность аэромонад близко коррелирует со способностью вызывать патологические процессы у гидробионтов и человека. Анализ полученных данных показал, что ДНК-аза была характерна для 77,0% выделенных аэромонад, независимо от их экотипической принадлежности. Благодаря ДНК-азе аэромонады способны быстро и эффективно адаптироваться в организме рыб.

Результаты сезонной динамики маркеров патогенности свидетельствовали об их нарастании у рыбных (в море и реке) штаммов от весны к осени (в среднем в 1,3 раза). При этом гидромикрофлора (в море и реке) посезонно практически не изменяла своих показателей патогенности, что обеспечивает устойчивость систем. Нами было установлено, что протеаза микрофлоры, выделенной от рыб, возрастала от весны к осени в 1,5; лецитиназа, гемолизин и ДНК-аза - в 1,3 раза. Здесь наглядно прослеживается связь увеличения этих маркеров с улучшением физиологического статуса рыб, обусловленного их летним и осенним нагулом. В соответствии с этим микроорганизмам следует «строить такой баланс вирулентности», какой необходим для выживания в здоровом организме рыб. В тоже время высокая патогенность бактерий в осенний период обуславливает их эпидемиологическую значимость.

Основными патогенными свойствами у энтеробактерий была лецитиназа, за исключением группы протея, которые лидировали по протеазе. Псевдомонады в большей степени обладали протеазой. Аэромонады больше проявляли ДНКазную, гемолитическую и лецитиназную активности. Вибрионы обладали только гемолизином и лецитиназой.

Таким образом, маркеры патогенности и/или персистенции условно-патогенной микрофлоры, обсеменявшей внутренние органы и ткани бычков и осетров, позволяли ей стабилизировать свое состояние в избранной экологической нише и влиять на формирование бактериальных сообществ. Учет набора факторов патогенности или персистенции позволяет отнести конкретный штамм микроорганизма

к способности образовывать паразитарные системы и тестировать экологическое и эпидемиологическое благополучие водоемов.

4.5 Антибиотикорезистентность выделенной микрофлоры

Результаты наших исследований показали, что микрофлора, обсеменяющая бычков, осетровых и среду их обитания, обладала множественной антибиотикорези-стентностью. При этом на всех обследованных участках регистрировали близкие показатели, т.е. в лекарственной устойчивости существенных различий между речной и морской бактериофлорой не выявлено, что обусловлено мощным влиянием речного стока на гидроэкосистему Северного Каспия. Выделенные нами микроорганизмы проявляли наибольшую устойчивость к бензилпенициллину (86,0% устойчивых штаммов) и ампициллину (69,0%), наименьшую - к левомицетину (15,0%), стрептомицину (18,0%). К фурадонину было устойчиво 50,0%, к тетрациклину 20,0% изолированных бактерий.

Таким образом, сезонная направленность факторов патогенности выделенных бактерий и отсутствие существенных различий по их антибиотикорезистентности на протяжении всего периода исследований свидетельствовало об относительной устойчивости экосистемных процессов и соответственно сообществ данных микроорганизмов в гидробионтах и среде их обитания. Однако в случае ухудшения экологической ситуации микроорганизмы, обладающие маркерами патогенности и множественной антибнотикорезистентностью, могут проявить себя как патогены в отношении бычковых и осетровых рыб и вызвать у них вспышки заболеваний инфекционной природы, что немаловажно при использовании последних в аквакультуре в качестве производителей. В искусственных условиях содержания и выращивания при заболеваниях бактериальной природы от производителей осетровых очень часто высеваются возбудители, обладающие множественной лекарственной устойчивостью, что влечет за собой такие трудности, как правильная постановка диагноза и правильное назначение лечения инфекций у этих видов рыб. Вода и рыба в данном случае являются природным резервуаром и переносчиком антибиотикоустойчивой микрофлоры.

4.6 Результаты биопроб на представителях каспийской ихтиофауны и белых мышах

Рыбы

Опыт с Pr. mirabilis и С. freundii

Особи, инфицированные протеями, погибли через 6-18 час., цитробактерами— через 20-30 час. после заражения. Патологоанатомическое вскрытие показало существенные патологические изменения "во всех внутренних органах, лизис мышц и папулу на месте инъекции. Из органов и тканей, экспериментально зараженных особей были реизолированы исходные штаммы бактерий. Группа контрольных рыб до конца наблюдения оставалась в норме.

Опыт с A. hydrophila и V fischeri

Все рыбы, зараженные аэромонадами и вибрионами, через 5 час. после инъекции стали вести себя неадекватно: у них наблюдали нарушение координации движений, обильное отделение слизи, судороги. На месте укола образовались гематома

и папула. Через 20-24 час. особи, инфицированные этими микроорганизмами, погибли. При вскрытии рыбы визуально обнаружены патологические изменения ее внутренних органов: печень рыхлая землистого цвета; почки кровенаполнены, увеличены; кишечник гиперемирован, наполнен газовыми пузырьками; на месте укола лизис мышечной ткани. Из пораженных органов погибающей рыбы реизолированы исходные штаммы. Группа контрольных рыб до конца наблюдения оставалась в норме.

Опыт с Ps aeruginosa

Рыба, инфицированная синегнойной палочкой, в течение 2-х сут. оставалась жива. У всех опытных рыб на месте инъекции отмечена гиперемия, небольшая папула, ерошение чешуи и лизис мышечной ткани, кровоизлияния на коже, плавниках. На 3-е сут. 90,0% особей, зараженных исследуемыми штаммами, погибли Патоло-гоанатомическое вскрытие этих рыб показало незначительное количество серозного экссудата в полости тела; печень рыхлая желто-зеленого цвета; почки увеличены, с многочисленными петехиями. Из пораженной мышечной ткани, экссудата и паренхиматозных органов повторно были выделены исходные штаммы синегнойной палочки.

У контрольных рыб на месте укола отмечена небольшая местная реакция. Их поведение было спокойным, координация движений не нарушена, мышечная ткань и внутренние органы в норме.

Теплокровные животные (нелинейные белые мыши)

Анализ материала по установлению вирулентности выделенной микрофлоры для белых мышей показал следующее: через 6 час. после заражения у мышей опытных групп наблюдали повышенную возбудимость, нарушение координации движения, взъерошенность шерсти, вздутие брюшка. На 2-е сутки эксперимента особи, инфицированные штаммами A hydrophila и Ps aeruginosa, погибли. При вскрытии павших животных зарегистрировали следующие патологические изменения внутренних органов: лимфатические узлы увеличены, печень рыхлой консистенции неравномерной окраски, селезенка дряблая, увеличена, сердце кровенаполнено, кишечник вздут, стенки его гиперемированы. При посеве печени и кишечника мышей повторно выделили исследуемые штаммы синегнойной палочки и аэромонады. У контрольной группы мышей и особей, зараженных изолятом V.ßscheri, в течение 8-ми сут. наблюдения при визуальном осмотре клинические признаки заболевания отсутствовали.

Следовательно, проведенная биопроба, в соответствии с ветеринарным законодательством, считается положительной, так как больше 80,0% рыб и 66,6% подопытных белых мышей погибло при наличии у них клинических признаков заболевания и патологических изменений внутренних органов.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о патогенности для гид-робионтов и теплокровных животных некоторых микроорганизмов, населяющих гидроэкосистему Волго-Каспия. Это подтверждает тот факт, что мониторинг условно-патогенной микрофлоры является одним из самых объективных критериев оценки санитарного состояния Волго-Каспийского бассейна в условиях поиска и добычи газонефтеуглеводородного сырья.

выводы

1. Бактериальные сообщества воды и рыбы Волго-Каспия представлены 83 видами из 25 родов. Доминантами являлись условно-патогенные бактерии из сем. Enterobacieriaceae, Vibrionaceae и Pseudomonadaceae, которые персистировапи по трофическим звеньям: вода-бычки-осетровые-вода. Бактерии рр. Lucibacterium и Photobacterium были зарегистрированы только в экосистеме Северного Каспия. Из воды Северного Каспия были изолированы единичные штаммы Ps aeruginosa, что свидетельствует о неблагополучной санитарной обстановке в период исследований на Северном Каспии, имеющим наиболее рыбопродуктивный потенциал.

2. В дельте Волги и прибрежной зоне Северного Каспия преобладали энтеро-бактерии (25,5±4,3% штаммов); в восточной и глубоководной акватории моря они отсутствовали. Псевдомонады были доминантным комплексом в морской биоте (30,1±7,4%). Аэромонады чаще регистрировали в реке (9,1±1,6%), чем в море (6,2±0,8%); вибрионы, наоборот, чаще в море (12,0±3,9%). Наличие псевдомонад и аэромонад в районе дагестанского побережья Каспия обусловлено их частой встречаемостью в микробном фоне мнемиопсиса - одного из резервентов этой микрофлоры.

3. Структура бактериальных сообществ воды и рыбы дельты Волги и шельфа Северного Каспия определена совокупным эффектом комбинированного воздействия абиотических и биотических факторов. Она обусловлена различными стадиями переадаптации выделенных бактерий, а также образом жизни рыб, типом их питания, миграционными путями и состоянием естественной резистентности их организма под давлением антропогенного пресса, о чем свидетельствует микробное инфицирование внутренних органов рыб, в частности, печени и крови.

4. Большая часть выделенной микрофлоры обладала галотолерантностью. Морские бактерии были галотолерантнее речных (80,6% против 61,2% штаммов). Солеустойчивость бактерий речной биоты обусловлена их частичной миграцией из моря с проходными рыбами, в частности, осетровыми. Высокая галотолерантность изолированных микроорганизмов обеспечивает им выживаемость вплоть до готовой рыбной продукции.

5. Экспериментально установлено, что доминирующие в микробном пейзаже аэромонады, цитробактеры и псевдомонады способны сохранять, увеличивать, а также приобретать новые морфологические, физиологические и патогенные свойства при превышении ПДК (0,05 мг/л) нефтяных углеводородов. Однако при превышении ПДК в 5, 10 и 20 раз отмечена потеря некоторых маркеров" протеазы у цит-робактеров и псевдомонад, ДНК-азы - у аэромонад, что требует дальнейшего и более детального изучения этого явления нагенетическом уровне.

6. Более высокие значения маркеров патогенности были у гидромикрофлоры -53,4% против 43,2% рыбных штаммов. Возрастание патогенных свойств бактерий происходило от весны к осени. Все это позволило выделенной микрофлоре стабилизировать свое состояние в избранной экологической нише и влиять на формирование устойчивого бактериоценоза.

7. Микрофлора бычков, осетров и среды их обитания обладала множественной антибиотикорезистентностью. Наибольшую устойчивость изолированные бактерии проявили к бензилпенициллину (85,5% штаммов), наименьшую - к левомицетину

(15,0% штаммов). Вода и рыба в данном случае являются природным резервуаром и переносчиком антибиотикоустойчивых микроорганизмов.

8. В результате проведенных биопроб показана патогенность A hydrophila, Рг. mirabilis, С. freundii, Ps aeruginosa и V fîscheri для морской ихтиофауны, а также А. hydrophila и Ps aeruginosa — для мышей, что свидетельствует о целесообразности использования этих бактерий в качестве индикаторных организмов для оценки санитарного состояния Волго-Каспийского региона в современный период до начала промышленного добывания нефтеуглеводородного сырья в Северном Каспии.

Практические предложения:

• Результаты данной работы Moiyr являться составной частью экологического мониторинга водной среды при проведении нефтеразведочных и нефтедобывающих работ в Северном Каспии.

• Экспериментальные данные по изменению патогенности бактерий под воздействием нефтяного загрязнения могут быть использованы при моделировании предотвращения аварийных ситуаций во время промышленной добычи нефтеуглеводородного сырья в Северном Каспии.

• Результаты работы могут быть использованы в аквакультуре для сани-тарно-микробиологической оценки осетровых-производителей, в частности для коррекции их микробного фона при использовании лекарственных препаратов.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. ЛарцеваЛ. В., Вьюшхова Л. А., Проскурина В В, Нестерова Л А, Болдырева Я М,Лисицкая И. А., Митрофанова Е С. Санитарно-эпизоотологическая обстановка Волго-Каспийского региона // Рыбохоз исследования на Каспии Результаты НИР КаспНИРХ за 2000 год - Астрахань, 2001.-С. 411

2 Ларцева Л. В., Лисицкая И. А. Болдырева Я M Эколого-микробиологический скрининг бычковых рыб Северного Каспия // Современные проблемы океанологии шельфовых морей России. Материалы междунар конференции. - Мурманск, 2002 - с 138-140

3 ЛарцеваЛ В , Лисицкая И. А, Болдырева Я. M Микробиологические исследования осетровых рыб Нижней Волги // Проблемы аквакультуры и функционирования водных экосистем Материалы междунар. конф молодых ученых - Киев, 2002. - с 38-39

4. Ларцева Л В., Проскурина В В , Вьюшкова Л В , Нестерова Л. А., Болдырева Я. M, Лисицкая И А. Санитарно-эпизоотическая ситуация Волго-Каспийского региона на рубеже XXI века // Рыбн хоз-во Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре Обзорная информация / ВНИЭРХ, в 1.-Москва, 2002.-50 с

5 Ларцева Л В , Болдырева Я M, Лисицкая И А Рыбы и гидробионты - переносчики возбудителей инфекционных болезней человека // Материалы Международной научно-практической конференции -М Изд-воВНИРО,2002 -С 226-231

6 Ларцева Л В., Лисицкая И. А. Проблемы микробной обсемененности молоди осетровых и среды их обитания при искусственном разведении в дельте Волги // Проблемы воспроизводства, кормления и борьбы с болезнями рыб при выращивании в искусственных условиях Материалы науч конф - Петрозаводск, 2002 - С 145-147

7. Lubov V. Lartseva Integrated Research Into Speeles Of The Ctenophora Family Beroe ovata and Mnemiopsis levfyi // Lubov V Lartseva, Irina A Lisitskaya, Igor S Shcheikunov, and SveÜana Yu Kasaeva // Proceedmgs of the Second Bilateral Conference between Russia and United States - Shep-herdstown, West Virginia, 2003 -P 359.

8 Проскурина В В , Югай Т В , Лисицкая И А , Вощениюша H С , Воронина Е А, Солохина Т А, Володина В В Мониторинг инфекций и инвазий промысловых видов рыб. Оценка санитарного состояния водоема // Рыбохоз исследования на Каспии Результаты НИР КаспНИРХ за 2004г -Астрахань,2005 - с 467-480.

9 Лисицкая И А Условно патогенные бактерии как показатель экологического и санитарного состояния гидроэкосистемы Северного Каспия // Человек и животные' Материалы III Между-нар научно-практ конференции» - Изд дом «Астр уп-т» - Астрахань, 2005 - с. 44-46

10. Лисицкая И А Качесгвешпый состав микрофлоры бычковых рыб и воды Северного Каспия как один из критериев оценки санитарно-экологического состояния водоема // Современные проблемы адаптации и биоразнообразия. Труды международной научной конференции - Махачкала, 2006 - с 34-35

11 Ларцева Л В, Артемова А.В, Лисицкая И А, Евдокимова M И Микробные популяции гребневиков Черного и Каспийского морей // Научно-техн журн «Южно-Каспийский вестник геологии, географии и глобальной энергии». - Изд дом «Астр ун-т» -Астрахань, 2006 -№1(14) -с. 247-254.

12 Проскурина В.В., Лисицкая И А Паразиты и микрофлора промысловых рыб дельты Волги и их патогенное влияние на представителей ихтиофауны // Журнал «Рыбное хозяйство». - №3. -2007 - с 69-71

13. Воронина Е. А, Лисицкая И А, Ларцева Л. В Ихтиопатологические исследования морских рыб Каспийского моря // Экология биосистем' проблемы изучения, индикации и прогнозирования Мат-лы Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию Астраханского Государственного университета -Изд. Дом Астраханского гос Ун-та -2007 -с. 268-272.

14 Лисицкая И А, Артемова А В. Бактериологические исследования бычков // Экологические мониторинговые исследования на лицензионном участке «Северный» ООО «Лукойл-Нижневолжскнефть» (1997-2006 гг ) Глава 6 Экология, распределение и запасы рыб и нерыбных объектов, их качественное состояние и трофология - Астрахань: Изд-во КаспНИРХ, 2007. -с. 321-327.

15 Лисицкая И А. Биологическая опасность условно-патогенных бактерий, связанная с нефтяным загрязнением водоемов // Экологические проблемы природных и урбанизированных территорий. Мат-лы Второй научно-практической конференции студентов, аспирантов, преподавателей и научных сотрудников, посвященной Ю-летию кафедры экологии и безопасности жизнедеятельности Астраханского Государственного Университета - Изд дом «Астраханский университет» -2008,- С 129-130.

Статьи, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК, выделены курсивом

Подписано в печать 16.09.08 г. Тираж 100 экз. Заказ 574 Типография ФГОУ ВПО «АГТУ», тел. 61-45-23 г. Астрахань, Татищева 16ж.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лисицкая, Ирина Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Гидробиологическая характеристика и современное экологическое состояние дельты Волги и Северного Каспия.

1.2. Биологическая характеристика изучаемых гидробионтов.

1.3. Бактериальные сообщества различных водоемов и гидробионтов.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3 СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ВОДЫ И

РЫБЫ ДЕЛЬТЫ ВОЛГИ И СЕВЕРНОГО КАСПИЯ.

3. 1. Эколого-биологическая характеристика выделенных микроорганизмов.

3.2. Бактериальные сообщества осетровых-эврибионтов и бычковыхстенобионтов, а также среды их обитания.

ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ НЕКОТОРЫХ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ

НА ФОРМИРОВАНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ВОДЫ И РЫБЫ ДЕЛЬТЫ ВОЛГИ И СЕВЕРНОГО КАСПИЯ.

4.1. Влияние температурного фактора на развитие микроорганизмов в разные периоды года.

4.2. Влияние солености воды на развитие выделенных микроорганизмов и их галотолерантность.

4.3. Влияние различных концентраций нефти на биологические свойства некоторых условно-патогенных бактерий.

4.4. Факторы патогенности выделенной микрофлоры (протеаза, леци-тиназа, гемолизин, ДНКаза аэромонад).

4.5. Антибиотикорезистентность выделенной микрофлоры.

4.6. Результаты биопроб на представителях каспийской ихтиофауны и белых мышах.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Бактериальные сообщества некоторых компонентов экосистемы дельты Волги и Северного Каспия"

Антропогенное загрязнение является существенным экологическим фактором, лимитирующим жизнедеятельность биологических систем на разных уровнях их организации в водной среде. Изучение особенностей функционирования водных организмов, обитающих в хронически загрязненной среде, - одна из актуальных проблем гидроэкосистем. Наиболее пристальное внимание ученых вызывают условно-патогенные микроорганизмы вследствие их широкого распространения и важной роли в различных гидробиоценозах. В то же время информация о состоянии здоровья водных животных очень важна для оценки санитарно-гидробиологической ситуации в акваториях, подвергнутых техногенному воздействию. В настоящее время экологи осознают, что методами физико-химического мониторинга невозможно определить в полной мере концентрации всего спектра химических веществ в компонентах морской среды, изучить процессы их трансформации, переноса и накопления, а тем более предсказать экологические последствия загрязнения. Для выявления наличия и определения степени воздействия антропогенного загрязнения разрабатываются методы биоиндикации, позволяющие судить о характере и силе влияния загрязнения по ответным реакциям самих биологических систем, а также методы биомониторинга, с помощью которых возможно контролировать экологическую ситуацию в морских прибрежных водах, состояние здоровья отдельных организмов, их популяций и прибрежных экосистем в целом (Димитриева, Безвербная, 2002; Сокольский, Умер-баева, 2002; Ващенко, Жадан, 2003; Zavane, 2003).

Дестабилизирующее воздействие человека на окружающую среду, особенно обозначившееся во второй половине ХХ-го столетия, настолько стало мощным и многогранным, что без учета его составляющей уже невозможно оценивать фундаментальные изменения, происходящие в структуре и функционировании любых водных и наземных экосистем, в том числе, и микробиоценозов. Антропогенный фактор ведет к разбалансированию экосистемы, что способствует торможению процессов естественной коадаптации всех ее составляющих (Викторов с соавт., 2001; Varnor, 2002).

Высокая напряженность экологической ситуации в Прикаспийском регионе России определяется совместным действием ряда негативных природных и антропогенных факторов. Между тем, угроза деградации природных комплексов береговой зоны и экосистемы всего моря нарастают (Иванов, 2000; Абдурахманов, Карпюк с соавт., 2002). По их данным, в современных условиях основными факторами экологической нестабильности Каспийского моря являются: загрязнение моря, обусловленное поступлением загрязняющих веществ с речным стоком, со сточными водами от предприятий и населенных пунктов, расположенных на побережье, а также истощение и загрязнение вод каспийского бассейна; загрязнение Каспийского моря нефтепродуктами, значительные риски возникновения аварийного загрязнения при судоходстве, на нефтепроводах и при освоении морских месторождений углеводородов;

- истощение рыбных ресурсов, обусловленное, в частности, такими факторами, как криминальный промысел или вселение чужеродного вида -гребневика мнемиопсиса;

- изменение уровня Каспийского моря, продолжающееся подтопление городских и сельскохозяйственных земель, смыв загрязняющих веществ с побережья при ветровых нагонах;

- высокая сейсмичность и активная геодинамика района;

- вторичное засоление, химическое загрязнение и дефляция почв, деградация естественных кормовых угодий и опустынивание прибрежных земель;

- недостаточно эффективное управление состоянием окружающей среды и эксплуатацией природных ресурсов, нарушения режима особо охраняемых природных территорий и акваторий;

- недостаточная международная координация природоохранной деятельности в регионе Каспийского моря.

Следует подчеркнуть, что при создавшейся экологической ситуации заметно изменился качественный и количественный состав гетеротрофной микрофлоры воды и грунтов Каспийского моря. В связи с увеличением объема поступающего органического субстрата в Каспийском море общее число микроорганизмов в слоях воды, где активно идет фотосинтез, возросло в 4-6 раз. В глубоководных горизонтах, особенно в грунтах, повысилось также количество анаэробных форм микрофлоры по отношению к аэробным. Более того, в грунтах на глубине 400-500 м — отмечено наличие сероводорода, который раньше фиксировали в грунтах лишь глубоководной впадины Южного Каспия. Таким образом, эвтрофирование Каспийского моря оказывает крайне негативное влияние на его экосистему, обусловленное в глубоководных участках моря чрезмерной продукцией фитопланктона и микроорганизмов, а также аллохтонным органическим веществом, которое расходуется на размножение и биохимическую активность анаэробных бактерий (Салманов, 1999; Сокольский, Умербаева, 2001).

Морские бактерии как эпибионты составляют часть нормального бак-териоценоза различных гидробионтов, на который в значительной степени влияет эвтрофирование Каспийского моря и где всегда присутствуют потенциально патогенные виды бактерий. Любое нарушение экологической обстановки, в частности, загрязнение водной среды нефтяными углеводородами, сопровождается изменениями, которые охватывают как свободноживущих, так и паразитических животных (в том числе микроорганизмов), обусловливая жесткий отбор видов, идущий по пути приспособления к экстремальным условиям гидроэкосистемы. Трансформирование среды обитания представителей ихтиофауны сказывается не только на видовом составе и численности их микрофлоры, но также инициирует ослабление защитных механизмов самих гидробионтов, что делает последних более доступными для патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, способствует возникновению и тяжелому протеканию инфекций. Многие возбудители болезней гидробионтов, считавшиеся ранее относительно безопасными, становятся причиной их гибели и как следствие, значительных экономических ущербов (Бухарин, 1999; Osukoda, 2002).

Таким образом, санитарно-экологическое состояние является важным мобильным природным фактором, влияющим на формирование биологических ресурсов в водоеме, а устойчивость водных биоценозов в значительной мере обусловлена адаптивным потенциалом «патогенов и возбудителей» (Карасева, 2003).

Следует отметить, что многие представители микрофлоры являются патогенными не только для рыб, но и для человека. Однако рыбное сырье и изготавливаемая из него продукция должны быть безопасны для потребителя. Биолого-экологические особенности инфекций, передающихся человеку через рыбу и продукты ее переработки, в совокупности с природно-климатическими и социально-экономическими особенностями различных административных и этнических регионов страны определяют своеобразие эпидемиологии этих заболеваний в каждом конкретном районе и зоогеогра-фической зоне. Борьба с такими болезнями базируется на изучении особенностей пространственно-функциональной структуры ареалов возбудителей и комплексно-дифференцированном подходе к каждой инфекции. При этом первостепенное значение приобретают мониторинговые исследования опасной для здоровья человека микрофлоры рыб, позволяющие дать объективную оценку санитарного состояния водной экосистемы и разработать мероприятия по обеспечению безопасности рыбной продукции (Пивоваров с со-авт., 1989; Ларцева 1998; Вялова, 2006; Zceng et. al., 1998).

Согласно статистике рыба и беспозвоночные вызывают у человека заболевания бактериальной природы, связанные с водным и пищевым факторами, составляя во всем мире 20,0-35,0% всех пищевых отравлений (Liston, 1990). По мнению автора за этиологию этих заболеваний ответственны не только сальмонеллы, но и другие энтеробактерии, а также аэромонады, псевдомонады, ацинетобактеры, кампилобактерии, вибрионы. Это свидетельствует о необходимости исследования качественного состава микрофлоры, обсеменяющей рыбу в местах ее промысла (Пивоваров с соавт., 1989; Григорьев, 1992: цит. по Ларцева, 1998).

Под влиянием техногенных воздействий качественный состав микрофлоры может быть показателем степени нарушения экологического равновесия микробиоценоза водной экосистемы, когда условно-патогенная микрофлора превалирует над индикаторной. Установлено, что фон естественной микрофлоры живой рыбы зависит от условий ее обитания и антропогенного прессинга на водную экосистему. Более того, определено, что у факультативных микроорганизмов существуют механизмы устойчивости к стрессу, необходимые для выживания в сложных условиях окружающей среды (Novo et al., 1994; Mazumder et. al., 1999).

Результаты ранее проведенных исследований (Ларцева, 1998) показали, что количественно-качественный состав микрофлоры рыб дельты Волги обусловлен образом их жизни, типом питания. Установлено, что рыбы, ведущие придонный образ жизни, обсеменены выше, чем пелагические. Однако исследования по бактерионосительству гидробионтов на Каспийском море ранее никем не проводились.

По данным лаборатории гидробиологии КаспНИРХ в спектре питания осетровых процент бычковых рыб составлял около 20,0%. В связи с этим в экологическом аспекте целесообразно проследить миграционные пути микроорганизмов по трофическим звеньям: вода - бычки - осетровые. Между тем, способность персистирования условно-патогенных и патогенных бактерий в водной экосистеме по трофическим звеньям фито-, зоопланктон, рыба свидетельствует об актуальности и высокой информативной значимости мониторинговых микробиологических исследований представителей чисто морской ихтиофауны и среды их обитания, так как под влиянием негативных биотических и абиотических факторов нарушается экологическое равновесие водной экосистемы. Микрофлора, являясь активным участником в распаде накопленных органических соединений, обсеменяя воду и рыбу, использует их в качестве экологической ниши, поэтому может служить критерием оценки экологического и санитарного состояния гидробионтов и экосистемы в целом (Литвин, 1999).

Результаты данного исследования по бычковым рыбам и среде их обитания были получены при осуществлении программы производственного экологического мониторинга в северной части Каспийского моря, который обязаны проводить все компании, ведущие поисково-разведочные работы по нефтедобыче согласно закону Российской Федерации «ОБ ОХРАНЕ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ».

Основным экологическим законом Российской Федерации является Федеральный закон от 10 января 2002г. №7 - ФЗ «ОБ ОХРАНЕ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ». Он пришел на смену действовавшему до этого Закону РСФСР от 19 декабря 1991г. №2060-1 «ОБ ОХРАНЕ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ» и отменил действие изменений к ряду статей закона от 19.12. 1991г. и других корреспондирующих законов. При этом в действующем законе смещены акценты по сравнению с предыдущим законом: уже в преамбуле (в отличие от закона 1991г.) записано: «В соответствии с Конституцией Российской Федерации каждый имеет право на благоприятную окружающую среду.», очерчены обязанности граждан и правовые основы государственной деятельности в области охраны окружающей среды (Кузнецов, Тютюнченко, 2004).

Следует также отметить, что в марте 1997г. Постановлением правительства Российской Федерации было утверждено «Положение о ведении государственного мониторинга водных объектов». Этим Положением было определено несколько задач мониторинга водных объектов, одной из которых является своевременной выявление и прогнозирование развития негативных процессов, влияющих на качество вод и состояние водных объектов по предотвращению вредных последствий этих процессов (Чуйков, 2001).

В тоже время нельзя не отметить важность исследовательской работы, проведенной нами по осетровым рыбам Волго-Каспийского бассейна. До недавнего времени промысловый лов этих ценных видов рыб, по существу, велся лишь в Волго-Каспийском регионе. Известно, что на его долю приходилось около 80,0% мировой добычи. Между тем, последнее десятилетие ХХ-го столетия для них стало катастрофическим. С 1990-1991гг. численность осетровых видов рыб стала резко снижаться. Но самое главное - уменьшается нерестовая часть популяции. В море нет старших возрастных групп осетровых, нет остатка - тех особей, которые дают потомство. В настоящее время формирование промысловых запасов идет в основном за счет искусственного воспроизводства. Это единственное мероприятие, позволяющее сохранить осетровых как биологический вид (Власенко, 2000; Карпюк, 2003).

Но и в отрасли промышленного осетроводства существует немало проблем. В частности, ранее проведенные нами исследования свидетельствовали о неблагоприятной санитарно-микробиологической обстановке на некоторых осетровых рыбоводных заводах Астраханской области. Следует также отметить, что микробиологические показатели санитарного состояния воды и рыбы в местах ее заготовки для рыбоводных целей приобретают большую эпидемиологическую значимость (Ларцева, 2003).

В связи с вышеизложенным и отсутствием данных по качественному составу условно-патогенной и санитарно-значимой микрофлоры гидроэкосистемы Северного Каспия перед нами были поставлены следующие цель и задачи:

Цель - выявить особенности распределения бактериальных сообществ некоторых компонентов экосистемы дельты Волги и Северного Каспия и оценить воздействие на них антропогенных факторов, в том числе интенсивного поиска углеводородного сырья в Северном Каспии.

Задачи:

1. Изучить видовой состав бактериальных сообществ, выделенных из внутренних органов и тканей бычковых рыб-стенобионтов, осетровых-эвриобионтов и среды их обитания.

2. Определить роль отдельных экологических факторов в развитии бактериальных сообществ морской и пресноводной биот: температурного фактора, определяющего сезонную динамику; галото-лерантность микрофлоры.

3. Изучить в экспериментальных условиях изменение патогенных свойств отдельных видов бактерий при загрязнении их среды обитания различными концентрациями сырой нефти.

4. Оценить факторы патогенности выделенной микрофлоры и ее антибиотикорезистентность.

5. Определить методом биопробы на рыбе и белых мышах степень патогенности некоторых штаммов микроорганизмов, выделенных из исследованных нами объектов.

Научная новизна. Впервые в Вол го-Каспийском регионе проведены систематические исследования по качественному составу условно-патогенной микрофлоры, обсеменяющей бычковых и осетровых рыб, а также среду их обитания в условиях многофакторного антропогенного пресса. Проведен сравнительный анализ бактериальных сообществ морской и речной биот. Показано их пространственное распределение в море в зависимости от ряда факторов природного и антропогенного происхождения. Впервые выявлены и определены различия проявления факторов персистенции и/или патогенности выделенной микрофлоры и антибиотикорезистентности в зависимости от ее экотипической принадлежности. Определено влияние разных концентраций нефти на морфологию и патогенные свойства доминирующих видов микроорганизмов. Проведенные исследования позволяют объективно оценивать и прогнозировать санитарно-экологическую и эпизоотическую ситуацию в водоеме.

Теоретическое и практическое значение данной работы заключается в раскрытии роли фенотипических особенностей бактериальных сообществ, обуславливающих политропность, смену нозоареала и стадии переадаптации микрофлоры морских и речных биот. Результаты проведенных санитарно-микробиологических исследований являются составной частью производственного экологического мониторинга морской среды при проведении нефтеразведочных работ на шельфе Северного Каспия. Материалы, изложенные в диссертационной работе, нашли применение в учебном процессе по многим прикладным дисциплинам: «Общая экология», «Экологическая эпидемиология», «Санитарная гидробиология», «Ихтиопатология» в Астраханском государственном техническом университете, «Экологическая экспертиза», «Экология микроорганизмов» в Астраханском государственном университете. Результаты работы также могут быть использованы в аквакультуре для сани-тарно-микробиологической оценки осетровых-производителей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На структуру бактериальных сообществ осетровых, бычковых рыб и воды дельты Волги и Северного Каспия доминирующее влияние оказывают температура воды и антропогенный прессинг.

2. Сезонная динамика выделенной условно-патогенной микрофлоры обусловлена температурным и гидрохимическим режимами, сложившимися на акватории дельты Волги и Северного Каспия, а также антропогенным прессом.

3. Степень патогенности бактерий, выделенных из пресноводной и морской биот, их множественная антибиотикорезистентность и га-лотолерантность являются факторами выживания микроорганизмов в меняющихся условиях среды обитания.

4. Нефтяное загрязнение оказывает стимулирующее воздействие на рост, развитие и патогенные свойства некоторых микроорганизмов, степень угнетения или возрастания их патогенных свойств зависит от степени превышения ПДК по нефтеуглеводородам.

5. Результаты проведенных биопроб свидетельствуют о мощном патогенном потенциале условно-патогенных бактерий, циркулирующих в гидроэкосистеме Волго-Каспия.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы были представлены и получили положительную оценку на заседаниях Астраханского отделения Всероссийского общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (2002, 2003, 2004); на совместном заседании научно-консультативного совета по болезням рыб ФГУ «Межведомственная ихтиологическая комиссия» и Секции патологии рыб и охраны гидробионтов Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии (Москва, 2007); на международной конференции «Современные проблемы океанологии шельфо-вых морей России» (Мурманск, 2002), международной научно-практической конференции «Аквакультура начала XXI века: истоки, состояние, стратегия развития» (п. Рыбное, 2002); международной конференции молодых ученых «Проблемы аквакультуры и функционирования и водных экосистем» (Киев, 2002); Proceedings of the Second Bilateral Conference between Russia and United States (Shepherdstown, West Virginia, 2003); I международной научно-практической конференции молодых ученых «Комплексные исследования биологических ресурсов южных морей и рек» (Астрахань, 2004); III международной научно-практической конференции «Человек и животные» (Астрахань, 2005); международной научной конференции «Современные проблемы и адаптации и биоразнообразия» (Махачкала, 2006); международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию Астраханского Государственного университета «Экология биосистем: проблемы изучения, индикации и прогнозирования» (Астрахань, 2007); второй научно-практической конференции студентов, аспирантов, преподавателей и научных сотрудников, посвященной 10-летию кафедры экологии и безопасности жизнедеятельности Астраханского Государственного Университета (Астрахань, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ.

Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно в полевых условиях собран и обработан материал, проведены бактериологические исследования и биопробы, выполнена видовая идентификация выделенных микроорганизмов, осуществлен анализ и статистическая обработка полученных данных.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 152 страницах, включает 13 рисунков, 8 таблиц и 3 приложения. Состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов и списка литературы. Список литературы включает 169 наименований, из них 60 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Гидробиология", Лисицкая, Ирина Анатольевна

• Результаты работы могут быть использованы в аквакультуре для санитарно-микробиологической оценки осетровых-производителей, в частности для коррекции их микробного фона при использовании лекарственных препаратов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенных исследований было установлено, что экосистемам дельты Волги и Северного Каспия характерен устойчивый состав бактериальных сообществ воды и гидробионтов (осетровые и бычки), обусловленный совокупным эффектом комбинированного воздействия абиотических и биотических факторов.

Установлено, что в анализируемых экосистемах доминировали условно-патогенные бактерии — представители семейств Enterobacteriaceae, Vibrionaceae и Pseudomonadaceae, которые персистировали по трофическим звеньям: вода - бычки - осетровые - вода, используя их в качестве экологических ниш или нозоареалов. Удельный вес доминирующей микрофлоры в период проведенных исследований был стабилен. В тоже время сезонная цикличность микробных популяций, необходимая им для саморегуляции численности, может быть показателем санитарно-экологического состояния и критерием степени нарушения равновесия водной экосистемы.

Среди выделенных энтеробактерий в речной экосистеме доминировали микроорганизмы pp. Proteus и Citrobacter, т.е. это многолетняя тенденция, отмеченная ранее (Ларцева, 1998; Обухова, 2004). В морской экосистеме удельный вес энтеробактерий был ниже в 3,1 раза, чем в речной, что обусловлено снижением антропогенного прессинга волжского стока, являющегося основным носителем хозбытовых вод. Видимо, поэтому в прибрежной и мелководной зонах Северного Каспия (в западной и восточной частях) выделенные энтеробактерии по количественному и качественному составу были близки к речному микробному пейзажу. Уже на глубоководных станциях запада Северного Каспия их удельный вес был относительно низким, а качественный состав менее разнообразным. В восточной части обследованной акватории на больших глубинах энтеробактерии отсутствовали. При этом, среди всех выделенных бактерий этого семейства субдоминантами остались цитробактеры с близкой корреляцией во всех морских биотопах, что связано с персистентными свойствами этих бактерий и их способности к политропности. При этом основными эконишами всех энтеробактерий были желудочно-кишечный тракт и жабры осетровых и бычков.

Среди выделенных представителей семейства Vibrionaceae в морской экосистеме преобладала вибриофлора; в речной — аэромонады. Формирование режима солености Северного Каспия в сочетании с термическими условиями обусловили интенсивное развитие галофильной вибриофлоры с субдоминированием V. fischeri у осетров, бычков и среде их обитания. В аэро-монадном комплексе установлено доминирование A. hydrophila, отмеченное в ранее проведенных исследованиях (Ларцева, 1998; Обухова, 2004). Следует отметить, что вид A. hydrophila зарегистрирован как этиологический агент при кишечных инфекциях Волго-Каспийского региона (Бойко, 1998; Журавлева, 1998). Это дает основание считать A hydrophila показателем санитарно-эпизоотического состояния гидроэкосистемы Волго-Каспия.

Основными биотопами бактерий этого семейства были жабры, кишечник, печень исследуемых рыб, а также гонады у осетра в речной период жизни.

Бактерии pp. Lucibacterium и Photobacterium нами зарегистрированы только в экосистеме Северного и Среднего Каспия, что связано с их приуроченностью только к морским и океаническим экосистемам (Берджи, 1997).

Анализ материала показал существенные различия встречаемости микроорганизмов семейства Vibrionaceae по районам исследования. В морском бактериоценозе бактерии этого семейства превышали в 5,6 раза обсеменен-ность речной биоты с увеличением частоты встречаемости вибрионов, луси-бактерий и фотобактерий по мере удаления обследованных станций от прибрежной зоны как на западе так и на востоке Северного Каспия. Наличие га-лофильных вибрионов в реке связано с их персистированием в организме осетровых во время нерестовых миграций, что было предположено ранее (Ларцева, 1998). Существенных различий встречаемости аэромонад и пле-зиомонад по районам исследований в море нами не выявлено, что свидетельствует о высокой адаптивности или экологической валентности этих бактерий.

Грамнегативная неферментирующая микрофлора была представлена различными родами: Acinetobacter, Alcaligenes, Flavobacterium, Moraxella и Pseudomonas. Представители последнего рода были доминантами в бакте-риоценозе морской биоты; в реке и мелководной прибрежной части Северного Каспия они регистрировались в 2-3 раза реже, где их, по-видимому, инги-бировали ферментативно-активные энтеробактерии и грампозитивная флора. Как в море, так и в реке субдоминировали Pseudomonas sp. и Ps. fluorescens. В пробах морской воды и бычках впервые зарегистрированы единичными штаммами Ps. aeruginosa - патоген для человека и животных. При этом псев-домонадный комплекс в восточной части моря был более многочисленным и разнообразным, по сравнению с западной. Вероятно, это определено различиями гидрохимического режима между западом и востоком Северного Каспия. Кроме того, высокая встречаемость псевдомонад в районе дагестанского побережья связано с их частой контаминацией гребневика - нового вселенца Каспия.

Основными биотопами всех выделенных псевдомонад были жабры, желудочно-кишечный тракт и печень всех исследуемых рыб. Причем, контаминация жаберного аппарата обследованных гидробионтов и воды была почти на одном уровне. Локализация этих микроорганизмов в печени рыб свидетельствует об их политропности и персистентных свойствах, что дает основание рассматривать псевдомонады в качестве индикаторов санитарного состояния гидроэкосистемы и ее экологического благополучия.

Сравнение полученных данных по сезонной динамике морских и речных биот показало, что все исследуемые объекты обсеменены микрофлорой, характерной для того или иного сезона года. Так, нами отмечен рост численности энтеробактерий в морской экосистеме (в прибрежной зоне) весной и осенью, а в речной - динамично от весны к осени, что связано с температурным режимом и региональными особенностями дельты Волги, что отмечено раннее в литературе (Леонова с соавт., 1991; Ларцева, 1998). Причем, ближе к осени рыба была обсеменена энтеробактериями в 1,8 раза выше, чем вода. Симптоматично, что пик кишечных инфекций у людей, вызванные этими бактериями, приходился на конец лета и раннюю осень (Буркин с соавт., 1995; Бойко, 1998).

Представители семейства Vibrionaceae в экосистеме дельты Волги снижали свою численность от весны к осени в 1,5 раза, синхронно, по мере развития энтеробактерий, которые их ингибировали в силу своих генотипи-ческих и фенотипических свойств. В морской экосистеме, наоборот, комплекс этих микроорганизмов повышал свою численность от весны к осени, что связано с эвтрофикой водоема, природно-климатическим факторам и их приуроченностью к солоноватым водам Северного Каспия.

Для псевдомонад, как в речной, так в морской экосистемах был характерен только весенний максимум развития. В тоже время, отмечено преобладание и разнообразие «морских» псевдомонад над «речными», что подтверждает приуроченность этих бактерий к морской биоте. Следовательно, в экологическом аспекте сезонная неоднородность и цикличность микробных популяций является движущей силой, необходимой им для саморегуляции и самовоспроизведения своей численности.

Антропогенный прессинг на окружающую среду приводит к изменению условий существования бактерий, активизируя их адаптационные механизмы, необходимые им для самосохранения. В первую очередь - это факторы патогенности, выполняющие двойную функцию, обеспечивают выживание паразита как в организме хозяина, так и во внешней среде (Бойко, 1998; Бухарин, 1999).

По результатам наших исследований, установлено, что гидромикрофлора обладала более высокими значениями протеолитической и лецитиназ-ной активности, чем выделенная от рыб, причем, по нарастающей от весны к осени. Аналогичная тенденция была характерна для ДНК-азы аэромонад. Гемолитическая активность была на одном уровне в биопрофиле водных и рыбных штаммов, как в море, так и реке. Следовательно, независимо от эко-типической принадлежности, микрофлора, персистирующая в воде и рыбе, имеет определенную эпидемиологическую опасность, что характерно для возбудителей сапронозов. В пользу этого свидетельствуют данные о множественной антибиотикорезистентности и галотолерантности выделенной нами микрофлоры.

Впервые экспериментально установлены взаимоотношения доминирующих цитробактеров, аэромонад и псевдомонад с нефтью в различных концентрациях. Установлена способность этой микрофлоры сохранять, увеличивать, а также приобретать новые морфологические, физиологические и патогенные свойства на уровне ПДК (0,05 мг/л) нефтяных углеводородов. Однако при превышении ПДК в 5,10 и 20 раз отмечена потеря некоторых маркеров патогенности: протеазы у цитробактеров и псевдомонад, ДНК-азы - у аэромонад, что может быть обусловлено их структурно-функциональными нарушениями или защитно-приспособительной реакцией, что согласуется с литературными данными (Бухарин, 1999; Черкасский, 2001). В любом случае полученные данные свидетельствуют о необходимости изучения этого явления, но уже на молекулярно-генетическом уровне.

В результате проведенных биопроб показана патогенность А. hydrophila, Pr. mirabilis, С. freundii, Ps. aeruginosa и V. jischeri для морских осетровых, воблы, бычков, кефали. В экспериментах на мышах была подтверждена патогенность только A. hydrophila и Ps. aeruginosa. В обоих случаях были выполнены все постулаты Коха.

Следовательно, данные, полученные в результате наших исследований, свидетельствуют о целесообразности и необходимости проведения микробиологического мониторинга, который может служить одним из объективных критериев оценки санитарно-экологического состояния Волго-Каспийского региона в современных условиях.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лисицкая, Ирина Анатольевна, Астрахань

1. Абдурахманов, Г. М. Современное состояние и факторы, определяющие биологическое и ландшафтное разнообразие Волго-Каспийского региона России Текст. / Г. М. Абдурахманов, М. И. Карпюк, Б. Н. Морозов, Ю. Г. Пузаченко // М. наука. - 2002. - 414 с.

2. Авчинников, А. В. Микробное загрязнение водной среды и его влияние на заболеваемость населения Текст. / А. В. Авчинников // Мед. консультация. 2000. - №2. - С. 43 - 47

3. Алексеенко, В. В. Кишечные инфекции Текст. / В. В. Алексеенко, Е. В. Доброштан, А. В. Моисеева и др. // Киев: Наукова думка. 1991. - Вып. 22.-с. 91-95.

4. Антипенко, В. П. Энтеробактерии и Pseudomonas aeruginosa в этиологии хронических заболеваний легких и плевры Текст. / В. П. Антипенко С. А. Куницкая, Л. С. Рудницкая // Журн. микробиол., эпидимиол. и иммунологии. 1990. - №9. - С. 24 - 27.

5. Артюшенко, И. И. Острые кишечные заболевания протейной этиологии у детей Текст. / И. И. Артюшенко, B.C. Коновалова // Киш. инфекции. Киев. - 1987. - №19. - С. 70 - 73.

6. Байдин, С. С. Гидрология дельты Волги Текст. / С. С. Байдин, Ф. Н. Линберг, И. В. Самойлов; под ред. проф. И. В. Самойлова. Л.: Гидрометео-издат, 1956.-С. 43-50.

7. Батурин, В. П. Введение в геологию дельты Волги Текст. / В. П. Батурин // Тр. Гос. океанографического ин-та. Вып. (18)30. - 1951. - С. 12.

8. Берг, С. JI. Основные черты морфологии дельты Волги Текст. / С. JI. Берг // Тр. Гос. океанографического ин-та. Вып. (18)30. - 1951. - С. 49.

9. Берджи, Определитель бактерий. В 2-х т. Текст. / Берджи; под. ред. Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли и С. Уилльямса М.: Мир, 1997. - 799 е., ил.

10. Бойко, А. В. Микробиологические и экологические аспекты паразитизма вибриофлоры и аэромонад Текст. / А. В. Бойко // Автореф. дис. . доктор. мед. наук. Челябинск. - 1998. - 43 с.

11. Бузолева, JI. С. Микробиологический анализ загрязнения окраинных морей северо-западной части Тихого океана Текст. / Л. С. Бузолева, И. П. Безвербная, Е. В. Журавель, Е. Г. Калитина // Журн. Океанология. 2006. -т. 46, № 1.-С. 55-62.

12. Бурлаченко, И. В. Теоретические и прикладные аспекты повышения резистентности осетровых рыб в аквакультуре Текст. / И. В. Бурлаченко // Автореф. дис. .доктор.биол.наук. Москва. - 2007. - 48 с.

13. Бухарин, О. В. Персистенция патогенных бактерий Текст. / О. В. Бухарин // М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 1999. 367 с.

14. Бухарин, О. В. Патогенетические особенности формирования бактерионосительства Текст. / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов // Журн. микро-биол., эпидемиол. и иммунологии. — 1996. № 2. — С. 98-101.

15. Бычкова, JI. И. Протейная инфекция у форели при выращивании в морских садках Текст. / JL И. Бычкова, JL Н. Юхименко, А. И. Можарова // Информ. пакет «Болезни рыб» Рыбное хоз-во. - Сер. Аквакультура. - 1995. -в. 2. - С. 7- 10.

16. Бычкова, JI. И. Микробиоценоз как индикатор экологического состояния водной среды и рыбы Текст. / JI. И. Бычкова, JI. Н. Юхименко, А. И. Можарова // Тез. докл. научно-практ. конф. «Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре» М. - 2000. - С. 42 - 43.

17. Бычкова, JI. И. Микробиоценоз радужной форели (Oncorynchus mykiss Walbaum) и водной среды при садковом выращивании Текст. / JI. И. Бычкова // Авторефер. дис. . канд. биол. наук. — М. 2002. - 25 с.

18. Ващенко, М. А. Нарушение развития потомства морского ежа как показатель загрязнения среды Текст. / М. А. Ващенко, П. М. Жадан // Журн. Экология. 2003. - № 6. - С. 459-465.

19. Виноградова JI. А. Микрофлора воды в загрязненных водоемах // Гигиена и санитария. 1988. - №12. - С. 13 - 16.

20. Виноградова JI. А., Пархомчук Т. К. Комплексные санитарно-микробиологические критерии оценки качества водных объектов в условиях возрастающей антропогенной нагрузки // Гигиена и санитария. 1991. - №1 .С. 24 - 26.

21. Виноградова, JI. А. Комплексные санитарно-микробиологические критерии оценки качества водных объектов в условиях возрастающей антропогенной нагрузки Текст. / JI. А. Виноградова, Т. К. Пархомчук // Журн. Гигиена и санитария. 1991. - №1 .- С. 24 - 26.

22. Воробьев, А. А. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите Текст. / А. А. Воробьев, Л. О. Иноземцева, Ю. В. Несвижский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. — 1996. -№1. С. 70-74.

23. Воробьев А. А., Иноземцева Л. О., Несвижский Ю. В. Особенности микрофлоры толстого кишечника при инфекционном эндокардите // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. 1996. - №1. - С. 70 - 74.

24. Вялова Г. П., Шкурина Э. К. Псевдомоноз молоди лососевых на Малкинском рыбоводном заводе Камчатки // Сб. докл. Всерос. совещ. «Проблемы товарн. выращ. лососевых рыб России» Мурманск. - 1995. - С. 79 -84.

25. Вялова Г. П., Шкурина Э. К., Стексова В. В. Инфекционные заболевания камбал на шельфе Сахалина // Тез. докл. I конгресса ихтиологов России. Астрахань. - 1997.- С. 372.

26. Головина, Н. А. Ихтиопатология Текст. / Н. А. Головина, Ю. А. Стрелков, В. Н. Воронин, П. П. Головин, Е. Б. Евдокимова, Л. Н. Юхименко // М.: Мир, 2003. 448с.: ил. (Учебники и учеб. пособия для студентов высших учебных заведений).

27. Дзюбан, А. Н. Микробиологические процессы в Горьковском водохранилище Текст. / А. Н. Дзюбан, Д. Б. Косолапов, И. А. Кузнецова // Водные ресурсы. 2001 . - т. 28. - №1. - С. 47-57.

28. Димитриева, Г. Ю. Микробная индикация эффективный инструмент для мониторинга загрязнения прибрежных морских вод тяжелыми металлами Текст. / Г. Ю. Димитриева, И. П. Безвербная // Журн. Океанология.- 2002. т. 42, № 3. - С. 408-415.

29. Домарадский, И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации Текст. / И. В. Домарадский // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии.- 1997. №4.-С. 16-20.

30. Жезмер В. Ю., Лященко Е. В., Кутищева Н. В., Галдина Е. А. Протейная инфекция в установках с оборотным водообеспечением // Рыбное хоз-во. 1991.-№4.-С. 39-40.

31. Журавель, Е. В. Микробная индикация загрязнения прибрежных вод Охотского моря и Авачинской бухты Текст. / Е. В. Журавель, И. П. Безвербная, JL С. Бузолева // Биология моря.- том 30.- №2. 2004. - С. 138-142.

32. Журавлева, JI. А. Распространенность аэромонад в регионе дельты

33. Волги и некоторые эпидемиологические особенности заболеваний, вызываемых ими Текст. / JI. А. Журавлева // Автореф. дис. . канд. мед. наук. М. -1998.- 14 с.

34. Захалева В. А., Душкина JI. А. Микрофлора икры морских сельдей Белого и Балтийского морей // Тр. Зоол. ин-та АН СССР. 1990. - С. 51 - 53.

35. Иванов, В. П. Биологические ресурсы Каспийского моря Текст. / Иванов В. П. // Астрахань: Изд-во КаспНИРХ. 2000. - 100 с.

36. Извекова, Г. И. Микрофлора, ассоциированная с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод Текст. / Г. И. Извекова, Н. А. Лаптева // Экология. 2004. - №3. - С. 205-209.

37. Камакин, А. М. Особенности формирования популяции вселенца Mnemiopsis Leidyi (A. Agassiz) (Ctenophora: Lobata) в Каспийское море Текст. / А. М. Камакин // Автореф. дисс.канд.биол. наук. Астрахань. -2005.-24 с.

38. Карасева, Т. А. Болезни рыб в аквакультуре севера России (на примере Кольского полуострова) Текст. / Т. А. Карасева // Автореф. дисс. .канд.биол. наук. Петрозаводск. - 2003. - 22 с.

39. Карасева Т. А., Сердюк А. В., Логинова Г. А. Некоторые болезни атлантического лосося на рыбоводных заводах Мурманской области // Тр. АН СССР УрО Коми. Сыктывкар. - 1990. - С. 91 - 97.

40. Козинец, Г.И. Кровь и инфекция Текст. / Г. И. Козинец, В.В. Высоцкий, В.М. Погорелов, А.А. Еровинченков, В.А. Малов // М.: Триада-фарм, 2001.- 456 с.

41. Керашева С. И., Островский А. Д., Илинская В. В. Микробиологические методы идентификации вирулентного протея // Вопросы физиол. метаболизма и идентиф. микроорганизмов. М. - 1987. - С. 113-115.

42. Кузнецов В. И., Синенко В. И., Бахарева JI. П. Этиологическая структура острых кишечных инфекций, вызванных условно патогенными микроорганизмами // Лабораторное дело. 1991. - №4. - С. 62 - 63.

43. Лакин, Р. Ф. Биометрия Текст. / Р. Ф. Лакин // М: Высшая школа. 1990. - 352 с.

44. Ларцева, Л. В. Бактерии группы протея у осетровых, как показатель санитарного состояния водоема Текст. / Л. В. Ларцева // Тез. докл. Всерос. совещ. «Проблемы охраны здоровья и соц. аспекты освоения газ. месторожд. России» Астрахань. - 1993. - С. 93.

45. Ларцева, Л. В. Гигиеническая оценка по микробиологическим показателям рыбы и рыбных продуктов Волго-Каспийского региона Текст. / Л. В. Ларцева // Автореф. дис. . док. биол. наук. М. -1998. - 44 с.

46. Ларцева, Л. В. Рыбы и гидробионты переносчики возбудителей инфекционных болезней человека Текст. / Л. В. Ларцева // Астрахань. - Изд-во КаспНИРХ. - 2003. - 99 с.

47. Ларцева Л. В. Экспериментальная септицемия осетровых, вызванная Pseudomonas aeruginosa // Экспресс-информ. М. - ЦНИИТЭИРХ. - 1991. -в. 1.-С. 13 - 16.

48. Ларцева Л. В. Бактерии группы протея у осетровых, как показатель санитарного состояния водоема // Тез. докл. Всерос. совещ. «Проблемы охраны здоровья и соц. аспекты освоения газ. месторожд. России» Астрахань. - 1993.-С. 93.

49. Литвин, В. Ю. Природно-Очаговые инфекции: ключевые вопросы и новые позиции Текст. / В. Ю. Литвин // Журн. Микробиол., эпидемиол., и иммунологии. 1999. - №5. - С. 26-33.

50. Литвин, В. Ю. Факторы патогенности бактерий: функции в окружающей среде Текст. / В. Ю. Литвин, В.И. Пушкарева // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиологии.- 1994.- YIII-IX.- С. 83-87.

51. Лукьяненко, В. И. Общие закономерности деградации экосистем и ухудшения качества воды в загрязненных водоемах Текст. / В.И. Лукьяненко // Тез. докл. II Всес. Конф. по рыбохозяйств. токсикол. С-П. - 1991. - т.2. -С. 16-18.

52. Мойсеенко, Н. Н. Условно-патогенные бактерии в морской воде реакционных зон Текст. / Н. Н. Мойсеенко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. 1994. - №1. - С. 8-11.

53. Новоскольцева Т. Н. Аэромоноз карпов: совершенствование мер борьбы и профилактики болезни Текст. // Автореф. дис. .канд. вет. наук. -М. 2002. - 30 с.

54. Обухова, О. В. Бактериоценоз воды и судака (Stizostedion lucioperca) в дельте Волги Текст. / О. В. Обухова // Автореф. дисс.канд.биол. наук. -Москва. 2004. - 24 с.

55. Перепичко Н. 3., Лобынцева Е. П. Распространение условно-патогенных микроорганизмов в пищевых продуктах Текст. // Тр. Каз. филиала ин-та питания АМН СССР. 1988. - С. 123 - 126.

56. Патин, С. А. Характер, масштабы и факторы антропогенного воздействия на морские экосистемы Текст. / С. А. Патин // Тез. докл. Всесоюз. конф. «Экосистемы морей Росси в условиях антропогенного пресса (включая промысел)». Астрахань. - 1994. - С. 29-31.

57. Пивоваров Ю. П., Подъясенев С. В. Аэробная микрофлора све-жевыловленной и мороженой промысловой рыбы // Гигиена и санитария. -1985. №6.-С. 80-81.

58. Пивоваров, Ю. П. Микрофлора мясных и рыбных продуктов Текст. / Ю. П. Пивоваров, Л. С. Зиневич, М. Н. Грачева // Гигиена и санитария. 1988 - №8. - С.18 - 21.

59. Пивоваров, Ю. П. Санитарно-значимые микроорганизмы Текст. / Ю. П. Пивоваров, В. В. Королик // М.: Из-во «ИКАР». - 2000. - 267 с.

60. Погорелова, Н. П. Бактерии рода Aeromonas как возбудители са-пронозных инфекций Текст. / Н. П. Погорелова, Л. А. Журавлева, Ф. X. Ибрагимов, Г. В. Ющенко // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. -1995. №4.-С. 9-21.

61. Пожалостина, Л. В. Персистенция Shigella sonnei в эпителиальной ткани на модели шерени Текст. / Л. В. Пожалостина, А. В. Новикова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. 1994. - VIII-IX. - С. 34 - 36.

62. Полунин, И.П. Проблема подъема уровня Каспия и охрана здоровья населения Астраханской области Текст. / И. П. Полунин, Т. Д. Мухатов, В. А. Юшков // Тез. докл. Межд. конф. «Каспий настоящее и будущее». - Астрахань. - 1995.-С. 76-80.

63. Практикум по микробиологии: Учеб. пособие для студ. высш. Учеб. заведений Текст. / А. И. Нетрусов, М. А. Егорова, JL М. Захарчук и др., под ред. А. И. Нетрусова // М.: Издательский центр «Академия», 2005. — 608 с.

64. Природа и история Астраханского края Текст. / Ушаков Н. М. и др.; под ред. В. Н. Пилипенко — Астрахань: изд-во Астраханского пед. ин-та, 1996.-364 с.

65. Просяная В. В. Характеристика флавобактерий, выделенных от судака Текст. // Тез. докл. VIII Всес. совещ. по паразитам и болезням рыб. JL-Наука.- 1985.-С. 114-115.

66. Пученкова, С. Г. Выделение Edwardsiella tarda от черноморских кефалей Текст. / С. Г. Пученкова // Тез. докл. Всес. Конф. «Научно-технические проблемы марикультуры в стране». Владивосток. - 1990. - С. 183-184.

67. Пученкова, С. Г. Санитарно-микробиологические исследования устриц и морской воды у побережья Северного Кавказа Текст. / С. Г. Пученкова // Гигиена и санитария. 1991. - №3. - С. 22 - 23.

68. Пученкова, С. Г., Микрофлора производителей горбуши в период нереста на Юге Сахалина Текст. / С. Г. Пученкова, 3. К. Шкурина // Ин-форм. пакет. Сер. Аквакультура. - М. - ВНИЭРХ. - 1991. - в. 2. - С. 1 - 5.

69. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для студ. высш. учеб. заведений Текст./ А. И. Нетрусов, М. А. Егорова, JI. М. Захарчук и др.; // под ред. А. И. Нетрусова. М.: Издательский центр «Академия», 2005. -608 с.

70. Распопов, В. М. Экологические основы воспроизводства осетровых в условиях современного стока р. Волга Текст. / В. М. Распопов // Автореф. дисс. .докт.биол. наук. Москва. - 2001. - 86 с.

71. Русаков, Г. В. Современная динамика геолого-морфологических процессов в авандельте Текст. / Г. В. Русаков // Биологические ресурсы Каспийского моря: Тез. докл. I международной конф. Астрахань, 1992. - С. 340-344.

72. Салманов, М. А. Экология и биологическая продуктивность Каспийского моря Текст. / М. А. Салманов // Баку, 1999. 400 с.

73. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб Текст. / Под ред. Н. А. Яременко. М.: Отдел маркетинга АМБ-агро. - 1999. -Ч. 1.-310 с.

74. Смирнов, В. В. Бактерии рода Pseudomonas Текст. / В. В. Смирнов, Е. А. Киприанова // Киев. Наукова Думка. - 1990. - 262 с.

75. Сокольский, А. Ф. Микробиологические исследования на Каспии Текст. / А. Ф. Сокольский, Р. И. Умербаева // Рыбохозяйственные исследования на Каспии: Результаты НИР за 2000 г. Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2001.-С. 44-56.

76. Сокольский, А. Ф. Микробиологические исследования на Каспии Текст. / А. Ф. Сокольский, Р. И. Умербаева // Рыбохозяйственные исследования на Каспии: Результаты НИР за 2001 г. Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 2002.-С. 48-61.

77. Сомов Г. П. Еще раз о сапронозах Текст. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. 1985. - №5. - С. 98 - 103.

78. Ступакова, Т. П. Роль микроорганизмов в седиментальных процессах в океане Текст. / Т. П. Ступакова, Г. А. Дубинина, Л. Л. Демина // Микробиология. 1990 . - Т. 60. - в. 1.- I-II. - С.148 - 156.

79. Смирнов В. В., Киприанова Е. А. Бактерии рода Pseudomonas Текст. // Киев. Наукова Думка. - 1990. - 262 с.

80. Сужко, О. А. Экологический мониторинг и оценка бактериального загрязнения воды Нижнего Дона Текст. / О. А. Сужко, В. В. Алешня // Юж. Рос. гос. техн. ун-т. Новочеркасск. - 2000. - Рус. Деп. в ВИНИТИ. -24.05.00., № 1507-300.- 8 с.

81. Чайка Н. А., Сафонова Н. В., Вассер Н. Р. Некоторые малоизученные бактерии возбудители острых кишечных заболеваний у людей Текст. // Остр, кишечн. инфекции. - Л. -1986. - С. 68 - 74.

82. Шендеров Б. А., Серкова Г. П. Неферментирующие грамотрица-тельные бактерии Flavobacterium Текст. // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунологии. - 1984.- №7. - С. 85-90.

83. Шульгина, Л. В. Микрофлора дальневосточных морей и ее влияние на продукцию из промысловых объектов Текст. / Л. В. Шульгина, Г. И. Загородная, Ю. П. Шульгин, Т. М. Бывальцева, Л. М. Галкина // Гигиена и санитария. 1995. - №1. - С. 14-16.

84. Юхименко JI. Н. Проблема аэромоноза рыб в России Текст. // Тез. докл. I Конгресса ихтиологов России. М. - Из-во ВНИРО. - 1997. - С. 398-399.

85. Асаг Е. Т., Cunha В. A. Buttock anscess dur to Habnia alvei // Clin Infec. Diseases. -1999. 20. - №5. - P. 1426.

86. Andremot R. J. Growth of Vibrio parahaemolyticus, Escherichia coli and Staphylococcus aureus on smoked mullet (Mugil cephalus) // Zbl. Bakteriol. -2002.-№3.-P. 416-420.

87. Austin В., Austin D.A. Bacterial fish pathogens // Diseases of farmed and wild fish. Chichesters. 1999. - P. 210-216.

88. Bragg A. C. Foods and microbiological risks. // Microbiol. 1991. -140. - №4. - P. 687 - 695.

89. Baya A. M.,Toranzo A. E., Lupiani В., Santos Y., Hetrick F. M. Ser-rattia marcescens: a potential pathogen for fich. // J. Fish Diseases.- 1992.-15.-№1.-P. 15-26.

90. Balslev Т., Kristensen В., Ebbesen F., Sshumacher H., Korsager B. Gentamycinresistente enterobakterier pa en neonatalefdeling. // Ugeskr. Laeger. -1994. 156. - №43. - P. 6378-6380.

91. Beri H. R., James M. A., Solanki К. K. Bacterial flora of some fishes of Maharashtra and Saurashtra coasts // J. Food Sci and Technol. 1989. - 26.6.-P. 318-321.

92. Birgann Т. Aeromonas spp.- Bedentung fur die Lebens -mittelhygiene // Monatsh. Veterinar. med. - 1989. - 44. - №24. - P. 862 - 867.

93. Bosnakovski J., Nicev K., Apostolski K., Hristovski M. Appearance о eel disease in Ohrid Lake // Irish. Fish Invest. 1992. - №36. - P. 151.

94. Delarras C. Microbiologische Untersuchung getrockneter Mecresalgen // Fleischwirtschaft. 1997. - 77, № 10 / P. 932-935.

95. Depaola Angelo, Kaysner Charles A., et. al. Environmental investigations of Vibrio parahaemolyticus in oysters after outbreaks in Washington, Texas, and New York (1997 and 1998) // Appl. And Environ. Microbiol. 2000. - 66. № 11. P. 4649-4654.

96. Di Paola A.,Capers Gesa M., Alexander D. Densities of Vibrio vulnificus in the intestines of fish from U. S. // Appl. and Environ. Microbiol. 1994. -60.-№3.-P. 984-988.

97. Esteve C., Amaro C. Sidephore production in Aeromonas spp. isolated from Europhore production, Anguilla anguilla L. // J. Fish. Diseases. 1991. - 14. -№3. - P. 423 - 427.

98. Fell G., Hamonda O., binder R. An outbreak of Salmonella brockey ifections following smoked eel consumption in Germany // Epidemiol, and Infec. -2000.- 125.-№1-P. 9-12.

99. Gerner-Smidt P. Taxonomy and epidimiology of Acinetobacter infections // Rev. Med. Microbiol. 1995. - 6. - №3. - P. 186 - 195.

100. Gonzalez G., Dominguez M., Vergara L., Zemelman R. Bacilos gram negativos heterotroficos aerobios del sistema fluvial Italia, Chile // Rev. Latinoamer. microbiol. 1993. - 35. - №3. - P. 289 - 296.

101. Gomes-Gil В., et. al. Species of Vibrio isolated from hepatopancreas, haemolymph and digestive tract of a population of healthy juvenile Penaeus Van-namei // Aquaculture. 1998. Vol. 163. P. 1-9.

102. Handfield et. al. Microbiological characteristics of a surface water: Determination of certain pathogenic microorganisms // Riv. ital. ig. 1996. - 58.5 -6. P. 343 -363.

103. Kaiser J. Helical protein helps Escherichia coli hang on // Sci. News. -1995.- 147.-№3.-P. 17-19.

104. Karnop G. Vorkommen und Bedentung Eiweikabbanender Bakkerien an Seefischen // Inf. Fishwirt. 1982. - 29. - №2. - P. 98 - 101.

105. Ki-Zerbo G. A., Sawadogo A., Reghini M. Septicemic a Edwarsiella tarda: A propos d'une observation an centre hospitalier national de Bobo -Dionlasso, Burkina Faso // Med. Et malad. infec. - 1999. - 29. - № 8. - P. 539 -540.

106. Korzenieewska Ewa et. al. Bacterie z rodziny Enterobacteriaceae w wodach przybrzeznych jeziora Wigry w latach 1995-1199 // Ins. I ochr. Srod. -2001. 4, №. p. 61-72.

107. Kungolos E. et. al. Using bioassays for testing seawater quality in Greece // J. Environ. Sci. and Health. A. 2003. - № 3. - P. 533-544.

108. Leobert et. al A bacterium with sineilarities to the redmouth bacterium and Serratia liqnefaciens (Grimes and Hennerty) causing mortalities in hathery reared salmonids in Australia// J. Fish. Diseases. 1997. - 3. - №1. - P. 22 - 29.

109. Liston J. Microbial hazards of seafood consumption // Food Technol. -1990.-44.-№12.-P.58-62.

110. Loganathan В., Ramiesh A., Kenugopalan V.K. Pathogenic bacteria associated with Lates calcarifer and Ambassis commersoni // MIRCEN J. Appl. Microbiol and Biotechnol. 1989. -5. - №4. - P. 463 - 474.

111. Low K.W., Goh S.G., Lim T.M., Sin Y. M., Leung K.V. Actin rearrangements accompanying Aeromonas hydrophila entery into cultured fish cells // J. Fish Diseases. 1998. - 21. - №1. - P. 55 - 56.

112. Marranzano M., et. al. Microbiological pollution of the Ibleian rivers: Correlation between Salmonella and fecal indications // Ann. Ig.: Med. Prev. e comunita. -1997. 9, № 5. P. 401-406.

113. Mates A. The significance of testing for Pseudomonas aeruginosa in recreational seawater beaches // Microbios. 1992. - 71. - №277. - P. 89 - 93.

114. Mishael J., Guthertz L. S., Kokka R. P., Shimada T. Aeromonas species in septicemia: laboratory characteristics and clinical observations // Clin. Infec. Diseases. 1994. - 19. - №1. - P. 77 - 83.

115. Misra S., Sarkar S., Pal S.C., Nair G.B. Ecology, distribution serotypes and toxigenicity of Aeromonas species isolated from a lacustrine environment in Calcutta, India // Zentralbl. Hyg. und Umweltmed. 1990. - 190. - №5-6. -P. 434.

116. Melntosh D., Austin B. Recovery of an eztremery proteolytic form of Serratia liquefaciens as a pathogen of Atlantic salmon, Salmo Salar, in Scotland // J. Fish Biol. 1990. - 36. - №5. - P. 765 - 772.

117. Mohney L.L. An epizootic of vibriosis in Ecuadorian pond-reare Penaeus vannamei Boone (Crustacea: Decapoda) // J. World Aqaucult. Soc. -1994.-25.-№1.-P. 116-125.

118. Miyazaki Т., Kajihara N., Fujiwara K., Egusa S. Патологическое изучение некроза кишечника личинок японской камбалы // Fish Pathol. 1990. -25. -№1.- Р. 7-13.

119. Nieto F.P., Lopez L.R., Santos V., Nunes S., Toranzo A.E. Isolation of Serratia plymuthica as an opprtunistic pathogen in rainbow trout, Salmo gaird-neri Richrdson//J. of Fish Disease. 1990. - 13. - P.175 - 177.

120. Nowo et. al. Przezywalnosc in situ niektorych bakterii wskaznikowych stanu sanitar nego i chorobotworczych przewodu pokarmowego w wodzie jeziornej // Acta Acad agr. ac technolosten. Prot. aguarum et pise. 1994. -№18.-P. 27-37.

121. Nucci С et. al. Microbiological comparative study of isolates of Ed-wardsiella tarda isolated in different countries from fish and humans // Net. Microbiological. 2002. - 89, № 1. - P. 29-39.

122. Ortigosa M., et. al. Vibrio species in seawater and mussels: abundance and numerical taxonomy// Syst. Apl. Microbiol. 1989. Vol. 12. P. 316-325.

123. Olafsen J. A., et. Al. Indigenous bacteria in hemolymph and tissues of marine Bivalves at low temperature // Appl. Environ. Microbiological. 1993.1. Vol. 59.-P. 1848-1854.

124. Osukoda., et. al . Virulence of Flavobacterium branchiophilium in experimentally infected salmonids // J. Fish Diseases. 2002. - 18. - №3. - P. 249 -262.

125. Pathak S.P., Bhattacheijee J.W. Effect of pollutants on survival of Escherichia coli in microcosms of riwer water // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1994. - 53. - №2. - P. 198 -203.

126. Ramaiah N. some aspects of microbiological characteristics in the nearshose waters of Bombay // Indian J. Mar. Sci. 1994. - 23. № 2. - c. 75-81.

127. Qingru Bo., Jerremy C., Xinmin H. Патологическое и патогенетическое изучение эдвардсиеллеза у угрей // Chin. J. Vet. Sci. 1999. - 19. - №3. -P. 258-260.

128. Savant P. Pseudomonas aeruginosa septicimia and deficit in neutrophil chemotaxis in a child with cystic gibrosis // Pediat. Pulmonol. Suppl. -2002. -№16.-P. 313.

129. Sheldon et. al. Densities of Vibrio vulnificus in the intestines offish from U. S. // Appl. and Environ. Microbiol. 2000. - 60. - №3. - P. 984 - 988.

130. Tan E., Low K. W., Wong W. C., Leng К. V. Internalization of Aeromonas hydrophila by fish epithelial cells and be inhibited with a tyrosine Kinase inhibitor // Microbiology. 1998. -144. - №2 - P. 299 - 307.

131. Torres Alvarez de Arcaya M. V., Rodriquez Luis J. C. Sepsis por Citrobacter frendii postsplenectomia: a proposito de un caso // An. esp. pediat. -1993.-39.- №4.-P. 376.

132. Urbanova E., Manova K., Pacova Z. Bacteria of the proteal occurence in raw materials and food, and resistance to antibiotics // Vet. med. - 2000. -45.-№6-P. 171 - 176.

133. Vamor P. R. G., Iyer T. S. G. Viability of Vibrio cholerae in water // Fish Technol. 2002. - 27. - №2. - P. 151 - 152.

134. Veenstra J., Reitra P.J.G.M., Coster J.M., Stoutenbeek C.P. Human Vibrio vulnificus infections and envirion mental isolates in the Netherlands //

135. Aquacult. and Fish Manag. -1993. 24. - №1. - P.l 19 - 122.

136. Veenstra J., Reitra P.J.G.M., Coster J.M., Slaats E., Dirk-Jo S. Seasonal variation in the occurence of Vibrio vulnificus along the Datch coast // Epidemiol and infec. -1994. 112. - №2. - P. 285 - 290.

137. Velammal A., Aiyamperumal В., Venugopalan V. K., Ajmalkhan S. Distribution of Pseudomonas aeruginosa in Pondicherry coastal environs // Indian J. Mar. Sci. 1994. - 23. - №4. - P. 239 - 241.

138. Vintner et. al. Resistance to antibiotics and neavy metals of Pseudomonas aeruginosa isolated from natural waters // J. Appl. Bacterial.- 2000.- 68. -№6. P. 625 - 632.

139. Yabuuchi E., Wang L., Arakawa M., Yano I. Survival of Pseudomonas pseudomallei Strains at 5o С // J. Jap. Assoc. Infec. Diseases. 1993. - 67. -№4.-P. 331 - 335.

140. Wilson B.W., Holliman A. Atypical Aeromonas salmonicida isolated from ulcerated chub Lenciscus cephalis // Vet. Rec. 1994. - 135. - №8. - P. 185 -186.

141. Zavane D. Filamentous Flavobacterium sp. isolated from fish with gill diseases in cold water // Aquaculture. 2003. - 44. - №1. - P.l - 10.

142. Zheng Т., Jian X. Ecology of vibrios in the Oliveri Tendari lagoon (Messina), two year study // Rev. int. ocenog. med. -1998. - 103. - 105. - P. 149 -161.

143. Zheng Т., Jian X., Aubert J., Aubert M. Pagrosomus major. Studies on opportunic pathogenes and bacterial flora in the water environment // Rev. int. ocenog. med. 1991. - 101. - 104. - P. 78 - 82.